發(fā)酵學(xué)第7章發(fā)酵工藝的控制1

1、復(fù)雜涉及生物細(xì)胞的生長、生理和繁殖等生命過程酶催化的生化反應(yīng)過程發(fā)酵是生物、化學(xué)和工程等學(xué)科理論和技術(shù)的綜合利用是生物細(xì)胞按照生命固有的一系列遺傳信息，是生物細(xì)胞按照生命固有的一系列遺傳信息，在所處營養(yǎng)和培養(yǎng)條件下，進(jìn)行復(fù)雜而細(xì)微在所處營養(yǎng)和培養(yǎng)條件下，進(jìn)行復(fù)雜而細(xì)微的各種動態(tài)生化反應(yīng)的集合。的各種動態(tài)生化反應(yīng)的集合。了解發(fā)育、生長、代謝的生物過程控制發(fā)酵過程了解各種生物、理化和工程環(huán)境因素對生物過程的影響充分表達(dá)生物細(xì)胞的生產(chǎn)能力過程中一些參數(shù)的變化情況，結(jié)合代謝調(diào)控的基礎(chǔ)理論，控制發(fā)酵第一節(jié)第一節(jié) 發(fā)酵過程中的代謝變化及主要控制參數(shù)發(fā)酵過程中的代謝變化及主要控制參數(shù)第二節(jié)第二節(jié) 菌體濃度的

2、影響及其控制菌體濃度的影響及其控制第三節(jié)第三節(jié) 基質(zhì)的影響及其控制基質(zhì)的影響及其控制第四節(jié)第四節(jié) 溫度的影響及其控制溫度的影響及其控制第五節(jié)第五節(jié) pHpH的影響及其控制的影響及其控制第六節(jié)第六節(jié) 溶氧的影響及其控制溶氧的影響及其控制第七節(jié)第七節(jié) COCO2 2的影響及其控制的影響及其控制第八節(jié)第八節(jié) 補(bǔ)料的作用和控制補(bǔ)料的作用和控制第九節(jié)第九節(jié) 泡沫的影響及其控制泡沫的影響及其控制第十節(jié)第十節(jié) 發(fā)酵終點(diǎn)的判斷發(fā)酵終點(diǎn)的判斷代謝變化：就是反映發(fā)酵過程中菌體的代謝變化：就是反映發(fā)酵過程中菌體的生長，發(fā)酵參數(shù)（培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件等）生長，發(fā)酵參數(shù)（培養(yǎng)基，培養(yǎng)條件等）和產(chǎn)物形成速率三者間的關(guān)系。和產(chǎn)

3、物形成速率三者間的關(guān)系。代謝變化曲線：把菌體生長、發(fā)酵參數(shù)代謝變化曲線：把菌體生長、發(fā)酵參數(shù)和產(chǎn)物形成速率隨時間變化的過程繪制和產(chǎn)物形成速率隨時間變化的過程繪制成圖，就成為所說的代謝曲線。成圖，就成為所說的代謝曲線。第一節(jié) 發(fā)酵過程中的代謝變化及主要控制參數(shù) 發(fā)酵過程按投料方式分類：發(fā)酵過程按投料方式分類：分批發(fā)酵分批發(fā)酵(Batch fermentation)補(bǔ)料分批發(fā)酵補(bǔ)料分批發(fā)酵(Fed-batch fermentation)連續(xù)發(fā)酵連續(xù)發(fā)酵(Continuous fermentation)1 1、分批發(fā)酵的定義、分批發(fā)酵的定義是指在一封閉系統(tǒng)內(nèi)含有初始限量基質(zhì)的是指在一封閉系統(tǒng)內(nèi)含有初

