中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰課件

1、中國胃癌中國胃癌HER2HER2檢測檢測(jin c)(jin c)指南解讀指南解讀（20112011版）版）第一頁，共四十頁。概述概述(i (i sh)sh)本指南推薦本指南推薦IHCIHC與與FISHFISH和（或）和（或）DSISHDSISH相結(jié)合的檢測策略相結(jié)合的檢測策略o胃癌有必要進行準確的胃癌有必要進行準確的HER2HER2檢測檢測oHER2HER2狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學法（狀態(tài)檢測首先選用免疫組織化學法（IHCIHC）oIHC 3+IHC 3+的病例的病例(bngl)(bngl)視為視為HER2HER2陽性陽性oIHC 2+IHC 2+的病例建議進一步行原位雜交（的病例建議

2、進一步行原位雜交（ISHISH：FISHFISH和或和或DSISHDSISH）檢測，）檢測，IHC IHC 2+/ISH+2+/ISH+的病例視為的病例視為HER2HER2陽性陽性oIHC 1+IHC 1+和和IHC 0 IHC 0 病例，病例，IHC 2+/ISH - IHC 2+/ISH - 病例視為病例視為HER2HER2陰性陰性o胃癌胃癌HER2HER2檢測應在有能力的實驗室進行檢測應在有能力的實驗室進行o檢測質(zhì)量取決于標本的采集、處理過程、檢測質(zhì)量取決于標本的采集、處理過程、IHC/ISH IHC/ISH 檢測方法和評判標準檢測方法和評判標準的執(zhí)行的執(zhí)行第二頁，共四十頁。中國胃癌HE

3、R2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)一1. 1. 請問您所在(suzi)的醫(yī)院胃癌HER2檢測是否屬于常規(guī)檢測項目？o是o否o不清楚第三頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)二請問您所在的醫(yī)院，由誰決定是否做胃癌HER2免疫組化檢測？o病理科o外科o腫瘤(zhngli)內(nèi)科o消化內(nèi)鏡室第四頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)三請您對多學科合作對胃癌HER2檢測的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增(dzng)），請按投票器選擇o0 o1o2o3o4o5第五頁，共四十頁。胃癌胃癌(wi i)HER2檢測檢測第六頁，共四十頁。切片切片(qi pi

4、n)脫水(tu shu)包埋固定固定(gdng)(gdng) HER2 HER2檢測的相關(guān)流程檢測的相關(guān)流程切片檢測判讀標本標本收取收取第七頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)四貴單位胃癌手術(shù)貴單位胃癌手術(shù)(shush)(shush)標本送到病理科處理的時間？標本送到病理科處理的時間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時內(nèi)C 2小時內(nèi)D 2小時E 不清楚 第八頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)五貴單位手術(shù)標本固定時間？貴單位手術(shù)標本固定時間？o不固定直接(zhji)取材o固定時間在8小時內(nèi)o固定時間在12小時左右（過夜）o固定時間12-24小時o不

5、清楚第九頁，共四十頁。標本(biobn)類型o 原發(fā)病灶的原發(fā)病灶的手術(shù)切除標本手術(shù)切除標本o 原發(fā)病灶的原發(fā)病灶的胃鏡活檢標本胃鏡活檢標本l建議取建議取6-86-8塊，以獲得塊，以獲得足夠的樣本組織足夠的樣本組織，多點活檢多點活檢對準確的對準確的檢測有必要檢測有必要o切除標本離體后切除標本離體后20203030分鐘內(nèi)分鐘內(nèi)進行標記、切開、固定進行標記、切開、固定(gdng)(gdng)等等初步處理后，及時送病理科初步處理后，及時送病理科o 活檢標本的大小活檢標本的大小2x2x2mm2x2x2mm3 3o原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使用手

6、術(shù)切建議使用手術(shù)切除組織進行檢測除組織進行檢測標本(biobn)采集第十頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰問題(wnt)六貴單位送檢標本采用何種固定液？貴單位送檢標本采用何種固定液？o不用固定液，直接(zhji)送病理科o10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）o10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）o10%甲醛固定液o不清楚第十一頁，共四十頁。標本(biobn)固定o采用新鮮配制采用新鮮配制10%10%中性緩沖福爾馬林中性緩沖福爾馬林作為固定液作為固定液o固定液的量應為組織的固定液的量應為組織的1010倍倍o 手術(shù)切除標本的固定時間為手術(shù)切除標本的固定時間為8 848h48h ( (至

