抗體產生過程中DNA脫甲基化對抗體基因的影響

1、抗體產生過程中DNA脫甲基化對抗體基因的影響研究背景及內容1實驗材料與方法結果與討論123研究背景及主要內容免疫球蛋白基因及抗體多樣性多肽鏈基因片段數V區(qū)基因重組方式H鏈和L鏈重排所推算的多樣性數目H鏈和鏈相互隨機配對后*推算的多樣性數目H鏈VDJV-D-J4.81044.81071000124L鏈VJV-J1.01032504DNA甲基化及其生物學意義1950年，科學家就發(fā)現了DNA甲基化現象，但直到1988年Bester等發(fā)現了編碼DNA甲基化的基因和甲基轉移酶，有關DNA甲基化的研究才慢慢開展起來，但主要集中在探討癌癥及腫瘤與DNA甲基化之間的聯系。DNMT在細胞發(fā)育和分化過程中調節(jié)基因

2、的表達DNA甲基化功能中和潛在危險的DNA序列DNA脫甲基化和免疫系統(tǒng)實驗材料與方法 模型一A組：空白B組：一次免疫C組：二次免疫D組：空白 +5-AzaE組：一次免疫+5-AzaF組：二次免疫+5-Aza 模型二A組：抗原B組：抗原+佐劑C組：抗原 +5-AzaD組：抗原+佐劑+5-Aza 局部甲基化程度檢測亞硫酸鹽修飾法 DNA經亞硫酸氫鈉修飾后C會變成U，而DNA甲基化后，帶有-CH3的C不被修飾。而A和T（U）的退火溫度比C和G的退火溫度低2。因此，甲基化程度低的目的片段的Tm值較低。整體甲基化程度檢測甲基化敏感性酶切法BamHCCTAGG MSCTGGCCA Hpa CCGG CH3

3、HpaCH3PCRHpaPCRV(D)J重排檢測引物設計VHDHJH1JH3JH2JH4VJ1J4J2J5H鏈鏈結果與討論一、抗體效價測定二、抗體基因啟動子區(qū)甲基化程度檢測體外實驗H鏈鏈體內實驗鏈H鏈三、抗體基因整體甲基化檢測體外實驗體內實驗四、抗體基因可變區(qū)突變檢測體細胞脾細胞脾細胞加入5-Aza培養(yǎng)24h脾細胞加入5-Aza培養(yǎng)48h編號位置突變類型位置突變類型位置突變類型位置突變類型A281AG281AG281AG281AG319TG319TG319TGB281AG281AG無無319TG319TGC35CT無356AC281AG301G缺失D281AG78AG281AG281AG79A

4、G319TG83TA319TG319TGE78AC80AC281AG281AG79AG83T缺失281AG319TG281AG319TG319TGF128T缺失78AG無319TG135A缺失79AG145GT83TA281AG281AG319TG319TG體細胞脾細胞脾細胞加入5-Aza培養(yǎng)24h脾細胞加入5-Aza培養(yǎng)48h編號位置突變類型位置突變類型位置突變類型位置突變類型A102CT69AG69AG69AG87GA102CT306T缺失87GA87GA318TC102CT102CTB無無69AG69AG87GA102CT87GA374C缺失102CTC306TG無69AG69AG87G

5、A102CT87GA374C缺失102CT376添加G374C缺失D95CA69AG69AG69AG87GA102CT87GA306TG102CT87GA102CT318TC374C缺失102CTE102CT102CT69AG69AG293TA306TA298CG318CG87GA102CT87GA374C缺失102CTF69AG69AG87GA69AG87GA87GA102CT102CT306T缺失306TG318TC318TC87GA五、抗體基因重排檢測VHJH1VJ1JH1JH2，JH1JH3，JH1JH4J1J2 ，J1J4 ，J1J5六、5-AZa對脾細胞的生長抑制MTT空白組七、5

6、-AZa對脾細胞周期的影響ABDCTLR與配體結合激活NF-B和IRF-3炎癥因子和型干擾素的表達激活天然免疫并啟動適應性免疫IFN-CD4+ Th細胞向Th1細胞分化刺激IL-2、IL-12、TNF-等上調 活化免疫系統(tǒng)MHC處理并與抗原結合激活免疫細胞，誘導免疫反應IL在傳遞信息，激活與調節(jié)免疫細胞，介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用八、免疫相關因子mRNA水平檢測IL2IL4IL6TLR4TLR9MHC MHC IFN- 九、免疫相關因子啟動子區(qū)甲基化水平檢測IL2IL4IL6TLR4TLR9MHC MHC IFN- 666768697071727374757677ABCDEF小鼠編號Tm值5-Aza誘導的小鼠抗體水平的增加不是由5-Aza促進免疫細胞