乳中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)

1、 乳中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)乳中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn) 由沙門(mén)氏菌引起的疾病統(tǒng)稱(chēng)沙門(mén)氏菌病(salmonellosis)。沙門(mén)氏菌病常在動(dòng)物中廣泛傳播，人的沙門(mén)氏菌感染和帶菌也非常普遍。由于動(dòng)物的生前感染或食品受到污染，均可使人發(fā)生食物中毒。 沙門(mén)氏菌屬屬于腸桿菌科中的埃希氏菌族，沙門(mén)氏菌屬的形態(tài)特征是革蘭氏陰性桿菌、無(wú)芽孢、無(wú)莢膜、大多數(shù)有動(dòng)力、周生鞭毛。其生化反應(yīng)特征是吲哚、尿素分解及VP試驗(yàn)均陰性，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，產(chǎn)生HzS，不分解蔗糖和水楊素，不利用丙二酸鈉，不液化明膠，且在含有氰化鉀的培養(yǎng)基內(nèi)不能生長(zhǎng)，使賴(lài)氨酸、精氨酸、鳥(niǎo)氨酸脫羧基，在普通培養(yǎng)基上形成中等大小、無(wú)色半透明、表面光滑的菌落，菌落邊緣整

2、齊或呈鋸齒形。不分解乳糖，在腸道鑒別培養(yǎng)基上形成無(wú)色菌落。 沙門(mén)氏茵在水中能存活23周。在糞便中可存活12個(gè)月，在冰凍土壤中可過(guò)冬。對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，6015min即可殺死。5石炭酸或1:500升汞水5min即可殺死。膽鹽、煌綠及其他染料對(duì)本屬細(xì)菌的抑制作用較其他腸道桿菌小。用這些染料制備腸道選擇性培養(yǎng)基，有利于分離沙門(mén)氏菌。 沙門(mén)氏菌屬有較強(qiáng)的內(nèi)毒素，另外某些沙門(mén)氏菌能產(chǎn)生腸毒 素。這兩種毒素均能導(dǎo)致人體疾病。由于食品的種類(lèi)不同，污染沙門(mén)氏菌或多或少，污染雜菌的種類(lèi)和數(shù)量可阱大于沙門(mén)氏菌幾十倍甚至幾百倍，所以食品沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)首先使用增菌培養(yǎng)法，然后進(jìn)行分離培養(yǎng)，最后進(jìn)行鑒定，做出判定。一、設(shè)備

3、和材料一、設(shè)備和材料(1)天平：稱(chēng)取檢樣用。(2)均質(zhì)器或乳缽。、(3)溫箱：(36士1)，42。(4)顯微鏡。(5)滅菌廣口瓶：500mL。(6)滅菌三角燒瓶：500mL，250mL。(7)滅菌吸管：10mL。(8)滅菌平皿：90mm15mm o(9)滅菌小試管：內(nèi)徑3mm，長(zhǎng)5cm(10)滅菌毛細(xì)管。(11)橡皮乳頭。(12)載玻片。(13)酒精燈。 (14)滅菌金屬匙或玻璃棒。 (15)接種棒、鎳鉻絲。(16)試管架、試管簍。二、培養(yǎng)基和試劑二、培養(yǎng)基和試劑(1)緩沖蛋白胨水(BP)。(2)氯化鎂孔雀綠(MM)增菌液。(3)四硫酸鈉煌綠(TTB)增菌液。(4)亞硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液

4、。(5)亞硫酸鉍瓊脂(BS)。(6)DHL瓊脂。(7)HE瓊脂。(8)WS瓊脂。(9)SS瓊脂。(10)三糖鐵瓊脂。(11)蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑。(12)尿素瓊脂(pH=7.2)。(13)氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基。(14)氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基。(15)糖發(fā)酵管。(16)ONPG培養(yǎng)基。(17)半固體瓊脂。(18)丙二酸鈉培養(yǎng)基。(19)沙門(mén)氏菌因子血清：26種用于初步分型；57種用于進(jìn)一步分型，163種用于詳細(xì)分型。 三、操作步驟三、操作步驟 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)程序如圖1所示。 (1)前增菌和增菌 乳制品應(yīng)經(jīng)過(guò)前增菌。稱(chēng)取檢樣25g，加在裝有225mL緩沖圖圖1 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)程序方框圖沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)程

5、序方框圖 蛋白胨水的500mL廣口瓶?jī)?nèi)。固體食品可先用均質(zhì)器以8 000 lO 000r/min打碎1min，或用乳缽加滅菌砂磨碎，粉狀食品用滅菌匙或玻棒研磨乳化，于(36士1)培養(yǎng)4h，移取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，予42培養(yǎng)1824h。同時(shí)，另取10mL，轉(zhuǎn)種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于(36士1)培養(yǎng)1884h。 鮮乳不必經(jīng)過(guò)前增菌j取25mL加入滅菌生理鹽水225mL，按前法做成檢樣勻液，取25mL接種于100mL氯化鎂孔雀綠增菌液或四硫磺酸鈉煌綠增菌液內(nèi)，于42培養(yǎng)24hI另取25mL接種于100mL亞硒酸鹽胱氨酸增菌液內(nèi)，于(36

6、士1)培養(yǎng)1824h。 (2)分離 取增菌液1環(huán)，劃線(xiàn)接種于一個(gè)亞硫酸鉍瓊脂平板和一個(gè) DHL瓊脂平板(或HE瓊脂平板、WS或SS瓊脂平板)。兩種增菌液可同時(shí)劃線(xiàn)接種在同一個(gè)平板上。于(36士1)分別培養(yǎng)1824h(DHL、HE、WS、SS)或4048h(BS)，觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落，沙門(mén)氏菌I、I。、V、和沙門(mén)氏菌I在各個(gè)平板上的菌落特征如表6-3所示。 (3)生化試驗(yàn) 從選擇性瓊脂平板上直接挑取數(shù)個(gè)可疑菌落，分別接種三糖鐵瓊脂。在三糖鐵瓊脂內(nèi)，腸桿菌科常見(jiàn)屬種的反應(yīng)結(jié)果如表6-4所示。 表64說(shuō)明在三糖鐵瓊脂內(nèi)只有斜面產(chǎn)酸并同時(shí)有硫化氫(H。s)陰性的菌株可以排除，其它的反應(yīng)結(jié)果均有沙門(mén)氏菌的可能，同時(shí)也均有不是沙門(mén)氏菌的可能。 在接種三糖鐵瓊脂的同時(shí)，再接種蛋白胨水(供做靛基質(zhì)試驗(yàn))、尿素瓊脂(pH=7.2)、氰化鉀(KCN)培養(yǎng)基和賴(lài)