7、少至少1h/mm1h/mm組織組織) )o活檢標本的固定時間活檢標本的固定時間不超過不超過24h24h ( (至少至少1h/mm1h/mm組織組織) )o不宜使用不宜使用(shyng)(shyng)其它固定液，非其它固定液，非10%10%中性緩沖福爾馬林中性緩沖福爾馬林制劑可能會妨礙制劑可能會妨礙IHCIHC和和ISHISH檢測的可靠性檢測的可靠性o不宜用微波快速固定組織不宜用微波快速固定組織規(guī)范的標本固定是規(guī)范的標本固定是HER2檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防檢測質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止止(fngzh)(fngzh)細胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失細胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失標本準備第十

8、二頁，共四十頁。固定1小時固定52小時固定4小時固定2周固定時間影響固定時間影響(yngxing)HER2染色結(jié)果染色結(jié)果固定22小時圖片(tpin)由 of A Morey, St Vincents Hospital, NSW, Australia提供第十三頁，共四十頁。固定較差示例固定較差示例(shl)：乳腺癌：乳腺癌HER2 IHC檢測檢測o固定(gdng)較差會導致染色結(jié)果的異質(zhì)性o 胞質(zhì)染色可能是由固定較差導致圖片(tpin)由 W Hanna提供第十四頁，共四十頁。固定較差示例固定較差示例(shl)：胃癌：胃癌HER2 IHC檢測檢測o 固定(gdng)不完全會導致假陽性檢查結(jié)果o

9、胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當?shù)墓潭ǚ绞綀D片(tpin)由Targos Molecular Pathology.提供第十五頁，共四十頁。固定固定(gdng)較差示例：較差示例：HER2 ISH檢檢測測圖片(tpin)由 Abbott/Vysis.提供p固定(gdng)不完全 - SISH，“空核”p固定不完全導致探針信號較弱或缺失p過度染色會導致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針信號可能較弱或缺失第十六頁，共四十頁。HER2檢測(jin c)HER2HER2過表達過表達(biod)(biod)的檢測的檢測HER2HER2擴增的檢測擴增的檢測(jin c)(jin c)n 免疫組織化學染色方法（免疫組織化學染色

10、方法（IHC）l 自動化自動化n 原位雜交方法原位雜交方法 （ISH）l FISHl Dual SISH第十七頁，共四十頁。實驗室總體(zngt)要求o應當在有條件的實驗室進行，擁有試驗所需的儀器和設(shè)備及應當在有條件的實驗室進行，擁有試驗所需的儀器和設(shè)備及空間條件空間條件o實驗室掌握包括標本的制備、抗體的選擇、抗原修復方法實驗室掌握包括標本的制備、抗體的選擇、抗原修復方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預處理方法及其它相及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測預處理方法及其它相關(guān)技術(shù)關(guān)技術(shù)o實驗室經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部實驗室經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部(wib)(wib)質(zhì)量控制程序驗證，建立質(zhì)量控制程序驗證，

11、建立完善的完善的實驗室標準操作流程（實驗室標準操作流程（SOPSOP） o實驗室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓實驗室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過合格培訓第十八頁，共四十頁。HER2檢測(jin c)-IHCp IHCIHC方法方法l 試驗方法根據(jù)實驗室條件試驗方法根據(jù)實驗室條件(tiojin)(tiojin)可以選擇手工染可以選擇手工染 色、半自動染色和全自動免疫組化染色色、半自動染色和全自動免疫組化染色l 建議使用全自動染色方法建議使用全自動染色方法p 建議使用建議使用我國相關(guān)部門我國相關(guān)部門（SFDASFDA）批準的試劑盒）批準的試劑盒p 自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部質(zhì)自行組

12、配和分裝的抗體必須經(jīng)過嚴格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制量控制(kngzh)(kngzh)程序驗證，并與權(quán)威機構(gòu)批準的檢測試劑盒程序驗證，并與權(quán)威機構(gòu)批準的檢測試劑盒進進 行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性行比對，以保證檢測結(jié)果的可靠性IHCIHC抗體抗體第十九頁，共四十頁。結(jié)果判讀(pn d)和分析普通普通(ptng)光學顯微光學顯微鏡鏡熒光熒光(ynggung)顯顯微鏡微鏡p 病理醫(yī)生需要經(jīng)過培訓p IHC評分標準和乳腺癌有所不同p 樣本：活檢組織和切除組織有所不同p 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織p 溝通：結(jié)果不確定時需要與腫瘤科醫(yī)生溝通第二十頁，共四十頁。IHCIHC判讀標準判讀標準（參照

