過柱子的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)

1、過柱子的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)   單一溶劑的極性大小順序?yàn)椋菏兔眩ㄐ。┉h(huán)己烷四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇甲醇吡啶乙酸（大）混合溶劑的極性順序：  苯氯仿（1+1） 環(huán)己烷乙酸乙酯（8+2）氯仿丙酮（95+5）苯丙酮（9+1）苯乙酸乙酯（8+2）氯仿乙醚（9+1）苯甲醇（95+5） 苯乙醚（6+4）環(huán)己烷乙酸乙酯（1+1）氯仿乙醚（8+2）氯仿甲醇（99+1）苯甲醇（9+1）氯仿丙酮（85+15）苯乙醚（4+6）苯乙酸乙酯（1+1）氯仿甲醇（95+5）氯仿丙酮（7+3）苯乙酸乙酯（3+7）苯乙醚（1+9）乙醚甲醇（99+

2、1）乙酸乙酯甲醇（99+1）苯丙酮（1+1）氯仿甲醇（9+1）  過柱子經(jīng)驗(yàn)總結(jié) 1, 選柱子:現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在 1:5-10. 2, 稱量:100-300 目硅膠,稱 30-70 倍于上樣量;如果極難分,也可以用 100 倍量的硅膠書中寫硅膠量是樣品量的 30-40 倍,具體的選擇要具體分析.如果所 需組分和雜質(zhì)分的比較開(是指在所需組分 Rf 在 0.2-0.4,雜質(zhì)相差 0.1 以上) , 就可以少用硅膠. 3, 選洗脫劑:一般淋洗劑是采用 TLC 分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后 的溶劑.極性小的用乙酸乙酯:石油醚系統(tǒng);極性

3、較大的用甲醇:氯仿系統(tǒng);極 性大的用甲醇:水:正丁醇:醋酸系統(tǒng).要使所需點(diǎn)在 Rf 值在 0.2-0.3 左右的比 較好.常用溶劑的極性順序:石油醚<環(huán)己烷/己烷<苯乙醚<氯仿<乙酸乙酯 <正丁醇<丙酮<乙醇<甲醇<水. 一般把兩種溶劑混合時(shí), 采用高極性/低極性的體積比為 1/3 的混合溶劑. 拖尾可 以加入少量氨水或冰醋酸. 乙酸乙酯/石油醚= 4:1 可用 TLC 分開.乙酸乙酯和石 油醚(60-90). 4, 攪成勻漿:先把硅膠泡在燒杯中,用干硅膠體積一倍的溶劑泡,用超聲波超 半個(gè)小時(shí),中間看到氣泡時(shí)用玻璃棒攪一下.如果洗

4、脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙 酮體系,就用石油醚拌;如果洗脫劑是氯仿/醇體系,就用氯仿拌. 5, 裝柱: A, 用溶劑把柱子飽和一次, 因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時(shí)放出的熱量可能使產(chǎn)品分解. B,將柱底用棉花塞緊,不必用海沙,加入約 1/3 體積石油醚(氯仿),裝上蓄 液球,打開柱下活塞,將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi).隨著沉降,會(huì)有一些硅膠沾在 蓄液球內(nèi),用石油醚(氯仿)將其沖入柱中. C,裝柱時(shí)一定要保證無氣泡,同時(shí)敲打柱體使柱體更均勻,緊湊,裝畢,用洗 脫液沖三次. 6, 壓實(shí):裝柱完后,加入更多的石油醚,用雙聯(lián)球或氣泵加壓,直至流速恒定. 柱床約被壓縮至 9/10 體積.無論走常壓柱

5、或加壓柱,都應(yīng)進(jìn)行這一步,可使分 離度提高很多,且可以避免過柱時(shí)由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂. 7, 上樣:干法濕法都可以. A,在硅膠上層加少量無水硫酸鈉(以免樣品被洗脫劑沖散)取適量樣溶液 上樣.上樣后,加入一些洗脫劑,再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面.然后就可 以放心地加入大量洗脫劑,而不會(huì)沖壞硅膠表面. B,用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞打開,待溶劑層下降至 石英砂面時(shí),再加少量的低極性溶劑,然后再打開活塞,如此兩三次,一般石英 砂就基本是白色的了.加入淋洗劑,一開始不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層 有一段距離(24cm 就夠了) ,再加壓,這樣避免了溶劑(如二氯甲烷等)夾

