磁珠分選(xiu)

1、免疫磁珠分選技術(shù)技術(shù)原理MACS（磁性細(xì)胞分選技術(shù)）是一種廣泛用來磁性分選多種細(xì)胞或者生物分子的技術(shù)。 基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別 磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連 在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中達(dá)到細(xì)胞磁性分離的目的組成成分 MACS微珠 MACS分選柱 MACS分選器MACS微珠 與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒 直徑約有50nm 無毒性，對(duì)細(xì)胞無損傷，可以生物降解 不影響細(xì)胞的光散射特性 磁性標(biāo)記只占用2030的結(jié)合位點(diǎn)，不影響細(xì)胞的熒光抗體標(biāo)記。 最大限度地避免細(xì)胞活化； 無需解離磁珠 MACS微珠主要有三種： 直標(biāo)微珠 間標(biāo)微珠: 抗免疫球蛋白微珠、抗生物素微珠或鏈霉

2、親和素微珠、抗熒光素微珠 多選微珠:專門為分選細(xì)胞亞群而研制的一種微珠。這種微珠通過特殊的方式與抗體偶聯(lián)，在第一次陽性分選完成后，與細(xì)胞結(jié)合的多選微珠可以被解離試劑剪切下來，陽性分選的細(xì)胞可以進(jìn)行再次陽性分選或者去除分選。 MACS分選柱是一類填充有不同規(guī)格鐵珠的塑料容器，鐵珠表面有親水包被 MACS分選器由永久性磁鐵和支架構(gòu)成。與分選柱一起組成高強(qiáng)度的梯度磁場(chǎng)。根據(jù)應(yīng)用范圍分為研究用和臨床應(yīng)用的MACS分選器，根據(jù)操作方式分為手動(dòng)和自動(dòng)分選器。MACS技術(shù)優(yōu)點(diǎn)1、MACS微珠由氧化鐵和多聚糖組成，直徑只有50nm，體積大約為真核細(xì)胞的百萬分之一。2、微珠易于降解，對(duì)細(xì)胞無毒性，分選后細(xì)胞仍舊

3、保持生理功能。3、與流式細(xì)胞儀兼容，分選后細(xì)胞可以立即用于分析和后續(xù)實(shí)驗(yàn)。4、高純度、高回收率、高活性。MACS分選策略分選策略 陽性分選 去除分選 復(fù)合分選。 陽性分選中，目的細(xì)胞被磁性標(biāo)記后，作為陽性標(biāo)記組分直接分選出來。陽性分選策略優(yōu)點(diǎn)：純度高，回收率高，操作迅速、簡(jiǎn)便 去除分選是把非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后從細(xì)胞混合物中去除的方法，即未磁性標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞。去除分選策略適用范圍 去除不需要的細(xì)胞； 缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）； 不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合，即細(xì)胞不被激惹（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功能分析）； 復(fù)合分選的一部分。聯(lián)合使用兩種以上分選策略，主要用于細(xì)胞亞群的分

4、選或者得到高純度非常稀有的細(xì)胞。適用范圍： （1）非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性選擇的抗原 （2）分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，可獲得高純度的稀有目的細(xì)胞。步驟 查找合適的磁珠：首選直標(biāo)磁珠，試劑盒 仔細(xì)閱讀說明書，根據(jù)分選總細(xì)胞數(shù)，目的細(xì)胞數(shù)選擇合適的柱子。合適的柱子對(duì)應(yīng)合適的分選器 按照說明書進(jìn)行操作 樣本制備：制備單細(xì)胞懸液 磁珠標(biāo)記：將磁珠與細(xì)胞共孵育 過柱：洗柱-上柱-洗脫關(guān)鍵環(huán)節(jié)關(guān)鍵環(huán)節(jié) 1.抗體包被磁珠對(duì)死細(xì)胞常有非特異性結(jié)合.因而分選前去除死細(xì)胞; 2.上分離柱前,充分振蕩,混懸細(xì)胞,打散細(xì)胞團(tuán)塊;3.用分離柱分選, 減少水中氣泡,使分離柱不被氣泡阻滯; 分選過程中

5、不能干柱4.細(xì)胞懸液加入分離柱中時(shí),應(yīng)將滴管伸至底壁后加入,避免將細(xì)懸液沿管壁流入,使管壁殘流末分選細(xì)胞,以致后繼洗柱過程中,因疏忽末被洗下,最后導(dǎo)致純度不高.洗柱時(shí),應(yīng)在前次液體充分流盡后,再加洗液. 5.分選細(xì)胞量應(yīng)根據(jù)說明書控制,不超量;細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確 6.孵育時(shí)間和溫度應(yīng)按說明書進(jìn)行,延長(zhǎng)孵育時(shí)間、提高溫度會(huì)增加非特異結(jié)合; 7.先用抗體阻斷Fc受體,可降低非特異性結(jié)合 8.分選溫度：低溫。預(yù)冷分離液 其他磁分選產(chǎn)品Dynal 大磁珠 后續(xù)應(yīng)用研究，如流式細(xì)胞術(shù)，則需要將Dynabeads 與靶細(xì)胞分離。 適用于高頻細(xì)胞stemcell MACS 與FACSMACS相比相比FACS的優(yōu)點(diǎn)：的優(yōu)點(diǎn)：1， 適合大批量的細(xì)胞分選，F(xiàn)ACS分選速度相對(duì)而言要慢很多；2，穩(wěn)定性高，重復(fù)性強(qiáng)，而FACS由于機(jī)器運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致參數(shù)漂移故而實(shí)際獲取得靶細(xì)胞陽性率會(huì)大大下降；3，無須大型設(shè)備，普遍適合大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞分選工作；4，操作簡(jiǎn)單，無須專門的設(shè)備操作人員（FACS操作需要一定的經(jīng)驗(yàn)）。FACS相比相比MACS的優(yōu)點(diǎn)：的優(yōu)點(diǎn)：1，少量細(xì)胞分選時(shí)比MACS精確得多，速度也快；2，可以多個(gè)marker分選、正選負(fù)選同時(shí)進(jìn)行（比如CD117+/CD90lo/Sca-1+/CD45-），而MACS一般只能進(jìn)行陽選或陰選，