13、ToGA經(jīng)驗(jngyn)，所有圖片來自SCC）0 0 無反應或腫瘤無反應或腫瘤(zhngli)(zhngli)細胞膜染色細胞膜染色10% 1+ 1+ 10%腫瘤細胞微弱腫瘤細胞微弱(wiru)(wiru)或隱約膜染色，或隱約膜染色，細胞膜僅部分區(qū)域著色細胞膜僅部分區(qū)域著色2+2+ 10%腫瘤細胞弱到中度的完全或腫瘤細胞弱到中度的完全或細胞基底部和兩側(cè)邊膜染色細胞基底部和兩側(cè)邊膜染色3+3+ 10%腫瘤細胞完全性或基底部和腫瘤細胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強染色（對兩側(cè)邊膜強染色（對3+的病例同時的病例同時表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）IHCIHC結(jié)果判讀時應注意：

14、細胞質(zhì)著色應忽略不計，正常胃黏膜上皮細胞不應著色結(jié)果判讀時應注意：細胞質(zhì)著色應忽略不計，正常胃黏膜上皮細胞不應著色HER2檢測-IHC第二十一頁，共四十頁。o 原位雜交檢測原位雜交檢測(jin c)(jin c)方法（方法（ISHISH） 熒光原位雜交（熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）o 探針探針建議使用我國相關(guān)部門（建議使用我國相關(guān)部門（SFDASFDA）批準的試劑盒）批準的試劑盒第二十二頁，共四十頁。FISH，HER2紅色紅色(hngs)信號增多，局信號增多，局部呈簇狀，部呈簇狀，CEP17信號信號1-2個，個，比值比值7.

15、2，有擴增（，有擴增（100）FISH，HER2和和CEP17信號信號(xnho)各各1-2個，比值個，比值1.65，無擴增（，無擴增（100） FISHFISH：嚴格按照：嚴格按照(nzho)(nzho)試劑盒標準程序執(zhí)行試劑盒標準程序執(zhí)行HER2檢測-FISH圖片來自圖片來自SCC第二十三頁，共四十頁。DSISH HER2黑色信號擴增，呈簇狀；黑色信號擴增，呈簇狀；CEP17紅色紅色(hngs)信號信號1-2個；比值個；比值15，有擴增有擴增(100)DSISH HER2和和CEP17信號信號(xnho)各各1-2個，比值個，比值0.8，無擴增，無擴增(100)DSISHDSISH：實驗室

16、應先進行嚴格的對比：實驗室應先進行嚴格的對比(dub)(dub)試驗和程序優(yōu)化試驗和程序優(yōu)化 嚴格按照所用全自動染色儀器的優(yōu)化程序和嚴格按照所用全自動染色儀器的優(yōu)化程序和SOPSOP執(zhí)行執(zhí)行HER2檢測-DSISH圖片來自圖片來自SCCSCC第二十四頁，共四十頁。中國胃癌HER2檢測-指南解讀-鄭杰請問貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測病理(bngl)報告格式？是否問題(wnt)七第二十五頁，共四十頁。檢測(jin c)報告內(nèi)容胃癌HER2 IHC/ISH檢測報告臨床信息：臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診住院號 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測日期 年 月 日標本信息：標本信息： 病理號/蠟塊號 標本類型：

17、 手術(shù)切除 活檢腫瘤部位： 胃食道交界處 胃底 胃體 胃竇 幽門管 轉(zhuǎn)移灶標本固定液種類（10中性緩沖福爾馬林(f r m ln)）是否標本離體至固定時間(如有記錄) 分鐘標本固定的時間(如有記錄) 分鐘組織學類型/分級 Laurn分型 臨床分期 T N M 第二十六頁，共四十頁。HER2 IHC 檢測(jin c)報告檢測信息：檢測信息：抗體信息(克隆號生產(chǎn)商) 檢測方法 手工/半自動 全自動 對照設(shè)置情況 3+ 0 樣本量是否足夠用于評估是否具有膜著色的腫瘤細胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有無腫瘤細胞膜染色模式 完整 基底和側(cè)膜（U-shaped) 兩者皆有判讀結(jié)果：判讀結(jié)果：0 l+ 2+

