動物細胞融合與單克隆抗體上課用

1、2.2.2 動物細胞融合與單克隆抗體動物細胞融合與單克隆抗體溫故而知新溫故而知新植物細胞雜交植物細胞雜交（馬鈴薯番茄）（馬鈴薯番茄）融合融合的原的原生質(zhì)生質(zhì)體體ABAB再再生生出出細細胞胞壁壁植物細胞的融合植物細胞的融合雜雜種種細細胞胞AB雜雜種種植植株株脫脫分分化化愈愈傷傷組組織織再再分分化化植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)原生質(zhì)體原生質(zhì)體B原生質(zhì)體原生質(zhì)體A去去 壁壁去去 壁壁人人工工誘誘導(dǎo)導(dǎo)植物細胞植物細胞A植物細胞植物細胞B三、動物細胞融合三、動物細胞融合1.1.概念：概念： 動物細胞融合也稱細胞雜交，是指動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或兩個或多個多個動物細胞結(jié)合形成動物細胞結(jié)合形成一個一

2、個細胞的過程。細胞的過程。 融合后形成的具有兩個或多個細胞遺傳融合后形成的具有兩個或多個細胞遺傳信息的信息的單核細胞單核細胞，稱為雜交細胞。，稱為雜交細胞。2 2、動物細胞融合基本原理：、動物細胞融合基本原理：與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，與植物原生質(zhì)體融合的基本原理相同，即細即細胞膜的流動性胞膜的流動性3、誘導(dǎo)方式、誘導(dǎo)方式物理法：物理法：化學(xué)法：化學(xué)法：生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒 例如：仙臺病毒例如：仙臺病毒滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜被病毒顆粒穿通細胞膜連接細胞膜連接細胞融合，形成雜種細胞細胞融合，形成雜種細胞（細胞膜

3、具有一定的流動性）（細胞膜具有一定的流動性）生物法：生物法： 滅活的病毒滅活的病毒（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）（喪失感染性、保留抗原結(jié)構(gòu)）. .過程：過程：、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目比較項目植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合細胞融合原理細胞融合原理細胞融合的方法細胞融合的方法誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法用途用途制備單克隆抗體制備單克隆抗體 獲得獲得雜種植株雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞的全能性細胞的全能性去除細胞壁去除細胞壁后誘導(dǎo)后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合原生質(zhì)體融合使細胞分散后誘導(dǎo)使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融

4、合細胞融合物理（離心、振蕩、物理（離心、振蕩、電刺激）電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒、動物細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴、動物細胞融合技術(shù)的發(fā)展簡史告訴我們：我們：科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的科學(xué)技術(shù)是不斷發(fā)展的。那么，。那么，實現(xiàn)動物細胞融合有什么實現(xiàn)動物細胞融合有什么意義意義呢？呢？打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能；打破生殖隔離，使遠緣雜交成為可能；廣泛應(yīng)用多個學(xué)科領(lǐng)域；廣泛應(yīng)用多個學(xué)科領(lǐng)域；重要用途：重要用途：四、單克隆抗體四、單克隆抗體自主閱讀自主閱讀P52：傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么

5、？B B淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。淋巴細胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生特異性抗體。動物在免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種動物在免疫反應(yīng)過程中，體內(nèi)產(chǎn)生特異性抗體種類可達百萬種以上，每種抗體對特定的抗原具有特異性類可達百萬種以上，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。免疫作用。但但每一個淋巴細胞只分泌一種特異性抗體每一個淋巴細胞只分泌一種特異性抗體。、在體外，、在體外，一個淋巴細胞是不可能無限增殖的。一個淋巴細胞是不可能無限增殖的。產(chǎn)量低、純度低；產(chǎn)量低、純度低；而且制備抗體特異性差。而且制備抗體特異性差。分析：分析： B B淋巴細胞與抗體的關(guān)系淋巴細胞與抗體的關(guān)系、單克隆抗體、