6、帶 樣品快速下行. 8, 過柱和收集:柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡.太低的洗脫強(qiáng)度并 不好,推薦用梯度洗脫.收集的例子:10mg 上樣量,1g 硅膠 H,0.5ml 收集餾 分;1-2g 上樣量,50g 硅膠(200-300 目) ,20-50ml 收集餾分.接收瓶一定要用 可密封的.柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑劑,會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的. 9, 用少量的溶劑溶樣品加樣,加完后將下面的活塞打開. 10,檢測(cè).要更多地使用專用噴顯劑,如果僅用紫外燈,會(huì)損失較多產(chǎn)品,紫外 的靈敏度一般比噴顯劑底 1-2 個(gè)數(shù)量級(jí). 11, 送譜. 收集的產(chǎn)品旋干,

7、在送譜前通常需要重結(jié)晶. 如果樣品太少或?yàn)橐后w, 可過一小凝膠柱,作為送譜前的最后純化手段.可除去氫譜 1.5ppm 左右所謂的 "硅膠"峰. 過柱子的經(jīng)驗(yàn)常說的過柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。柱分的經(jīng)驗(yàn)成分太多。 柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。 壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率最高的，但是時(shí)間也最長(zhǎng)，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。 減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺能夠節(jié)省一半甚至更多，但是由

8、于大量的空氣通過硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。以前曾經(jīng)大量的過減壓柱，對(duì)它有比較深厚的感情，但是自從嘗試了加壓后，就幾乎再也沒動(dòng)過減壓的念頭了。 加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球或者小氣泵（給魚缸供氣的就行）。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。 關(guān)于柱子的尺寸，應(yīng)該是粗長(zhǎng)的最好。 柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)

9、的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^薄），這樣相對(duì)的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到完全分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來說也許就不算什么了。 現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1：510，書中寫硅膠量是樣品量的3040倍，具體擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分rf在0.20.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm&

10、#215;20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺得可以增加柱子的直徑，比如用3cm的，也可以減小淋洗劑的極性等等。                                       

11、   關(guān)于無水無氧柱，適用于對(duì)氧，水敏感，易分解的產(chǎn)品。 可以濕柱，也可以干柱。不過在樣品之前至少要用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時(shí)放出的熱量有可能使產(chǎn)品分解，畢竟要分離的是敏感的東東，小心不為過。也是因?yàn)榉蛛x的東西比較敏感，所以接收瓶一定要用可密封的，遵循schlenk操作。至于是加壓、常壓、減壓，隨需而定。因?yàn)槭莝chlenk操作，所以點(diǎn)板是個(gè)問題，如果樣品是顯色的，恭喜了，不用點(diǎn)板，直接看柱子上的色帶就行了。如果樣品無色，只好準(zhǔn)備幾十個(gè)schlenk瓶，一瓶一瓶的點(diǎn)，不過幾次之后就知道樣品在哪，也就可以省些了。 像我以無水無氧柱

12、中用的比較多的是用氧化鋁作固定相。因?yàn)楣枘z中有大量的羥基裸露在外，很容易使樣品分解，特別是金屬有機(jī)化合物和含磷化合物。而氧化鋁可以做成堿性、中性和酸性的，選擇余地比較大，但是比硅膠要貴些。 聽說有個(gè)方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，這樣在柱子外面用紫外燈一照就知道產(chǎn)品在哪里了，沒有驗(yàn)證過。哪位做過可以提出來大家參詳參詳。 關(guān)于濕法、干法上樣。 濕法省事，一般用淋洗劑溶解樣品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶劑越少越好，不然溶劑就成了淋洗劑了。 很多樣品在上柱前是粘乎乎的，一般沒關(guān)系?？墒怯械纳蠘雍笤诠枘z上又會(huì)析出，這一般都是比較大量的樣