4、始限量基質(zhì)的發(fā)酵方式。在這一過程中，除了氧氣、消發(fā)酵方式。在這一過程中，除了氧氣、消泡劑及控制泡劑及控制pHpH的酸或堿外，不再加入任何的酸或堿外，不再加入任何其它物質(zhì)。發(fā)酵過程中培養(yǎng)基成分減少，其它物質(zhì)。發(fā)酵過程中培養(yǎng)基成分減少，微生物得到繁殖。微生物得到繁殖。分批發(fā)酵分批發(fā)酵2.2.分批發(fā)酵的特點(diǎn)分批發(fā)酵的特點(diǎn)微生物所處的環(huán)境在發(fā)酵過程中不斷變化，其物理，化學(xué)微生物所處的環(huán)境在發(fā)酵過程中不斷變化，其物理，化學(xué)和生物參數(shù)都隨時間而變化，是一個不穩(wěn)定的過程。和生物參數(shù)都隨時間而變化，是一個不穩(wěn)定的過程。優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 操作簡單； 操作引起染菌的概率低。 不會產(chǎn)生菌種老化和變異等問題缺點(diǎn)缺點(diǎn) 非生產(chǎn)時

5、間較長、設(shè)備利用率低。補(bǔ)料分批發(fā)酵補(bǔ)料分批發(fā)酵1 1、定義、定義 補(bǔ)料分批發(fā)酵又稱半連續(xù)發(fā)酵或流補(bǔ)料分批發(fā)酵又稱半連續(xù)發(fā)酵或流加分批發(fā)酵，是指在分批發(fā)酵過程加分批發(fā)酵，是指在分批發(fā)酵過程中，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基中，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)基的發(fā)酵方式。的發(fā)酵方式。2、補(bǔ)料分批發(fā)酵的優(yōu)缺點(diǎn)補(bǔ)料分批發(fā)酵的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)使發(fā)酵系統(tǒng)中維持很低的基質(zhì)濃度；和連續(xù)發(fā)酵比、不需要嚴(yán)格的無菌條件；不會產(chǎn)生菌種老化和變異等問題。缺點(diǎn)缺點(diǎn)存在一定的非生產(chǎn)時間；和分批發(fā)酵比，中途要流加新鮮培養(yǎng)基，增加了染菌的危險。3 3、補(bǔ)料分批發(fā)酵的類型、補(bǔ)料分批發(fā)酵的類型補(bǔ)料方式補(bǔ)料方式連續(xù)流加不連續(xù)流加多周期流加補(bǔ)料成

6、分補(bǔ)料成分單一組分流加多組分流加控制方式控制方式反饋控制無反饋控制連續(xù)發(fā)酵連續(xù)發(fā)酵1 1、定義、定義 培養(yǎng)基料液連續(xù)輸入發(fā)酵罐，并同時放出培養(yǎng)基料液連續(xù)輸入發(fā)酵罐，并同時放出含有產(chǎn)品的相同體積發(fā)酵液，使發(fā)酵罐內(nèi)含有產(chǎn)品的相同體積發(fā)酵液，使發(fā)酵罐內(nèi)料液量維持恒定，微生物在近似恒定狀態(tài)料液量維持恒定，微生物在近似恒定狀態(tài)（恒定的基質(zhì)濃度、恒定的產(chǎn)物濃度、恒（恒定的基質(zhì)濃度、恒定的產(chǎn)物濃度、恒定的定的pHpH、恒定菌體濃度、恒定的比生長、恒定菌體濃度、恒定的比生長速率）下生長的發(fā)酵方式。速率）下生長的發(fā)酵方式。2、連續(xù)發(fā)酵的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)能維持低基質(zhì)濃度；可以提高設(shè)備利用率和單位時間的產(chǎn)量；便于自動

7、控制。缺點(diǎn)缺點(diǎn)菌種發(fā)生變異的可能性較大；要求嚴(yán)格的無菌條件。3、連續(xù)發(fā)酵的類型連續(xù)發(fā)酵的類型恒化培養(yǎng)恒化培養(yǎng)使培養(yǎng)基中限制性基質(zhì)的濃度保持恒定恒濁培養(yǎng)恒濁培養(yǎng)使培養(yǎng)基中菌體的濃度保持恒定本章主要以分批發(fā)酵基礎(chǔ)介紹微生物的代謝特征。本章主要以分批發(fā)酵基礎(chǔ)介紹微生物的代謝特征。一、分批發(fā)酵的代謝類型一、分批發(fā)酵的代謝類型二、發(fā)酵過程的代謝變化規(guī)律二、發(fā)酵過程的代謝變化規(guī)律（一）初級代謝產(chǎn)物的代謝變化（二）次級代謝產(chǎn)物的代謝變化三、發(fā)酵過程的主要控制參數(shù)三、發(fā)酵過程的主要控制參數(shù)一、分批發(fā)酵的代謝類型一、分批發(fā)酵的代謝類型按照菌體生長，碳源利用和產(chǎn)物生成的按照菌體生長，碳源利用和產(chǎn)物生成的變化變化第