6、單克隆抗體McAb（概念）（概念） 由單個由單個B B淋巴細胞經(jīng)過淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖無性繁殖（克?。?，形（克?。?，形成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的成基因型相同的細胞群，這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。稱為單克隆抗體。 那么，如何那么，如何大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異大量獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體性強的抗體？（即？（即單克隆抗體單克隆抗體）一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖雜種細胞雜種細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)、設(shè)計方

7、案：、設(shè)計方案：動物細胞融合動物細胞融合單克隆單克隆抗體抗體既能產(chǎn)生特異性抗既能產(chǎn)生特異性抗體，又能大量繁殖體，又能大量繁殖二、單克隆抗體抗體由什么細胞產(chǎn)生？效應(yīng)B淋巴細胞每個效應(yīng)每個效應(yīng)B細胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性細胞只分泌一種化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體強的抗體要想獲得大量的單一抗體，必須克隆單一的B淋巴細胞，形成細胞群1975，米爾斯坦和柯勒 雜交瘤技術(shù)1、原理：雜交瘤細胞具有兩個親本的特性，即能迅速大量增殖，又能足夠數(shù)量的單一抗體。2、過程B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合B-B細胞B-瘤細胞瘤-瘤細胞選擇培養(yǎng)雜交瘤細胞（ B-瘤細胞）克隆化培養(yǎng)抗體檢測雜交瘤細胞體外培養(yǎng)小鼠腹腔內(nèi)增

8、殖單克隆抗體3. 3.單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、產(chǎn)單克隆抗體的優(yōu)點：特異性強、靈敏度高、產(chǎn)量大量大 作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與作為診斷試劑：準確識別各種抗原物質(zhì)，并與特異性結(jié)合特異性結(jié)合 優(yōu)點：優(yōu)點：準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速用于用于運載藥物：制成運載藥物：制成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療疾病：主要用于癌癥治療治療疾?。褐饕糜诎┌Y治療一種誘導(dǎo)細胞融合的新方法一種誘導(dǎo)細胞融合的新方法一種新細胞一種新細胞滅活病毒滅活病毒雜交瘤細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性強、單克隆抗體特異性強、靈敏度高、產(chǎn)量大的靈敏度高

9、、產(chǎn)量大的優(yōu)勢優(yōu)勢主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、物理（離心、振動、電刺激）振動、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比植物、動物細胞融合的比較

10、較1 1、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，、科學(xué)家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓疤細胞融合的是（抗體，與骨髓疤細胞融合的是（ ） A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 B.B.沒經(jīng)過免疫的沒經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞沒經(jīng)過免疫的淋巴細胞A2.動物細胞融合的目的中最重要的是動物細胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服遠緣雜交不親和克服遠緣雜交不親和 B. 制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新品種培

11、育新品種 D.生產(chǎn)雜種細胞生產(chǎn)雜種細胞3.動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較中，正確的是（ ）誘導(dǎo)融合的方法完全相同誘導(dǎo)融合的方法完全相同 B.所用的技術(shù)手段基本相同所用的技術(shù)手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成雜種細胞都能形成雜種細胞 AD4. 單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是單克隆抗體制備過程中培育的雜交細胞是-（ ）A.由小鼠能產(chǎn)生抗體的由小鼠能產(chǎn)生抗體的B淋巴細胞與肝細胞融合淋巴細胞與肝細胞融合 B.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細胞誘導(dǎo)融合而成 C.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞與肌瘤細胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細胞與肌瘤細胞誘導(dǎo)融合而成 D.由小鼠一個由小鼠一個B淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合而成淋巴細胞與骨髓瘤細胞誘導(dǎo)融合而成 D動物細胞動物細胞融合技術(shù)融合技術(shù)B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有雜種細只有雜種細胞才能活胞才能活動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)3.3.單克隆抗體制單克隆抗體制備過程備過程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的體的B淋巴細胞淋巴細胞4 4、單克隆抗體的、單克隆抗體的特點和應(yīng)用特點和應(yīng)用與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體特異性強，特異