病毒感染性疾病的實驗室診斷(盧忠心)

1、病毒感染性疾病的實驗室診斷病毒感染性疾病的實驗室診斷武漢市中心醫(yī)院武漢市中心醫(yī)院 盧忠心盧忠心病毒的發(fā)現(xiàn)與研究歷史病毒的發(fā)現(xiàn)與研究歷史 v 病毒病由來已久病毒病由來已久 公元前二至三個世紀公元前二至三個世紀 天花天花 中國中國 公元十世紀公元十世紀 接種人痘預(yù)防天花接種人痘預(yù)防天花 1796英國醫(yī)生琴納英國醫(yī)生琴納 牛痘使人預(yù)防天花牛痘使人預(yù)防天花 阿里斯多德在公元前四世紀阿里斯多德在公元前四世紀 狂犬病狂犬病 法國人巴斯德在法國人巴斯德在1884年年 狂犬疫苗狂犬疫苗 病毒學(xué)的發(fā)展歷程病毒學(xué)的發(fā)展歷程 v病毒的病原研究階段病毒的病原研究階段v病毒的化學(xué)和結(jié)構(gòu)研究階段病毒的化學(xué)和結(jié)構(gòu)研究階段

2、v病毒研究的細胞水平時期病毒研究的細胞水平時期 v分子病毒學(xué)的研究時期分子病毒學(xué)的研究時期 病毒病的病原研究階段病毒病的病原研究階段 v自病毒發(fā)現(xiàn)直到上個世紀自病毒發(fā)現(xiàn)直到上個世紀30年代初，病毒學(xué)研究主要集中在：分離和鑒定年代初，病毒學(xué)研究主要集中在：分離和鑒定 引起各種病毒性疾病的病毒；病毒對疾體所引起的特異性病理效應(yīng)；病毒引起各種病毒性疾病的病毒；病毒對疾體所引起的特異性病理效應(yīng)；病毒 的傳播方式和感染宿主范圍；各種理化因子對病毒感染的影響等方面的傳播方式和感染宿主范圍；各種理化因子對病毒感染的影響等方面。v在這一階段，人們對病毒本質(zhì)的認識還很膚淺，認為病毒是一種與細菌類在這一階段，人們

3、對病毒本質(zhì)的認識還很膚淺，認為病毒是一種與細菌類 似的病原體，所不同的僅在于病毒必須在生活的細胞內(nèi)才能繁殖，再就是似的病原體，所不同的僅在于病毒必須在生活的細胞內(nèi)才能繁殖，再就是 體積十分微小，以致在顯微鏡下不能見到，能夠通過細菌濾器。這也正是體積十分微小，以致在顯微鏡下不能見到，能夠通過細菌濾器。這也正是 在那一時期把病毒稱之為在那一時期把病毒稱之為“超顯微的濾過性病毒超顯微的濾過性病毒”的原因。的原因。 病毒的化學(xué)和結(jié)構(gòu)研究階段病毒的化學(xué)和結(jié)構(gòu)研究階段 v1934年年M.Schlesinger獲得了純化的噬菌體；獲得了純化的噬菌體；1935年，美國生化學(xué)家年，美國生化學(xué)家Stanley第一

4、次提純了煙草花葉病毒（簡稱第一次提純了煙草花葉病毒（簡稱TMV），因為這項貢獻），因為這項貢獻 1946年被授予諾貝爾獎，這是病毒學(xué)領(lǐng)域第一個獲此殊榮的科學(xué)家；年被授予諾貝爾獎，這是病毒學(xué)領(lǐng)域第一個獲此殊榮的科學(xué)家；1938年年W.J.Elford測定了各種病毒顆粒大小；測定了各種病毒顆粒大??； 1939年，年，G.A.Kansche在電鏡下在電鏡下直接觀察到直接觀察到TMV ；1955年，年，Scaffer和和Schwerdt成功結(jié)晶了脊髓灰質(zhì)炎成功結(jié)晶了脊髓灰質(zhì)炎病毒，這是第一個被結(jié)晶出來的動物病毒；等等。病毒，這是第一個被結(jié)晶出來的動物病毒；等等。v這一階段，病毒學(xué)工作者主要采用敏感動物

5、（如小白鼠）或動物胚胎這一階段，病毒學(xué)工作者主要采用敏感動物（如小白鼠）或動物胚胎（如雞胚）來研究病毒，分離鑒定了近百種病毒。同時在機體水平上研（如雞胚）來研究病毒，分離鑒定了近百種病毒。同時在機體水平上研究了病毒的繁殖、發(fā)病機理和免疫反應(yīng)等。只是微生物學(xué)的一個分支。究了病毒的繁殖、發(fā)病機理和免疫反應(yīng)等。只是微生物學(xué)的一個分支。病毒的細胞水平研究時期病毒的細胞水平研究時期 v利用大腸桿菌研究噬菌體的感染過程取得了迅速發(fā)展利用大腸桿菌研究噬菌體的感染過程取得了迅速發(fā)展v組織培養(yǎng)技術(shù)開始應(yīng)用于動物病毒的研究組織培養(yǎng)技術(shù)開始應(yīng)用于動物病毒的研究 我國學(xué)者黃禎祥早在我國學(xué)者黃禎祥早在1943年就利用雞