18、3+ 無法判讀結(jié)論：結(jié)論：陽性(yngxng)；不確定；陰性；無法判讀檢測人員：技術(shù)員檢測人員：技術(shù)員 病理醫(yī)師病理醫(yī)師 第二十七頁，共四十頁。 HER2 ISH 檢測(jin c)報告 檢測信息：檢測信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號) 檢測方法 對照設(shè)置情況 陽性對照 陰性對照 樣本量是否足夠用于評估是否IHC檢測結(jié)果0 l+ 2+ 3+ 無法判讀判讀結(jié)果：判讀結(jié)果： 用于評估的腫瘤細胞數(shù)量 HER2信號總數(shù)CEPl7信號總數(shù) HER2信號數(shù)平均值細胞核 CEPl7信號數(shù)平均值細胞核 17號染色體是否為多體是否結(jié)論結(jié)論(jiln)(jiln)： 陽性陽性( (擴增擴增) ) 陰性陰性( (無擴

19、增無擴增) ) 無法判讀無法判讀 檢測人員：檢測人員：技術(shù)員技術(shù)員 病理醫(yī)生病理醫(yī)生 第二十八頁，共四十頁。實驗室質(zhì)量(zhling)控制 （1）nHER2蛋白和基因擴增的檢測均應在內(nèi)、外部質(zhì)量控制良好(lingho)的病理實驗室進行n檢測必須嚴格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠n不具備HER2檢測條件的單位應按照指南要求，妥善處理和準備好標本，提供給有質(zhì)量保證的病理實驗室進行檢測第二十九頁，共四十頁。實驗室質(zhì)量(zhling)控制 （2）實驗室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下o準備開展GC HER2檢測的實驗室應選擇12家已較好開展該項檢測的實驗進行25100例標本的對比驗證(ynzh

20、ng)o 或通過參加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動來實現(xiàn)，外部質(zhì)控陽性和陰性結(jié)果的一致性應達到90以上，每年應進行12次o從事GC HER2檢測的實驗室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應進行必要的培訓和資格考核第三十頁，共四十頁。實驗室質(zhì)量(zhling)控制 （3）n實驗室應建立完善的SOP，并做好每次檢測情況的記錄(jl)和存檔工作n 任何改變操作程序和試劑的行為均應重新進行嚴格的驗證n 內(nèi)部質(zhì)控應包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復性分析，每次染色陽性、陰性對照的設(shè)置，如有可能還應沒置包括低表達低擴增對照n 檢測相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護、校驗第三十一頁，共四十頁。p 類似類似(li s)乳腺癌乳腺癌p亮視野檢測

21、方法有優(yōu)勢亮視野檢測方法有優(yōu)勢Her2檢測檢測(jin c)流程流程樣本樣本(yngbn)收集收集鏡下觀察鏡下觀察p異質(zhì)性高異質(zhì)性高p需要觀察需要觀察整張整張切片切片檢測所需時間檢測所需時間p胃癌進展快，宜及時獲得結(jié)果胃癌進展快，宜及時獲得結(jié)果p 多學科多學科參與參與結(jié)果判讀結(jié)果判讀p與乳腺癌有所不同與乳腺癌有所不同胃癌HER2HER2檢測： 基本過程和特殊性p數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的織的活檢活檢標本標本 p具有代表性的具有代表性的手術(shù)切除手術(shù)切除標本標本第三十二頁，共四十頁。o多學科協(xié)作共同努力多學科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員醫(yī)生和技術(shù)員o知識更新和觀念知識更

22、新和觀念(gunnin)(gunnin)改變改變 患者和醫(yī)生患者和醫(yī)生第三十三頁，共四十頁。多學科協(xié)作檢測(jin c)HER2：臨床醫(yī)生之角色采樣采樣 手術(shù)和胃鏡活檢手術(shù)和胃鏡活檢(hu jin)(hu jin)（6-8塊組織塊組織） 固定固定 10%中性緩沖福爾馬林中性緩沖福爾馬林樣本送檢（離體時間）樣本送檢（離體時間）30分鐘分鐘結(jié)果解讀結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽性陽性第三十四頁，共四十頁。多學科協(xié)作檢測HER2：病理(bngl)醫(yī)生之角色Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118145.檢測結(jié)果分析檢測結(jié)果分析 檢查備檢標本是否可用 正確設(shè)立內(nèi)部對照組 依照國際評分系統(tǒng)進行評分檢測結(jié)果報告檢測結(jié)果報告 使用標準化HER2檢測結(jié)果報告表 報告內(nèi)容應包括標本取樣，固定，檢測方法及評分系統(tǒng) 多學科(xuk)檢測治療小組(MDT)會議第三十五頁，共四十頁。學科(xuk)協(xié)作檢測HER2：技術(shù)員之角色l處理處理: : 避免影響檢測結(jié)果之因素- 最佳固定時間及固定方法- 石蠟包埋- 組織切片的合理時間 (最好于HER2檢測前切片)- 標本脫蠟l方法方法: : 使用(shyng)標準化/經(jīng)驗