蠟樣芽孢桿菌檢測

1、蠟樣芽孢桿菌檢驗劉曉川中心實驗室-20121128GB/T 4789.14-2003 GB 4789.14-征求意見稿 檢測程序 錯誤糾正及細節(jié)修改 形態(tài)觀察 生化試驗 主要修改如下： 修改標(biāo)準的中英文名稱 增加第二法MPN法 更改MYP培養(yǎng)條件 增加根狀生長實驗 增加溶菌酶實驗 增加附錄A、附錄B內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTDGB/T 4789.14-2003 檢驗程序：與6.1操作步驟不一致

2、，此處稀釋液培養(yǎng)不執(zhí)行。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD菌數(shù)測定將原來5個稀釋度調(diào)整為2-3個稀釋度。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTDGB 4789.14-XXXX內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙

3、PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD附加試劑異常問題 甘露醇卵黃多粘菌素（MYP）培養(yǎng)基異常 正常 50%卵黃生產(chǎn)時污染微生物，平板培養(yǎng)后變黃，同時有異味。聯(lián)系廠家換貨。自行配置50%卵黃。（ 無菌操作，卵黃與等量滅菌生理鹽水混合）內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (G

4、ROUP)CO.,LTD標(biāo)準菌株蠟樣芽孢桿菌標(biāo)準菌株ATCC11778ATCC菌株不需要配置活化液，復(fù)溶后可直接涂抹平板。生長溫度范圍為20-45，最適生長溫度為30-37 。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD菌落形態(tài)ATCC 11778產(chǎn)生卵磷脂酶不發(fā)酵甘露醇發(fā)酵甘露醇內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（

5、集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD蠟樣芽孢桿菌顯色培養(yǎng)基（海博） 蠟樣芽孢桿菌呈現(xiàn)藍綠色，菌落較大。 蘇云金芽孢桿菌呈現(xiàn)藍綠色。 單增李斯特菌呈現(xiàn)深藍色。 其他菌呈現(xiàn)黃色或無色。 G-菌抑制。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD形態(tài)觀察芽孢（隱藏的生命） 營養(yǎng)體條件合適內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TI

6、TLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD芽孢染色 染液：孔雀綠孔雀綠+ +沙黃沙黃內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD 芽孢 在一定條件下，生長發(fā)育后期細胞質(zhì)高度濃縮脫水所形成的一種抗逆性很強的球形或橢圓形的休眠體。 芽孢所處的位置不同，有的在中部，有的在偏端，有的在頂端。芽孢

7、一般呈圓形、橢圓形、圓柱形（前孢子）。 有些細菌中，芽孢的直徑小于菌體直徑，稱芽孢桿菌。 另一些細菌中，芽孢的直徑大于菌體直徑，使整個菌體呈梭形或鼓槌狀，這些細菌稱為梭狀芽孢桿菌，為厭氧菌。 2，6-吡啶二羧酸（DPA） 內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD培養(yǎng)特性內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股

8、份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD生化性狀內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD生化鑒定套裝 可使用陸橋或海博生化鑒定套裝內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.

9、,LTD生化試驗(陸橋)檸（枸） 動 硝 VP 木 明 葡 （厭氧） 甘 - + + - - + + -明膠、硝酸鹽穿刺接種，其他滴加菌液內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD生化試驗(海博)1.揭開蓋板2.撕開封口膜3.標(biāo)記4.制備菌液，加入試劑孔5.蓋上蓋板，培養(yǎng)后填寫結(jié)果表并報告。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙

10、古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD明膠液化實驗 注意事項：注意事項： 1.明膠觀察結(jié)果時，需放4,30min,而后觀察結(jié)果，呈液體狀態(tài)為陽性，固態(tài)為陰性。 2.葡萄糖利用試驗，需厭氧條件培養(yǎng)，變?yōu)辄S色為陽性。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD過氧化氫酶實驗 3%過氧化氫溶液，臨用前配置，用水稀釋 挑取單個菌落置于潔凈試管

11、內(nèi)，滴加3%過氧化氫溶液2ml，觀察結(jié)果 陽性半分鐘內(nèi)產(chǎn)生氣泡 陰性不產(chǎn)生氣泡 原理： 過氧化氫 水+氧氣 載玻片接觸酶實驗 不建議將過氧化氫直接滴加于平皿上過氧化氫酶內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD溶血實驗 胰酪胨大豆養(yǎng)血（TSSB）瓊脂 陸橋CM136（TSSB基礎(chǔ)） + P62（無菌脫纖維羊血） 301培養(yǎng)242h，菌落淺灰色，不透明，似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)或完全溶血環(huán)。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙

12、內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD根狀生長實驗 間隔0.5cm左右距離劃平行直線于營養(yǎng)瓊脂平板上，301 培養(yǎng)24h2h。蕈狀芽胞桿菌形成根狀生長的特征。蠟樣芽胞桿菌菌株不具形成根狀生長的特征。蠟樣芽胞桿菌蕈狀芽胞桿菌內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DA

13、IRY (GROUP)CO.,LTD酪蛋白酶實驗 酪蛋白瓊脂 培養(yǎng)基成分中酪蛋白不會溶解 接種可以菌落，361 培養(yǎng)482h 陽性菌落周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)澄清透明區(qū)， 表示產(chǎn)生酪蛋白酶。 陰性反應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)72h觀察 原理：蠟樣芽孢桿菌代謝產(chǎn)生堿性蛋白酶，可水解酪蛋白成為小分子肽段，使菌落周圍的培養(yǎng)基變透明。 采用點種的方式接種，可以清晰的看到透明環(huán)。 內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD蛋白質(zhì)毒素結(jié)晶試驗

14、步驟：步驟：1.取室溫放置3 d4 d的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)物少許涂于載玻片。2.自然干燥，微火固定，甲醇作用30s，火焰干燥.3.滴0.5堿性復(fù)紅，火焰加熱（微見蒸氣，勿使染液沸騰)持續(xù)1 min2 min，移去火焰。更換染色液加溫30 s，水清洗、晾干后鏡檢。結(jié)果觀察：結(jié)果觀察：觀察有無游離芽胞（淺紅色）和染成深紅色的菱形、正方形或其它形狀的蛋白結(jié)晶體（伴孢晶體） 。芽孢芽孢蛋白結(jié)晶體蛋白結(jié)晶體內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (

15、GROUP)CO.,LTD溶菌酶耐性試驗 用接種環(huán)取純菌懸液一環(huán)，接種于溶菌酶肉湯中，361培養(yǎng)24 h。蠟樣芽胞桿菌在本培養(yǎng)基(含0.001 溶菌酶)中能生長。如出現(xiàn)陰性反應(yīng)，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)24h。 結(jié)果觀察：混濁現(xiàn)象 培養(yǎng)基：溶菌酶肉湯基礎(chǔ)+溶菌酶溶液內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD蠟樣芽胞桿菌生化特征與其它芽胞桿菌的區(qū)別內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY (GROUP)CO.,LTD生化分型 （選作）根據(jù)對檸檬酸鹽利用、硝酸鹽還原、淀粉水解、V-P試驗反應(yīng)、明膠液化試驗，將蠟樣芽胞桿菌分成不同生化型別 。內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙內(nèi)蒙PRESENTATION TITLE & DATE 20.09.09 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團）股份有限公司INNER MONGLIA MENGNIU DAIRY