緒論-植物組織培養(yǎng)

1、第一章第一章 緒論緒論第二節(jié)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)發(fā)展簡(jiǎn)史；植物組織培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)植物組織培養(yǎng)發(fā)展簡(jiǎn)史；植物組織培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn) 上的應(yīng)用上的應(yīng)用第一節(jié)第一節(jié) 植物組織培養(yǎng)的概念及植物組織培養(yǎng)的概念及類型類型 主要內(nèi)容：主要內(nèi)容：植物組織培養(yǎng)含義植物組織培養(yǎng)含義組織培養(yǎng)的類型組織培養(yǎng)的類型植物組織培養(yǎng)的發(fā)展簡(jiǎn)史植物組織培養(yǎng)的發(fā)展簡(jiǎn)史植物組織培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用植物組織培養(yǎng)在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用A Glimpse of Plant Tissue Culture一、基本概念一、基本概念 What Is Tissue Culture?What Is Tissue Culture? Or Or in vitroin

2、 vitro culture? culture? Or micropropagation? Or micropropagation?第一節(jié)第一節(jié) 植物組織培養(yǎng)的概念植物組織培養(yǎng)的概念和類型和類型營(yíng)養(yǎng)器官：根、莖、葉、花、形成層營(yíng)養(yǎng)器官：根、莖、葉、花、形成層生殖器官：花藥、胚珠、胚、胚乳生殖器官：花藥、胚珠、胚、胚乳植物組織培養(yǎng)（植物組織培養(yǎng)（Tissue culture） 用用無菌無菌方法使植物體的離體方法使植物體的離體（in vitro)in vitro)器官、組織和細(xì)胞器官、組織和細(xì)胞在在人為提供的條件人為提供的條件下生長(zhǎng)和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術(shù)的總稱，也下生長(zhǎng)和發(fā)育的所有培養(yǎng)技術(shù)的總稱，也

3、稱之為離體培養(yǎng)（稱之為離體培養(yǎng)（In vitro cultureIn vitro culture）或試管培養(yǎng)。）或試管培養(yǎng)。細(xì)胞：原生質(zhì)體細(xì)胞：原生質(zhì)體Characteristics of Characteristics of Plant Tissue Culture TechniquesPlant Tissue Culture Techniques培養(yǎng)條件可以人為控制培養(yǎng)條件可以人為控制生長(zhǎng)周期短，繁殖率高生長(zhǎng)周期短，繁殖率高植物組織培養(yǎng)特點(diǎn)植物組織培養(yǎng)特點(diǎn)管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制管理方便，利于工廠化生產(chǎn)和自動(dòng)化控制植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性

4、 細(xì)胞全能性細(xì)胞全能性（cell totipotency) ：植物體的每一個(gè)具有完整結(jié)構(gòu)：植物體的每一個(gè)具有完整結(jié)構(gòu)的細(xì)胞都具有該物種全部遺傳物質(zhì)，在一定條件下具有發(fā)的細(xì)胞都具有該物種全部遺傳物質(zhì)，在一定條件下具有發(fā)育成完整植物體的潛在能力。育成完整植物體的潛在能力。植物細(xì)胞全能性的表達(dá)植物細(xì)胞全能性的表達(dá) 脫分化（脫分化（dedifferentiation)：將已分化的功能細(xì)胞，放在培養(yǎng)將已分化的功能細(xì)胞，放在培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，細(xì)胞重新進(jìn)入分裂狀態(tài)。一個(gè)成熟的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榛吓囵B(yǎng)后，細(xì)胞重新進(jìn)入分裂狀態(tài)。一個(gè)成熟的細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉稚鸂顟B(tài)的過程叫脫分化。分生狀態(tài)的過程叫脫分化。 一個(gè)細(xì)胞一旦沿著某一條

5、特定的途徑分化發(fā)育后，一般不會(huì)一個(gè)細(xì)胞一旦沿著某一條特定的途徑分化發(fā)育后，一般不會(huì)再回復(fù)到未分化狀態(tài)，但在組織培養(yǎng)條件下，可能發(fā)生脫分化再回復(fù)到未分化狀態(tài)，但在組織培養(yǎng)條件下，可能發(fā)生脫分化和再分化。和再分化。l 再分化（再分化（redifferentiation):經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定經(jīng)脫分化的組織或細(xì)胞在一定的培養(yǎng)條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同的細(xì)胞類型，形成完整植株的培養(yǎng)條件下可轉(zhuǎn)變?yōu)楦鞣N不同的細(xì)胞類型，形成完整植株的過程。的過程。植物全能性的表達(dá)植物全能性的表達(dá)離體的植物器官、離體的植物器官、組織、細(xì)胞組織、細(xì)胞 游離單細(xì)胞游離單細(xì)胞或原生質(zhì)體或原生質(zhì)體胚狀體胚狀體根、芽根、芽 愈愈傷傷

6、組組織織 人人工工種種子子再生植株再生植株 脫分化脫分化再分化再分化再分化再分化脫分化脫分化愈愈傷傷組組織織再分化再分化根根芽芽再再生生植植株株植物組織培養(yǎng)過程植物組織培養(yǎng)過程合適的外植體合適的外植體離體的植物器官、組織、離體的植物器官、組織、細(xì)胞細(xì)胞移栽移栽 外植體：外植體：由活體植物體上切取下來的，用于組織培由活體植物體上切取下來的，用于組織培養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì)胞、養(yǎng)的各種接種材料。包括各種器官、組織、細(xì)胞、原生質(zhì)體等。原生質(zhì)體等。即能被誘導(dǎo)產(chǎn)生無性增殖系的器官或即能被誘導(dǎo)產(chǎn)生無性增殖系的器官或組織。組織。胡胡蘿蘿卜卜離離體體根根愈傷組織：愈傷組織：在人工培養(yǎng)基上由外