6、胚組織塊在試管內(nèi)進行病毒傳代、定量滴定年就利用雞胚組織塊在試管內(nèi)進行病毒傳代、定量滴定及中和試驗。及中和試驗。 組織培養(yǎng)技術(shù)對動物病毒研究所作的貢獻主要包括：病毒轉(zhuǎn)錄新途徑和翻譯新途徑組織培養(yǎng)技術(shù)對動物病毒研究所作的貢獻主要包括：病毒轉(zhuǎn)錄新途徑和翻譯新途徑的發(fā)現(xiàn)；病毒對宿主范圍的選擇；某些腫瘤病毒引起的細胞轉(zhuǎn)化；某些病毒侵染引的發(fā)現(xiàn)；病毒對宿主范圍的選擇；某些腫瘤病毒引起的細胞轉(zhuǎn)化；某些病毒侵染引起的細胞融合；發(fā)現(xiàn)有的病毒核酸由若干片段組成；有的病毒核酸具有極性的不同，起的細胞融合；發(fā)現(xiàn)有的病毒核酸由若干片段組成；有的病毒核酸具有極性的不同，如小如小RNA病毒為正鏈病毒為正鏈RNA病毒，正粘病

7、毒為負鏈病毒，正粘病毒為負鏈RNA病毒。病毒。 v植物病毒不斷有重要的發(fā)現(xiàn)植物病毒不斷有重要的發(fā)現(xiàn) 此階段，病毒學(xué)逐步形成了一門獨立的學(xué)科。此階段，病毒學(xué)逐步形成了一門獨立的學(xué)科。分子病毒學(xué)的研究時期分子病毒學(xué)的研究時期 自從自從1953年年DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)理論建立以來，由于分子生物雙螺旋結(jié)構(gòu)理論建立以來，由于分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，使病毒學(xué)的研究步入了分子病毒學(xué)的發(fā)展時學(xué)的迅速發(fā)展，使病毒學(xué)的研究步入了分子病毒學(xué)的發(fā)展時期，分子病毒學(xué)也正是分子生物學(xué)的發(fā)展過程中應(yīng)運而生。期，分子病毒學(xué)也正是分子生物學(xué)的發(fā)展過程中應(yīng)運而生。分子病毒學(xué)的發(fā)展是各相關(guān)學(xué)科如分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、分子病毒學(xué)的發(fā)展是

8、各相關(guān)學(xué)科如分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)與病毒學(xué)理論和技術(shù)相互滲透的結(jié)果。尤其遺傳學(xué)、免疫學(xué)與病毒學(xué)理論和技術(shù)相互滲透的結(jié)果。尤其是分子生物學(xué)新技術(shù)的發(fā)明極大剌激了分子病毒學(xué)的發(fā)展。是分子生物學(xué)新技術(shù)的發(fā)明極大剌激了分子病毒學(xué)的發(fā)展。 時間時間研究者研究者成果成果19531953年年Watson,CrickWatson,Crick建立建立DNADNA雙螺旋結(jié)構(gòu)理論雙螺旋結(jié)構(gòu)理論, ,為分子生物學(xué)和分子病毒學(xué)的創(chuàng)立奠定基礎(chǔ)為分子生物學(xué)和分子病毒學(xué)的創(chuàng)立奠定基礎(chǔ)19621962年年D.L.D.CasfarD.L.D.Casfar闡明病毒的二十面體結(jié)構(gòu)，是對病毒超微結(jié)構(gòu)認識的重大突破闡明病

9、毒的二十面體結(jié)構(gòu)，是對病毒超微結(jié)構(gòu)認識的重大突破19621962年年D.NathansD.Nathans進行了噬菌體進行了噬菌體RNARNA的體外翻譯的體外翻譯19651965年年S.SpiegelmanS.Spiegelman體外復(fù)制出體外復(fù)制出QQ噬菌體噬菌體RNARNA19671967年年M.GoulianM.Goulian體外復(fù)制體外復(fù)制X174X174噬菌體噬菌體, ,對以后闡明對以后闡明DNADNA病毒和病毒和RNARNA病毒的繁殖機制起了重要作用病毒的繁殖機制起了重要作用19671967年年T.O.DienerT.O.Diener發(fā)現(xiàn)類病毒發(fā)現(xiàn)類病毒, ,揭示了自然界存在著比病毒

10、更簡單的生物揭示了自然界存在著比病毒更簡單的生物, ,加深了對生命起源的認識。加深了對生命起源的認識。19681968年年P(guān).H.DuesbergP.H.Duesberg發(fā)現(xiàn)流感病毒的多節(jié)段發(fā)現(xiàn)流感病毒的多節(jié)段RNARNA基因組基因組19701970年年P(guān).H.DuesbergP.H.Duesberg發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)RousRous肉瘤病毒含有癌基因肉瘤病毒含有癌基因v-srcv-src，使人們對腫瘤發(fā)生的機制有了更深刻的了解，使人們對腫瘤發(fā)生的機制有了更深刻的了解19701970年年H.M.Temin,D.BaH.M.Temin,D.Baltimorltimor分別發(fā)現(xiàn)了病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶，這是對分別發(fā)

11、現(xiàn)了病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶，這是對Crick 1958Crick 1958年提出的遺傳學(xué)中心法則的重要補充和發(fā)展年提出的遺傳學(xué)中心法則的重要補充和發(fā)展19711971年年限制性內(nèi)切酶技術(shù)的發(fā)現(xiàn)成功地為乳頭瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、皰疹病毒構(gòu)建了酶切圖譜限制性內(nèi)切酶技術(shù)的發(fā)現(xiàn)成功地為乳頭瘤病毒、多瘤病毒、腺病毒、皰疹病毒構(gòu)建了酶切圖譜19771977年年SangerSanger完成了完成了X174-DNAX174-DNA全部序列的測定，發(fā)現(xiàn)了發(fā)現(xiàn)了基因重疊現(xiàn)象全部序列的測定，發(fā)現(xiàn)了發(fā)現(xiàn)了基因重疊現(xiàn)象19771977年年L LT TChowChow闡明了腺病毒轉(zhuǎn)錄過程中的闡明了腺病毒轉(zhuǎn)錄過程中的mRNAm

