PCR熒光檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)質(zhì)控規(guī)程

1、PCR熒光檢測(cè)試劑盒生產(chǎn)質(zhì)量控制規(guī)程一.微量加樣器的使用規(guī)定1 .微量加樣器校正：使用微量加樣器吸10 口 10次是否為100仙1。2 .加樣前吸頭潤(rùn)濕：當(dāng)吸頭排空時(shí)，仍會(huì)有一些殘留的液體以薄膜的形式 吸附在吸頭里面，所以，在加樣時(shí)先吸打液體數(shù)次，充分潤(rùn)濕吸頭管腔，以保證加樣的一致性。3 .加樣時(shí)吸頭應(yīng)靠試管壁：加樣時(shí)吸頭的液體順著管壁流出，防止液滴的 形成由于其表面張力的作用而阻止樣本的釋放。4 .吸頭是否與加樣器上吸頭套筒密封：樣器上吸頭與套筒密封完好。5 .加樣時(shí)注意第一停點(diǎn)和第二停點(diǎn)：吸液是應(yīng)注意大拇指按下按鈕至第一 停點(diǎn)，緩慢慢慢吸入液體。停留 1s,然后將吸頭提離液面。用吸紙抹去吸

2、嘴外 面可能黏附的液滴。放液時(shí)經(jīng)過第一停點(diǎn)，停 1-2s后，繼續(xù)按壓到第二停點(diǎn)， 排出殘余液體。6 . PCRE應(yīng)原液由于有甘油在冷的狀態(tài)較黏稠,易于1次吸取數(shù)人份，慢一 些。7 .邊加邊看，直觀估計(jì)，防止跳管。8 .低溫冷藏批量DNA!取液、PCRS應(yīng)液A和B取出時(shí)是否充分混勻后，分 裝使用，PC網(wǎng)應(yīng)液A和B是否避光低溫冷藏和使用。9 .配PCRK應(yīng)液應(yīng)先加緩沖液再加 PCRK應(yīng)液充分混勻，必要時(shí)倒置混勻， 再離心，或用滅菌吸頭上下吸幾次。10 . PCR5應(yīng)液（包括樣品）應(yīng)充分混勻：保證PC網(wǎng)應(yīng)曲線呈S形，全陰性 樣品呈近似水平曲線。PCR式驗(yàn)操作規(guī)程程序操作檢查操作1混勻方法每一次提醒注

3、意倒置混勻、移液器吹打、震蕩， 50000rpm離心1分鐘。2取血清樣本1）因水分蒸發(fā)變濃2）凍狀、混濁按（1）法混勻，再取25 6加水5 口混勻。溫水浴37 c溶解按（1 ）法混勻，或12000rpm離心5分鐘,取清液。3取質(zhì)控品凍狀、混濁溫水浴37 c溶解按（1）法混勻或12000rpm 離心5分鐘，取清液。4血清樣本稀釋混勻血清陰性血清40科l加陽(yáng)性血清10 6，按（1）法混勻。5倍稀釋5質(zhì)控品稀釋混勻質(zhì)控品血清稀釋液40 6加質(zhì)控品10 6，按（1）法混勻5倍稀釋。6血清樣本 DNA提取DNA取液完好血清樣本按（1）法混勻，取30 6 加DNA 提取液60 口，按（1）法混勻，98 C

4、 8 分鐘變性,0C冷卻2-3分鐘，12000rpm, 離心10分鐘，吸取上清液。7質(zhì)控品DNA變性分裝，有效，呈清液狀態(tài)，未反復(fù)加熱、凍融質(zhì)控品按（1）法混勻，取 3065000rpm 離心1分鐘，98 C 5分鐘變性,5000rpm ,離心1分鐘，吸取上清液。8PC取應(yīng)液混勻狀態(tài)取256 反應(yīng)液加5 d l提取DNA按（1） 法混勻,5000rpm離心1分鐘,5000rpm , 離心1分鐘，吸取上清液。9PC即應(yīng)室溫10-30 CPCR反應(yīng)槽四角不放管。10設(shè)陰性對(duì)照陰性混勻血清CT3811陽(yáng)性經(jīng)f品各濃度呈梯度以PCR阪應(yīng)液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈直線。12陰性質(zhì)控品B各濃度呈梯度以PCR府口