13、品才會(huì)出現(xiàn)，是因?yàn)楣枘z對(duì)樣品的吸附飽和，而樣品本身又是比較好的固體才會(huì)發(fā)生，這就應(yīng)該先重結(jié)晶，得到大部分的產(chǎn)品后再柱分，如果不能重結(jié)晶那就不管它了，直接過就是了，樣品隨著淋洗劑流動(dòng)會(huì)溶解的。 有些樣品溶解性差，能溶解的溶劑又不能上柱（比如DMF, DMSO等，會(huì)隨著溶劑一起顯色是一個(gè)很長(zhǎng)的脫尾），這時(shí)就必須用干法上柱了。樣品和硅膠的量有一種說法是1：1，我覺得是越少越好，但是要保證在旋干后，不能看到明顯的固體顆粒（那說明有的樣品沒有吸附在硅膠上）。 溶劑的選擇： 當(dāng)然是最便宜，最安全，最環(huán)保的了。所以大多選用石油醚、乙酸乙酯。文獻(xiàn)中有寫用正己烷的，太貴了，除非特別

14、需要不要用，不然銀子嘩嘩的，流的比淋洗劑還快，不過因?yàn)闃O性很小，有時(shí)還是非它不可。乙醚也可以用，但是就是容易睡覺，注意保持清醒別讓溶劑流干了，那樣柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過程，所以夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。甲醇，據(jù)說能溶解部分的硅膠，所以產(chǎn)品如果想過元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過后繼處理，比如說重結(jié)晶等。其他的溶劑用的相對(duì)較少，要依個(gè)人的不同需要選擇了。由于某些原因，用到的淋洗劑多是大包裝的（便宜嘛），我們這里是用10升或25升的塑料桶裝的，就要注意這些工業(yè)品的純度是較低的。經(jīng)常能夠從送來的大桶底部看見有色的雜質(zhì)，其他的

15、雜質(zhì)就可想而知了，所以在比較嚴(yán)格的柱分時(shí)就要對(duì)溶劑重蒸。當(dāng)然過原料時(shí)就可以免去這一步了，反正下面還有提純的方法。另外溶劑在過柱子后最好也回收使用，一方面環(huán)保，另一方面也能節(jié)省部分經(jīng)費(fèi)，缺點(diǎn)是要消耗一定的人工。這里要注意的是，一般在過柱同時(shí)進(jìn)行的是減壓旋蒸，石油醚和乙酸乙酯的比例由于揮發(fā)度的不同會(huì)導(dǎo)致極性的變化，一般會(huì)使得極性變大，在梯度淋洗時(shí)比較合適，正好極性越來越大了。在過完柱子后，溶劑最后回收要采用常壓，因?yàn)樵跍p壓旋蒸時(shí)會(huì)有部分低沸點(diǎn)的雜質(zhì)一起出來，常壓時(shí)就會(huì)減少這種現(xiàn)象，如果雜質(zhì)和你下面要過的樣品有反應(yīng)那就慘了。 關(guān)于操作問題。 1 裝柱。柱子下面的活塞一定不要涂潤(rùn)滑

16、劑，會(huì)被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的，可以采用四氟節(jié)門的。干法和濕法裝柱覺得沒什么區(qū)別，只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密（太密了淋洗劑走的太慢），一定要均勻（不然樣品就會(huì)從一側(cè)斜著下來）。書中寫的都是不能見到氣泡，我覺得在大多數(shù)情況下有些小氣泡沒太大的影響，一加壓氣泡就全下來了。當(dāng)然如果你裝的柱子總是有氣泡就說明需要多練習(xí)了。但是柱子更忌諱的是開裂，甭管豎的還是橫的，都會(huì)影響分離效果，甚至作廢！ 2 加樣。用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時(shí)，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。 加入淋洗劑

17、，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（24cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。 3 淋洗劑的選擇。感覺上要使所需點(diǎn)在rf0.20.3左右的比較好。不要認(rèn)為在板上爬高了分的比較開，過柱子就用那種極性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分開，因?yàn)橹邮且粋€(gè)多次爬板的狀態(tài)，可以通過公式的比較：0.6/0.8一次的分離度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。 4 樣品的收集。用硅膠作固定相過柱子的原理是一個(gè)吸附與解吸的平衡。所以如果樣品與硅膠的吸附比較強(qiáng)的話，就不容易流出。這樣就會(huì)發(fā)生，后面的點(diǎn)先出，而前面的點(diǎn)