12、RNA拼接現(xiàn)象，從而明確了內(nèi)含子和外顯子的概念拼接現(xiàn)象，從而明確了內(nèi)含子和外顯子的概念19781978年年W WFiersFiers V.B.ReddyV.B.Reddy測定了測定了SV40-DNASV40-DNA的一級結(jié)構(gòu)由的一級結(jié)構(gòu)由52245224個堿基對組成。個堿基對組成。SV40SV40是第一個全部核苷酸序列被搞清楚的病毒是第一個全部核苷酸序列被搞清楚的病毒分子病毒學(xué)的研究時期的研究成果（一）分子病毒學(xué)的研究時期的研究成果（一）時間時間研究者研究者成果成果19791979年年T TTaniguchiTaniguchi用載體成功地表達了人干擾素基因用載體成功地表達了人干擾素基因1981

13、1981年年D.K.KleidD.K.Kleid利用重組利用重組DNADNA技術(shù)制備出口蹄疫病毒疫苗技術(shù)制備出口蹄疫病毒疫苗19821982年年J.SummersJ.Summers發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒發(fā)現(xiàn)乙型肝炎病毒DNADNA復(fù)制中有逆轉(zhuǎn)錄過程復(fù)制中有逆轉(zhuǎn)錄過程19821982年年B.MossB.Moss，E.PaolettiE.Paoletti用痘苗病毒作為載體表達外源基因用痘苗病毒作為載體表達外源基因19831983年年MontagnierMontagnier，R.C.GalloR.C.Gallo分別分離到與分別分離到與AIDSAIDS相關(guān)的人類逆轉(zhuǎn)錄病毒（相關(guān)的人類逆轉(zhuǎn)錄病毒（HIVHIV

14、）19851985年年H.VonderH.Vonder PattenPatten闡明了鼻病毒的晶體結(jié)構(gòu)闡明了鼻病毒的晶體結(jié)構(gòu)19881988年年ChuoChuo，YamayaYamaya用弱病毒全長用弱病毒全長cDNAcDNA導(dǎo)入產(chǎn)生抗病毒的轉(zhuǎn)化植株導(dǎo)入產(chǎn)生抗病毒的轉(zhuǎn)化植株19911991年年HanHan將將MoloneyMoloney鼠白血病毒的反義表達序列導(dǎo)入小鼠受精卵中，從而培育成功對該病毒有抗性的轉(zhuǎn)基因小鼠鼠白血病毒的反義表達序列導(dǎo)入小鼠受精卵中，從而培育成功對該病毒有抗性的轉(zhuǎn)基因小鼠19921992年年DesrosiersDesrosiers利用利用SIV mac239/nefSIV

15、 mac239/nef缺失突變株制備出減毒活疫苗，取得了抗缺失突變株制備出減毒活疫苗，取得了抗SIVSIV感染成功感染成功19931993年年K.MullisK.Mullis發(fā)明了發(fā)明了PCRPCR儀儀19951995年年HIVHIV天冬氨酰蛋白酶三維結(jié)構(gòu)的鑒定，使得一些針對病毒蛋白酶活性位點的抑制劑先后問世天冬氨酰蛋白酶三維結(jié)構(gòu)的鑒定，使得一些針對病毒蛋白酶活性位點的抑制劑先后問世19961996年年David HoDavid Ho利用逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑與蛋白酶抑制劑配成的利用逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑與蛋白酶抑制劑配成的“雞尾酒雞尾酒”式藥，成功地抵抗了式藥，成功地抵抗了HIVHIV感染感染1997199

16、7年年S.PrusinerS.Prusiner發(fā)現(xiàn)羊瘙癢病致病因子是朊病毒，提出瘋牛病、發(fā)現(xiàn)羊瘙癢病致病因子是朊病毒，提出瘋牛病、KuruKuru病等腦退化性疾病是由朊病毒引起，從而獲諾貝病等腦退化性疾病是由朊病毒引起，從而獲諾貝爾醫(yī)學(xué)獎爾醫(yī)學(xué)獎分子病毒學(xué)的研究時期的研究成果（二）分子病毒學(xué)的研究時期的研究成果（二）病毒感染性疾病病毒感染性疾病v肝炎病毒（肝炎病毒（Hepatitis Virus）v人類免疫缺陷病毒（人類免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus,HIV）v人乳頭瘤狀病毒（人乳頭瘤狀病毒（human papillomavirus , HPV ）vEB

17、病毒（病毒（Ebstein-Barr Virus, EBV）vSARS冠狀病毒冠狀病毒(SARS-associated coronavirus, SARS-CoV)v甲型甲型H1N1流感病毒（流感病毒（Influenza A(H1N1) virus ）v手足口病病毒（手足口病病毒（Hand, foot and mouth disease Virus ）肝炎病毒（肝炎病毒（Hepatitis Virus） 引起肝炎的病毒有多種類型，包括甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus, HAV)、乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)、丙型肝炎病毒(Hepatitis C

18、virus, HCV)、丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus, HDV)、戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus, HEV)等，分別能夠引起甲型、乙型、丙型、丁型、戊型5種肝炎癥狀。近年又發(fā)現(xiàn)有己型肝炎（HFV引起）和庚型肝炎(HGV引起)出現(xiàn)。 （一）（一） 乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒結(jié)構(gòu)和特點：HBsAg：是HBV感染的主要標志HBsAb：保護性抗體HBcAg：僅存于感染的肝細胞核內(nèi)，一般不存在于血循環(huán)中HBcAb: 非保護性抗體，HBcAb-IgM提示HBV處于復(fù)制狀態(tài)HBeAg：HBV復(fù)制及強感染性的指標HBeAb：有一定的保護作用，預(yù)后良好 HBV感染的診斷vEL