7、植體形成的一團(tuán)無序在人工培養(yǎng)基上由外植體形成的一團(tuán)無序生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。生長(zhǎng)狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。指經(jīng)組織培養(yǎng)產(chǎn)生的可傳代的指經(jīng)組織培養(yǎng)產(chǎn)生的可傳代的未分化細(xì)胞。未分化細(xì)胞。組織培養(yǎng)植株再生的途徑組織培養(yǎng)植株再生的途徑魔芋胚狀體魔芋胚狀體1）、體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑）、體細(xì)胞胚胎發(fā)生途徑（胚狀體發(fā)生途徑）（胚狀體發(fā)生途徑） ： 在組織培養(yǎng)中起源于一個(gè)非合子細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育在組織培養(yǎng)中起源于一個(gè)非合子細(xì)胞，經(jīng)過胚胎發(fā)生和胚胎發(fā)育過程（經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚過程（經(jīng)過原胚、球形胚、心形胚、魚雷胚和子葉胚5 5個(gè)時(shí)期），形成個(gè)時(shí)期），形成具有具有雙極性雙極性的胚狀結(jié)構(gòu)，而發(fā)育成

8、再生植株的途徑。的胚狀結(jié)構(gòu)，而發(fā)育成再生植株的途徑。胚狀體發(fā)生途徑胚狀體發(fā)生途徑外植體外植體愈傷組織愈傷組織胚狀體胚狀體再生植株再生植株再再分分化化脫分化脫分化 2）、）、愈傷組織途徑愈傷組織途徑 將外植體接種在人工培養(yǎng)基上，由于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑將外植體接種在人工培養(yǎng)基上，由于植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的存在，細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后通過再分化形成的存在，細(xì)胞脫分化形成愈傷組織，然后通過再分化形成再生植株。它是最為常見的。再生植株。它是最為常見的。 原球莖原球莖-主要是蘭科植物在誘導(dǎo)時(shí)，分化出的原初植物形態(tài)，具有完整的主要是蘭科植物在誘導(dǎo)時(shí)，分化出的原初植物形態(tài)，具有完整的植株器官原基，成苗容易。植株器

9、官原基，成苗容易。 胚狀體胚狀體-由愈傷組織或表面形成的許多類似胚的突起，是初步分化的幼小由愈傷組織或表面形成的許多類似胚的突起，是初步分化的幼小生命體，芽根有共同的維管束，是雙極性結(jié)構(gòu)，起源于單細(xì)胞，無嵌合現(xiàn)象，生命體，芽根有共同的維管束，是雙極性結(jié)構(gòu)，起源于單細(xì)胞，無嵌合現(xiàn)象，結(jié)構(gòu)完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化難，再分化也很難。結(jié)構(gòu)完整，可直接形成小植株，成苗率高，去分化難，再分化也很難。 由愈傷組織或外植體誘導(dǎo)形成芽、根，獲得由愈傷組織或外植體誘導(dǎo)形成芽、根，獲得再生植株的方法。再生植株的方法。百百合合鱗鱗葉葉培培養(yǎng)養(yǎng)愈傷組織愈傷組織芽分化芽分化再生苗再生苗胚狀體胚狀體小小麥麥

10、愈傷組織發(fā)生途徑愈傷組織發(fā)生途徑愈傷組織愈傷組織外植體外植體愈傷組織愈傷組織芽芽根根再生植株再生植株脫分化脫分化再分化再分化高生長(zhǎng)素高生長(zhǎng)素(2,4-D)高高(生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素)低低(生長(zhǎng)素生長(zhǎng)素/細(xì)胞分裂素細(xì)胞分裂素)植株發(fā)生途徑植株發(fā)生途徑按培養(yǎng)材料分為：按培養(yǎng)材料分為：懸浮細(xì)胞培養(yǎng)懸浮細(xì)胞培養(yǎng)單細(xì)胞培養(yǎng)單細(xì)胞培養(yǎng)胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、葉、花和胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、葉、花和幼果的培養(yǎng)幼果的培養(yǎng)二、二、 植物組織培養(yǎng)的類型植物組織培養(yǎng)的類型細(xì)細(xì) 胞胞 培培 養(yǎng)養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)器器 官官 培培 養(yǎng)養(yǎng)煙煙 草草器官培養(yǎng)：器官培養(yǎng)： 將植物的器官如將植物

11、的器官如胚、胚乳、珠心、胚、胚乳、珠心、子房、根、莖、子房、根、莖、葉、花和幼果的葉、花和幼果的部分組織接種在部分組織接種在無菌培養(yǎng)基上進(jìn)無菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。行培養(yǎng)。細(xì)胞和原生質(zhì)體培細(xì)胞和原生質(zhì)體培養(yǎng)養(yǎng)： 細(xì)胞培養(yǎng)是將植細(xì)胞培養(yǎng)是將植物的單個(gè)細(xì)胞分離出物的單個(gè)細(xì)胞分離出來，并進(jìn)行培養(yǎng)；來，并進(jìn)行培養(yǎng)；原生質(zhì)體培養(yǎng)是指將原生質(zhì)體培養(yǎng)是指將植物細(xì)胞的細(xì)胞壁通植物細(xì)胞的細(xì)胞壁通過機(jī)械、物理或化學(xué)過機(jī)械、物理或化學(xué)的方法去除，然后再的方法去除，然后再進(jìn)行培養(yǎng)。進(jìn)行培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)方式：根據(jù)培養(yǎng)方式：固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng) 固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)：將培養(yǎng)物放在含有瓊脂等固化劑的培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)