5、B反應(yīng)液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，呈直線。*血清稀釋液：全陰性血清再加 2倍HBV DNA1取液混勻,5000rpm ,離心1分 鐘，混勻血清98c 5分鐘變性，12000rpm,離心10分鐘，吸取上清液。三.超凈工作臺(tái)的使用、維護(hù)保養(yǎng)與清潔標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1. 目的建立一個(gè)超凈工作臺(tái)的使用、維護(hù)保養(yǎng)與清潔標(biāo)準(zhǔn)操作程序，使操作過程標(biāo)準(zhǔn)化。2. 職責(zé)質(zhì)量部QC負(fù)責(zé)本文件的起草，質(zhì)量部及QC僉驗(yàn)人員負(fù)責(zé)本標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)施。3. 范圍本標(biāo)準(zhǔn)適用于超凈工作臺(tái)的使用、維護(hù)和保養(yǎng)與清潔。4. 內(nèi)容超凈工作臺(tái)的主要組成部分：高效過濾器、中效過濾器、通風(fēng)機(jī)、電氣控制及排氣管道部分。安放點(diǎn)的選擇：4.2.1 應(yīng)安放于衛(wèi)生條件較好的地

6、方，便于清潔，門窗能夠密封以避免外界的污染空氣對(duì)室內(nèi)的影響。4.2.2 安放位置應(yīng)遠(yuǎn)離有震動(dòng)及噪音大的地方。4.2.3 嚴(yán)禁安放在產(chǎn)生大塵粒及氣流大的地方，以保證操作區(qū)空氣的正常流動(dòng)。使用前的檢查：4.3.1 接通超凈工作臺(tái)的電源。4.3.2 旋開風(fēng)機(jī)開關(guān)，使風(fēng)機(jī)開始正常運(yùn)轉(zhuǎn)，這時(shí)應(yīng)檢查高效過濾器出風(fēng)面是否有風(fēng)送出。4.3.3 檢查照明及紫外設(shè)備能否正常運(yùn)行，如不能正常運(yùn)行則通知工程部檢修。4.3.4 工作前必須對(duì)工作臺(tái)周圍環(huán)境及空氣進(jìn)行超凈處理，認(rèn)真進(jìn)行清潔工作，并采用紫外線滅菌法進(jìn)行滅菌處理。4.3.5 凈化工作區(qū)內(nèi)嚴(yán)禁存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流動(dòng)不受干擾。使用：4.4.1 使用工

7、作臺(tái)時(shí)，先經(jīng)過清潔液浸泡的紗布擦拭臺(tái)面，然后用消毒劑擦拭消毒。4.4.2 接通電源，提前50 分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺(tái)表面積累的微生物，30 分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開啟送風(fēng)機(jī)。4.4.3 工作臺(tái)面上，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。4.4.4 操作結(jié)束后，清理工作臺(tái)面，收集各廢棄物，關(guān)閉風(fēng)機(jī)及照明開關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。4.4.5 最后開啟工作臺(tái)紫外燈，照射消毒30 分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。4.4.6 每二月用風(fēng)速計(jì)測(cè)量一次工作區(qū)平均風(fēng)速，如發(fā)現(xiàn)不符合技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)調(diào)節(jié)調(diào)壓器手柄，改變風(fēng)機(jī)輸入電壓，使工作臺(tái)處于最佳狀況。4.4.7 每月進(jìn)