19、ISA方法，但只能提供血清中的HBV間接證據(jù)，無法證明是否具有傳染性檢測血清標本中的HBSAg，HbeAg，抗-Hbs，抗-HBc和抗-Hbe（兩對半）：比較簡單，而且敏感性較低。v內(nèi)源性DNA聚合酶法和斑點雜交分析法：可直接確定臨床標本中HBV DNA的存在。比較敏感，能檢測到0.1pg的HBV DNA。v 熒光定量PCR方法：可檢測到200copy/ml的HBV DNA。 可 檢出雜交法測定陰性而具有不同HBV血清學(xué)標志的血清標本中的 HBV DNA?？蓹z出HBs Ag陽性而Hbe Ag陰性攜帶者的HBV DNA。 可檢出慢性HBV感染-干擾素治療后轉(zhuǎn)陰的患者血清中殘存的HBV DNA。（

20、一） 乙型肝炎病毒應(yīng)用核酸擴增技術(shù)應(yīng)用核酸擴增技術(shù)(NAT)(NAT)是降低是降低HBVHBV殘留危險性的重要策略殘留危險性的重要策略病毒特點： 1. 單正鏈RNA病毒 2. E1和E2區(qū)基因高度變異性（二）丙型肝炎病毒感染特點：1. HCV在血中含量極微 2. 輸血后肝炎主要致病因子3. 免疫學(xué)標志僅有抗-HCV，非中和抗體，產(chǎn)生時間不一4. 有一部分人感染HCV后，不產(chǎn)生抗-HCV 5. 感染易于慢性化(50-85%)6. 疫苗研制尚不成功單鏈RNAHCVHCV的流行病學(xué)的流行病學(xué)v全世界的感染人群約有全世界的感染人群約有1.71.7億億v75% HCV75% HCV感染發(fā)展成慢性感染發(fā)展

21、成慢性vHCVHCV感染發(fā)展成有癥狀的肝病需要十年以上感染發(fā)展成有癥狀的肝病需要十年以上v可引起慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌可引起慢性肝炎、肝硬化、肝細胞癌v通過輸血、靜脈用藥傳播通過輸血、靜脈用藥傳播v血清中出現(xiàn)血清中出現(xiàn)HCVHCV抗體在感染后抗體在感染后5454192192天天 vELISA方法檢測方法檢測HCV抗體：篩查試驗抗體：篩查試驗 vRIBA：確證試驗：確證試驗v HCV RNA檢測：確證試驗檢測：確證試驗 HCV感染的診斷感染的診斷 抗HCV篩查及確認試驗結(jié)果的解釋篩查試驗結(jié)篩查試驗結(jié)確認試驗結(jié)確認試驗結(jié) 果果結(jié)果報告結(jié)果報告 解解 釋釋陰陰 性性不需檢測不需檢測抗抗HCV陰性

22、陰性未感染未感染HCV,除非懷疑是最近感染除非懷疑是最近感染,或有其它證據(jù)表或有其它證據(jù)表明有明有HCV感染感染陽性且陽性且S/CO 值高值高未檢測未檢測抗抗HCV陽性陽性提示既往或現(xiàn)癥提示既往或現(xiàn)癥HCV感染感染. 未進行確認驗未進行確認驗.S/CO值高值高的標本一般均為確認陽性的標本一般均為確認陽性(95%),但尚有但尚有5%的的標本可能為假陽性標本可能為假陽性,可在患者要求下進行確認試可在患者要求下進行確認試驗驗.陽性陽性陽性陽性抗抗HCV陽性陽性提示既往或現(xiàn)癥提示既往或現(xiàn)癥HCV感染感染陽性陽性陰性陰性抗抗HCV陰性陰性未感染未感染HCV,除非懷疑是最近感染除非懷疑是最近感染,或有其它

23、證據(jù)表或有其它證據(jù)表明有明有HCV感染感染陽性陽性不確定不確定抗抗HCV不確定不確定不能確定抗不能確定抗HCV及及HCV感染狀態(tài)感染狀態(tài),;應(yīng)再采集另一份應(yīng)再采集另一份標本重測抗標本重測抗HCV(1個月個月)或或HCV RNA陽性陽性HCV RNA陽性陽性抗抗HCV 陽性陽性HCV RNA陽性陽性提示活動性提示活動性HCV感染感染陽性陽性RIBA 陽性陽性HCV RNA陰性陰性抗抗HCV 陽性陽性HCV RNA陰性陰性抗抗HCV陽性提示既往或現(xiàn)癥陽性提示既往或現(xiàn)癥HCV感染感染.單個單個HCV RNA陰性結(jié)果不能排除活動性感染陰性結(jié)果不能排除活動性感染陽性陽性RIBA 陰性陰性HCV RNA陰

24、性陰性抗抗HCV 陰性陰性HCV RNA陰性陰性未感染未感染HCV陽性陽性RIBA 不確定不確定HCV RNA陰性陰性抗抗HCV 不確定不確定HCV RNA陰性陰性抗抗HCV篩查結(jié)果可能為假陽性篩查結(jié)果可能為假陽性,此時此時,提示未感染提示未感染HCV HCV-RNA定量檢測的臨床意義定量檢測的臨床意義v 早期診斷：早期診斷： HCV感染感染1-3W，即可檢出，即可檢出HCV-RNA的存在。的存在。v HCV-RNA載量與抗載量與抗-HCV滴度、滴度、ALT水平之間的相關(guān)性：抗水平之間的相關(guān)性：抗-HCV滴滴 度和度和ALT異常率隨著異常率隨著HCV-RNA載量升高而增加。載量升高而增加。v