18、后出。這時(shí)可以采用氧化鋁作固定相。 另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了三個(gè)樣品，wuwu。如果都用小試管那工作量又太大。 5 最后的處理。柱分后的產(chǎn)品，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會(huì)累積到產(chǎn)品中，所以如果想送分析，最好用少量的溶劑洗滌一下，因?yàn)榇蟛糠值碾s質(zhì)是溶在溶劑里的，一洗基本了，必要時(shí)進(jìn)行重結(jié)晶。 補(bǔ)充 自然沉降法制備常壓色譜柱 常壓柱色譜，又稱柱層析，是色譜法中最常見的一種。它的突出優(yōu)點(diǎn)是，分離效率比經(jīng)典的化學(xué)分離方法高的多，與其他色譜法相比，不需要昂貴的儀器設(shè)備，更換流動(dòng)相和吸附劑方

19、便，消耗材料少，成本低，適合分離取樣量從克到微克級(jí)范圍很寬的各種樣品，因此在化學(xué)實(shí)驗(yàn)室中至今仍被廣泛應(yīng)用。 為了保證色譜柱良好的分離效果，色譜柱應(yīng)裝填得盡可能緊密和均勻，在柱中沒有氣泡、裂縫或溝槽，也不發(fā)生柱的徑向或軸向固定相的粒度不均勻分布。傳統(tǒng)常壓色譜柱的填裝分為干法裝柱和濕法裝柱（也稱漿法裝柱）兩種，這兩種方法均存在操作不易掌握、易出現(xiàn)氣泡和裂縫，裝柱時(shí)間長(zhǎng)等不足之處。本文提出的新的裝柱方法介入干裝法和濕裝法之間，稱之為自然沉降法。 自然沉降法通過對(duì)固定相和溶劑的選擇，并輔以新的色譜柱，可對(duì)常壓色譜柱進(jìn)行簡(jiǎn)便、高效的填裝。用所述裝柱技術(shù)制備的色譜柱對(duì)多種未知組成樣品進(jìn)

20、行分離1，分離效果明顯優(yōu)于傳統(tǒng)裝柱法。此外，該法裝柱快速，易掌握，不會(huì)出現(xiàn)斷層和氣泡等常見問題，裝柱成功率高，具有很好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。   過柱子總結(jié)（吸附劑與洗脫劑）字體大小：大 | 中 | 小 2009-04-30 11:13 - 閱讀：1397 - 評(píng)論：0吸附劑與洗脫劑（一）吸附劑與洗脫劑  根據(jù)待分離組分的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)選擇合適的吸附劑和洗脫劑是分離成敗的關(guān)鍵。1吸附劑的要求對(duì)樣品組分和洗脫劑都不會(huì)發(fā)生任何化學(xué)反應(yīng)，在洗脫劑中也不會(huì)溶解。對(duì)待分離組分能夠進(jìn)行可逆的吸附，同時(shí)具有足夠的吸附力，使組分在固定相與流動(dòng)相之間能最快地達(dá)到

21、平衡。顆粒形狀均勻，大小適當(dāng)，以保證洗脫劑能夠以一定的流速（一般為1.5mL·min-1）通過色譜柱。材料易得，價(jià)格便宜而且是無色的，以便于觀察。2、常用吸附劑的種類：氧化鋁、硅膠、聚酰胺、硅酸鎂、滑石粉、氧化鈣（鎂）、淀粉、纖維素、蔗糖和活性炭等。3、幾種常見吸附劑的特性（1）氧化鋁：市售的層析用氧化鋁有堿性、中性和酸性三種類型，粒度規(guī)格大多為100150目。堿性氧化鋁（pH910）：適用于堿性物質(zhì)（如胺、生物堿）和對(duì)酸敏感的樣品（如縮醛、糖苷等），也適用于烴類、甾體化合物等中性物質(zhì)的分離。但這種吸附劑能引起被吸附的醛、酮的縮合。酯和內(nèi)酯的水解、醇羥基的脫水、乙酰糖的去乙?；⒕S生

