細胞工程考試

1、專業(yè)： 生物技術(shù)年級2011級 學生姓名 敖佳琳 學號 2011210154序號裝訂線華中師范大學20132014學年第二學期期末考試試卷（A）卷課程名稱 細胞工程 課程編號 84425002 任課教師 金燁 劉凱于 題型植物動物總分簡答分析論述綜合分值30203020100得分得分評閱人一、植物部分簡答題(每題10分,30分)1. 簡述植物細胞工程的應(yīng)用。10分1. 脫毒苗生產(chǎn)，利用植物快速繁殖技術(shù)2. 植物改良，利用體細胞無性系技術(shù)3. 創(chuàng)造新的種質(zhì)資源，利用原生質(zhì)體培養(yǎng)和體細胞雜交技術(shù)4. 植物來源生物產(chǎn)品的生產(chǎn)，如人參皂甙、紫杉醇等5. 人工種子生產(chǎn)，利用植物胚胎培養(yǎng)技術(shù)2. 舉例說明

2、你對胚胎發(fā)生途徑和器官發(fā)生途徑的理解。10分 胚胎發(fā)生途徑是指指外植體按胚胎發(fā)生方式形成再生植株的過程。在植物的有性生殖過程中，精子與卵子結(jié)合形成合子，爾后發(fā)育成胚，胚再進一步發(fā)育成完整的植株。蘭花的組織培養(yǎng)過程中，經(jīng)誘導之后，莖尖會逐漸增大而形成原球莖體，與蘭花的胚胎正常發(fā)育相似。器官發(fā)生途徑是指在組織培養(yǎng)的過程中，再生植株不是通過胚胎，而是通過分生中心直接分化器官，最終形成完整植株的過程。通常情況下像草莓無菌苗的獲?。翰捎醚兰夥稚M織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，進而再分化發(fā)育成不同的組織器官，最后形成完整植株。 3. 有位同學配完MS液體培養(yǎng)基時，發(fā)現(xiàn)其中有一些沉淀，請分析可能的原因。10分 M

3、S液體培養(yǎng)基配方復(fù)雜，從培養(yǎng)基配方角度考慮，出現(xiàn)沉淀可能有以下個方面的原因：l Mg2+、Ca2+、Fe3+等會與PO43-結(jié)合形成微溶或難溶物，加母液時沒有有意調(diào)整加樣順序l 調(diào)節(jié)pH時，所用的NaOH的濃度太高，又沒有及時攪拌均勻，局部出現(xiàn)過堿性，產(chǎn)生Mg(OH)2及Ca(OH)2等沉淀l 所用到的雙蒸水沒有達到要求，存在雜質(zhì)排除以上原因，操作者在配置時使用到的器皿不潔凈以及滅菌過程溫度、時長的設(shè)置不合適都有可能會是的配置的培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀。得 分評閱人二、植物部分-分析題(20分)1 配置MS固體、液體培養(yǎng)基2 誘導形成愈傷組織（流程圖如下）以水稻、煙草的種子為原材料，采用植物愈傷組織誘導

4、的方法建立1. 如果要建立水稻（單子葉植物）和煙草（雙子葉植物）的懸浮細胞系，請寫出你的工作方案。工作方案可以用文字描述，也可以箭頭、文字說明，你需要盡量考慮到實驗的細節(jié)，不要過于簡略，但又要注意：實驗方案不等于具體的實驗步驟，不可寫成實驗的具體步聚。20分煙草種子消毒（84#消毒無菌水反復(fù)沖洗）水稻種子去殼、消毒（95%酒精消毒無菌水沖洗25.0g/L的次氯酸鈉浸泡無菌水沖洗）接種（每瓶接種23粒）接種（誘導愈傷組織形成的固體培養(yǎng)基中，每瓶接種510粒）培養(yǎng)，得無菌苗葉片消毒，切成小片接種（每皿接種5片）培養(yǎng)（26，恒溫培養(yǎng)箱避光培養(yǎng)）愈傷組織反復(fù)繼代培養(yǎng)3 愈傷組織離散重懸液體懸浮，搖床振