8、行一次維護(hù)檢查，并填寫維護(hù)記錄。清潔4.5.1 每次使用完畢，立即清潔儀器，懸掛標(biāo)識(shí)，并填寫儀器使用記錄。4.5.2 取樣結(jié)束后，先用毛刷刷去潔凈工作區(qū)的雜物和浮塵。4.5.3 用細(xì)軟布擦拭工作臺(tái)表面污跡、污垢目測(cè)無清潔劑殘留，用清潔布擦干。4.5.4 要經(jīng)常用紗布沾上酒精將紫外線殺菌燈表面擦干凈, 保持表面清潔,否則會(huì)影響殺菌能力.4.5.5 效果評(píng)價(jià): 設(shè)備內(nèi)外表面應(yīng)該光亮整潔，沒有污跡。四 . 檢驗(yàn)方法操作規(guī)范1 .混勻：反應(yīng)液混勻，按人份量取出，加樣，再混勻后5000 rpm離心數(shù)秒（按 原說明進(jìn)行） 。2 . 準(zhǔn)確：反應(yīng)液及樣本混勻后, 每一步加樣準(zhǔn)確（按原說明進(jìn)行）。3 .新鮮血清

9、樣本： 血清樣本混勻后離心（5000 rpm離心數(shù)秒），取30履， 加2倍量DN戰(zhàn)取液60膜 混勻100c 8-9分鐘變性，放置冰箱0c冷卻2-3 分鐘，12000rpm離心5分鐘，取出全部上清液置另1管混勻，再取5膜加樣。4 .長(zhǎng)期放置冰箱冷藏血清樣本：取 25膜，加無菌水5仙l力口 2倍量DNA是 取液60膜 混勻98 C 8-9 分鐘變性，放置冰箱 0 c冷卻2-3分鐘，12000rpm 離心5分鐘，取出全部上清液置另1管混勻，再取5履力口樣.5 . DNA 提取液處理并冷藏保存血清樣本：DNAI取液處理：血清樣本混勻，取200仙l ,加DNM取液400仙l混勻98 C 5分鐘變性，放置

10、冰箱0c冷去2-3分鐘，12000rpm離心5分鐘，取出全部上清 液置另1管混勻，冷藏保存，按100膜/管分裝冷藏保存.保存血清樣本使用：取1 管分裝冷藏保存血清樣本，融化后混勻，5000 rpm離心數(shù)秒，再取30-40履98c 5-6分鐘變性，放置冰箱0c冷去2-3分鐘，5000 rpm離心數(shù)秒，再取51加樣.6.質(zhì)粒DNA有關(guān)質(zhì)寸5品（P和N）:用全陰性血清與質(zhì)粒 DNA按9:1混勻， 5000rpm,離心1分鐘，再加2倍HBV DNAI取液混勻，5000rpm ,離心1分鐘， 混勻血清98 5 分鐘變性 ,12000rpm， 離心 10 分鐘 , 吸取上清液, 取出全部上清液置另1管混勻

11、，冷藏保存，按100膜/管分裝冷藏保存.有關(guān)質(zhì)控品使用：取1 管分裝冷藏保存質(zhì)控品，融化后混勻，5000 rpm 離心數(shù)秒，再取30-40履98 C 5-6分鐘變性，放置冰箱0 c冷去2-3分鐘，5000 rpm離心數(shù)秒，再取51加樣.五.防止熒光定量PCRT物污染的質(zhì)控規(guī)程1. 目的規(guī)范熒光定量PC效驗(yàn)和生產(chǎn)的操作過程，確保操作過程中無PCR"物污染。2. 適用范圍本規(guī)范適用于熒光定量PCR®驗(yàn)和生產(chǎn)的操作過程。該規(guī)程參照中華人民共和國(guó)艾滋病核酸檢測(cè)技術(shù)規(guī)范。3. 職責(zé)劃分操作人員按照此標(biāo)準(zhǔn)操彳規(guī)范進(jìn)行熒光定量PCRS驗(yàn)和生產(chǎn)，質(zhì)檢部經(jīng)理負(fù)責(zé)監(jiān)督。4. 質(zhì)量保證體系實(shí)驗(yàn)室