22、素A和K等的破壞等不良副反應(yīng)。所以，這些化合物不宜用堿性氧化鋁分離。酸性氧化鋁（pH3.54.5）：適用于酸性物質(zhì)如有機(jī)酸、氨基酸等以及色素和醛類化合物的分離。中性氧化鋁（pH77.5）：適用于醛、酮、醌、苷和硝基化合物以及在堿性介質(zhì)中不穩(wěn)定的物質(zhì)如酯、內(nèi)酯等的分離，也可以用來分離弱的有機(jī)酸和堿等。（2）硅膠：硅膠是硅酸的部分脫水后的產(chǎn)物，其成分是SiO2·xH2O，又叫縮水硅酸。柱色譜用硅膠一般不含粘合劑。適用范圍：非極性和極性化合物，適用于芳香油、萜類、甾體、生物堿、強(qiáng)心甙、蒽醌類、酸性、酚性化合物、磷脂類、脂肪酸、氨基酸，以及一系列合成產(chǎn)品如有機(jī)金屬化合物等。（3）聚酰胺：色譜

23、用聚酰胺主要又錦綸6（聚己內(nèi)酰胺）和錦綸66（聚己二酰己二胺）兩種，分子量一般在1600020000，其親水性和親脂性均較好，因此既可分離水溶性成份，也可分離脂溶性成分。可溶于濃鹽酸、甲酸及熱的乙酸、甲酰胺和二甲基甲酰胺中；微溶于乙酸和苯酚等；不溶于醇、氯仿、丙酮、乙醚、苯等；對(duì)堿穩(wěn)定，對(duì)強(qiáng)酸可水解。聚酰胺色譜的原理：兼具吸附色譜和分配色譜的功能。采用強(qiáng)極性洗脫劑時(shí)主要為吸附色譜正相色譜；采用弱極性洗脫劑時(shí)主要為分配色譜反相色譜。分離對(duì)象：能與聚酰胺形成氫鍵的化合物，如酚類、酸類、醌類、硝基化合物及含羥基、氨基、亞氨基的化合物及腈和醛等類化合物。聚酰胺在水中吸附能力的規(guī)律：形成氫鍵的基團(tuán)(如：

24、酚經(jīng)基、按基、酪基、硝基等)越多，則吸附力越強(qiáng)。如：丁二酸丁酸形成氫鍵的位置與吸附力有很大關(guān)系。對(duì)位、間位酚羥基使吸附力增大，鄰位使吸附力減小。芳香核、共軛雙鍵多者吸附力大，少者吸附人小。若形成分了內(nèi)氫鍵，則使化合物的吸附力減小。（4）硅酸鎂：中性硅酸鎂的吸附特性介于氧化鋁和硅膠之間，主要用于分離甾體化合物和某些糖類衍生物。為了得到中性硅酸鎂，用前先用稀鹽酸，然后用醋酸洗滌，最后用甲醇和蒸餾水徹底洗滌至中性。3吸附劑的活度及其調(diào)節(jié)吸附劑的活性取決于它們含水量的多少，活性最強(qiáng)的吸附劑含有最少的水。吸附劑的活性一般分為五級(jí)，分別用、和表示。數(shù)字越大，表示活性越小，一般常用。向吸附劑中添加一定的水，

25、可以降低其活性。反之，如果用加熱處理的方法除去吸附劑中的部分水，則可以增加其活性，后者稱為吸附劑的活化。各種不同活度吸附劑的含水量見表   表36  各種不同活度的吸附劑的含水量活度        氧化鋁（水%）        硅膠（水%）        硅酸鎂（水%）        0   

26、60;    0        0        3        5        7        6        15        15&#

27、160;       10        25        25        15        35        354、實(shí)驗(yàn)操作吸附劑用量的確定柱子的選擇裝柱柱留體積的測(cè)量加樣或拌樣洗脫分部收集檢測(cè)合并濃縮氧化鋁：一般選擇中性，粒度1502