8、一類型 生長關(guān)聯(lián)型第二類型 部分生長關(guān)聯(lián)型第三類型 非生長關(guān)聯(lián)型第一類型（生長關(guān)聯(lián)型）第一類型（生長關(guān)聯(lián)型） n產(chǎn)物直接來源于產(chǎn)物直接來源于產(chǎn)能的初級代謝產(chǎn)能的初級代謝（自身繁殖所必需（自身繁殖所必需的代謝），菌體生的代謝），菌體生長與產(chǎn)物形成不分長與產(chǎn)物形成不分開。開。n例如單細(xì)胞蛋白例如單細(xì)胞蛋白和葡萄糖酸的發(fā)酵和葡萄糖酸的發(fā)酵第二類型（部分生長關(guān)聯(lián)型）第二類型（部分生長關(guān)聯(lián)型） 產(chǎn)物也來源于能產(chǎn)物也來源于能量代謝所消耗的基量代謝所消耗的基質(zhì)，但產(chǎn)物的形成質(zhì)，但產(chǎn)物的形成在與初級代謝分開在與初級代謝分開的次級代謝中，出的次級代謝中，出現(xiàn)兩個峰，菌體生現(xiàn)兩個峰，菌體生長進(jìn)入穩(wěn)定期，出長進(jìn)入穩(wěn)

9、定期，出現(xiàn)產(chǎn)物形成高峰。現(xiàn)產(chǎn)物形成高峰。例如，檸檬酸和例如，檸檬酸和某些氨基酸的發(fā)酵。某些氨基酸的發(fā)酵。第三類型（非生長關(guān)聯(lián)型）第三類型（非生長關(guān)聯(lián)型） n產(chǎn)物是在基質(zhì)消產(chǎn)物是在基質(zhì)消耗和菌體生長之后，耗和菌體生長之后，菌體利用中間代謝菌體利用中間代謝反應(yīng)來形成的，即反應(yīng)來形成的，即產(chǎn)物的形成和初級產(chǎn)物的形成和初級代謝是分開的。代謝是分開的。n如抗生素發(fā)酵。如抗生素發(fā)酵。分批發(fā)酵的分類對實(shí)踐的指導(dǎo)意義從上述分批發(fā)酵類型可以分析：如果生產(chǎn)的產(chǎn)品是生長關(guān)聯(lián)型（如菌體與初級代謝產(chǎn)物），則宜采用有利于細(xì)胞生長的培養(yǎng)條件，延長與產(chǎn)物合成有關(guān)的對數(shù)生長期；如果產(chǎn)品是非生長關(guān)聯(lián)型（如次級代謝產(chǎn)物），則宜縮短

10、對數(shù)生長期，并迅速獲得足夠量的菌體細(xì)胞后延長平衡期，以提高產(chǎn)量。二、發(fā)酵過程的代謝變化二、發(fā)酵過程的代謝變化菌體DNA含量達(dá)到定值，即不進(jìn)行繁殖，細(xì)胞數(shù)量恒定，但多元醇、脂類等細(xì)胞內(nèi)含物仍在積累，使菌體干重增加，此時開始合成產(chǎn)物，此刻的菌體濃度稱為臨界濃度?；|(zhì)過多，不合成產(chǎn)物基質(zhì)過少，菌體衰老，產(chǎn)量下降菌體自溶期或發(fā)酵后期。菌體自溶期或發(fā)酵后期。菌體衰老，細(xì)胞開始自溶菌體衰老，細(xì)胞開始自溶DODO上升上升產(chǎn)物合成能力下降產(chǎn)物合成能力下降產(chǎn)物易受破壞后期分離困難第二節(jié) 菌體濃度的影響及其控制一、影響菌體濃度的因素一、影響菌體濃度的因素二、菌濃對發(fā)酵的影響二、菌濃對發(fā)酵的影響三、菌濃的控制措施三

