微生物限度檢查方法適用性驗(yàn)證方案

1、WORD格式微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)方案專業(yè)資料整理WORD格式驗(yàn)證方案組織與實(shí)施微生物限度檢查方法適用性試驗(yàn)工作應(yīng)由質(zhì)量管理部門負(fù)責(zé)組織，質(zhì)量管理部門有關(guān)人員組成驗(yàn)證小組，參與實(shí)施。方案起草部門/職務(wù)簽名日期質(zhì)量管理部QC方案審核部門/職務(wù)簽名日期質(zhì)量管理部QC經(jīng)理方案批準(zhǔn)部門/職務(wù)批準(zhǔn)人批準(zhǔn)日期質(zhì)量管理部質(zhì)量總監(jiān)專業(yè)資料整理WORD格式2專業(yè)資料整理WORD格式目錄一、 概述二、 驗(yàn)證目的和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估三、 驗(yàn)證內(nèi)容四、方法判定五、再驗(yàn)證周期六、參考文獻(xiàn)七、結(jié)果評(píng)價(jià)及結(jié)論專業(yè)資料整理WORD格式3專業(yè)資料整理WORD格式1、概述：微生物限度檢查法系檢查非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受微生物污

2、染程度的方法。檢查工程包括需氧菌數(shù)、霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)及控制菌檢查。當(dāng)建立產(chǎn)品的微生物限度檢查法時(shí)，應(yīng)進(jìn)展需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法的適用性試驗(yàn)和控制菌檢查方法的適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的需氧菌、霉菌和酵母菌數(shù)的測(cè)定和控制菌檢查。依照中國(guó)藥典2021 版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法進(jìn)展方法適用性試驗(yàn)。2、試驗(yàn)?zāi)康暮惋L(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：驗(yàn)證目的：確認(rèn)所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法及控制菌檢查方法適合我公司所生產(chǎn)產(chǎn)品的微生物限度檢查。風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估：工程潛在失效模式失效影響采取措施試驗(yàn)局部工程出現(xiàn)偏差直接影響試驗(yàn)結(jié)果的嚴(yán)格執(zhí)行經(jīng)批準(zhǔn)未按方案執(zhí)行的試驗(yàn)方案和漂移正確性試驗(yàn)過(guò)程操

3、作不當(dāng)未到達(dá)試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)失敗未嚴(yán)格遵循試驗(yàn)方案規(guī)定3、驗(yàn)證內(nèi)容：3.1 、培養(yǎng)基來(lái)源：品名批號(hào)規(guī)格來(lái)源確認(rèn)人：確認(rèn)日期：3.2 、檢查用培養(yǎng)基配制方法：專業(yè)資料整理WORD格式4專業(yè)資料整理WORD格式培養(yǎng)基名稱配制方法PH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液取本品 14.63g ，加水 1000ml ，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基取本品 40g，加水 1000ml，加熱溶解，分裝， 121， 15 分鐘滅菌，備用。胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基取本品 30.0g ，加水 1000ml，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基取本品 30.

4、0g ，加水 1000ml，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基取本品 65.0g ，加水 1000ml，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基取本品 50.0g ，加水 1000ml，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。麥康凱液體培養(yǎng)基取本品 35.0 ，加水 1000ml ，加熱溶解，分裝， 121，15 分鐘滅菌，備用。確認(rèn)人：確認(rèn)日期：3.3 、使用儀器名稱型號(hào)校驗(yàn)單位有效期至數(shù)顯電熱恒溫培養(yǎng)數(shù)顯霉菌培養(yǎng)箱確認(rèn)人 :確認(rèn)日期：3.4 、驗(yàn)證試驗(yàn)用菌種：菌種名稱代號(hào)傳代代數(shù)來(lái)源金黃色葡萄球菌大腸埃希菌銅綠假單胞菌枯草芽