12、。：將培養(yǎng)物放在含有瓊脂等固化劑的培養(yǎng)基表面進(jìn)行培養(yǎng)。 液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)：將培養(yǎng)物放在未加固化劑的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，一般需進(jìn)行震蕩，又稱液體：將培養(yǎng)物放在未加固化劑的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)，一般需進(jìn)行震蕩，又稱液體 震蕩培養(yǎng)。震蕩培養(yǎng)。固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)固體培養(yǎng)法固體培養(yǎng)法 是最常用的方法。該方法簡(jiǎn)單，易行，但養(yǎng)分吸收不均，生長(zhǎng)速度不是最常用的方法。該方法簡(jiǎn)單，易行，但養(yǎng)分吸收不均，生長(zhǎng)速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。液體培養(yǎng)法液體培養(yǎng)法 由于液體中氧氣含量較少，常用震蕩培養(yǎng)的方法以確保氧氣的供給由于液體中氧氣含量較少，常用震蕩培養(yǎng)的方法以確保氧氣的供給 往復(fù)

13、式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng)，速度一般為往復(fù)式搖床或旋轉(zhuǎn)式搖床進(jìn)行培養(yǎng)，速度一般為50-200r50-200rminmin，這，這種定期浸沒的方法，既能使培養(yǎng)基均一，又能保證氧氣的供給。種定期浸沒的方法，既能使培養(yǎng)基均一，又能保證氧氣的供給。 固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)的特點(diǎn)：固體培養(yǎng)、液體培養(yǎng)的特點(diǎn)：l根據(jù)培養(yǎng)物量的多少：根據(jù)培養(yǎng)物量的多少： 大量培養(yǎng)、微量培養(yǎng)大量培養(yǎng)、微量培養(yǎng)。l根據(jù)培養(yǎng)過程中是否需光：根據(jù)培養(yǎng)過程中是否需光： 光培養(yǎng)、暗培養(yǎng)光培養(yǎng)、暗培養(yǎng)l根據(jù)培養(yǎng)方法的不同：根據(jù)培養(yǎng)方法的不同： 平板培養(yǎng)、微室培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)平板培養(yǎng)、微室培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng) 按培養(yǎng)過程分為按培養(yǎng)過程分為: 初代培養(yǎng)和

14、繼代培養(yǎng)初代培養(yǎng)和繼代培養(yǎng)初代培養(yǎng)（初代培養(yǎng)（Primary culture）：）： 指外植體的最初培養(yǎng)。指外植體的最初培養(yǎng)。繼代培養(yǎng)（繼代培養(yǎng)（Subculture）：）： 將初代培養(yǎng)得到的培養(yǎng)體移植于新鮮培養(yǎng)基中，這種反復(fù)多次移將初代培養(yǎng)得到的培養(yǎng)體移植于新鮮培養(yǎng)基中，這種反復(fù)多次移植的培養(yǎng)，稱為繼代培養(yǎng)。植的培養(yǎng)，稱為繼代培養(yǎng)。 第二節(jié)第二節(jié) 植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展歷史植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展歷史 1、 早期探索階段早期探索階段 （1930年以前）年以前） 1893年，年，Schwann和和Scheiden提出細(xì)胞學(xué)說及植物細(xì)胞全能性理論。提出細(xì)胞學(xué)說及植物細(xì)胞全能性理論。 1902年，德

15、國(guó)植物生理學(xué)家年，德國(guó)植物生理學(xué)家Haberlandt第一次嘗試采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小野芝麻、風(fēng)第一次嘗試采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)小野芝麻、風(fēng)眼蘭葉肉組織及萬(wàn)年青屬植物的表皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，但未能培養(yǎng)成活。眼蘭葉肉組織及萬(wàn)年青屬植物的表皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，但未能培養(yǎng)成活。 1904年，年，Hanning首次對(duì)十字花科的蘿卜和辣根的胚培養(yǎng)成功。首次對(duì)十字花科的蘿卜和辣根的胚培養(yǎng)成功。 1922年，年，Knudson將蘭花種子在離體的條件下非共生萌發(fā)。同年，將蘭花種子在離體的條件下非共生萌發(fā)。同年，Knotte和和Robbins對(duì)離體對(duì)離體根尖進(jìn)行了培養(yǎng)。根尖進(jìn)行了培養(yǎng)。Robbins還對(duì)豌豆、玉米及棉

16、花的莖尖進(jìn)行了培養(yǎng)，只形成一些缺綠的葉和根。還對(duì)豌豆、玉米及棉花的莖尖進(jìn)行了培養(yǎng)，只形成一些缺綠的葉和根。 1925年，年，Laibach利用胚培養(yǎng)技術(shù)對(duì)亞麻的種間雜種胚進(jìn)行了培養(yǎng)，并于利用胚培養(yǎng)技術(shù)對(duì)亞麻的種間雜種胚進(jìn)行了培養(yǎng)，并于1929年利用亞麻的年利用亞麻的胚培養(yǎng)來克服雜交不親和性。胚培養(yǎng)來克服雜交不親和性。2、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的初步形成（、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的初步形成（1930-1960年）年） 1933年，我國(guó)植物生理學(xué)家李繼侗培養(yǎng)銀杏胚胎，并發(fā)現(xiàn)銀杏胚乳提取液可促進(jìn)離體胚的生年，我國(guó)植物生理學(xué)家李繼侗培養(yǎng)銀杏胚胎，并發(fā)現(xiàn)銀杏胚乳提取液可促進(jìn)離體胚的生長(zhǎng)。長(zhǎng)。 1937年，年，Whi

17、te發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)B族維生素族維生素對(duì)離體根培養(yǎng)的重要性。并指出對(duì)離體根培養(yǎng)的重要性。并指出IAA對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的控制起對(duì)植物生長(zhǎng)發(fā)育的控制起重要作用。重要作用。 1937、1938年，年，Gantheret在培養(yǎng)基中加入上述生長(zhǎng)因子，使得柳樹形成層誘導(dǎo)形成的在培養(yǎng)基中加入上述生長(zhǎng)因子，使得柳樹形成層誘導(dǎo)形成的愈傷組愈傷組織織連續(xù)生長(zhǎng)。連續(xù)生長(zhǎng)。Nobecomt對(duì)煙草種間雜種莖段的形成層細(xì)胞培養(yǎng)也得到了類似的結(jié)果。對(duì)煙草種間雜種莖段的形成層細(xì)胞培養(yǎng)也得到了類似的結(jié)果。 1948年，年，Skoog等通過對(duì)煙草莖段和髓培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，不定芽和不定根的發(fā)生由等通過對(duì)煙草莖段和髓培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)，不定芽和不定根的發(fā)生由生