11、、菌濃的控制措施菌體（細(xì)胞）濃度(cell concentration)：單位體積培養(yǎng)液中菌體的含量。反映：菌體細(xì)胞的多少，而且反映菌體細(xì)胞生理特性不完全相同的分化階段。一、影響菌體濃度的因素（菌體生長速率）微生物的種類和自身的遺傳特性營養(yǎng)基質(zhì)的種類和濃度有關(guān)環(huán)境條件1.菌濃越大，產(chǎn)物的產(chǎn)量越大。（在適當(dāng)?shù)谋壬L速率的條件下）2.菌濃過高影響代謝營養(yǎng)基質(zhì)消耗過快，培養(yǎng)液的營養(yǎng)成分發(fā)生明顯變化，有毒物質(zhì)積累，可能改變菌體的代謝途徑影響溶解氧菌濃增大，OUR增大。表觀粘度增大，OTR減少，當(dāng)OUROTR時，DO減少，成為限制因素一般選取OUR=OTR的菌濃（臨界菌體濃度）二、菌體濃度對發(fā)酵的影響最

12、適菌濃確定最適菌濃確定三、菌濃的控制措施三、菌濃的控制措施依靠調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的濃度來控制菌濃。依靠調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的濃度來控制菌濃。l首先確定基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方中有個適當(dāng)?shù)呐浔?，首先確定基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方中有個適當(dāng)?shù)呐浔龋苊猱a(chǎn)生過濃（或過?。┑木w量。避免產(chǎn)生過濃（或過?。┑木w量。l然后通過中間補(bǔ)料來控制然后通過中間補(bǔ)料來控制l向發(fā)酵罐中補(bǔ)入無菌水向發(fā)酵罐中補(bǔ)入無菌水第三節(jié) 基質(zhì)的影響及其控制一、碳源的影響及其控制一、碳源的影響及其控制二、氮源的影響及其控制二、氮源的影響及其控制三、磷酸鹽的影響及其控制三、磷酸鹽的影響及其控制1.C源種類影響源種類影響2.C源濃度的影響源濃度的影響過少，菌體量小，產(chǎn)物少過大

13、，菌體量大，好氧多，傳氧慢，產(chǎn)物少，若產(chǎn)生阻遏作用的C源過多，菌體生長和產(chǎn)物合成都會受到影響舉例：基質(zhì)濃度對生成量和組成的影響黑曲霉檸檬酸發(fā)酵蔗糖濃度15%18%，蔗糖同化率97%蔗糖濃度20%，只同化92%蔗糖濃度低于10%，產(chǎn)檸檬酸少，積累草酸蔗糖濃度低于2.5%，不產(chǎn)檸檬酸3.控制控制發(fā)酵工業(yè)中常采用含迅速利用的碳源和緩發(fā)酵工業(yè)中常采用含迅速利用的碳源和緩慢利用的碳源的混合碳源。慢利用的碳源的混合碳源。在發(fā)酵過程中，補(bǔ)加糖類控制碳源濃度在發(fā)酵過程中，補(bǔ)加糖類控制碳源濃度種類：種類：氨水、銨鹽、玉米漿優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 易被菌體利用，明顯促進(jìn)菌體生長缺點(diǎn)：缺點(diǎn)： 對于有些菌種高濃度的銨離子抑制產(chǎn)

14、物合成迅速利用的氮源迅速利用的氮源緩慢利用的氮源緩慢利用的氮源n種類：種類：黃豆餅粉、花生餅粉、和棉子餅粉n優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 利用緩慢，有利于延長次級代謝產(chǎn)物的分泌期。 防止早衰。n缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：溶解度低，發(fā)酵液粘度大。 1.氮源的影響氮源的影響影響產(chǎn)物合成的方向和產(chǎn)量影響產(chǎn)物合成的方向和產(chǎn)量如：如： 谷氨酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵 NH4+供應(yīng)不足，促使形成供應(yīng)不足，促使形成-酮戊二酸；酮戊二酸； NH4+過量，促使谷氨酸轉(zhuǎn)變成谷氨酰胺。過量，促使谷氨酸轉(zhuǎn)變成谷氨酰胺。 控制適量的控制適量的NH4+濃度濃度 2.控制辦法控制辦法 磷酸鹽能明顯促進(jìn)產(chǎn)生菌的生長。磷酸鹽能明顯促進(jìn)產(chǎn)生菌的生長。對于次級代謝產(chǎn)物，