5、孢桿菌白色念珠菌黑曲霉菌確認(rèn)人：確認(rèn)日期：3.5 試驗(yàn)方法：專業(yè)資料整理WORD格式5專業(yè)資料整理WORD格式取供試品 10 ml 加 PH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液至 100ml 1:10 供試液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常規(guī)法。3.6 菌液的制備：3.6.1取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、枯草芽孢桿菌的胰酪大豆胨瓊脂斜面培物一鉑金餌，參加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中置30 35 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 24h ，取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、 枯草芽孢桿菌的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)物1ml 參加 9ml0.9 無(wú)菌氯化鈉溶液中，制成 10 -1的菌液， 依法 10 倍

6、稀釋至 107注入平皿中， 立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml ， 分取各菌懸液 1ml各菌懸液平行制備兩個(gè)平皿，平皿法培養(yǎng)計(jì)數(shù)，取小于100CFU/ml 和 1000CFU/ml 的菌液備用。3.6.2 取白色念珠菌的沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)物，參加沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中置20 25培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 24 48h ，取白色念珠菌的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)物1ml參加 9ml0.9 無(wú)菌氯化鈉溶液中，制成10-1的菌液，依法 10倍稀釋至 107，取菌懸液 1ml 注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基25ml ，各菌懸液平行制備兩個(gè)平皿，平皿法培養(yǎng)計(jì)數(shù)，取小于100CFU/ml 和 1000CFU/

7、ml的菌液備用。3.6.3 取黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物接種子沙氏葡萄糖瓊脂斜面上，20-25 培養(yǎng) 5-7 天，參加 3-5ml 含 0.05% 聚山梨酯 80 的 0.9% 無(wú)菌氯化鈉溶液， 將孢子洗脫。 取 1ml 參加含 0.05% 聚山梨酯 80 的 9ml 0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液中，制成10 -1的菌液，依法 10 倍稀釋至 107，取，取菌懸液1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基25ml ，各菌懸液平行制備兩個(gè)平皿，平皿法培養(yǎng)計(jì)數(shù)，取小于 100CFU/ml和 1000CFU/ml的菌液備用。3.7 需氧菌、霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)：3.7.1供試液制備：取供試品10 m

8、l ，加 PH7.0 氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液至100ml 1:10 供試液。3.7.2實(shí)驗(yàn)條件：需氧菌培養(yǎng)溫度：30 35 3 5 天培養(yǎng)箱：霉菌和酵母菌培養(yǎng)溫度： 20 25 5 7 天培養(yǎng)箱：3.7.3 試驗(yàn)方法：3.7.3.1試驗(yàn)組：3.7.3.1.1分別取供試液9.9ml ，分別參加 0.1ml 濃度為 1000CFU的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌，混勻后取其中1ml 注皿 , 傾注溫度不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml ，置 3035或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)不超過(guò)3 天，計(jì)數(shù)，每株試驗(yàn)菌平行制備2 個(gè)平皿。3.7.3.1.2分別取供試液9.9ml ，分別參加 0.1ml

9、濃度為 1000CFU白色念珠菌、黑曲霉菌液， 混勻后分別取其中 1ml 注皿 , 傾注溫度不超過(guò) 45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基20ml ，置 3035或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)不超專業(yè)資料整理WORD格式6專業(yè)資料整理WORD格式過(guò) 5 天，計(jì)數(shù)，每株試驗(yàn)菌平行制備2 個(gè)平皿。 另分別取其中1ml 注皿 ,傾注溫度不超過(guò)45的沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基20ml ，置 20 25或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)不超過(guò)5 天，計(jì)數(shù)，每株試驗(yàn)菌平行制備2 個(gè)平皿。3.7.3.2菌液對(duì)照組：分別取稀釋液9.9ml ，分別參加0.1ml 濃度為 1000CFU的菌液，按試驗(yàn)組操作, 傾注溫度不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂

10、培養(yǎng)基，置與試驗(yàn)組一樣條件下培養(yǎng),計(jì)數(shù)。每株試驗(yàn)菌平行制備2 個(gè)平皿。3.7.3.3供試品對(duì)照組：取供試液1ml ，傾注溫度不超過(guò)45的胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，置與試驗(yàn)組一樣條件下培養(yǎng),計(jì)數(shù)。每株試驗(yàn)菌平行制備2 個(gè)平皿。3.7.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果3.7.4.1結(jié)果判定：試驗(yàn)組的菌落數(shù)減去供試品對(duì)照組菌落數(shù)的值與菌液對(duì)照組菌落數(shù)的比值應(yīng)在0.5 2X圍內(nèi)。比值 =試驗(yàn)組菌落數(shù)供試品對(duì)照組的菌落數(shù)*對(duì)照組菌落數(shù)3.7.4.2需氧菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)： 1供試品批號(hào) :供試品菌種類型試驗(yàn)組菌液組比值對(duì)照組銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日期：復(fù)

11、核人：日期：試驗(yàn)次數(shù)： 2供試品批號(hào) :供試品菌種類型試驗(yàn)組菌液組比值對(duì)照組銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌專業(yè)資料整理WORD格式7專業(yè)資料整理WORD格式白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：試驗(yàn)次數(shù)： 3供試品批號(hào) :供試品菌種類型試驗(yàn)組菌液組比值對(duì)照組銅綠假單胞菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：3.7.4.3霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)次數(shù)： 1供試品批號(hào) :供試品菌種類型試驗(yàn)組菌液組比值對(duì)照組白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：試驗(yàn)次數(shù)： 2供試品批號(hào) :供試品菌種類型試驗(yàn)組菌液組比值對(duì)照組白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日

12、期：復(fù)核人：日期試驗(yàn)次數(shù)： 3供試品批號(hào) :專業(yè)資料整理WORD格式8專業(yè)資料整理WORD格式供試品菌種類型試驗(yàn)組 菌液組 比值對(duì)照組白色念珠菌黑曲霉檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期3.7.5結(jié)論 :檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：3.8 控制菌微生物檢測(cè)方法適用性試驗(yàn)：3.8.1實(shí)驗(yàn)方法：3.8.1.1試驗(yàn)組：取供試液 10ml及不大于 100cfu 大腸埃希菌菌液參加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置 3035培養(yǎng) 18-24 小時(shí) ,取上述培養(yǎng)物 1ml 接種至 100ml 麥康凱液體培養(yǎng)基中，4244培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上3035培養(yǎng) 18-72 小時(shí)

13、。試驗(yàn)組應(yīng)生長(zhǎng)良好。3.8.1.2陰性對(duì)照組：取稀釋劑10ml, 參加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置3035培養(yǎng) 18-24 小時(shí)，陰性對(duì)照應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。3.8.1.3陽(yáng)性對(duì)照組：取不大于100cfu 大腸埃希菌菌液參加胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，置3035培養(yǎng)18-24 小時(shí) ,取上述培養(yǎng)物1ml 接種至 100ml 麥康凱液體培養(yǎng)基中，42 44培養(yǎng) 24-48 小時(shí)。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上3035培養(yǎng) 18-72 小時(shí)。陽(yáng)性對(duì)照組應(yīng)生長(zhǎng)良好。3.8.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)次數(shù)： 1供試品批號(hào) :控制菌工程常規(guī)法試驗(yàn)組大腸埃希菌陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：試驗(yàn)次數(shù)： 2供試品批號(hào) :專業(yè)資料整理WORD格式9專業(yè)資料整理WORD格式控制菌工程常規(guī)法試驗(yàn)組大腸埃希菌陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：試驗(yàn)次數(shù)： 3供試品批號(hào) :控制菌工程常規(guī)法試驗(yàn)組大腸埃希菌陽(yáng)性對(duì)照組陰性對(duì)照組3.8.3結(jié)論：檢驗(yàn)人：日期：復(fù)核人：日期：4. 方法判定：本品按&quo