12、和生產(chǎn)工作區(qū)質(zhì)控體系4.1.1 實(shí)驗(yàn)室和生產(chǎn)工作區(qū)原則上應(yīng)分為四個(gè)獨(dú)立工作區(qū)，分別是試劑準(zhǔn)備區(qū)（GMPA同超凈工作室）、樣品處理區(qū)（質(zhì)檢室1）、擴(kuò)增區(qū)（質(zhì)檢室2）和擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)（質(zhì)檢室3） 。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。各區(qū)的功能是：（1） 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝。各種組織勻漿或細(xì)胞裂解，進(jìn)行核酸提取、保存和加樣。（2）試劑準(zhǔn)備區(qū)：PCFT增試劑的配制、分裝和保存。(3)擴(kuò)增區(qū)：普通PCRT增及熒光定量PCRT增。(4)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：PCRT增產(chǎn)物的電泳、雜交、成像、測(cè)定、結(jié)果分析、 報(bào)告。4.1.2 用有效的方法對(duì)操作區(qū)域和共用器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔及消毒推薦的程序是：a.

13、實(shí)驗(yàn)前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺(tái)或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。b. 移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進(jìn)行試驗(yàn)。c. 一個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域在同一時(shí)間段只進(jìn)行一種實(shí)驗(yàn)。d. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后移出個(gè)人專用材料至個(gè)人專用區(qū)域保管；封好污染材料盛放器皿并移出至污物袋；移出共用器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺(tái)或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15 分鐘。4.1.3 實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)必須穿好實(shí)驗(yàn)工作服，并戴口罩，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)根據(jù)要求戴不同規(guī)格的手套。4.1.4 PCR 產(chǎn)物分析使用相對(duì)封閉的系統(tǒng)或共用分析軟件時(shí)，如特定的凝膠成像分析檢測(cè)系統(tǒng)及分析軟件或

14、熒光定量 PCRa及分析軟件，每位實(shí)驗(yàn)人員都要準(zhǔn)確的命名自己的設(shè)置程序及分析結(jié)果，使用完畢后需收拾好所用的儀器并保存好自己的實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果。4.1.5 各區(qū)域的儀器、設(shè)備、器具和試劑應(yīng)為該區(qū)專用，不得交叉使用。熒光定量PCRT增實(shí)驗(yàn)過程控制體系：4.2.1 樣品的采集和處理4.2.1.1 用于普通PCRE熒光定量PCR僉測(cè)的樣品有細(xì)胞、全血、血漿、各種組織和其他分泌物，有時(shí)還包括生物制品。4.2.1.2 采集樣品應(yīng)避免微生物和核酸污染(所用器皿必須無菌或?qū)儆谝淮涡杂闷?，RN聯(lián)樣品所用器皿必須沒有 RNA#污染)。4.2.1.3 處理樣品應(yīng)在樣品處理區(qū)由專人進(jìn)行。處理和保存用于抽提DNA戈 RNA

15、勺樣品應(yīng)避免DNA£ RNA#造成的降解，通常要求在采樣后1小時(shí)內(nèi)處理并 低溫保存。4.2.1.4 處理后的樣品應(yīng)分裝、標(biāo)記（需用防水的筆填寫），并做好實(shí)驗(yàn)記錄，凍存于-20 C以下，DNA£ RN聯(lián)樣品應(yīng)凍存于-60 C或保存在液氮中。4.2.2 核酸（RNA/DNA 提取4.2.2.1 應(yīng)在規(guī)定的區(qū)域內(nèi)由專人按相應(yīng)程序進(jìn)行。4.2.2.2 應(yīng)保證無細(xì)菌及核酸污染，實(shí)驗(yàn)材料和容器應(yīng)經(jīng)過消毒處理并一次性使用。4.2.2.3 提取RNA寸應(yīng)避免RNAB污染，抽提RNA羊品實(shí)驗(yàn)使用的移液器 及離心管等用品必須用 DEPCt理，去除RNABo4.2.2.4 配制RNA©