28、00目，超過220目需加壓；一般用量1g樣品/2050g，特例1g樣品/100200g硅膠：吸附色譜1g樣品/2050g ，特例1g樣品/5001000g，用前最好120烘24h，可不做活性測(cè)定。分配色譜1g樣品/1001000g，特例1g樣品/10000g。色譜柱的選擇：有玻璃柱和不銹鋼柱兩種，一般不使用有機(jī)玻璃柱，實(shí)驗(yàn)室常用玻璃柱；徑長(zhǎng)比一般為1:101 :20，特例1:40；內(nèi)壁光滑均勻，上下粗細(xì)一樣，管壁無裂縫，活塞密封良好；根據(jù)吸附劑用量（體積）確定柱子的大小，一般吸附劑應(yīng)填充到柱子體積的1/41/5左右。裝柱：有干裝法和濕裝法兩種。干裝法在下端減壓抽氣的同時(shí)，將吸附劑通過長(zhǎng)徑漏斗緩

29、緩到入柱內(nèi)。濕裝法準(zhǔn)確加入一定體積的溶劑，然后緩慢加入吸附劑，必要時(shí)可輕敲柱壁，排除多余溶劑，計(jì)算主留體積；準(zhǔn)確量取一定體積的溶劑倒入稱量好的吸附劑，間歇性攪拌數(shù)次，靜置過夜，次日在攪拌下裝柱，計(jì)算主留體積。加樣：將樣品溶于合適的溶劑，在不擾動(dòng)吸附劑層面的情況下，加到柱體上面。最后在用少量清潔溶劑對(duì)主壁洗滌23次；將樣品溶于合適的溶劑后，在攪拌下加入樣品量35倍的吸附劑，晾干至粉末狀，然后在不擾動(dòng)吸附劑層面的情況下，加到柱體上面。洗脫必須注意在洗脫的過程中，尤其是開始階段，不能擾動(dòng)層面。洗脫速度一般為每分鐘流出1/200柱留體積左右。對(duì)于梯度洗脫需注意標(biāo)記不同溶劑的分界管號(hào)。分部收集：一般每管

30、收集1/20 1/10柱留體積檢測(cè)：確定目標(biāo)物的位置及純化情況薄層色譜或紙色譜檢測(cè)；氣相色譜或液相色譜檢測(cè)；合并：成分相同或相似的收集液合并，交叉部分單獨(dú)收集。濃縮：旋轉(zhuǎn)薄膜蒸發(fā)；確保燒瓶干燥干凈。展開劑的極性規(guī)律單一溶劑的極性大小順序?yàn)椋菏兔眩ㄐ。┉h(huán)己烷四氯化碳三氯乙烯苯甲苯二氯甲烷氯仿乙醚乙酸乙酯乙酸甲酯丙酮正丙醇甲醇吡啶乙酸（大）混合溶劑的極性順序：  苯氯仿（1+1） 環(huán)己烷乙酸乙酯（8+2）氯仿丙酮（95+5）苯丙酮（9+1）苯乙酸乙酯（8+2）氯仿乙醚（9+1）苯甲醇（95+5） 苯乙醚（6+4）環(huán)己烷乙酸乙酯（1+1）氯仿乙醚（8+2）氯仿甲醇（99+1）苯

31、甲醇（9+1）氯仿丙酮（85+15）苯乙醚（4+6）苯乙酸乙酯（1+1）氯仿甲醇（95+5）氯仿丙酮（7+3）苯乙酸乙酯（3+7）苯乙醚（1+9）乙醚甲醇（99+1）乙酸乙酯甲醇（99+1）苯丙酮（1+1）氯仿甲醇（9+1）選擇展開劑，要依據(jù)溶劑極性和他們的混溶性，溶劑對(duì)被分析 物的溶解性，以及被分析物的結(jié)構(gòu)。這里只討論藥典里通常使用的以硅膠為固定相主體的正相薄層，也不考慮板的活 性。 列出溶劑極性參數(shù)表，方便以下比較展開劑。環(huán)已烷 :-0.2、石油醚（類，3060）、 石油醚（類，6090）、正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、異丙醇:3.9