25、HCV-RNA是評價抗病毒治療效果的重要指標。是評價抗病毒治療效果的重要指標。v 慢性丙型肝炎長期抗慢性丙型肝炎長期抗-HCV陽性，這時如果進行陽性，這時如果進行HCV-RNA 定量檢測定量檢測 可以鑒別活動性、復(fù)制程度?？梢澡b別活動性、復(fù)制程度。人類免疫缺陷病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)19821982年發(fā)現(xiàn)第年發(fā)現(xiàn)第1 1例經(jīng)輸血傳播例經(jīng)輸血傳播HIVHIV19851985年開始檢測血液和血液制品年開始檢測血液和血液制品還可通過母嬰垂直傳播和性接觸傳播還可通過母嬰垂直傳播和性接觸傳播可變的潛伏期可變的潛伏期普遍的癥狀包括夜汗、體重下降、普遍的癥狀包括夜汗、體重下降、 腹瀉、鵝腹瀉、鵝口瘡、

26、紫癜口瘡、紫癜慢性感染，但多種藥物治療可降低病毒滴度慢性感染，但多種藥物治療可降低病毒滴度人類免疫缺陷病毒(HIV)艾滋病有三個特性：艾滋病有三個特性：v 獲得性獲得性-艾滋病并非先天具有，而是后天獲得。艾滋病并非先天具有，而是后天獲得。v 免疫缺陷免疫缺陷-AIDS的發(fā)病機理在于，的發(fā)病機理在于，HIV通過造成人體免疫系通過造成人體免疫系 統(tǒng)的損傷，進而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)防護功能的減低甚至喪失。統(tǒng)的損傷，進而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)防護功能的減低甚至喪失。v 綜合癥綜合癥-在臨床癥狀方面，由于免疫缺陷導(dǎo)致的各個系統(tǒng)的在臨床癥狀方面，由于免疫缺陷導(dǎo)致的各個系統(tǒng)的 機會性感染、腫瘤而出現(xiàn)復(fù)雜的伴隨癥狀群。機會性感

27、染、腫瘤而出現(xiàn)復(fù)雜的伴隨癥狀群。 人類免疫缺陷病毒(HIV) HIV, the virus that causes AIDS, is shown budding out of a human immune cell.人類免疫缺陷病毒(HIV)HIV病毒：多亞型和多變異HIV-1和HIV-2M組、O組和N組亞型：A-KCRF：基因重組亞型，主要是HIV-1型毒株亞型監(jiān)測的意義 不同亞型與不同傳播途徑的關(guān)系：B主要通過男性同性性行為和靜脈注射吸毒傳播，C主要異性性接觸傳播 流行地理和傳播線路的分析：東南亞區(qū)域的C亞型和B亞型 重組亞型傳播效力變化及對流行的影響：東歐的B/A重組流行、泰國的A/E重

28、組 HIV在外界的抵抗力vHIV病毒一旦離開宿主細胞在外界環(huán)境中生存能力很快消失vHIV對環(huán)境中的物理因素和化學(xué)因素抵抗力均較弱，比乙型肝炎病毒（HBV）的抵抗力低得多v對HBV有效得消毒和滅活方法均適用于HIV人類免疫缺陷病毒(HIV)HIV感染的三種結(jié)局v典型進展者：8-10年潛伏期后成為艾滋病人，80% -90%v快速進展者：CD4細胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒載量一直維持較高水平，而且分離的HIV有均一性。v長期存活者（又稱長期不進展者）：維持15年以上，而且CD4計數(shù)維持正常，在所有感染者中比例一般在8%-10%。人類免疫缺陷病毒(HIV)HIV感染的三種結(jié)局v典型進展者：8-1

29、0年潛伏期后成為艾滋病人，80% -90%v快速進展者：CD4細胞2-5年內(nèi)迅速下降，HIV病毒載量一直維持較高水平，而且分離的HIV有均一性。v長期存活者（又稱長期不進展者）：維持15年以上，而且CD4計數(shù)維持正常，在所有感染者中比例一般在8%-10%。人類免疫缺陷病毒(HIV)vHIV抗體的檢測抗體的檢測vP24抗原的檢測抗原的檢測vHIV 核酸檢測核酸檢測HIV感染的實驗室診斷感染的實驗室診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)明膠凝集試驗各種快速診斷試劑檢測亞型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亞型，窗口期由10周縮短至34周。HIV抗體的檢測抗體的檢測HIV抗體的檢測抗體的檢測

30、按按規(guī)范規(guī)范要求，我國采供血機構(gòu)進行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機要求，我國采供血機構(gòu)進行血液篩查和各醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)常規(guī)篩查檢測宜采用構(gòu)常規(guī)篩查檢測宜采用ELISA法。對用法。對用ELISA試劑或快速診斷試試劑或快速診斷試劑進行的篩查實驗如呈陰性反應(yīng)，即報告劑進行的篩查實驗如呈陰性反應(yīng)，即報告HIV抗體陰性；對呈陽抗體陰性；對呈陽性反應(yīng)的標本，篩查實驗室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或性反應(yīng)的標本，篩查實驗室應(yīng)用原有試劑和另外一種不同原理或不同廠家的試劑進行重復(fù)檢測，如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，不同廠家的試劑進行重復(fù)檢測，如兩種試劑復(fù)測均呈陰性反應(yīng)，則報告則報告HIV抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽

31、，需送艾滋抗體陰性；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確認實驗室進行確認。篩查試劑必須是病確認實驗室進行確認。篩查試劑必須是HIV-1/2混合型、經(jīng)國家混合型、經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局藥品監(jiān)督管理局(SDA)注冊批準、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、注冊批準、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。在有效期內(nèi)的試劑。 人類免疫缺陷病毒(HIV)免疫印跡試驗條帶免疫試驗免疫熒光試驗HIV確認試驗確認試驗ELISA雙抗體夾心法雙抗體夾心法 陽性結(jié)果必須經(jīng)中和試驗確認，該結(jié)果才可作為陽性結(jié)果必須經(jīng)中和試驗確認，該結(jié)果才可作為HIV感染感染的輔助診斷依據(jù)。的輔助診斷依據(jù)。HIV-1 P24抗原檢測陰