16、轉(zhuǎn)錄或DNAS應(yīng)試劑，所有操作超過10分鐘時(shí)應(yīng)將 反應(yīng)管置于冰盒內(nèi)，防止各種酶及樣品DNA1£ RNA竄解。4.2.3.3 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)時(shí)應(yīng)避免 RNA酶污染，實(shí)驗(yàn)使用的移液器及離心 管等用品必須用DEPCt理，去除RNAWo4.2.3.4 擴(kuò)增儀應(yīng)預(yù)熱，時(shí)間不少于20分鐘。4.2.3.5 進(jìn)行內(nèi)參基因的擴(kuò)增（B actin或GAPDH并設(shè)置遞增PCR1環(huán) 數(shù)，電泳確定逆轉(zhuǎn)錄的效率及 CDNA羊品的起始濃度，為熒光定量 PC蚊驗(yàn)做準(zhǔn) 備，成功的逆轉(zhuǎn)錄樣品在PCFT增時(shí)25個(gè)循環(huán)即可見清晰的內(nèi)參條帶。4.2.4熒光定量PC雙驗(yàn)：4.2.4.1 應(yīng)在樣品處理區(qū)內(nèi)加樣?？焖贉?zhǔn)確的將樣品D

17、NAlE RNA、心加入裝 有反應(yīng)液體的反應(yīng)管內(nèi)，蓋緊蓋子并做好標(biāo)記。4.2.4.2 操作超過10 分鐘時(shí)應(yīng)將反應(yīng)管置于冰盒內(nèi)，防止酶降解及副反應(yīng)發(fā)生。4.2.4.3 嚴(yán)格按照熒光定量PC敬的操作手冊(cè)啟動(dòng)機(jī)器，設(shè)置實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增程序， 保存文件，最好以日期及樣品名稱命。PCFT增儀應(yīng)預(yù)熱，時(shí)間不少于20分鐘。4.2.4.5 將反應(yīng)管置于擴(kuò)增儀上，開始擴(kuò)增。4.2.4.6 反應(yīng)結(jié)束時(shí)停止實(shí)驗(yàn)程序，取出反應(yīng)產(chǎn)物，20保存。4.2.4.7 擴(kuò)增結(jié)果分析和定量按照操作手冊(cè)進(jìn)行，對(duì)三孔平行的實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須首先判斷其是否準(zhǔn)確（孔間差異時(shí)應(yīng)考慮舍棄該孔數(shù)據(jù)，并重新進(jìn)行該樣品的熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)），然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

18、算出各樣品的濃度。4.2.7.8 結(jié)果報(bào)告中應(yīng)注明使用的實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)試劑、實(shí)驗(yàn)儀器及樣品種 類和樣品量?？蛻魷贤ㄙ|(zhì)量體系：4.3.1 收到樣品后，由專業(yè)的負(fù)責(zé)人進(jìn)行樣品的清點(diǎn)和整理工作，以確保樣品數(shù)目的準(zhǔn)確性和樣品的有效性。如有問題，應(yīng)及時(shí)的與客戶進(jìn)行溝通。4.3.2 在確保樣品無誤和有效的情況下，由專業(yè)的技術(shù)人員進(jìn)行樣品的處理工作核酸的抽提工作（按照標(biāo)準(zhǔn)操作）；并進(jìn)行抽提的DNAE RNA勺濃度測(cè)定。 在此步驟實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將結(jié)果整理，并及時(shí)的發(fā)送給客戶。如有問題出現(xiàn)，則和客戶及時(shí)溝通，保證實(shí)驗(yàn)的下一步工作。4.3.3 在確保核酸的抽提正確和有效的前提下，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄的實(shí)驗(yàn)過程（按照標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)

19、行）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將結(jié)果整理，并及時(shí)的發(fā)送給客戶。如有問題出現(xiàn)，則和客戶及時(shí)溝通，保證實(shí)驗(yàn)的下一步工作。4.3.4 在確保逆轉(zhuǎn)錄正確和有效的前提下，進(jìn)行樣品的預(yù)實(shí)驗(yàn)過程。摸索檢測(cè)基因的反應(yīng)條件，并將結(jié)果及時(shí)通知客戶。4.3.5 在預(yù)實(shí)驗(yàn)成功的前提下，進(jìn)行正式的熒光定量PC雙驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)開始后，每周和客戶進(jìn)行一次溝通（可以通過電話或e-mail 及網(wǎng)絡(luò)方式）， 匯報(bào)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展情況，并認(rèn)真記錄客戶提出的建議和意見，對(duì)出現(xiàn)的問題隨時(shí)協(xié)商解決。六試劑盒的生產(chǎn)和制備1試劑盒的生產(chǎn)和制備地點(diǎn)在GM就化車間進(jìn)行，凈化車間內(nèi)工作的人員應(yīng)穿著符合要求的工作服和帽子。選材、 式樣及穿戴方式應(yīng)與生產(chǎn)操作和空氣潔凈度級(jí)別

