綜合實(shí)訓(xùn)配套PPT-農(nóng)產(chǎn)品中霉菌和酵母檢驗(yàn)

1、農(nóng)產(chǎn)品微生物檢驗(yàn)技術(shù) 綜合實(shí)訓(xùn)9霉菌和酵母檢驗(yàn) 3 實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)備 1 1實(shí)驗(yàn)操作2 2目錄頁CONTENTS PAGE結(jié)果與計(jì)數(shù)3 3原始數(shù)據(jù)記錄表4 4 4 一：實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：（1）培養(yǎng)箱：28 1 。 （2） 拍擊式均質(zhì)器及均質(zhì)袋。 （3）電子天平：感量為 0.1 g。 （4）無菌錐形瓶：容量500 mL。（5） 無菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、10 mL（具 0.1 mL 刻度）。 （6）無菌試管：18mm180mm。 （7）旋渦混合器。（8）無菌培養(yǎng)皿：直徑 90 mm。（9）恒溫水浴箱：46 1 。1、設(shè)備和材

2、料 5 一：實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備2、培養(yǎng)基和試劑（1）生理鹽水：見GB 4789.15-2016附錄 A 中 A.1。（2）馬鈴薯葡萄糖瓊脂：見GB 4789.15-2016附錄 A 中 A.2。（3）孟加拉紅瓊脂：見GB 4789.15-2016附錄 A 中 A.3。（4）磷酸鹽緩沖液：見GB 4789.15-2016附錄 A 中 A.4。 6 二：實(shí)驗(yàn)操作過程（1） 固體和半固體樣品：稱取 25 g 樣品，加入 225 mL無菌稀釋液（蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液），充分振搖，或用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。 （2）液體樣品：以無菌吸管吸取 25 mL 樣

3、品至盛有 225 mL無菌稀釋液（蒸餾水或生理鹽水或磷酸鹽緩沖液）的適宜容器內(nèi)（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）或無菌均質(zhì)袋中，充分振搖或用拍擊式均質(zhì)器拍打1 min2 min，制成 1:10 的樣品勻液。（3）取 1 mL 1:10 樣品勻液注入含有 9 mL 無菌稀釋液的試管中，另換一支1 mL無菌吸管反復(fù)吹吸，或在旋渦振蕩器上混勻，此液為1:100 的樣品勻液。 1、樣品稀釋 7 二：實(shí)驗(yàn)操作過程（4） 按（3） 操作，制備 10 倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用 1 支 1 mL 無菌吸管。（5） 根據(jù)對樣品污染狀況的估計(jì)，選擇 2 個(gè)3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包

4、括原液）， 在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋的同時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取 1 mL 樣品勻液于2個(gè)無菌平皿內(nèi)。同時(shí)分別吸取 1 mL 無菌稀釋液加入2個(gè)無菌平皿作空白對照。 （6） 及時(shí)將 20 mL25 mL 冷卻至 46 的馬鈴薯葡萄糖瓊脂或孟加拉紅瓊脂（可放置于 46 1恒溫水浴箱中保溫）傾注平皿，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。置水平臺(tái)面待培養(yǎng)基完全凝固。1、樣品稀釋 8 二：實(shí)驗(yàn)操作過程2、培養(yǎng) 瓊脂凝固后，正置平板，置281 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察并記錄培養(yǎng)至第5d的結(jié)果。3、菌落計(jì)數(shù) 用肉眼觀察，必要時(shí)可用放大鏡或低倍鏡，記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母菌菌落數(shù)。以菌落形成單位（colony-formi

5、ng units，CFU）表示。 選取菌落數(shù)在 10 CFU150 CFU的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計(jì)數(shù)霉菌和酵母。霉菌蔓延生長覆蓋整個(gè)平板的可記錄為菌落蔓延。 9 三：結(jié)果與報(bào)告結(jié)果（1） 計(jì)算同一稀釋度的兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。 （2）若有兩個(gè)稀釋度平板上菌落數(shù)均在10 CFU150 CFU之間，則按照GB 4789.2的相應(yīng)規(guī)定進(jìn)行計(jì)算。（3）若所有平板上菌落數(shù)均大于 150 CFU，則對稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，其他平板可 記錄為多不可計(jì)，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。（4）若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 10 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以

6、稀釋倍數(shù)計(jì)算。 （5） 若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 （6）若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在10 CFU150 CFU之間，其中一部分小于10 CFU或大于150 CFU 時(shí)，則以最接近 10 CFU 或 150 CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。 10 三：結(jié)果與報(bào)告報(bào)告（1） 菌落數(shù)按“四舍五入”原則修約。菌落數(shù)在10以內(nèi)時(shí)，采用一位有效數(shù)字報(bào)告；菌落數(shù)在10100之間時(shí)，采用兩位有效數(shù)字報(bào)告。 （2）菌落數(shù)大于或等于 100 CFU 時(shí)，前第 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前 2 位數(shù)字，后面用 0 代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用 10 的指數(shù)形式來表示，此時(shí)也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。（3） 若空白對照平板上有菌落出現(xiàn)，則此次檢測結(jié)果無效。（4） 稱重取樣以 CFU/g 為單位報(bào)告，體積取樣以 CFU/mL 為單位報(bào)告，報(bào)告或分別報(bào)告霉菌和/或酵母數(shù)。 11 四：原始數(shù)據(jù)記錄表: 稀釋度稀釋度 霉菌霉菌CFU CFU均值 酵母菌酵母菌CFU CFU均