18、長(zhǎng)素生長(zhǎng)素/腺嘌呤腺嘌呤的的比例決定。比例決定。 1950年，年，Ball從紅杉愈傷組織培養(yǎng)中再生獲得器官。從紅杉愈傷組織培養(yǎng)中再生獲得器官。1952年年，Morel和和Martin通過通過分生組織分生組織培養(yǎng)獲得大麗花的脫毒植株，同年，首次應(yīng)用微型嫁接技培養(yǎng)獲得大麗花的脫毒植株，同年，首次應(yīng)用微型嫁接技術(shù)。術(shù)。1953年，年，Tuleche首次從花粉培養(yǎng)中獲得銀杏的首次從花粉培養(yǎng)中獲得銀杏的單倍體愈傷組織單倍體愈傷組織。1955年，年，Miller等發(fā)現(xiàn)了一種促進(jìn)細(xì)胞分裂的植物激素等發(fā)現(xiàn)了一種促進(jìn)細(xì)胞分裂的植物激素激動(dòng)素，后來發(fā)現(xiàn)激動(dòng)素，后來發(fā)現(xiàn)激動(dòng)素激動(dòng)素可用來代替腺可用來代替腺嘌呤促進(jìn)芽

19、的形成，而且其效力比后者高嘌呤促進(jìn)芽的形成，而且其效力比后者高3萬(wàn)倍。萬(wàn)倍。1957年年，Skoog和和Miller發(fā)現(xiàn)改變細(xì)胞分裂素發(fā)現(xiàn)改變細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素比例，可以控制根和芽的發(fā)生。生長(zhǎng)素比例，可以控制根和芽的發(fā)生。1958年年，Maheshwari和和Rangaswamy從柑橘胚珠的珠心組織培養(yǎng)中再生獲得體細(xì)胞胚；同年，從柑橘胚珠的珠心組織培養(yǎng)中再生獲得體細(xì)胞胚；同年，Reinert 和和Steward分別從胡蘿卜的愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中再生得到原胚，為以后的組織培養(yǎng)中分別從胡蘿卜的愈傷組織和細(xì)胞培養(yǎng)中再生得到原胚，為以后的組織培養(yǎng)中器官發(fā)生和體細(xì)胞胚胎發(fā)生奠定了基礎(chǔ)，也為植物細(xì)胞全能性

20、理論提供了證據(jù)。器官發(fā)生和體細(xì)胞胚胎發(fā)生奠定了基礎(chǔ)，也為植物細(xì)胞全能性理論提供了證據(jù)。3、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展（、植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展（1960年以后）年以后）1960年，年，Morel利用蘭花莖尖培養(yǎng)對(duì)蘭花進(jìn)行利用蘭花莖尖培養(yǎng)對(duì)蘭花進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)繁殖營(yíng)養(yǎng)繁殖； 1962年，年，Murashige和和Skoog開發(fā)出最著名的開發(fā)出最著名的Murashige和和Skoog培養(yǎng)基（培養(yǎng)基（MS基本培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基），并被），并被后來廣泛采用的基本培養(yǎng)基。后來廣泛采用的基本培養(yǎng)基。1964年，印度人年，印度人Guha和和Maheshwari利用曼陀羅利用曼陀羅花粉培養(yǎng)獲得第一例單倍體植株花粉培養(yǎng)獲得第

21、一例單倍體植株。從而開辟了單。從而開辟了單倍體育種技術(shù)。倍體育種技術(shù)。1971年年，Takebe等獲得第一例等獲得第一例原生質(zhì)體培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)的再生植株。的再生植株。1972年，年，Carlson等利用等利用原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合在兩個(gè)煙草屬中進(jìn)行種間雜交。在兩個(gè)煙草屬中進(jìn)行種間雜交。1974年年，Murashige等利用細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)莖尖側(cè)芽分枝。等利用細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)莖尖側(cè)芽分枝。Zaenen和和Larebeke分別發(fā)現(xiàn)分別發(fā)現(xiàn)土壤農(nóng)桿土壤農(nóng)桿菌（菌（Agribacterium）中的根瘤誘導(dǎo)的主要成分是中的根瘤誘導(dǎo)的主要成分是Ti質(zhì)粒質(zhì)粒。1978年年，Melchers等進(jìn)行了番茄和馬鈴

22、薯的等進(jìn)行了番茄和馬鈴薯的體細(xì)胞雜交體細(xì)胞雜交。1979年年，Marton提出了利用植物提出了利用植物原生質(zhì)體和土壤農(nóng)桿菌共培養(yǎng)原生質(zhì)體和土壤農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。的方法進(jìn)行轉(zhuǎn)化。1981年，年，Larkin和和Scowcroft引入引入“體細(xì)胞無性系變異體細(xì)胞無性系變異（Somaclonal variation）”這一術(shù)語(yǔ)。這一術(shù)語(yǔ)。1982年年，Krens等的工作證明，等的工作證明，原生質(zhì)體可以攝入裸露的原生質(zhì)體可以攝入裸露的DNA，表明可以用外源，表明可以用外源DNA對(duì)原生質(zhì)體對(duì)原生質(zhì)體進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。1982年，年，Zimmermann利用利用電刺激進(jìn)行原生質(zhì)體融合電