20、要求相適應(yīng)，并不得混用。2 工藝用水制水設(shè)備應(yīng)滿足水質(zhì)要求并通過驗(yàn)證，經(jīng)滅菌處理。3 微量加樣器使用前后用滅菌消毒的紙包好，置傳遞窗，紫外線消除DNA30分鐘。4 生產(chǎn)區(qū)域定期清潔、清洗和消毒生產(chǎn)區(qū)域定期清潔、清洗和消毒，高風(fēng)險(xiǎn)的生物活性物料其操作應(yīng)使用單獨(dú)的空氣凈化系統(tǒng)，與相鄰區(qū)域保持負(fù)壓，排出的空氣不能循環(huán)使用。5質(zhì)粒DNA0備和提純 在質(zhì)粒DNA0備和提Z程中,所有器具都應(yīng)滅菌消 毒，紫外線照射，確保無質(zhì)粒DN用口 PCR物污染。質(zhì)粒DNASJ備和提純后，立 即分裝，置放于用高壓處理的容器中，60c保存，防止質(zhì)粒DNAT散和被PCR產(chǎn)物汽溶膠污染6病毒(HBV)核酸定量標(biāo)準(zhǔn)品、陰性參考品

21、、陽(yáng)性參考品，質(zhì)粒DNA和PCR產(chǎn)物污染防止將標(biāo)準(zhǔn)品和參考品包裝表面清除質(zhì)粒 DNAF口 PCRT物污染后，在 超凈工作條件下，分裝，置放于用高壓滅菌處理的容器中，- 60c保存，防止質(zhì) 粒DNAT散和被PCRT物汽溶膠污染。7 PCR反應(yīng)管的中PC網(wǎng)應(yīng)產(chǎn)物污染消除 應(yīng)用尿喀噬-N-糖基化酶(UNG 酶)對(duì)DNA中dUTP的酶解彳用酶PC阪應(yīng)產(chǎn)物DNA將UNCJB 100 u單位濃度稀 液稀釋到 口，每支PC網(wǎng)應(yīng)管中加入 口，進(jìn)行UNGB解，消除污染。含 dUTP的 10mM dNTPE制:原材料:dATP 100mM /250 l; dGTP 100mM /250 l; dCTP 100mM

22、 /250 口； dTATP 100mM /250 仙 l;dUTP 100mM /250 口。 配制 10mMdNTP:dATP100mMi20 仙 l; dGTP100mM20 l;dCTP 100mM20 口； dTTP 100mM /10 口;dUTP 100mM /10 l; 合計(jì) 25 mM /80 l ,稀釋倍-10 mM /200 a l。PCR1環(huán)條件按以下設(shè)置：37c 5分鐘UNGB解反應(yīng)，93c 3分鐘預(yù)變性， 然后93 C 30秒-55 C 30秒循環(huán)10次，93C 30秒-55 C 60秒循環(huán)30次。 37c 5分鐘UNG#解反應(yīng)，使PC阪應(yīng)產(chǎn)物污染完全消除。七.質(zhì)量