32、性，只表示在本抗原檢測陰性，只表示在本試驗中無反應(yīng)，不能排除試驗中無反應(yīng)，不能排除HIV感染。感染。 在窗口期檢測在窗口期檢測P24抗原是早期輔助診斷和進一步縮短窗口抗原是早期輔助診斷和進一步縮短窗口期的一種方法，還可用于期的一種方法，還可用于HIV陽性母親所生嬰兒的早期輔陽性母親所生嬰兒的早期輔助鑒別診斷。助鑒別診斷。P24抗原抗原的檢測的檢測檢測檢測HIV RNA通常使用通常使用PCR或或RT-PCR技術(shù)，技術(shù)， 核酸序列擴增實驗核酸序列擴增實驗(NASBA)、分、分支支DNA雜交實驗等雜交實驗等 注意注意： HIV核酸定性檢測陰性，只可報告本次實驗結(jié)果陰性，但不能排除核酸定性檢測陰性，只

33、可報告本次實驗結(jié)果陰性，但不能排除HIV感染；感染；HIV核酸檢測陽性，可作為診斷核酸檢測陽性，可作為診斷HIV感染的輔助指標，不能單獨用感染的輔助指標，不能單獨用于于HIV感染的診斷，報告定性檢測結(jié)果時還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物感染的診斷，報告定性檢測結(jié)果時還應(yīng)注明反應(yīng)條件和所使用的引物序列。報告序列。報告HIV核酸定量檢測結(jié)果時應(yīng)按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，注明使用的核酸定量檢測結(jié)果時應(yīng)按照儀器讀數(shù)報告結(jié)果，注明使用的試驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結(jié)果小于最低檢測限時，應(yīng)注明最低試驗方法、樣品種類和樣品量，當測定結(jié)果小于最低檢測限時，應(yīng)注明最低檢測限水平，低于最低檢測限的結(jié)果不能排除檢測

34、限水平，低于最低檢測限的結(jié)果不能排除HIV感染。感染。HIV核酸檢測核酸檢測vCD4+T淋巴細胞計數(shù)淋巴細胞計數(shù)v血漿血漿HIV RNA水平水平(病毒載量病毒載量) 這兩項實驗可以為臨床醫(yī)生提供病人病毒水平、免疫這兩項實驗可以為臨床醫(yī)生提供病人病毒水平、免疫狀態(tài)的相關(guān)資料，是預(yù)測疾病進程的可靠指標，還可狀態(tài)的相關(guān)資料，是預(yù)測疾病進程的可靠指標，還可獨立預(yù)測艾滋病臨床過程和生存期。獨立預(yù)測艾滋病臨床過程和生存期。HIV感染的實驗室監(jiān)測感染的實驗室監(jiān)測 流式細胞儀是檢測流式細胞儀是檢測CD4+T淋巴細胞計數(shù)的標準方法，可淋巴細胞計數(shù)的標準方法，可以得出以得出CD4+T細胞占淋巴細胞的比值及絕對值。

35、細胞占淋巴細胞的比值及絕對值。CD4+T細胞計數(shù)是艾滋病診斷、疾病分期的實驗室標準指標。細胞計數(shù)是艾滋病診斷、疾病分期的實驗室標準指標。CD4+T淋巴細胞計數(shù)淋巴細胞計數(shù) HIV病毒耐藥分為原發(fā)性病毒耐藥分為原發(fā)性(Primary)及繼發(fā)性及繼發(fā)性(Secondary) v原發(fā)性原發(fā)性HIV病毒耐藥：指那些直接影響抗病毒藥物作用靶點的變病毒耐藥：指那些直接影響抗病毒藥物作用靶點的變異，具有藥物特異性，可降低抗病毒藥物敏感性異，具有藥物特異性，可降低抗病毒藥物敏感性v 繼發(fā)性變異又稱為補償變異：常出現(xiàn)于原發(fā)性變異已存在的病毒繼發(fā)性變異又稱為補償變異：常出現(xiàn)于原發(fā)性變異已存在的病毒基因組中，原發(fā)性

36、變異可造成復(fù)制關(guān)鍵酶的改變，導(dǎo)致病毒動力基因組中，原發(fā)性變異可造成復(fù)制關(guān)鍵酶的改變，導(dǎo)致病毒動力學(xué)的不利，繼發(fā)性變異可糾正由原發(fā)性變異導(dǎo)致的不利，提高病學(xué)的不利，繼發(fā)性變異可糾正由原發(fā)性變異導(dǎo)致的不利，提高病毒的耐藥性，對原發(fā)性變異起到保護和促進作用毒的耐藥性，對原發(fā)性變異起到保護和促進作用HIV抗病毒治療的耐藥監(jiān)測抗病毒治療的耐藥監(jiān)測 耐藥性檢測有兩種方法耐藥性檢測有兩種方法 v表型檢測：通過用藥期間的病毒培養(yǎng)進行表型檢測：通過用藥期間的病毒培養(yǎng)進行v基因型檢測：通過分子生物學(xué)方法檢測與耐藥性相關(guān)的病毒基因突變基因型檢測：通過分子生物學(xué)方法檢測與耐藥性相關(guān)的病毒基因突變v基因型檢測的費用較低