23、刺激進(jìn)行原生質(zhì)體融合。1985年年，Horsch等用等用土壤農(nóng)桿菌對(duì)葉盤進(jìn)行感染和轉(zhuǎn)化土壤農(nóng)桿菌對(duì)葉盤進(jìn)行感染和轉(zhuǎn)化，并得到再生的轉(zhuǎn)化植株。，并得到再生的轉(zhuǎn)化植株。植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展特點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展特點(diǎn)q研究材料范圍逐步擴(kuò)大研究材料范圍逐步擴(kuò)大q培養(yǎng)方法逐步完善培養(yǎng)方法逐步完善q培養(yǎng)基不斷改進(jìn)培養(yǎng)基不斷改進(jìn)q實(shí)驗(yàn)手段逐步完備實(shí)驗(yàn)手段逐步完備植物再生植株的途徑植物再生植株的途徑第三節(jié)第三節(jié) 植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用領(lǐng)域植物組織培養(yǎng)的應(yīng)用領(lǐng)域1、快速繁殖、快速繁殖2、種苗脫毒、種苗脫毒3、遠(yuǎn)緣雜交、遠(yuǎn)緣雜交8、植物性藥物和生物制品的生產(chǎn)植物性藥物和生物制品的生產(chǎn)7、基因工程、基因工程 6、

24、種質(zhì)保存、種質(zhì)保存4、突變育種、突變育種5、單倍體育種、單倍體育種一、植物快速繁殖一、植物快速繁殖植物快速繁殖技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)的一個(gè)重植物快速繁殖技術(shù)是植物組織培養(yǎng)技術(shù)的一個(gè)重要組成部分，在生產(chǎn)中起的作用最大，應(yīng)用也最要組成部分，在生產(chǎn)中起的作用最大，應(yīng)用也最廣泛。廣泛。加速育種加速育種提高物種優(yōu)良性狀提高物種優(yōu)良性狀工廠化生產(chǎn)工廠化生產(chǎn)大量快速繁殖大量快速繁殖植物的有性繁殖周期長(zhǎng)，數(shù)量較少，一粒種子發(fā)植物的有性繁殖周期長(zhǎng)，數(shù)量較少，一粒種子發(fā)育成一株新植株。而運(yùn)用快速無性繁殖技術(shù)可在短期內(nèi)育成一株新植株。而運(yùn)用快速無性繁殖技術(shù)可在短期內(nèi)獲得大量遺傳性一致的植株，如石刁柏一個(gè)腋芽半年可獲

25、得大量遺傳性一致的植株，如石刁柏一個(gè)腋芽半年可以繁殖以繁殖1200倍，一株的腋芽一年可繁殖倍，一株的腋芽一年可繁殖7萬(wàn)株。萬(wàn)株。傳統(tǒng)的的無性繁殖方法如扦插、分根、壓條、嫁接等方傳統(tǒng)的的無性繁殖方法如扦插、分根、壓條、嫁接等方法法 ，繁殖系數(shù)低、速度慢，不能適應(yīng)現(xiàn)代化生產(chǎn)要求，繁殖系數(shù)低、速度慢，不能適應(yīng)現(xiàn)代化生產(chǎn)要求，但快速無性繁殖技術(shù)周期短、速度快、效率高但快速無性繁殖技術(shù)周期短、速度快、效率高 ，在植物，在植物優(yōu)良品種的快速繁殖及推廣方面取得了巨大成功。優(yōu)良品種的快速繁殖及推廣方面取得了巨大成功。同時(shí)可用于珍稀植物的快速繁殖，搶救與繁殖珍、稀、同時(shí)可用于珍稀植物的快速繁殖，搶救與繁殖珍、稀

26、、瀕危植物，比如紅豆杉。瀕危植物，比如紅豆杉。脫毒快速繁殖技術(shù)脫毒快速繁殖技術(shù) 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的植物病毒有現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)的植物病毒有500多種，一些植物病毒相當(dāng)嚴(yán)多種，一些植物病毒相當(dāng)嚴(yán)重，給生產(chǎn)造成極大損失，如葡萄扇葉病毒。使葡萄減產(chǎn)重，給生產(chǎn)造成極大損失，如葡萄扇葉病毒。使葡萄減產(chǎn)10%50%，花卉病毒使各種花卉嚴(yán)重退化，致使花少而小，花卉病毒使各種花卉嚴(yán)重退化，致使花少而小，甚至造成畸變和變色。利用組織培養(yǎng)脫毒后所得到的無毒甚至造成畸變和變色。利用組織培養(yǎng)脫毒后所得到的無毒植株，形狀明顯優(yōu)于原來染病植株。植株，形狀明顯優(yōu)于原來染病植株。 l 大規(guī)模生產(chǎn)大規(guī)模生產(chǎn)農(nóng)作物：甘蔗、甘薯、馬鈴薯農(nóng)作物：甘蔗

27、、甘薯、馬鈴薯果樹：葡萄、果樹：葡萄、柑橘柑橘、蘋果、桃、蘋果、桃花卉：花卉：菊花菊花、香石竹、蝴蝶蘭、香石竹、蝴蝶蘭苗木：苗木：桂花桂花、銀杏、銀杏藥材：太白七藥、藥材：太白七藥、紅豆杉紅豆杉、紫草、人參、紫草、人參 甘蔗莖尖快速繁殖甘蔗莖尖快速繁殖l甘蔗脫毒苗與常規(guī)苗相比，果蔗甘蔗脫毒苗與常規(guī)苗相比，果蔗增產(chǎn)增產(chǎn)33.6%69.4%，糖料蔗蔗莖，糖料蔗蔗莖增產(chǎn)增產(chǎn)15.1%52.1%、蔗糖分提高、蔗糖分提高0.12%1.71%(絕對(duì)值絕對(duì)值)。 柑橘的快速繁殖（非試管苗）柑橘的快速繁殖（非試管苗）l桔子傳統(tǒng)都是以嫁接的方式進(jìn)行繁殖桔子傳統(tǒng)都是以嫁接的方式進(jìn)行繁殖,其其成苗需要成苗需要1-2

