純化水需氧菌檢查R2A培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)方案版藥典上上

1、純化水需氧菌檢查R2A培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)方案起草部門：QC組簽名： 日期：審核部門：QC組簽名： 日期：部門：質(zhì)量部簽名： 日期：批準(zhǔn)質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名： 日期：質(zhì)量部頒發(fā)本文件根據(jù)需要應(yīng)分發(fā)于以下部門：01 質(zhì)量部下表用于記錄修訂/變更主要內(nèi)容及歷史。文件編號(hào)修訂原因修訂日期按GMP（2010年修訂版）及2015年版中國藥典要求新制定目 錄1. 概述2. 驗(yàn)證目的和范圍3. 組織及職責(zé)4. 驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表5. 驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備的確認(rèn)6. 驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、試劑、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)7.驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法7.1試驗(yàn)菌株7.2菌液制備7.3培養(yǎng)基適用性檢查7.4計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)（薄膜過濾法）8

2、.偏差與漏項(xiàng)控制9.驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審1. 概述我公司自制純化水微生物限度檢查項(xiàng)目為需氧菌總數(shù)檢查。參照中國藥典2015版四部附錄1105：微生物計(jì)數(shù)法的規(guī)定，須對(duì)純化水檢查所用的R2A培養(yǎng)基進(jìn)行適用性試驗(yàn)。通過適用性試驗(yàn)以確認(rèn)所采用的培養(yǎng)基適用于純化水的需氧菌檢查。本驗(yàn)證方案通過試驗(yàn)菌株的回收率測(cè)試，驗(yàn)證R2A瓊脂培養(yǎng)基是否適用于本品的需氧菌總數(shù)檢查。2. 驗(yàn)證目的和范圍驗(yàn)證純化水的需氧菌檢查所用R2A培養(yǎng)基的適用性，對(duì)其有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)，保證檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性。本驗(yàn)證方案采用1批按GMP要求組織生產(chǎn)的純化水，并進(jìn)行R2A培養(yǎng)基適用性檢查。3.組織及職責(zé)3.1驗(yàn)證方案和驗(yàn)證報(bào)告的起草、審核、批準(zhǔn)驗(yàn)證方

3、案由質(zhì)量部QC組負(fù)責(zé)起草，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)。驗(yàn)證方案實(shí)施完成后，由QC組負(fù)責(zé)匯總需氧菌檢查法驗(yàn)證的結(jié)果、撰寫報(bào)告，由質(zhì)量部審核，最終由質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)報(bào)告。3.2驗(yàn)證方案的培訓(xùn)驗(yàn)證方案在經(jīng)質(zhì)量負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后，由QC組組長對(duì)本次驗(yàn)證實(shí)施的相關(guān)人員組織培訓(xùn)工作，并將該次的培訓(xùn)記錄歸檔。3.3驗(yàn)證方案實(shí)施過程中的變更和偏差驗(yàn)證方案實(shí)施過程中如有變更和偏差，質(zhì)量負(fù)責(zé)人應(yīng)當(dāng)組織進(jìn)行評(píng)估并采取相應(yīng)的控制措施。3.4 驗(yàn)證工作小組成員表姓名部門及職務(wù)職 責(zé)質(zhì)量負(fù)責(zé)人/質(zhì)量受權(quán)人負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案及報(bào)告的批準(zhǔn)質(zhì)量部QA組長審核驗(yàn)證方案、審核驗(yàn)證報(bào)告并協(xié)調(diào)工作質(zhì)量部QC組長負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案審核、實(shí)施、匯總報(bào)

4、告及培訓(xùn)工作 質(zhì)量部QC負(fù)責(zé)驗(yàn)證方案起草、具體實(shí)施、報(bào)告工作4. 驗(yàn)證進(jìn)度計(jì)劃表 本次R2A培養(yǎng)基的適用性試驗(yàn)的計(jì)劃安排時(shí)間是2015年8 月至2015年 9月。5. 驗(yàn)證所需要的儀器設(shè)備的確認(rèn)主要檢驗(yàn)儀器設(shè)備確認(rèn)表序號(hào)儀器設(shè)備名稱型 號(hào)編號(hào)生產(chǎn)廠家1電子天平 2電熱恒溫水浴鍋 3恒溫培養(yǎng)箱 4壓力蒸汽滅菌鍋 5生物安全柜 6微生物限度檢查儀 7潔凈工作臺(tái) 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6. 驗(yàn)證所需要的菌種、培養(yǎng)基、試劑、檢驗(yàn)樣品的確認(rèn)6.1.試驗(yàn)菌種檢查表序號(hào)菌種名稱代碼甘油菌種批號(hào)菌種內(nèi)控縮寫來源1銅綠假單胞菌CMCC（B）10104Pa中國食品藥品檢定研究院2枯草芽孢桿菌CMCC（B）

5、63501Bs中國食品藥品檢定研究院檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6.2試驗(yàn)所需的培養(yǎng)基檢查序號(hào)名稱生產(chǎn)廠家是否通過培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)批號(hào)01胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基 是 否 02胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基 是 否 03R2A瓊脂培養(yǎng)基 是 否 04R2A瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基 是 否 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6.3試劑序號(hào)名稱規(guī)格級(jí)別生產(chǎn)廠家批號(hào)01pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液干粉250g 檢查人/日期： 復(fù)核人/日期：6.4.試劑及培養(yǎng)基配制pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液（沖洗液）：稱取pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液干粉16.09g。加水定容1000mL，微溫溶解，濾清，分裝至藍(lán)蓋試劑瓶，121