15、高濃度的磷酸鹽能抑對于次級代謝產(chǎn)物，高濃度的磷酸鹽能抑制產(chǎn)物合成。制產(chǎn)物合成。1.1.磷酸鹽的影響磷酸鹽的影響微生物生長良好所允許的磷酸鹽濃度為微生物生長良好所允許的磷酸鹽濃度為0.32300mmol/L，次級代謝產(chǎn)物合成良好所允許的最高平均濃度僅為次級代謝產(chǎn)物合成良好所允許的最高平均濃度僅為1.0mmol/L.2.2.控制辦法控制辦法四環(huán)素發(fā)酵：菌體生長最適的磷濃度為四環(huán)素發(fā)酵：菌體生長最適的磷濃度為6570 gmL，而四，而四環(huán)素合成最適磷濃度為環(huán)素合成最適磷濃度為2530 gmL。第四節(jié)第四節(jié) 溫度的影響及其控制溫度的影響及其控制一、溫度對發(fā)酵的影響一、溫度對發(fā)酵的影響二、影響溫度變化的

16、因素二、影響溫度變化的因素三、溫度的控制三、溫度的控制一、溫度對發(fā)酵的影響一、溫度對發(fā)酵的影響1.影響酶活及反應(yīng)速率影響酶活及反應(yīng)速率發(fā)酵溫度升高，生長代謝加快，生產(chǎn)期提前。發(fā)酵溫度太高，由于酶很容易熱失活，菌體容易衰老。酶活酶活溫度溫度2.影響產(chǎn)物的合成代謝。影響產(chǎn)物的合成代謝。1）改變菌體代謝產(chǎn)物的合成方向）改變菌體代謝產(chǎn)物的合成方向例金色鏈霉菌 溫度小于30，合成金霉素的能力強(qiáng) 溫度等于35，只合成四環(huán)素2）影響多組分次級代謝產(chǎn)物的組分比例）影響多組分次級代謝產(chǎn)物的組分比例3）影響代謝調(diào)控機(jī)制）影響代謝調(diào)控機(jī)制例如，在20時，氨基酸末端產(chǎn)物對其合成途徑的第一個酶的反饋抑制作用，比在其正常

17、生長溫度37時更大。因此，考慮在抗生素發(fā)酵的后期降低溫度，加強(qiáng)氨基酸的反饋抑制作用，使蛋白質(zhì)和核酸的正常合成途徑關(guān)閉得早些，從而使發(fā)酵代謝轉(zhuǎn)向抗生素的合成。3.影響發(fā)酵液的理化性質(zhì)影響發(fā)酵液的理化性質(zhì)二、影響溫度變化的因素二、影響溫度變化的因素發(fā)酵熱發(fā)酵熱 生物熱生物熱：生產(chǎn)菌在生長繁殖過程中產(chǎn)生的熱叫生物熱。生產(chǎn)菌在生長繁殖過程中產(chǎn)生的熱叫生物熱。 營養(yǎng)基質(zhì)被菌體分解產(chǎn)生大量的熱能，部分用于合成高營養(yǎng)基質(zhì)被菌體分解產(chǎn)生大量的熱能，部分用于合成高能化合物能化合物ATP，供給合成代謝所需要的能量，多余的熱量，供給合成代謝所需要的能量，多余的熱量則以熱能的形式釋放出來，形成生物熱。則以熱能的形式釋