28、年的時(shí)間才能成苗年的時(shí)間才能成苗,繁殖速繁殖速度非常的慢度非常的慢,而采用植物非試管快繁技而采用植物非試管快繁技術(shù)術(shù) ，采其一個(gè)，采其一個(gè)枝段枝段,在智能化控制的在智能化控制的快快繁苗床給其創(chuàng)造最佳的生根環(huán)境繁苗床給其創(chuàng)造最佳的生根環(huán)境,就能快就能快速的生根成苗速的生根成苗 。l選擇幼小的桔樹選擇幼小的桔樹,取粗壯的取粗壯的枝條枝條作為離體作為離體材料材料,一般取材長(zhǎng)度為一般取材長(zhǎng)度為5厘米厘米,下切口靠芽下切口靠芽帶一定斜度斜剪帶一定斜度斜剪,再用快繁寶處理再用快繁寶處理,處理處理后繁殖于智能化控制的快繁苗床后繁殖于智能化控制的快繁苗床, 能快能快速的生根速的生根 。菊花快速繁殖菊花快速繁殖

29、l菊花組織培養(yǎng)，菊花組織培養(yǎng)，莖尖莖尖是主要是主要培養(yǎng)部位，其它還可采用培養(yǎng)部位，其它還可采用莖莖段、花托、花瓣、葉片段、花托、花瓣、葉片等。等。用于快速繁殖、加快繁殖速用于快速繁殖、加快繁殖速度的，可采用大于度的，可采用大于1厘米以上厘米以上的莖段。如培養(yǎng)的莖段。如培養(yǎng)脫毒苗脫毒苗，則，則以采用小于以采用小于0.6厘米的莖尖培厘米的莖尖培養(yǎng)，有較好的脫毒效果。養(yǎng)，有較好的脫毒效果。 桂花快速繁殖桂花快速繁殖根據(jù)當(dāng)年的氣候特點(diǎn)結(jié)合桂根據(jù)當(dāng)年的氣候特點(diǎn)結(jié)合桂花的生長(zhǎng)物候期特點(diǎn)確定花的生長(zhǎng)物候期特點(diǎn)確定萌發(fā)芽萌發(fā)芽的取材時(shí)間，一般在每年的的取材時(shí)間，一般在每年的23月份；對(duì)金桂萌發(fā)芽消毒，消月份；

30、對(duì)金桂萌發(fā)芽消毒，消毒時(shí)間控制在毒時(shí)間控制在37min，以莖尖，以莖尖作為培養(yǎng)對(duì)象能夠獲得高達(dá)作為培養(yǎng)對(duì)象能夠獲得高達(dá)86.1的誘導(dǎo)率。的誘導(dǎo)率。 紅豆杉快速繁殖紅豆杉快速繁殖使用莖和枝條誘使用莖和枝條誘導(dǎo)愈傷組織，導(dǎo)愈傷組織，也可利用芽、葉也可利用芽、葉和成熟種子胚。和成熟種子胚。1. 單倍體的概念及其特點(diǎn)單倍體的概念及其特點(diǎn) 含有一套染色體組的生物體；含有一套染色體組的生物體； 被子植物的配子體世代。被子植物的配子體世代。矮小性矮小性不育性不育性全顯性。全顯性。l單倍體植物的直接利用；單倍體植物的直接利用；l克服雜種分離，縮短育種年限；克服雜種分離，縮短育種年限；l快速獲得異花授粉植物的自

31、交系；快速獲得異花授粉植物的自交系；l單倍體植物的誘變育種；單倍體植物的誘變育種；l克服遠(yuǎn)緣雜種不孕性與不穩(wěn)定的現(xiàn)象；克服遠(yuǎn)緣雜種不孕性與不穩(wěn)定的現(xiàn)象；（1）單倍體材料的獲得）單倍體材料的獲得 單倍體育種的首要問題是如何獲得大量的單倍體植株。據(jù)現(xiàn)單倍體育種的首要問題是如何獲得大量的單倍體植株。據(jù)現(xiàn)有的研究材料，用花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株有兩個(gè)途徑有的研究材料，用花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株有兩個(gè)途徑: 第一是在離體培養(yǎng)的花藥中，花粉經(jīng)過類似胚胎發(fā)育的過程第一是在離體培養(yǎng)的花藥中，花粉經(jīng)過類似胚胎發(fā)育的過程直接形成單倍體植物，如煙草、曼陀羅等。直接形成單倍體植物，如煙草、曼陀羅等。 第二是在離體培養(yǎng)的花

32、藥中，花粉形成愈傷組織，再?gòu)挠鷤诙窃陔x體培養(yǎng)的花藥中，花粉形成愈傷組織，再?gòu)挠鷤M織分化出單倍體植株。組織分化出單倍體植株。（2）花藥的接種）花藥的接種接種前的準(zhǔn)備工作接種前的準(zhǔn)備工作 接種和培養(yǎng)花藥是在無菌條件下進(jìn)行的，所用的一切用具必須接種和培養(yǎng)花藥是在無菌條件下進(jìn)行的，所用的一切用具必須徹底滅菌。徹底滅菌?；ǚ郯l(fā)育時(shí)期的鑒定花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定 適宜的花粉發(fā)育時(shí)期對(duì)于提高花粉誘導(dǎo)愈傷組織分化的頻率是適宜的花粉發(fā)育時(shí)期對(duì)于提高花粉誘導(dǎo)愈傷組織分化的頻率是很重要的，為此，進(jìn)行花藥培養(yǎng)前，要用顯微鏡進(jìn)行很重要的，為此，進(jìn)行花藥培養(yǎng)前，要用顯微鏡進(jìn)行花粉發(fā)育時(shí)期花粉發(fā)育時(shí)期的鑒定。的鑒定。 經(jīng)

