第三章 方法選擇與評(píng)價(jià)2009

1、本章主要內(nèi)容第一節(jié) 性能評(píng)價(jià)在臨床實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用范圍第二節(jié) 性能評(píng)價(jià)與驗(yàn)證的基本方法第三節(jié) 室內(nèi)與室間比對(duì)實(shí)驗(yàn)n性能評(píng)價(jià)性能評(píng)價(jià) n自行研究或開發(fā)了一個(gè)檢測(cè)方法，為了使方法的檢測(cè)結(jié)果符合臨床要求，必須對(duì)方法的性能作詳細(xì)而全面的實(shí)驗(yàn)，這時(shí)的實(shí)驗(yàn)是對(duì)性能的評(píng)價(jià)。 n通常是生產(chǎn)廠家完成 n性能驗(yàn)證性能驗(yàn)證 n對(duì)他人或廠商的評(píng)價(jià)資料中的幾個(gè)主要性能的證實(shí)。 n實(shí)驗(yàn)室自己完成性能評(píng)價(jià)在臨床實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用范圍性能評(píng)價(jià)在臨床實(shí)驗(yàn)室的應(yīng)用范圍IFCC根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度與精密度的不同可以分為決定性方法、參考方法、決定性方法、參考方法、常規(guī)方法常規(guī)方法三級(jí)。 準(zhǔn)確度增加準(zhǔn)確度增加應(yīng)用范圍增加應(yīng)用范圍增加 不同方法的

2、關(guān)系不同方法的關(guān)系 參考物，也稱標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，是一類具有一種或多種成分、含量均勻確定的物質(zhì)。 參考物用以校準(zhǔn)儀器設(shè)備、評(píng)價(jià)測(cè)量方法或給其它物質(zhì)賦值。 參考物的結(jié)果含量一般表示為： 標(biāo)準(zhǔn)值總不確定度 用于常規(guī)質(zhì)量控制，用來控制患者標(biāo)本的測(cè)定誤差。 質(zhì)控物不能用于儀器的校準(zhǔn)。決定性方法決定性方法用途：評(píng)價(jià)參考方法及一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)展及評(píng)價(jià)參考方法，校準(zhǔn)決定性方法及參考方法，為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品定值參考方法參考方法為二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品及質(zhì)控品定值，評(píng)價(jià)常規(guī)方法二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)品常規(guī)方法的標(biāo)準(zhǔn)品，為質(zhì)控品定值常規(guī)方法常規(guī)方法臨床實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)定量分析 質(zhì)控品質(zhì)控品質(zhì)量保證評(píng)價(jià)校準(zhǔn)校準(zhǔn)評(píng)價(jià)定值評(píng)價(jià)校

3、準(zhǔn)定值各級(jí)分析方法與標(biāo)準(zhǔn)品的互相關(guān)系各級(jí)分析方法與標(biāo)準(zhǔn)品的互相關(guān)系測(cè)定結(jié)果測(cè)定控制 量值溯源的目的，是讓常規(guī)標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果得到和參考系列相同的測(cè)量值。參考方法常規(guī)方法患者新鮮標(biāo)本參考值結(jié)果常規(guī)測(cè)定結(jié)果結(jié)果一致一級(jí)參考校準(zhǔn)測(cè)定得到三 量值溯源掌握幾個(gè)基本概念二級(jí)參考校準(zhǔn)二、量值溯源的概念量值的溯源性 通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的比較鏈，使測(cè)量結(jié)果或標(biāo)準(zhǔn)的值能夠與規(guī)定的參考標(biāo)準(zhǔn)，通常是與國家標(biāo)準(zhǔn)或國際標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)系起來的特性。 現(xiàn)實(shí)問題是：是否可以讓常規(guī)的檢測(cè)系統(tǒng)，對(duì)患者標(biāo)本的檢測(cè)，得到的測(cè)定值和參考實(shí)驗(yàn)室相同的檢測(cè)量值。這就是通過一條連續(xù)（不間斷）的比較鏈在一定的誤差條件下，使患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果與

4、國家或國際的參考系統(tǒng)在參考實(shí)驗(yàn)室，使用參考方法、參考品得到的結(jié)果聯(lián)系起來。為此，生產(chǎn)廠商必須對(duì)完成檢測(cè)涉及的檢測(cè)系統(tǒng)各要素（儀器、試劑、校準(zhǔn)品、和操作程序）進(jìn)行嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化，來實(shí)現(xiàn)溯源性。 （廠家提供標(biāo)準(zhǔn)化的檢測(cè)系統(tǒng)）關(guān)于檢驗(yàn)結(jié)果溯源的解釋 臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化可以簡(jiǎn)單理解為：為了實(shí)現(xiàn)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的溯源性，檢測(cè)系統(tǒng)的生產(chǎn)廠商和臨床實(shí)驗(yàn)室的所有努力，進(jìn)行有秩序的特定活動(dòng)所制定并實(shí)施各項(xiàng)規(guī)則的過程為標(biāo)準(zhǔn)化。三、標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn)要有規(guī)程，按規(guī)程去操作，檢驗(yàn)要有規(guī)程，按規(guī)程去操作，操作要有記錄，記錄要有分析。操作要有記錄，記錄要有分析。標(biāo)準(zhǔn)化涉及的內(nèi)容標(biāo)準(zhǔn)化涉及的內(nèi)容n嚴(yán)格的質(zhì)量管理；n訓(xùn)練有素的人員；n良好的必

