磷酸鹽緩沖液的配發(fā)

1、磷酸鹽緩沖液的配發(fā)找本實(shí)驗(yàn)書一般都有附 磷酸氫二鈉 -磷酸二氫鈉緩沖液（0.2mol/L ）pH 值； 0.2mol/LNa2HPO4溶液（ mL ）； 0.2mol/LNaH2PO4溶液（ mL ）5.8；8.0；92.05.9； 10.0；90.06.0 ； 12.3；87.76.1； 15.0；85.06.2； 18.5；81.56.3； 22.5 ；77.56.4； 26.5；73.56.5； 31.5；68.56.6； 37.5 ；62.56.7； 43.5；56.56.8； 49.0 ；51.06.9 ； 55.0；45.07.0； 61.0；39.07.1； 67.0；33.07

2、.2； 72.0；28.07.3； 77.0；23.07.4； 81.0 ；19.07.5； 84.0；16.0的磷酸根濃度 ，而非 Na 離子或 K 離子的濃度， Na 離子和K 離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。母液的配制：0.2M Na2HPO4 ：稱取71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml水0.2M NaH2PO4 ：稱取31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于 1000ml水各種濃度 PB(pH=7.4) 的配制：先配 0.2M PB (pH=7.4 ，100ml) ：取 19ml 0.2mol/L的NaH2PO4 ， 81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4, 即

3、可。然后 只需將 0.2M PB (pH=7.4) 按相應(yīng)比例適當(dāng)稀釋即可，如：0.1M PB（PH=7.4 ） ：取 500ml 0.2M PB，加水稀釋至1000ml即可。0.01M PB （PH=7.4 ）：取 50ml 0.2M PB，加水稀釋至1000ml即可。0.02M PB （PH=7.4 ）：取 100ml 0.2 M PB，加水稀釋至1000ml即可。若需要NaCl 的話，加入NaCl至 0.9% （g/100ml ）即可。另：其它各種另PH值的0.2M PB（100ml)配方 ：pH0.2M NaH2PO4（ml ）0.2M Na2HPO4（ml）5.793.56.55.8

4、9285.990106.087.712.36.185156.281.518.56.377.522.56.473.526.56.568.531.56.662.537.56.756.543.56.851496.945557.038627.133677.228727.323777.419ml81ml7.516847.613877.710.590.57.88.591.57.97938.05.394.70.01M磷酸鹽緩沖液（ PBS ）配制方法稱取 8g NaCl 、0.2g KCl 、1.44g Na2HPO4和 0.24g KH2PO4,溶于 800ml 蒸餾水中， 用 HCl 調(diào)節(jié)溶液的pH 值

5、至 7.4 ，最后加蒸餾水定容至1L 即可。在 15lbf/in2(1034×105Pa) 高壓下蒸氣滅菌（至少20 分鐘），保存存于室溫或4冰箱中。需要注意的是，通常所說(shuō)的濃度0.01M 指的是緩沖溶液中所有的磷酸根 濃度，而非 Na離子或 K 離子的濃度，Na 離子和 K離子只是用來(lái)調(diào)節(jié)滲透壓的。如果是用于免疫組化的話， 則需要在配置的時(shí)候分別加入 100 u/ml 青霉素和鏈霉素之后再調(diào)PH 、定容、滅菌消毒。PH7.67.47.27.0H2O1000100010001000NaCl8.58.58.58.5Na2HPO4 2.22.22.22.2NaH2PO4 0.10.20.

6、30.4根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來(lái)看，新鮮配置的PBS 攪勻后其 PH 值約在 7.2-7.4之間，可是在溫度的影響下，尤其在夏天， 其電離常數(shù)發(fā)生了改變，在經(jīng)過(guò)晝夜的時(shí)間后， PH 值會(huì)明顯改變（我親自測(cè)過(guò)偏酸） 。所以做實(shí)驗(yàn)的同學(xué)可要注意了， PH 值可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，甚至可能導(dǎo)致陰性。 所以務(wù)必記得這個(gè)時(shí)候和天氣， 要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)條件控制問(wèn)題。每次使用前最好用試紙測(cè)一下過(guò)夜了的 PBS ，如果發(fā)生偏酸或偏堿，注意重新?lián)Q新液。PBS 緩沖液稱取 NaCl 8g ， KCl 0.2g ， Na2HPO4 ?12H2O3.63g, KH2PO40.24g，溶于900ml雙蒸水中，用鹽酸調(diào)pH值至7.4 ，加水定

7、容至1L ，常溫保存?zhèn)溆?。PBST 緩沖液取 300l Tween -20 加入 PBS 100ml 中，混勻后即刻使用?，F(xiàn)用現(xiàn)配。如果是把所有固體加大十倍， 配置為濃縮液，工作時(shí)候十倍稀釋，那么，在剛配好濃縮液時(shí)， PH 在 6.5 左右，明顯偏酸。不能用鹽酸調(diào)。雖然可以用氫氧化鈉顆粒調(diào)，但是有更方便的方法。十倍稀釋以后， PH 自動(dòng)升高到所需要的值。不需要其它任何處理。這個(gè)可以先取少量試一試，配好之后再測(cè)一次PH8.0的PBS配方詳細(xì)1. NaCl 137mmol/L，KCl 2.7mmol/L，Na2HPO4 4.3mmol/L，KH2PO4 1.4mmol/L2. 向燒杯中加入約 80

8、0 ml 的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加濃鹽酸將 pH 值調(diào)節(jié)至 8.0 ，然后加入去離子水將溶液定容至 1L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述 PBS Buffer中無(wú)二價(jià)陽(yáng)離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充 1 mM CaCl2和 0.5 mM MgCl2。0.05mol/L PBS(磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS)的配制：甲液： 0.05mol/L Na2HPO4溶液：稱取磷酸氫二鈉9.465g7.099g, 加蒸 餾水至 1000ml ;乙液： 0.05mol/L KH2P04 溶液 : 稱取磷酸二氫鉀 , 9.07g 6.803g, 加蒸餾水至 1000m1 。將甲乙液分裝在 棕色瓶 內(nèi)，于 4冰箱中保存，用時(shí)甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需 pH 的緩沖液 ,見(jiàn)下表 :pH甲液5.292.55.595.05.9110.06.2420.06.4730.06.6440.06.815