18、放出來，形成生物熱。 攪拌熱攪拌熱：攪拌器轉(zhuǎn)動引起的液體之間和液體與設(shè)備之?dāng)嚢杵鬓D(zhuǎn)動引起的液體之間和液體與設(shè)備之間的摩擦所產(chǎn)生的熱能。間的摩擦所產(chǎn)生的熱能。 Q攪拌攪拌 P 蒸發(fā)熱蒸發(fā)熱 ：空氣進(jìn)入發(fā)酵罐與發(fā)酵液廣泛接觸后，進(jìn)行：空氣進(jìn)入發(fā)酵罐與發(fā)酵液廣泛接觸后，進(jìn)行熱交換，必然引起水分的蒸發(fā)，被空氣和蒸發(fā)水分帶走熱交換，必然引起水分的蒸發(fā)，被空氣和蒸發(fā)水分帶走的熱量。的熱量。 輻射熱輻射熱：由于罐外壁和大氣間的溫度差異而使發(fā)酵液中由于罐外壁和大氣間的溫度差異而使發(fā)酵液中的部分熱能通過罐體向大氣輻射的熱量。的部分熱能通過罐體向大氣輻射的熱量。 顯熱顯熱：廢氣因溫度差異所帶走的熱量。廢氣因溫度差

19、異所帶走的熱量。 1 1）根據(jù)菌種及生長階段選擇）根據(jù)菌種及生長階段選擇微生物種類不同，所具有的酶系及其性質(zhì)不同，所微生物種類不同，所具有的酶系及其性質(zhì)不同，所要求的溫度范圍也不同。要求的溫度范圍也不同。如黑曲霉生長溫度為37谷氨酸產(chǎn)生菌棒狀桿菌的生長溫度為3032 青霉菌生長溫度為30 。前期前期菌量少，取菌量少，取稍高的溫度稍高的溫度，使菌生長迅速；，使菌生長迅速；中期中期菌量已達(dá)到合成產(chǎn)物的最適量，發(fā)酵需要延長菌量已達(dá)到合成產(chǎn)物的最適量，發(fā)酵需要延長中期，從而提高產(chǎn)量，因此中期，從而提高產(chǎn)量，因此溫度要稍低溫度要稍低一些，可以一些，可以推遲衰老。因?yàn)樵谏缘蜏囟认掳被岷铣傻鞍踪|(zhì)和推遲衰老

20、。因?yàn)樵谏缘蜏囟认掳被岷铣傻鞍踪|(zhì)和核酸的正常途徑關(guān)閉得比較嚴(yán)密有利于產(chǎn)物合成。核酸的正常途徑關(guān)閉得比較嚴(yán)密有利于產(chǎn)物合成。后期后期產(chǎn)物合成能力降低，延長發(fā)酵周期沒有必要，產(chǎn)物合成能力降低，延長發(fā)酵周期沒有必要，就又就又提高溫度提高溫度，刺激產(chǎn)物合成到放罐。，刺激產(chǎn)物合成到放罐。如：如：四環(huán)素生長階段四環(huán)素生長階段28 ，合成期，合成期26 后期再升溫；后期再升溫；黑曲霉生長黑曲霉生長37 ，產(chǎn)糖化酶，產(chǎn)糖化酶3234 。但也有的菌種產(chǎn)物形成比生長溫度高但也有的菌種產(chǎn)物形成比生長溫度高谷氨酸谷氨酸產(chǎn)生菌生長產(chǎn)生菌生長3032 ，產(chǎn)酸，產(chǎn)酸3437 。最適溫度選擇要根據(jù)菌種與發(fā)酵階段做試驗(yàn)。最適溫度選擇要根據(jù)菌種與發(fā)酵階段做試驗(yàn)。2 2）根據(jù)培養(yǎng)條件選擇）根據(jù)培養(yǎng)條件選擇溫度選擇還要根據(jù)培養(yǎng)條件綜合考慮，靈活選擇。溫度選擇還要根據(jù)培養(yǎng)條件綜合考慮，靈活選擇。通氣條件差時可適當(dāng)降低溫度，使菌呼吸速率降低通氣條件差時可適當(dāng)降低溫度，使菌呼吸速率降低些，溶氧濃度也可髙些。些，溶氧濃度也可髙些。培養(yǎng)基稀薄時，溫度也該低些。因?yàn)闇囟雀郀I養(yǎng)利培養(yǎng)基稀薄時，溫度也該低些。因?yàn)闇囟雀郀I養(yǎng)利用快，會使菌過早自溶。用快，會使菌過早自溶。3 3）根據(jù)菌生長情況）根據(jù)菌生長情況菌生長快，維持在較高溫度時間要短些；菌生長菌生長快