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文檔簡介

1、實驗5雙縮脲法測定蛋白質(zhì)濃度實驗目的掌握比色法測蛋白質(zhì)濃度原理及方法學習標準曲線繪制和分光光度計使用實驗原理蛋白質(zhì)肽鍵結構具有雙縮脲反應，所產(chǎn)生的紫色配合物在540nm有最大吸收。在一定能夠濃度范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)濃度與雙縮脲反應物光吸收度線性相關，可以作為定量分析依據(jù)。實驗儀器與試劑實驗器材玻璃試管1.5cm X15 cm， 10 只刻度移液管5mLX3， 2mLX1， ？型 紫外-可見分光光度計 實驗試劑雙縮脲試劑；標準溶液貯備液：2mg/mLBSA溶液待測蛋白液：卵清蛋白液 實驗操作 1. 標準曲線繪制工作表 管號試劑 mL0123456未知1未知2BSA(2mg/mL)0.00.30.60.

2、91.21.51.83.03.0dH2O3.02.72.42.11.81.51.20.00.0雙縮脲試劑2.02.02.02.02.02.02.02.02.0充分混勻,30 min以內(nèi)在540nm處測定吸收度.蛋白質(zhì)濃度(mg/mL)0.00.20.40.60.81.01.2A540nm數(shù)據(jù)處理 標準曲線繪制：用坐標紙，以吸光度值對標準蛋白質(zhì)濃度作圖Y：A540；X：蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),坐標刻度：涵蓋全部測定值，易于讀取，適當反應實驗精度比例：適當，基本保證圖形為正方形，容易進行數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)點標示：用X，O 等圖形，其中心點為數(shù)據(jù)值趨勢線回歸：常用一元回歸方程；直接估計使實驗數(shù)據(jù)點分布在擬合曲線的兩側，直線方程擬合：任意選取擬合曲線上兩點，求直線方程未知樣品濃度：測定值應在標準曲線范圍以內(nèi) 吸光度值代入方程 稀釋倍數(shù)牛血清白蛋白標準曲

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