33、顯微鏡檢查后，把花粉細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)程與花藥或花序的外部經(jīng)顯微鏡檢查后，把花粉細(xì)胞的發(fā)育進(jìn)程與花藥或花序的外部形態(tài)聯(lián)系起來，按照形態(tài)聯(lián)系起來，按照花粉單核期花粉單核期或單核期的花蕾或花序的外部形態(tài)或單核期的花蕾或花序的外部形態(tài)標(biāo)志選取花藥進(jìn)行接種培養(yǎng)。標(biāo)志選取花藥進(jìn)行接種培養(yǎng)。 誘導(dǎo)愈傷組織分化出根、莖、葉的方法是在愈傷組織長(zhǎng)到誘導(dǎo)愈傷組織分化出根、莖、葉的方法是在愈傷組織長(zhǎng)到1-3毫毫米大小（如小米大）時(shí)，即可轉(zhuǎn)移到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，促使分化米大?。ㄈ缧∶状螅r(shí)，即可轉(zhuǎn)移到誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，促使分化長(zhǎng)出植株。一般說來，愈傷組織如果先形成芽，隨后根自然會(huì)發(fā)生，長(zhǎng)出植株。一般說來，愈傷組織如果先形成

34、芽，隨后根自然會(huì)發(fā)生，如果先有根，以后不一定會(huì)出芽。因此，掌握芽分化的條件是十分如果先有根，以后不一定會(huì)出芽。因此，掌握芽分化的條件是十分重要的。重要的。 愈傷組織轉(zhuǎn)移培養(yǎng)工作是在無菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行的，轉(zhuǎn)移后愈愈傷組織轉(zhuǎn)移培養(yǎng)工作是在無菌室或接種箱內(nèi)進(jìn)行的，轉(zhuǎn)移后愈傷組織培養(yǎng)在傷組織培養(yǎng)在23-28恒溫室內(nèi)，每日光照恒溫室內(nèi)，每日光照9-11小時(shí)，可用日光燈作小時(shí)，可用日光燈作輔助光，光強(qiáng)度在輔助光，光強(qiáng)度在2000勒克斯以上。勒克斯以上。 在轉(zhuǎn)移愈傷組織時(shí)，應(yīng)注意其極性，原來向上的轉(zhuǎn)移后仍應(yīng)向上，在轉(zhuǎn)移愈傷組織時(shí)，應(yīng)注意其極性，原來向上的轉(zhuǎn)移后仍應(yīng)向上，否則會(huì)影響生長(zhǎng)，同時(shí)在轉(zhuǎn)移時(shí)，避免沾

35、帶過多的培養(yǎng)基。否則會(huì)影響生長(zhǎng)，同時(shí)在轉(zhuǎn)移時(shí)，避免沾帶過多的培養(yǎng)基。 處理方式：處理方式：l試管內(nèi)進(jìn)行；試管內(nèi)進(jìn)行；l花粉植株定植后進(jìn)行；花粉植株定植后進(jìn)行；藥劑處理；藥劑處理；植株鑒定。植株鑒定。 三、原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交三、原生質(zhì)體培養(yǎng)與體細(xì)胞雜交 雜交育種由于親緣關(guān)系遠(yuǎn)的物種間存在雜交不結(jié)實(shí)。雜交育種由于親緣關(guān)系遠(yuǎn)的物種間存在雜交不結(jié)實(shí)。按照植物細(xì)胞全能性理論及植物組織培養(yǎng)的方法，利用按照植物細(xì)胞全能性理論及植物組織培養(yǎng)的方法，利用物種間的體細(xì)胞融合、雜種細(xì)胞的組織培養(yǎng)，通過這種物種間的體細(xì)胞融合、雜種細(xì)胞的組織培養(yǎng)，通過這種技術(shù)克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性。技術(shù)克服遠(yuǎn)緣雜交的不親和性。l

36、原生質(zhì)體的概念原生質(zhì)體的概念 植物細(xì)胞原生質(zhì)體是指那些去除全部細(xì)胞壁的細(xì)胞。植物細(xì)胞原生質(zhì)體是指那些去除全部細(xì)胞壁的細(xì)胞。 此時(shí)，細(xì)胞外僅由細(xì)胞膜包裹，此時(shí)，細(xì)胞外僅由細(xì)胞膜包裹， 呈圓形只有在高滲溶液中才呈圓形只有在高滲溶液中才能相對(duì)穩(wěn)定。能相對(duì)穩(wěn)定。 原生質(zhì)體經(jīng)適當(dāng)處理，可與其他細(xì)胞融合成新的體細(xì)胞。原生質(zhì)體經(jīng)適當(dāng)處理，可與其他細(xì)胞融合成新的體細(xì)胞。比完整的細(xì)胞更容易獲得外來遺傳物質(zhì)，為實(shí)現(xiàn)異源遺比完整的細(xì)胞更容易獲得外來遺傳物質(zhì)，為實(shí)現(xiàn)異源遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)化提供了較好的實(shí)驗(yàn)材料。傳物質(zhì)轉(zhuǎn)化提供了較好的實(shí)驗(yàn)材料。原生質(zhì)體在一定條件下可以融合成雜種細(xì)胞，開辟了一原生質(zhì)體在一定條件下可以融合成雜種細(xì)

37、胞，開辟了一條新的育種途徑。條新的育種途徑。1892， J. A. Klerker 用機(jī)械法獲得原生質(zhì)體；用機(jī)械法獲得原生質(zhì)體；1960，E.C. Cocking 用酶法首先從番茄根尖中分離出大量有活性的原用酶法首先從番茄根尖中分離出大量有活性的原生質(zhì)體并通過培養(yǎng)再生出細(xì)胞壁，形成再生植株生質(zhì)體并通過培養(yǎng)再生出細(xì)胞壁，形成再生植株;1960，G. Barski發(fā)現(xiàn)細(xì)胞原生質(zhì)體能融合在一起形成單核的、并能進(jìn)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞原生質(zhì)體能融合在一起形成單核的、并能進(jìn)行分裂的雜種細(xì)胞；行分裂的雜種細(xì)胞；1972，P.S.Carlon首次獲得煙草體細(xì)胞種間雜種。首次獲得煙草體細(xì)胞種間雜種。80年代年代 ，此項(xiàng)技術(shù)