5、要設(shè)備和環(huán)境要求；n操作的每個(gè)步驟都有具體明確的操作規(guī)程；n有詳細(xì)記錄；n每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目都要有一個(gè)完整文件資料，證實(shí)分析性能、溯源性、操作要求、質(zhì)量要求等。四、參考物的量值溯源了解大大小小 精密度是指同一樣本在一定條件下多次重復(fù)測(cè)得的一系列單次值之間的接近程度，是表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的指標(biāo)。 精密度一般以變異系數(shù)CV%表示 重復(fù)性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)精密度的常用方法。 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 1 1系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差： 由方法、儀器、試劑或操作的明顯恒定誤差引起，一系列測(cè)定值存在有相同傾向的偏差，表現(xiàn)有恒定系統(tǒng)誤差和比例系統(tǒng)誤差。其不準(zhǔn)確度表示為絕對(duì)偏差和相對(duì)偏差 。特點(diǎn)：?jiǎn)蜗蛐裕瑳]有隨機(jī)性，有一定的大

6、小和方向；找到原因，采取措施后可以基本消除。恒定系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差比較方法試驗(yàn)方法真值樣本均值測(cè)定值SERE四、準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)評(píng)價(jià)方法準(zhǔn)確度的常用試驗(yàn)：1. 方法比較試驗(yàn)2. 回收試驗(yàn)3. 干擾試驗(yàn) （1）比較方法的選擇3. 試驗(yàn)要點(diǎn)（2） 測(cè)定步驟從經(jīng)驗(yàn)上講，若b0.97，或b1.03，已有可能b和1之間有統(tǒng)計(jì)上顯著性差異。比較方法候選方法比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）標(biāo)準(zhǔn)液量（）血清量（）標(biāo)準(zhǔn)液量（mlmlml加入濃度回收濃度100回收率接近100 分析不受基質(zhì)影響。 無論在純?nèi)芤哼€是復(fù)雜的基質(zhì)環(huán)境中，分析方法的反應(yīng)能力是一樣的。（準(zhǔn)確度不受影響）回收率明

7、顯偏離100 分析明顯受不同的基質(zhì)影響。 在不同的基質(zhì)環(huán)境下，分析方法的反應(yīng)能力有明顯差異。（準(zhǔn)確度受影響）回收率的理解： 精密度是指同一樣本在一定條件下多次重復(fù)測(cè)得的一系列單次值之間的接近程度，是表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差大小的指標(biāo)。 精密度一般以變異系數(shù)CV%表示 重復(fù)性試驗(yàn)是評(píng)價(jià)精密度的常用方法。4. 允許誤差和性能可接受方式 1988年美國通過了臨床實(shí)驗(yàn)室修正法規(guī)CLIA88，該法規(guī)對(duì)檢驗(yàn)項(xiàng)目規(guī)定了允許誤差，現(xiàn)成為許多國家和地區(qū)臨床檢驗(yàn)的最低質(zhì)量指標(biāo)。我國也已在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用該質(zhì)量指標(biāo)，用來評(píng)估全國或省、市的室間質(zhì)量評(píng)估成績(jī)，評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)性能可接受性。 檢測(cè)系統(tǒng)性能最重要的是不精密度和不準(zhǔn)

8、確度。由重復(fù)實(shí)驗(yàn)對(duì)方法的隨機(jī)誤差作出估計(jì)；用方法比較實(shí)驗(yàn)得到被評(píng)價(jià)方法和比較方法結(jié)果的均值間偏倚。 醫(yī)生和患者不關(guān)心檢驗(yàn)結(jié)果的誤差是不精密引起的還是由于不準(zhǔn)確引起，重要的是它造成的后果有多大。所以判斷檢測(cè)系統(tǒng)或方法性能可否接受，是看總誤差的水平。 應(yīng)用方法決定圖（MD圖）能以圖像的方式表達(dá)不精密度和不準(zhǔn)確度與總允許誤差的比較。 二、如何畫方法性能決定圖（簡(jiǎn)介）總允許誤差示意圖0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.00.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0允許不精密度（%）允許不準(zhǔn)確度（%） 最終判斷可接受性將依據(jù)每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的情況和方法的具體