32、、正丁醇:3.9 、四氫呋喃:4.0、氯仿:4.1、乙醇:4.3、乙酸乙酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.2 1 。     關(guān)于溶劑混溶性，一般根據(jù)相似相溶原則，需要注意，極性相 差大的不混溶，比如正己烷與甲醇。多元展開劑，主體的兩種溶劑不能混溶，就需要通過第三種溶劑來調(diào)和。比如： 石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、環(huán)已烷和甲醇、水之類的。    一般正相色譜，固定相為極性，被分析物質(zhì)的極性越大，需要極性更 大的展開劑。    了解被分析物的極性可以通過分析其結(jié)構(gòu)

33、獲得，很難獲得它的極性指 數(shù)。物質(zhì)分子化學(xué)結(jié)構(gòu)中，通常由較極性部分和非極性部分兩部分。例如下面以苯丙烷為極性小部分，隨著極性基團(tuán) 部分的增加，總體的極性就增加，展開劑極性也增加了。     依次為肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、綠原酸 。     相應(yīng)展開劑分別為：正己烷乙醚冰醋酸 (5:5:0.1)、苯 冰醋酸甲醇(30:1:3)、氯仿甲醇甲酸（9:1: 0.5）、石油醚乙酸乙酯甲酸（3:6: 1）、醋酸丁酯甲酸 水(7:2.5:2.5)。（由于薄層板、比移值不同的原因，展開劑極性比較是相對(duì)的，并非絕對(duì)的后者大于

34、前者）。     現(xiàn)在最重要的問題是，不同化合物，怎么定它的極性，又用什 么標(biāo)準(zhǔn)來定它對(duì)應(yīng)的展開劑呢？以下分開討論不同化合物極性情況及其對(duì)應(yīng)的展開劑。     首先是極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)。比如：冰片：石油醚 (3060 )醋酸乙酯(17:3)、厚樸酚：苯醋酸乙酯(9:1.5)、-香附酮：苯醋酯乙酯冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：環(huán)己 烷醋酸乙酯(3:1)，這類化合物，以石油醚、正構(gòu)烷和苯為體積百分?jǐn)?shù)比較大的溶劑，通常起溶解和分離化合物的作 用，而用醋酸乙酯為調(diào)節(jié)Rf（比移值）的溶劑。為了減少拖尾之類其他相似相溶原則以外的影響，適當(dāng)加入

35、添加劑， 如有機(jī)酸或者有機(jī)堿。     極性較小的不揮發(fā)性物質(zhì)。比如： -谷甾醇：環(huán)己烷醋酸 乙酯甲醇(6:2.5:1)或者環(huán)己烷丙酮(5:2) 、熊果酸：甲苯醋酸乙酯冰醋酸(12:4:0.5)、齊墩果酸：氯仿甲 醇(40:1)、豬去氧膽酸：氯仿乙醚冰醋酸(2:2:1)、大黃素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇 (8:1) 、丹參酮A：苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4) 、穿心蓮內(nèi)酯：氯仿-無水乙醇(9:1)、靛玉紅、靛藍(lán)氯仿乙醇(9:1)或 者苯氯仿丙酮(5:4:1)。這類物質(zhì)展開劑極性比極性較小的揮發(fā)性物質(zhì)洗脫力強(qiáng)一些，因?yàn)檫@類物質(zhì)極性小的母核 大，而極性大的基團(tuán)通?？梢孕纬蓺滏I，比如羧酸、羥基。以上物質(zhì)，母核分子量減小、母核結(jié)構(gòu)中不飽和健的增加 （尤其是出現(xiàn)苯環(huán)），極性基團(tuán)的增加，都使極性增加，展開劑極性也增大。這個(gè)范圍內(nèi)的物質(zhì)很多，一般展開劑大 百分?jǐn)?shù)的溶劑可以從環(huán)己烷甲苯二甲苯苯氯仿的順序，按照極性要求選擇。這里注意，異丙醇、正 丁醇極性指數(shù)也比較小，在這范圍的化合物很少用，因?yàn)檎承源蟆⒄归_慢，造成斑點(diǎn)擴(kuò)散；另外，羥基的氫鍵作用力 也有不利。調(diào)節(jié)Rf值的溶劑，從醋酸乙酯甲醇丙酮乙醇。揮發(fā)性物質(zhì)也有很多帶羰基、羥基的，但從它 的揮發(fā)性就可以