5、蕩超松散愈傷組織得分評閱人三、動物部分-問答題 (每題10分，共30分)影響動物細胞體外增殖的環(huán)境因素主要包括溫度、滲透壓、pH及氣體環(huán)境等。溫度 溫度是動物細胞在體外生存的基本條件之一，不同種類的動物細胞最適 生長溫度是不同的。滲透壓 體外培養(yǎng)滲透壓是依賴于溶液中離子和中性分子（蔗糖、葡萄糖等）濃 度，不同來源的細胞其所要求的滲透壓是不相同的 。pH 合適的酸堿度也是細胞生存的必要條件之一，一般來說，大多數(shù)哺乳動 物細胞的最適pH為7.27.4之間，如果低于6.5或者高于7.6都會對細胞 產(chǎn)生不利影響，較長時間在這種pH條件，細胞會衰老或死亡。氣相環(huán)境 體外培養(yǎng)細胞需要有一理想的氣體環(huán)境，包

6、括O2和CO2，且其濃度則需 要適當。多數(shù)細胞需要在有O2的條件下才能生長，CO2為細胞生長所需 要，同時又是細胞代謝的產(chǎn)物，并且與維持培養(yǎng)基的pH有關(guān)。體外培養(yǎng) 細胞采用開放培養(yǎng)時，其氣體環(huán)境一般應(yīng)為95%空氣加5%CO2的混合氣體。1. 簡述影響動物細胞體外增殖的環(huán)境因素（10分）。淋巴細胞雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體的主要步驟包括： 1、抗原制備； 2、免疫動物； 3、免疫脾細胞和骨髓瘤細胞的制備； 4、細胞融合； 5、雜交瘤細胞的選擇培養(yǎng)； 6、雜交瘤細胞的篩選； 7、雜交瘤細胞的克隆化； 8、單克隆抗體的檢定； 9、分泌單克隆抗體雜交瘤細胞系的建立； 10、單克隆抗體的大量制備。 用圖示

7、可以表示為：2 試述單克隆抗體的制備過程(10分)胚胎干細胞的特征，在形態(tài)上表現(xiàn)為：l 體積小、核大，l 有一個或多個核仁；l 胚胎干細胞克隆緊密堆積，無明顯的界限，形似鳥巢。在生化上表現(xiàn)為：l 具有堿性磷酸酶和端粒酶活性；l 表達SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60等；l 表達OCT-4蛋白；l 無X染色體失活。3 胚胎干細胞有什么特征？造血干細胞的來源途徑有哪些（10分）?造血干細胞是從血液或骨髓中分離到的具有能自我更新、能分化成一些具有組織特化的細胞、能從骨髓中游離出來進入血液循環(huán)、能發(fā)生程序性死亡特性的細胞。造血干細胞的來源途徑主要有：l 骨髓；1/400l 外周血；1/100

8、000l 臍帶血；1/10000l 胎兒造血系統(tǒng)；l 胚胎干細胞和胚胎生殖細胞得分評閱人四 動物部分-綜合題 (20分) 根據(jù)實驗需要準備好所需的試驗器皿，并清洗好。主要用到的器皿有：玻璃器皿（細胞培養(yǎng)瓶、試劑瓶、容量瓶、燒杯等） 新購置的應(yīng)經(jīng)過泡酸、泡堿處理，之后用刷子刷洗再用蒸餾水沖洗，完成之后自然陰干或者烘干。用過的培養(yǎng)瓶則可以省去泡酸泡堿的過程。塑料器皿（試劑瓶等） 新置的塑料器皿先用清水充分浸泡和清洗，再用2%NaOH溶液浸泡過夜，取出用自來水沖洗后用5%稀鹽酸浸泡30分鐘，取出再用自來水沖洗，完后用蒸餾水漂洗，晾干。用過的塑料器皿則可以省去泡酸泡堿的過程。濾器 玻璃濾器按照如下流程清洗后烤干備用。1. 用清水注入濾器，抽氣過濾3-5遍至無白沫，然后水滴濾過液。2. 用清潔液抽濾1-2遍，然后清潔液滴濾過夜。3. 自來水抽濾5遍，水滴濾過夜。4. 蒸餾水抽濾3遍，蒸餾水滴濾過夜。5. 三蒸水抽濾2遍，漂洗一次。 不銹鋼濾器按如下流程清洗后烤干備用。a. 棄去濾板或濾膜，浸泡于清水中。b. 用軟毛刷和優(yōu)質(zhì)洗滌劑輕輕刷洗干凈c. 自來水沖洗干凈d. 最后用蒸餾水漂洗3次金屬器械（鑷子、解剖刀等） 新置的金屬器械應(yīng)先用沾有汽油的沙布擦除防銹油，再用優(yōu)質(zhì)洗滌劑輕輕刷洗干凈，再經(jīng)自來水洗凈，最后用蒸餾水洗凈后用酒精棉球擦試，晾干或烤干備用。滅菌的過程常采用高壓濕熱滅菌，