9、應(yīng)用。 （1）具有不符要求性能的方法 不能用于常規(guī)。除非沒有其它方法可以替代。 （2）具有臨界性能的方法 若應(yīng)用在極其穩(wěn)定、極少有問題的高度控制的儀器系統(tǒng)上；或者由經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練、經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)人員應(yīng)用，他們很重視預(yù)防性保養(yǎng)，小心地監(jiān)視儀器性能，熟練精通統(tǒng)計(jì)控制圖上指示的問題等，還是可以接受的。（固有性能差，要求外加誤差要非常?。?）具有良好性能的方法 一般應(yīng)是可接受的，但是仍然需要高度的預(yù)防性保養(yǎng)和每天質(zhì)量控制，以確保常規(guī)性能。（4）具有優(yōu)秀性能的方法 是最合適的，在不同總誤差指標(biāo)和需要適當(dāng)控制檢驗(yàn)過程的操作特性間的關(guān)系，證實(shí)達(dá)到了最高要求的水平六、檢測(cè)限評(píng)價(jià) 可檢測(cè)的最低分析物濃度為檢測(cè)系統(tǒng)

10、的分析靈敏度或稱檢測(cè)限。 分析靈敏度：具有定性含義的 檢測(cè)低限 具有定量含義的 生物檢測(cè)限 功能靈敏度 如果空白響應(yīng)量（吸光度）的波動(dòng)服從正態(tài)分布規(guī)律，則95空白響應(yīng)量：空白均值2s空白 待測(cè)樣品響應(yīng)量只有超過空白均值2s空白才被認(rèn)為樣品中有分析物99.7空白響應(yīng)量：空白均值3s空白 待測(cè)樣品響應(yīng)量只有超過空白均值3s空白才被認(rèn)為樣品中有分析物(一) 檢測(cè)低限空白管的波動(dòng)原因：試劑空白的穩(wěn)定性，比色皿的一致性，比色計(jì)的穩(wěn)定性，如：某如：某5 5g/Lg/L分析物的分析物的吸光度吸光度落在落在 檢測(cè)低限檢測(cè)低限 5g/L（定性）（定性）（低于（低于5 5g/Lg/L時(shí)其吸光度與空白吸光度有重疊，

11、無法分辨）時(shí)其吸光度與空白吸光度有重疊，無法分辨） 稍大于檢測(cè)低限的響應(yīng)信號(hào)說明樣品內(nèi)有分析物，但是，這時(shí)還不能正確報(bào)告定量結(jié)果。因?yàn)槭菃未螠y(cè)定。 對(duì)于這個(gè)接近檢測(cè)低限的樣品做多次重復(fù)測(cè)定，按照正態(tài)分布規(guī)律其響應(yīng)值范圍應(yīng)該是X2s或X3s，即有50測(cè)定結(jié)果會(huì)“無分析物”，有50的測(cè)定結(jié)果“有分析物”。 那么多少檢測(cè)響應(yīng)量時(shí)才能較好地報(bào)告定量結(jié)果呢？XB-2sB XBXB+2sB(檢測(cè)低限）5050(二) 生物檢測(cè)限 對(duì)于多個(gè)接近檢測(cè)低限的樣品做多次重復(fù)測(cè)定，按照正態(tài)分布規(guī)律其響應(yīng)值范圍應(yīng)該是X2s或X3s，這些較均值小的值就有可能和檢測(cè)低限（空白響應(yīng)量的上限）交叉。 因此，這些樣品檢測(cè)響應(yīng)量的

12、95或99.7單次檢測(cè)響應(yīng)量的最低值也應(yīng)該比檢測(cè)低限大，從而保證樣品在任何情況下，單次檢測(cè)響應(yīng)量都不是空白響應(yīng)量，這些樣品具有的分析物濃度才可以定量的報(bào)告?？瞻卓瞻拙稻礨B+2sB 生物檢測(cè)低限的定義： 某樣品單次檢測(cè)可能具有的最小響應(yīng)量剛大于檢測(cè)低限響應(yīng)量，該樣品內(nèi)含有的分析物濃度為生物檢測(cè)限。（可以定量報(bào)告結(jié)果的限值）(三) 功能靈敏度 以日間重復(fù)測(cè)定的CV為20時(shí)，對(duì)應(yīng)的檢測(cè)限樣品具有的平均濃度作為檢測(cè)系統(tǒng)可定量報(bào)告的最低濃度。 需要多個(gè)檢測(cè)限濃度的樣品來做精密度試驗(yàn)，從中選擇CV接近20的對(duì)應(yīng)濃度，作為可定量報(bào)告的最低濃度值。分析物濃度越低，精密度實(shí)驗(yàn)CV值越大?？蓤?bào)告范圍指可以報(bào)告的所有結(jié)果的范圍。 1. 分析測(cè)量范圍：沒有進(jìn)行任何預(yù)處理（稀釋，濃縮等）的樣本，由方法儀器直接測(cè)出的結(jié)果范圍。 2. 臨床可報(bào)告范圍：對(duì)臨床診斷、治療有意義的待測(cè)物濃度范圍，可以通過稀釋、濃縮等方法擴(kuò)大分析測(cè)量范圍?；静襟E5個(gè)樣品各測(cè)定4次，結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，檢驗(yàn)有無稀釋變異，線