23、監(jiān)控點(diǎn):工序質(zhì)量控制點(diǎn)質(zhì)量控制項(xiàng)目頻次生產(chǎn)前原輔料由指定供應(yīng)商提供批批檢驗(yàn)符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)每一進(jìn)廠批次內(nèi)包裝材料外包裝材料純化水符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)1次/周校準(zhǔn)原輔料符合配制要求配制物料品種、數(shù)量1次/批投料計(jì)量設(shè)備經(jīng)過校驗(yàn)，在有效期內(nèi)雙人復(fù)核稱量克隆菌 種保存 與純化純化菌種菌種復(fù)壯、純化、防污染1次/2月陽(yáng)性標(biāo) 準(zhǔn)品制 備質(zhì)粒制備純度、濃度1次/批陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品制備配制、分裝、低溫保 存陰性質(zhì) 控品制 備血清蛋白制備無HBV配制、分裝、低溫保存1次/批PCR反應(yīng)液制 備防污染、移液 器精確加量、配制、分裝、低溫保存隨時(shí)/班包裝包材數(shù)量、無破損、色澤統(tǒng)一隨時(shí)/班批號(hào)正確、清晰成品數(shù)量準(zhǔn)確、包裝碼放符合要求試

24、劑盒 保存低溫潔凈防止反復(fù)凍融，出現(xiàn)菌斑隨時(shí)/班八.生物安全準(zhǔn)則本標(biāo)準(zhǔn)旨在規(guī)范臨床實(shí)驗(yàn)室的安全管理，內(nèi)容著重在實(shí)驗(yàn)室和工作人員安 全的一般要求，防火、用電、化學(xué)危險(xiǎn)物品、微生物的安全要求，以保證實(shí)驗(yàn)室 的安全運(yùn)作，將事故控制在最低限度。為各級(jí)臨床實(shí)驗(yàn)室的安全管理提供依據(jù)。 1.工作人員和實(shí)驗(yàn)室安全的一般要求實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)絕對(duì)禁止吸煙。實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)不得有食物、飲料及存在“手-口”接觸可能的其它物質(zhì)。 實(shí) 驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)的冰箱禁止存放食物。實(shí)驗(yàn)工作區(qū)內(nèi)禁止使用化妝品進(jìn)行化妝。處理腐蝕性或毒性物質(zhì)時(shí)，須使用安全鏡、面罩或其它保護(hù)眼睛和面部的防 護(hù)用品。工作人員在實(shí)驗(yàn)室的危險(xiǎn)區(qū)內(nèi)不要佩戴隱形眼鏡， 除非

25、同時(shí)使用護(hù)目鏡 或面罩。使用、處理能夠通過粘膜和皮膚感染的試劑， 或有可能發(fā)生試劑濺溢的 情況時(shí)，必須佩帶護(hù)目鏡、面罩或面具式呼吸器。實(shí)驗(yàn)室工作人員在脫下手套后、離開實(shí)驗(yàn)室前、接觸患者前后、以及在進(jìn)食或吸煙前都應(yīng)該洗手。接觸血液、體液或其它污染物時(shí)，應(yīng)立即洗手。外衣（實(shí)驗(yàn)服、工作服、和圍裙）應(yīng)懸掛在遠(yuǎn)離散熱器、蒸汽管道、供暖裝置、 以及有明火的地方，不要掛在壓縮氣瓶或滅火器上，也不要掛在門的玻璃隔板上，妨礙視線。“清潔”的和“非清潔”的個(gè)人防護(hù)服要分開存放。實(shí)驗(yàn)室的出口和通道必須保持暢通無阻，不準(zhǔn)堆放物品、垃圾、裝置、或設(shè)備。安全門必須保持暢通，不得堵塞。防火門前不能堆物，以確保失火時(shí)能夠自動(dòng)關(guān)閉。2. 實(shí)驗(yàn)室用電安全準(zhǔn)則作為儀器維護(hù)措施的一部分，應(yīng)進(jìn)行年度的安全用電檢查并建立檔案記錄。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)裝有足夠的插座，分布要合理，以減少在插座上接上其它多用插座和避免拖拉過多的電線。所有電器設(shè)備的維修與維護(hù)只能由取得正式資格的維修人員進(jìn)行。3. 實(shí)驗(yàn)室微生物安全準(zhǔn)則在臨床實(shí)驗(yàn)室，工作人員在接觸標(biāo)本和操作過程中，可能被感染。臨床實(shí)驗(yàn)室可能接觸的微生物可分為三類：病毒、細(xì)菌、其他具有