6、濕熱滅菌20min。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：取胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基29.8g，加1L純化水，加熱助溶，分裝至藍(lán)蓋試劑瓶，121濕熱滅菌20min。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基：取本品40g，加1L純化水，加熱助溶，分裝至錐形瓶，121濕熱滅菌20min。R2A瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基：取本品 4.55g，加300 mL純化水，加熱助溶，分裝至錐形瓶，121濕熱滅菌20min。 R2A瓊脂培養(yǎng)基：取本品18.2g，加1L純化水，加熱助溶，分裝至藍(lán)蓋試劑瓶，121濕熱滅菌20min。7.驗(yàn)證項(xiàng)目和驗(yàn)證方法7.1試驗(yàn)菌種R2A培養(yǎng)基的適用性試驗(yàn)所用的菌株為本實(shí)驗(yàn)室-80冰箱保存的銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的甘油菌，均為

7、第2代。7.2菌液制備7.2.1.稀釋液的配制pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液：稱取pH 7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液干粉16.09g。加純化水定容1000mL；微溫溶解，濾清，分裝至1000 mL藍(lán)蓋試劑瓶中，121濕熱滅菌20min。7.2.2.菌液的制備 從-80冰箱取出銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的第2代菌液，分別接種至10ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。同時(shí)分別劃線接種至胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基中，3035培養(yǎng)1824小時(shí)。菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2 小時(shí)內(nèi)使用；若保存在28，可在24小時(shí)內(nèi)使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在驗(yàn)證過的貯存期內(nèi)使用。7.3.培養(yǎng)

8、基適用性檢查取銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌各不大于100 cfu的菌液1ml分別注入90mm無菌平皿中，注入15-20ml溫度不超過45的供試R2A瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，每種試驗(yàn)菌各稀釋度制備兩個(gè)平板，置30-35倒置培養(yǎng)3天，計(jì)數(shù)；同時(shí)，用R2A瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢R2A瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)?；厥章?供試培養(yǎng)基組/對(duì)照培養(yǎng)組X100%計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查驗(yàn)證記錄試驗(yàn)時(shí)間 年 月 日 完成時(shí)間 年 月 日驗(yàn)證菌株平皿號(hào)供試培養(yǎng)基組cfuml對(duì)照培養(yǎng)基組cfuml回收率%應(yīng)50%200%銅綠假單胞菌(培養(yǎng)3天計(jì)數(shù))1-2-平均值枯草芽孢桿菌(培養(yǎng)3天計(jì)數(shù))1-2-平均值結(jié)論復(fù)核人 試驗(yàn)人 .

9、7.4接受標(biāo)準(zhǔn)可接受標(biāo)準(zhǔn)為各株試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)在0.52范圍內(nèi)。8.偏差與漏項(xiàng)控制：微生物限度檢查方法驗(yàn)證過程中存在和發(fā)現(xiàn)的任何偏差與漏項(xiàng)，都應(yīng)進(jìn)行詳細(xì)的記錄，并應(yīng)按公司GMP文件偏差處理規(guī)程進(jìn)行調(diào)查與處理。偏差調(diào)查與處理的報(bào)告和支持文件，應(yīng)作為此確認(rèn)方案的附錄部分。偏差和漏項(xiàng)記錄表偏差和漏項(xiàng)：處理過程：檢查人/日期： 復(fù)核人/日期： 9.驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審表驗(yàn)證項(xiàng)目名稱純化水需氧菌檢查R2A培養(yǎng)基適用性試驗(yàn)方案驗(yàn)證項(xiàng)目負(fù)責(zé)人 驗(yàn)證起止日期驗(yàn)證報(bào)告編號(hào) 驗(yàn)證結(jié)論：評(píng)價(jià)和建議：驗(yàn)證報(bào)告會(huì)審人簽名起草部門：質(zhì)量部QC組簽名/日期：審核部門：質(zhì)量部QC組簽名/日期：部門：質(zhì)量部QA組簽名/日期：批準(zhǔn)質(zhì)量負(fù)責(zé)人簽名/日期：驗(yàn)證報(bào)告 2015年 8 月 29 日至 年 月 日，驗(yàn)證小組根據(jù)批準(zhǔn)的微生物限度檢查方法驗(yàn)證文件對(duì)培養(yǎng)基適用性檢查（需氧菌）進(jìn)行了相關(guān)的一系列驗(yàn)證工作，達(dá)到了預(yù)期效果，滋將有關(guān)事項(xiàng)說明如下：1、 驗(yàn)證方案在實(shí)施過程中未做修改。2、 驗(yàn)證方案各項(xiàng)性能指標(biāo)在驗(yàn)證中未作變動(dòng)，誤差在允許范圍內(nèi)。3、 驗(yàn)證過程中結(jié)果符合規(guī)定要求，記錄完整屬實(shí)。4、 驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)計(jì)要求和GMP原則要求，可以投入使用。5、 片組分或檢驗(yàn)條件改變時(shí)須重新驗(yàn)證。以上情況，請(qǐng)驗(yàn)證委員會(huì)審批！驗(yàn)證小組：年 月 日試驗(yàn)報(bào)告審批表驗(yàn)證名稱純化水需氧菌檢查R2A培養(yǎng)基適用性