_安捷倫液相色譜培訓教材

1、硬件篇硬件篇 安捷倫高效液相色譜儀1200由幾部分組成，脫氣機，泵、進樣器、柱溫箱和檢測器。安捷倫1200HPLC系統(tǒng)采用積木式堆積結構，方便用戶按照自己的需要配置不同的的系統(tǒng)，整個系統(tǒng)的流路自上而下設計、連接，減小了系統(tǒng)的死體積和延遲體積。脫氣機 安捷倫1200系列在線脫氣機有，微量真空脫氣機G1379B、標準真空脫氣機G1322A。原理基本相同，就是使用半透膜管路，允許氣體分子通過，液體分子無法通過。A型用的是微滲管，B型用的是濾膜。流路A型是左進右出，而B型為下進上出，本科室使用的為A型G1322A。使用真空脫氣機可以降低噪聲，保證保留時間的重現(xiàn)性，與He脫氣相比，更方便，更節(jié)省費用。

2、泵安捷倫1200系列泵有：單元泵：G1310A、四元泵：G1311A、二元泵：G1312A、二元泵SL型：G1212B。 單獨一個泵腔泵腔無法滿足溶劑傳輸系統(tǒng)的要求：連續(xù)性、穩(wěn)定性都不符合標準，現(xiàn)在新購儀器中已很少考慮。單元泵，按溶劑的傳輸系統(tǒng)有兩種，一種是并聯(lián)柱塞泵，另一種是串連柱塞泵。并聯(lián)柱塞泵由于兩個泵的相位不同，可以補償流量脈沖，但由于單向閥的數(shù)量增多，所以容易造成泄漏，增加了維護使用的難度。串連柱塞泵左泵腔的活塞運動速度為右泵腔活塞的2倍，因此，相同時間內，左泵提供的流量為右泵的兩倍，左泵提供的溶劑一半直接供給系統(tǒng)，另一半被右泵吸入，稍后供給液相系統(tǒng)，減少了單向閥的用量，可以使用壓縮

3、因子補償。四元泵，其實就是比單元泵多了四元比例閥。由單元泵可以升級到四元泵，除了要加上四元比例閥外，還要更換主板。需要注意的是，當使用鹽溶液和有機溶劑時，建議將鹽溶液接到四元比例閥下面的通道上，有機溶劑接到上面的通道上。如果經(jīng)常使用鹽溶液，建議定期用水沖洗所有的通道以去除閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。二元泵，有兩個泵頭，特點是高壓混合，無需脫氣；對于有強紫外吸收的流動相，使用靜態(tài)混合器可以降低基線噪聲；可以選擇溶劑切換閥自動進行溶劑切換；對于高鹽流動相，可選擇泵頭密封墊清洗裝置。所以脫氣機不是標準配置，但增加真空脫氣機，流量范圍可以從0.55ml/min擴展至0.055ml/min；加入靜態(tài)混合器，

4、使流動相混合更加均勻；如果配置溶劑切換閥，則兩個泵頭可分別控制兩種溶劑，類似四元比例閥，但并不完全一樣，只能同時混合兩種溶劑，不可實現(xiàn)四種溶劑的同時使用。 二元泵為高壓泵，為后混合式，精度更高，而且由于為高壓混合，產生的氣泡也更少，所以價格也比四元泵貴得多。四元泵為低壓泵，流速穩(wěn)定性相對較差，低壓混合容易產生氣泡，在實驗中常會遇到這樣的問題，多元混合中出現(xiàn)流動相不穩(wěn)定的現(xiàn)象，特別是流動相配比較低的如小于1%，其多元混合效果難以達到我們的要求，造成保留時間漂移，甚至得不到我們預期的色譜峰。明白四元泵的低壓混合的道理，實際操作中我們發(fā)現(xiàn)問題時，有助于我們對原因的分析。 必要時泵可以拆御，更換密封墊

