共軛亞油酸對脂多糖刺激斷奶仔豬炎性細胞因子基因表達

1、農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C共軛亞油酸對共軛亞油酸對脂多糖刺激脂多糖刺激斷奶仔斷奶仔豬炎性細胞因子基因表達的調(diào)控豬炎性細胞因子基因表達的調(diào)控賴長華賴長華 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心2005.052005.05農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C報告內(nèi)容報告內(nèi)容.研究背景研究背景.試驗?zāi)康脑囼災(zāi)康?材料與方法材料與方法.試驗試驗結(jié)果結(jié)果.結(jié)論結(jié)論農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C炎性細胞因子炎性細胞因子炎性細胞因子炎性細胞因子：IL-1、IL-6

2、 和 TNF- 可介導(dǎo)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，如發(fā)燒、食欲減退、降解代謝加強、合成代謝減弱但肝臟急相期蛋白合成增多 適量產(chǎn)生：有利于機體抵御感染 過量產(chǎn)生：對機體造成不同程度的損傷 農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I Cv 特殊的結(jié)構(gòu)特殊的結(jié)構(gòu) v 廣泛的生物學(xué)功能廣泛的生物學(xué)功能共軛亞油酸（共軛亞油酸（CLACLA）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I Cv 對實驗動物或人類的研究證明，CLA抑制腫瘤等炎性疾病的發(fā)生v 降低體脂沉積v 增強免疫功能 v 免疫應(yīng)激調(diào)控共軛亞油酸的研究現(xiàn)狀共軛亞油酸的研究現(xiàn)狀農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料

3、工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I Cv 核受體核受體途徑途徑 過氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR） 防止黏膜炎癥 調(diào)控細胞因子的產(chǎn)生共軛亞油酸的調(diào)控機理共軛亞油酸的調(diào)控機理農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C核受體途徑CLA？PP農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C試驗?zāi)康脑囼災(zāi)康?通過給斷奶仔豬注射大腸桿菌脂多糖（LPS）造成急性炎癥反應(yīng)狀態(tài)，探討CLA對LPS刺激仔豬炎性細胞因子的影響及其調(diào)控機理農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C 動物試驗動物試驗 選擇28 d 斷奶雜交仔

4、豬24頭，采用22因子試驗設(shè)計分為4個處理（每處理6個重復(fù)），即日糧類型（2大豆油或2CLA）和免疫應(yīng)激（注射LPS或生理鹽水）。第14和21天腹膜注射LPS（100 ug/kg BW）和等量生理鹽水，并于注射后3 h 采血分離血漿，第29 d 屠宰仔豬取脾臟和胸腺，用于提取總RNA 材料與方法材料與方法農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C表表1 1 基礎(chǔ)日糧配方與營養(yǎng)成分基礎(chǔ)日糧配方與營養(yǎng)成分原料 營養(yǎng)成分 玉米 55.7 消化能，Mcal/kg 3.34 豆粕 23.0 粗蛋白， 21.11 玉米蛋白粉 10.0 鈣， 0.81 乳清粉 5.0 總磷，

5、0.34 大豆油 2.0 賴氨酸， 1.37 磷酸氫鈣 2.3 蛋胱氨酸， 0.79 石粉 0.5 食鹽 0.3 賴氨酸 0.2 1預(yù)混料 1.0注：試驗日糧中，CLA等量替代大豆油農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C體外試驗體外試驗 分離仔豬外周血淋巴細胞，用RPMI1640培養(yǎng)液制成懸浮液，培養(yǎng)于24孔細胞培養(yǎng)板，分別加入亞油酸（LA，對照）、c9, t11-CLA、t10, c12-CLA以及二者的1:1混合物，脂肪酸在培養(yǎng)體系中的終濃度為100 mol/L 將細胞置于5CO2、37下培養(yǎng)24 h，然后加入LPS（終濃度10 g/mL），3 h后取細胞

6、上清-20C凍存。細胞沉淀物用于提取核蛋白和總RNA 材料與方法材料與方法農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C測定指標及方法測定指標及方法 血漿及細胞上清液細胞因子的含量 淋巴細胞PPAR 的活性 脾臟與胸腺細胞因子和淋巴細胞PPAR mRNA相對含量 統(tǒng)計方法統(tǒng)計方法 用SAS軟件的GLM模型進行兩因子方差分析。模型主效應(yīng)包括日糧類型和免疫刺激，以及二者的互作效應(yīng)材料與方法材料與方法農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C試驗結(jié)果試驗結(jié)果農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C表表2 CLA2