37、，較容易，可在樣品收集后基因型檢測的費用較低，較容易，可在樣品收集后12周得到結(jié)果，但周得到結(jié)果，但分析基因型耐藥檢測時，需要掌握大量相關(guān)知識，如突變與抗病毒藥物分析基因型耐藥檢測時，需要掌握大量相關(guān)知識，如突變與抗病毒藥物及其它藥物的交叉耐藥等，才能對結(jié)果進行正確的分析。表型檢測可以及其它藥物的交叉耐藥等，才能對結(jié)果進行正確的分析。表型檢測可以直接檢測病毒的耐藥性，但操作復(fù)雜、耗時，技術(shù)要求高，且非常昂貴，直接檢測病毒的耐藥性，但操作復(fù)雜、耗時，技術(shù)要求高，且非常昂貴，因此目前國際上廣泛應(yīng)用于臨床的是基因型耐藥檢測。因此目前國際上廣泛應(yīng)用于臨床的是基因型耐藥檢測。人乳頭瘤狀病毒人乳頭瘤狀病毒

38、（human papillomavirus, HPV ）vHPV具有宿主和組織特異性，只能感染人的皮膚和黏膜上皮細胞，人是HPV的惟一宿主。v有100多個型v低危型：HPV 6、11引起良性病變 (尖銳濕疣、喉乳頭瘤等)v高危型：HPV 16、18引起惡性腫瘤 (宮頸癌、肛門癌、口腔癌等)v新生兒產(chǎn)道感染。v免疫原性低，易形成持續(xù)性感染。 v高危型高危型 16.18.31.33.35.39.45.51.52.56.58.59. 68.73.82.亞型亞型CP8304 v可能高危型可能高危型 26.66.53v低危型低危型 6.11.40.42.43.44.54.61.70.72.81.cp61

39、08 HPV型別型別HPVHPV中國型別分布中國型別分布HPV16(24.5%)HPV52(16.2%)HPV58(16.0%)HPV56HPV31烏蘭娜烏蘭娜, ,吳瑞芳等，人乳頭瘤病毒基因亞型與宮頸病變的關(guān)系吳瑞芳等，人乳頭瘤病毒基因亞型與宮頸病變的關(guān)系, ,中國婦產(chǎn)科臨床雜志中國婦產(chǎn)科臨床雜志 HPV16(32.9%)HPV58(18.8%)HPV52(16.9%)HPV18HPV33URRHPV2001年在歐洲由德國、法國和英國聯(lián)合對二代雜交捕獲HC2 HPV檢測在宮頸癌篩查中的作用進行了大規(guī)模的研究和評估K.U. Petry, C. Clavel, A. Szarewski, T.I

40、ftner, P.Birembaut, J.Cuzick23,890 (篩查人數(shù)）篩查人數(shù)）21,409HPV-細胞學(xué)細胞學(xué)-488HPV-細胞學(xué)細胞學(xué)+1370HPV+細胞學(xué)細胞學(xué)-523陰道鏡檢查陰道鏡檢查533無病例無病例 發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)只發(fā)現(xiàn)只發(fā)現(xiàn)3個病例個病例發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)59個病例個病例發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)144個病例個病例HPV+細胞學(xué)細胞學(xué)+HC2 與巴氏涂片對檢測與巴氏涂片對檢測CIN2或以上的病變或以上的病變的敏感度比較的敏感度比較法國法國英國英國德國德國總數(shù)總數(shù)HC2100%97.7%97.8%98.6%巴氏涂片巴氏涂片68.1 87.9%83.1%43.5%71.4%HC2+巴氏巴氏涂片涂片1

41、00%100%100%100%各地區(qū)細胞學(xué)與各地區(qū)細胞學(xué)與HPV敏感度結(jié)果比較篩查敏感度結(jié)果比較篩查020406080100LondonSeattleReimsNewfoundlandGuanacasteCape TownShanxiHanoverMorelosStudySensitivity % for CIN 3PapHPVPap+HPV “HPV相比其它所有的宮頸癌篩查方法重復(fù)性更好，是值得信賴的、可靠的宮頸癌初篩新方法。”HPV-DNA分型檢測的意義分型檢測的意義 ：v監(jiān)測子宮頸上皮內(nèi)高度病變監(jiān)測子宮頸上皮內(nèi)高度病變v區(qū)分患者患宮頸癌的危險度區(qū)分患者患宮頸癌的危險度v篩查宮頸細胞低度病

42、變（篩查宮頸細胞低度病變（ASCUS或或CINI）中潛在的宮）中潛在的宮頸癌頸癌v高?；颊吒呶；颊遶用于手術(shù)后追蹤以確定是否將病灶清除干凈用于手術(shù)后追蹤以確定是否將病灶清除干凈v用于治療后的隨訪用于治療后的隨訪v指導(dǎo)指導(dǎo)HPV疫苗的研究及使用疫苗的研究及使用v評估治療療效評估治療療效 EBEB病毒病毒v19641964年名年名EspteinEsptein-Barr -Barr 首先發(fā)現(xiàn)、命名首先發(fā)現(xiàn)、命名v19661966年年OldOld等首先證實等首先證實EBEB病毒和鼻咽癌的血清病毒和鼻咽癌的血清學(xué)關(guān)系學(xué)關(guān)系v19681968年年HenleHenle等證明該病毒是傳染性單核細胞等證明該病毒

43、是傳染性單核細胞增多癥的病原體增多癥的病原體EBEB病毒特異性抗原病毒特異性抗原v病毒潛伏感染時表達的抗原：病毒潛伏感染時表達的抗原： EBEB病毒核抗原（病毒核抗原（EBNAEBNA） EBEB病毒潛伏感染膜抗原（病毒潛伏感染膜抗原（EBLMPEBLMP）v病毒增殖感染相關(guān)抗原：病毒增殖感染相關(guān)抗原： EBEB病毒特異性抗原病毒特異性抗原EBEB病毒早期抗原（病毒早期抗原（EAEA） EBEB病毒衣殼抗原（病毒衣殼抗原（VCAVCA） EBEB病毒膜抗原（病毒膜抗原（MAMA）EBVEBV感染時主要抗病毒抗體產(chǎn)生的模式感染時主要抗病毒抗體產(chǎn)生的模式SARSSARS冠狀病毒冠狀病毒v一種新的烈