38、在我國(guó)得到發(fā)展。，此項(xiàng)技術(shù)在我國(guó)得到發(fā)展。4. 原生質(zhì)體的制備原生質(zhì)體的制備（1）取材與滅菌）取材與滅菌（2）酶解）酶解 (纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶) （3）分離）分離 （沉淀法、漂洗法）（沉淀法、漂洗法）（4）洗滌）洗滌（5）鑒定（形態(tài)觀測(cè)、活性鑒定）鑒定（形態(tài)觀測(cè)、活性鑒定）原生質(zhì)體的培養(yǎng)：原生質(zhì)體的培養(yǎng)：細(xì)胞壁再生；細(xì)胞壁再生；細(xì)胞分裂；細(xì)胞分裂；植株再生。植株再生。5. 原生質(zhì)體的融合原生質(zhì)體的融合v化學(xué)法誘導(dǎo)融合化學(xué)法誘導(dǎo)融合l按比例混合雙親原生質(zhì)體按比例混合雙親原生質(zhì)體- l滴加滴加PEG- l滴加高鈣、高滴加高鈣、高PH值溶液值溶液- l洗滌原生質(zhì)

39、體溶液洗滌原生質(zhì)體溶液- l離心獲得原生質(zhì)體溶液離心獲得原生質(zhì)體溶液-l篩選雜種細(xì)胞篩選雜種細(xì)胞-l再生雜種細(xì)胞。再生雜種細(xì)胞。v物理法誘導(dǎo)融合物理法誘導(dǎo)融合基本程序：基本程序：l原生質(zhì)體的獲得；原生質(zhì)體的獲得；l電擊融合；電擊融合；l篩選雜種細(xì)胞；篩選雜種細(xì)胞；l雜種細(xì)胞再生和完雜種細(xì)胞再生和完整植株的形成。整植株的形成。6. 融合細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定與篩選融合細(xì)胞的培養(yǎng)鑒定與篩選雜種細(xì)胞的顯微鏡鑒別；雜種細(xì)胞的顯微鏡鑒別；互補(bǔ)法鑒定雜種細(xì)胞；互補(bǔ)法鑒定雜種細(xì)胞；細(xì)胞與分子生物學(xué)法；細(xì)胞與分子生物學(xué)法；植株形態(tài)的鑒別。植株形態(tài)的鑒別。（三）人工種子（三）人工種子 人工種子即人為制造的種子，它包含植

40、物胚狀體、人工種子即人為制造的種子，它包含植物胚狀體、營(yíng)養(yǎng)成分、激素、其他成分。其具有種子的功能，可營(yíng)養(yǎng)成分、激素、其他成分。其具有種子的功能，可直接用于田間播種。直接用于田間播種。 1、人工種子的構(gòu)成人工種子的構(gòu)成 人工種皮人工種皮 胚胚 狀狀 體體 人工胚乳人工胚乳2、人工種子的特點(diǎn)人工種子的特點(diǎn)：（1）可以不受環(huán)境條件的限制，周年進(jìn)行生產(chǎn)；）可以不受環(huán)境條件的限制，周年進(jìn)行生產(chǎn)；（2）經(jīng)人工無性繁殖產(chǎn)生，有利于保存該種系的優(yōu)良性狀；）經(jīng)人工無性繁殖產(chǎn)生，有利于保存該種系的優(yōu)良性狀；（3）成本低，適于田間機(jī)械化生產(chǎn)；）成本低，適于田間機(jī)械化生產(chǎn)；（4）可根據(jù)需要調(diào)節(jié)胚乳成分。）可根據(jù)需要調(diào)

41、節(jié)胚乳成分。3、人工種子的制備人工種子的制備（1）胚狀體的制備及其同步生長(zhǎng)；）胚狀體的制備及其同步生長(zhǎng)；（2）人工胚乳的制備；）人工胚乳的制備；（3）配制包埋劑及人工包埋。）配制包埋劑及人工包埋。 人工種子包埋示意圖人工種子包埋示意圖 4%海藻酸鈉海藻酸鈉 體細(xì)胞胚體細(xì)胞胚 包埋丸包埋丸 2% CaCl2 人工種子人工種子 水水 4、人工種子的貯存與萌發(fā)、人工種子的貯存與萌發(fā) 低溫、干燥、潔凈。低溫、干燥、潔凈。1、基因工程的定義 按照人們的愿望， 進(jìn)行遺傳物質(zhì)的設(shè)計(jì)，通過體外 DNA重組技術(shù) 和DNA轉(zhuǎn)移技術(shù)，有目的地改造生物性狀， 使現(xiàn)有物種在短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)新的性狀， 創(chuàng)造出新的生物類型。致

42、癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的致癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的Ti質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化法質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化法2、重組、重組DNA的直接轉(zhuǎn)化法的直接轉(zhuǎn)化法微粒散射技術(shù)微粒散射技術(shù) (Particle bombardment)（二）基因工程的基本步驟1、目的基因的克隆與鑒定；2、植物表達(dá)載體的構(gòu)建；3、植物的遺傳轉(zhuǎn)化；4、轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選；5、轉(zhuǎn)基因植株的鑒定?；蚧蚧蚩寺』蚩寺』蜣D(zhuǎn)化基因轉(zhuǎn)化DNA重組技術(shù)重組技術(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)植物遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)p抗病細(xì)胞突變體基本原理抗病細(xì)胞突變體基本原理p抗病細(xì)胞突變體篩選程序抗病細(xì)胞突變體篩選程序p抗病細(xì)胞突變體篩選實(shí)例抗病細(xì)胞突變體篩選實(shí)例六、植物抗病細(xì)胞突變體篩選六、植物抗病細(xì)胞突變體篩選基本原理基本原理l 利用植物組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的變異，或由物理、化利用植物組織培養(yǎng)過程中出現(xiàn)的變異，或由物理、化學(xué)因素誘發(fā)變異，給予一定的選擇壓力，篩選出符合育學(xué)因素誘發(fā)變異，給予一定的選擇壓力，篩選出符合育種目