7、 CLA與與LPSLPS刺激對血漿細胞因子（刺激對血漿細胞因子（pg/mLpg/mL）的影響）的影響指標 LPS LPS P值大豆油CLA大豆油CLASEM日糧LPS互作d 14 IL-1 89 55 146 97 11.90.01 0.01 NS IL-6 70 6267436106 76.30.01 0.01 0.01 TNF- 12811471556329135.00.04 0.010.05 IL-1052.369.5182.3264.2 25.60.010.010.01d 21 IL-1 59 49 85 61 14.50.05 0.01NS IL-6 46 4331832605 37

8、.10.01 0.010.01 TNF- 11210958404688130.50.01 0.010.01 IL-1050.156.3168.5235.9 21.40.020.010.05農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C表表3 CLA3 CLA與與LPSLPS刺激對脾臟炎性細胞因子和刺激對脾臟炎性細胞因子和PPARPPAR mRNA mRNA表達的影響表達的影響指標-LPS+LPSSEM P-值大豆油CLA大豆油CLA日糧LPS互作 IL-1 2.732.4634.7627.297.850.630.010.65 IL-61.841.793.833.790

9、.010.010.010.06 TNF- 2.042.043.853.800.020.040.010.07 IL-101.231.6511.3620.103.54 0.05 0.01 0.05PPAR 0.130.350.300.610.10 0.02 0.05 0.67農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C表表4 CLA4 CLA與與LPSLPS刺激對胸腺炎性細胞因子和刺激對胸腺炎性細胞因子和PPAR mRNAPPAR mRNA表達的影響表達的影響指標-LPS+LPSSEM P-值大豆油CLA大豆油CLA日糧LPS互作 IL-1 0.210.160.460.

10、420.020.100.010.92 IL-6 18.2513.82251.50199.4312.700.040.010.08 TNF- 13.454.6582.8645.978.430.010.010.09 IL-100.350.545.4610.242.120.050.010.05PPAR 0.120.280.240.490.070.010.030.58農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C圖圖1 c9,t11-CLA1 c9,t11-CLA與與t10,c12-CLAt10,c12-CLA對外周血淋巴細對外周血淋巴細胞炎性細胞因子產(chǎn)生量的影響胞炎性細胞因子

11、產(chǎn)生量的影響0 02002004004006006008008001000100012001200IL-1IL-1IL-6IL-6TNF-aTNF-a亞油酸亞油酸c9,t11-CLAc9,t11-CLAt10,c12-CLAt10,c12-CLA1:1混合物1:1混合物(pg/mL)abcbcabcbcabcbc農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C圖圖2 c9,t11-CLA2 c9,t11-CLA與與t10,c12-CLAt10,c12-CLA對外周血淋巴細對外周血淋巴細胞炎性細胞因子胞炎性細胞因子mRNAmRNA表達量的影響表達量的影響0 00.50.5

12、1 11.51.52 22.52.53 33.53.54 44.54.5IL-1IL-1IL-6IL-6TNF-aTNF-a亞油酸亞油酸c9,t11-CLAc9,t11-CLAt10,c12-CLAt10,c12-CLA1:1混合物1:1混合物baabaaababaabab農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C圖圖3 c9,t11-CLA3 c9,t11-CLA與與t10,c12-CLAt10,c12-CLA對外周血淋巴細對外周血淋巴細胞胞1515d-PGJd-PGJ2 2的影響的影響0 020020040040060060080080010001000120

13、01200脂肪酸脂肪酸亞油酸亞油酸c9,t11-CLAc9,t11-CLAt10,c12-CLAt10,c12-CLA1:1混合物1:1混合物aabb15d-PGJ2 (pg/mL）農(nóng)農(nóng) 業(yè)業(yè) 部部 飼飼 料料 工工 業(yè)業(yè) 中中 心心 M A F I C0 00.050.050.10.10.150.150.20.20.250.250.30.30.350.35PPARmRNAPPARmRNAPPAR活性PPAR活性亞油酸亞油酸c9,t11-CLAc9,t11-CLAt10,c12-CLAt10,c12-CLA1:1混合物1:1混合物圖圖4 c9,t11-CLA4 c9,t11-CLA與與t10,c12-CLAt10,c12-CLA對外周血淋巴細胞對外周血淋巴細胞PPARmRNAPPARmRNA表達量及活性的影響表達量及活性的影響abcbabcbc農(nóng)農(nóng)