44、性呼吸道傳染病。一種新的烈性呼吸道傳染病。v疾病的病原體（疾病的病原體（SARSSARS冠狀病毒；冠狀病毒；SARA-CoVSARA-CoV）。）。vSARSSARS為全身損傷性疾病，尤以肺組織、免疫為全身損傷性疾病，尤以肺組織、免疫組織及小靜脈為主。組織及小靜脈為主。vSARSSARS的臨床診斷標準明確，實驗室的輔助手的臨床診斷標準明確，實驗室的輔助手段是抗段是抗-SARA-CoV IgM-SARA-CoV IgM的檢測和病毒的核酸分的檢測和病毒的核酸分析。析。甲型甲型H1N1流感病毒流感病毒 甲型流感病毒根據(jù)其表面甲型流感病毒根據(jù)其表面(H和和N)結(jié)構(gòu)及結(jié)構(gòu)及其基因特性的不同又可分成許多亞

45、型，其基因特性的不同又可分成許多亞型，至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有至今甲型流感病毒已發(fā)現(xiàn)的血凝素有16個亞型個亞型(H1-H16)，神經(jīng)氨酸酶，神經(jīng)氨酸酶9個亞型個亞型(N1-N9)。 世界衛(wèi)生組織2009年4月30日宣布，從當日起，該組織不再使用“豬流感”一詞，而開始使用“A（H1N1）型流感”一詞。與之相對應(yīng)，我國的官方文件從5月1日起相繼用“甲型H1N1流感”代替原來的“人感染豬流感”。甲型甲型H1N1流感流感 甲型H1N1流感病毒屬于正粘病毒科，典型病毒顆粒呈球狀，直徑為80 nm120 nm，有囊膜。囊膜上有許多放射狀排列的突起糖蛋白，分別是血凝素HA、神經(jīng)氨酸酶NA 和M2蛋白

46、。病毒顆粒內(nèi)為核衣殼, 呈螺旋狀對稱, 直徑為10nm。甲型H1N1流感病毒為單股負鏈RNA 病毒，基因組約為13.6 kb，由大小不等的8 個獨立片段組成。 甲型H1N1流感甲型H1N1流感流行病病學(xué)特點傳染源 主要為病豬和攜帶病毒的豬，感染豬流感病毒的人也被證實可以傳播病毒。感染這種病毒的動物均可傳播。傳播途徑 主要為呼吸道傳播，也可通過接觸感染的豬或其糞便、周圍污染的環(huán)境或氣溶膠等途徑傳播。某些毒株如H1N1可在人與人之間傳播，其傳染途徑與流感類似，通常是通過感染者咳嗽或打噴嚏等。易感人群 普遍易感?；颊叨鄶?shù)年齡在25歲至45歲之間，目前報道以青壯年為主，應(yīng)注意老人和兒童。甲型H1N1流

47、感實驗室檢查v外周血象：白細胞總數(shù)一般不高或降低。重癥患者多有白細胞總數(shù)及淋巴細胞減少，并有血小板降低；v血清學(xué)診斷：可使用間接ELISA、抗原捕捉ELISA、熒光免疫法等；v反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）：由于PCR技術(shù)具有簡便、快速、靈敏、特異性強等特點，已用于豬流感病毒基因的檢測和分子流行病學(xué)調(diào)查等；v病毒分離：從患者呼吸道標本中（咽拭子、口腔含漱液、鼻咽或氣管吸出物、痰或肺組織）分離甲型H1N1流感病毒。常用的方法有雞胚接種法和細胞培養(yǎng)法?，F(xiàn)有的診斷方法中，病毒分離法是較敏感的，但需要2-3周時間。甲型H1N1流感v1957年在加拿大首次報告，新西蘭年在加拿大首次報告，新西蘭S

48、eddon于于1957年最早加以描述，年最早加以描述，1958年加拿大年加拿大Robinson從患者糞便和咽拭中分離出從患者糞便和咽拭中分離出CoxA16，同時，同時患者血清抗體有四倍增長患者血清抗體有四倍增長,初步查明初步查明CoxA16為本病病原；為本病病原；v1959年提出年提出HFMD命名，命名，HFMD在全球廣泛流行，無明顯的地域分布。在全球廣泛流行，無明顯的地域分布。v之后世界各地均經(jīng)常發(fā)生由各型柯薩奇、?？刹《竞椭笫澜绺鞯鼐?jīng)常發(fā)生由各型柯薩奇、?？刹《竞虴V 71引起的手引起的手足口病流行。足口病流行。v發(fā)熱發(fā)熱, 不適不適, 咽喉腫痛咽喉腫痛, 口腔、手、腳側(cè)面及掌心、屁股

49、出現(xiàn)小泡口腔、手、腳側(cè)面及掌心、屁股出現(xiàn)小泡v傳染性極高傳染性極高v病程約病程約1周周手足口病病毒手足口病病毒（Hand, foot and mouth disease Virus ）v手足口病可由多種腸道病毒所引起，其中包括手足口病可由多種腸道病毒所引起，其中包括 CoxA5,A10, A16, A19, EV71,以及部分?？刹《竞涂滤_奇以及部分?？刹《竞涂滤_奇B組病毒組病毒, 以以CoxA16 和和 EV71最為常見最為常見 v傳播途徑傳播途徑: 糞糞-口途徑傳播口途徑傳播: 唾液與糞便唾液與糞便; 呼吸道傳播呼吸道傳播: 空氣飛沫空氣飛沫; 接觸接觸傳播傳播v 皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。v HFMD為全球性傳染病，在全球廣泛分布，無明顯的地域分布為全球性傳染病，在全球廣泛分布，無明顯的地域分布, 但但 近近年年EV71在東南亞一帶流行