凝乳酶酶制劑的制備

1、凝乳酶酶制劑的制備報娠2211中的方法制卷擬乳酶和酚液.5000inL煤終濃縮500mL,超濾濃綢fXf網(wǎng)態(tài)發(fā)酵陸?辿OjjyniiLIA.bOKD'PYr6DkD濃縮1知ml1泠才!酗沛10mm劃休沉淀的過程由圖3-25中所示"右OkD翅濾酒4500itjL>4350mL6000mL“1600QD屮玄A纖雉超泄:膜百000。趨遞液3甜0IT1I團3-対中空纖堆超熄法濃篩闔港實驗謊程囹FigJ-25TheHowchadofpolypropykne(PP)hollowfiberporousmembrane發(fā)酵原液離七用狀得的上清液經(jīng)過60kD中空纖維超粽膜*濃編液為黑色渾

2、濁液,超濾液為楡色透fl刖液體即通過KStfflttRfe去酋體呼片和發(fā)醉用菲堆的雜氛中空纖維超濾過程中體枳變化如圖3-25,從圖中我們可以看出發(fā)酵上清液體積由原來的5L濃縮金500ml.,HU發(fā)醉液休積濃縮信數(shù)約為20倍：圖326為中空纖緋甩濾膜濃縮后發(fā)酵液的Tris-SDS-PAGE凝膠電冰圖，對以石出經(jīng)過6000I)超濾膜的濃縮作用后.35.0kDa的冃的蛋門被高效濃縮。山此證明中空纖維超濾膜可以離效的將酶液濃縮，為酗活的捉高提供了理論基礎(chǔ)。MO4“21.1 45m；n*II的蛋門II的蛋門*JtSOkPa240H>»”UklH.U4kl>»圖3-26超濾

3、濃縮過程中電泳圖泳ill為原液泳道2為中空纖維6萬腫上的收集液泳道3為中空纖細6萬旅下的收集液.泳道4為中空纖維6千膜下的收集液.泳道5為中空纖維6千膜上的收集液.泳道6為markerIig.3-26Electrophoregraminconcentrationprocess山表314中所示,右：濃縮后，凝乳陽活力增加:Ihr人分孑徴白被£除，中空纖維6力截留下的蛋白含雖增加;而山于中空纖維6截昭小分子物質(zhì)包括無機鹽離f和水分化從而達到濃縮的冃的，因此蛋門含量增加。相應(yīng)地，比活力也隨之壇加。表3-14超濾過程中蠱白含審及比活力的比較Table3-14Enzymeactivits.pr

4、oteinandspecificactivity蛋白含(mg/mL)比活力(U/mg)沒提的液0.0973075±20中空纖維6/jJfi0.06452078士20中空纖維6千斥0.461764.70±20凝乳酣酶制劑的制備保護劑和載體的選擇/I/I62H8圖3-27甘油和海瘵檢對凝乳活力的彩響l;ig.3-27Effeclofmycosc,glycerinonclottingactivity海藻糖在高溫卜能保持萌的正常活性，甚至起熱激活作用，還能用提高F燥保存的酚的活性.II油是(ft品加T業(yè)屮通常便用的甜味劑和保濕劑,在3.5中,II油作為凝乳陽修飾劑對酶活有促進作用因

5、此,選用甘汕和海藻糖作為凝乳酶的修飾劑c如圖327所示，甘油濃度為2%時,凝乳誨活力最高:海鴻糖濃度為4%時,凝乳誨活力最高,并H在工業(yè)生產(chǎn)中,海藻糖作為酶制劑保護劑的濃度通常為4%.IM此.選川添加II汕至濃度為2%及海藻糖濃度為4%(1為胡制劑的保護劑。酶制劑的穩(wěn)定劑通常選用該酶的輔基、輔酶、金屬離了、底物、螯介劑、蛋門質(zhì)箸'凝乳爾的作用底物為牛乳中的酪蛋白，因此選用脫脂奶粉作為凝乳輸?shù)奈殷w，如表3】5所示。表3-15凝乳酶酶制劑中的添加仞table3I5Addtiveinrvnnctpreparation榊的濃縮液(ml.)同形物含地)奶粉(g)IHili(g)海魅糖(g)400

6、3.2150816凝乳附制劑制備后酶活力如農(nóng)3-I6所示.表3T6凝乳菊篦制劑的活力Table3-16Clottingactivtyofrennetpreparation就乳飾濃縮舸液(U/mg)殺乳輸海制劑U/g)248776±201764.70仝20本實驗分別利用江米酒液念發(fā)酵提取和固態(tài)發(fā)酵提取這兩種方法得到凝乳爲(wèi)與商品凝乳酶相比，具有生產(chǎn)周期短，操作簡便，價格低兼等特點，表317為本實驗得到的凝乳酶與商品凝乳酶胡制劑的比較。表317本實驗?zāi)榉优c商品凝乳酶比較Table3-17chymosininthisexperimentprearing:ocommercialrennet比

7、校頂口米酒敖乳的同態(tài)發(fā)酵處乳閘商品凝乳陽來源酒醪發(fā)酵.酒廨中訂人呈微生物,故屈微生物凝乳fit酒酵中分離純化得歎的零菌經(jīng)固態(tài)發(fā)酵.屈微生物凝乳酶由動物制的商制得，亦稱小牛皺加.屈動物源凝乳詹以糕;K：秋皮1:1、掖同比為0.9:1、匍的抽2.8%(m/v).小牛、小山羊或羊羔(亦制備過程以江米而：水為1：10ft為液態(tài)培養(yǎng)基在捲瓶中發(fā)醉52h離心.經(jīng)硫酸筱分級沉淀，除鹽，冷凍十如得劊凝乳誇粉木Na?SO,0.03l%(m/v)、乩溫800.34%(m/v).CaSOqO.O乙(m/v)、K3SOj0.04%(m/v)為同態(tài)培養(yǎng)基.接種由酒耀中分離地化符到的爸詢.佗二角瓶中發(fā)醋：96h經(jīng)NaCI溶液浸提，離心，超濾濃縮.噴為煉紂劉恥乳購粉末可由牛、綿羊城或山羊)第四射(皺謝的水抽提液。一般經(jīng)水洗、干燥、切片応在4%硼酸水溶液中丁30匸卜浚漬5大抽捉而得，或用食鹽浸出不干燥而成活力為l93l58±50(U/g).凝乳活力(u/g)利川該酶制作的契達干酯與商品焰在質(zhì)地、外觀等方而并別不人.并見任風(fēng)味上優(yōu)丁商品凝