5、及濾芯。對容易出故障部位及處理方法，比如寶石活塞桿是不能超聲的部件，泵頭密封墊要成對更換，實驗室中至少應備有一付室中至少應備有一付4號泵頭密封號泵頭密封墊，部件號為：墊，部件號為：5663-6589（用于反相色譜）；（用于反相色譜）；0905-1420（用于正相色譜）。同時實驗室應備（用于正相色譜）。同時實驗室應備有有5-10個個PTFE過濾芯，以備日常所需。判斷過濾芯，以備日常所需。判斷方法為，打開沖洗閥，以水為溶劑，流速方法為，打開沖洗閥，以水為溶劑，流速5ml/min，系統(tǒng)壓力大于，系統(tǒng)壓力大于10bar就應更換過濾白就應更換過濾白頭了。頭了。進樣器，安捷倫1200系列進樣器有：標準自動

6、進樣器G1329A、高性能進樣器G1367A、高性能進樣器SL型G1367B、手動進樣器G1328B。 自動進樣器的特殊功能，洗針功能可以把樣品殘留降低到最小限度；多次吸液用于進樣量大于100l的情況；程序進樣可以非常靈活地執(zhí)行用戶的進樣程序要求，如多種樣品自動混合，自動進樣等高級功能的自由設置，但是，由于進樣針的擴散，所以進樣量越小，受到擴散的影響也越大，所以自動混合的準確度還是難以達到容量瓶的混合方式。這在做標準由線時得注意的問題，如為定量則不推薦小樣量的混合方式。 程序進樣方式設置如下圖：對于手動進樣器，必須了解六通閥的工作原理，應特別注意的是進樣量少于定量環(huán)的50%或大于定量環(huán)的3-5

7、倍量是比較準確的，不過，大家用自動進樣器已經(jīng)習慣了，如果再用回手動進樣器會不會有些郁悶？會不會有一種坐慣了寶馬又要回到踩單車的感覺？ 柱溫箱，使用安捷倫柱溫箱可以保證柱的穩(wěn)定性，從而保證了保留時間的重現(xiàn)性。恒定的柱溫特別是日溫差大的時候更為必要。 檢測器，安捷倫1200系列檢測器有，可變波長檢測器G1314B、二極管陣列檢測器G1315B、二極管陣列檢測器SL型G1315C、示差折光檢測器G1362A、熒光檢測器G1321A。本所用的是VWD的G1314B型，DAD型及FLD的就不多說了。對VWD型檢測器應了解它的工作原理，氘燈的使用維護及更換。需要注意的是，使用中不要頻繁的開關氘燈，否則影響

8、氘燈的壽命。 可以利用診斷方式來檢測氘燈的能量，當然，發(fā)現(xiàn)氘燈能量降低時不要馬上得出氘燈應該更換的結論，這也許是流通池臟或有氣泡造成的能量降低，所以必須用診斷方式檢測流通池。診斷結果大于0.6說明流通池很干凈，小于0.2則說明流通池該清洗了。更換氘燈后要在診斷日志中填寫更換氘燈，這樣氘燈的使用時數(shù)便從零開始。 這里還有一點得注意的是流通池的后壓力非常重要，一定要使用適當出口連接管，出口管線要使用專用廢液管為系統(tǒng)提供適當?shù)暮髩海坏盟阶詫U液管截短，以防氣泡進入流通池。但如果壓力過高，流通池的石英窗片可能破裂。 在這里我要說的是，對安捷倫1200高效液相色譜儀正確的操作方法和定期的維護保養(yǎng)的是很

9、重要的。軟件篇軟件篇 軟件部分，這就是1200液相色譜儀的化學工作站。本所安捷倫1200高效液相色譜儀工作站軟件版本為B.02.01，現(xiàn)在新的版本為B.03-01的了，但這沒有太多的差別，新版本增加的只是一部分我們很少用到的高級功能。 在這里我就和大家一起討論一些日常使用中遇到的細節(jié)問題，也許是我們使用過程中所容易忽略也容易造成操作問題的。 軟件方面從數(shù)據(jù)采集，數(shù)據(jù)分析至報告格式及打印。 首先我們應該了解，脫機區(qū)別于聯(lián)機是不能對儀器進行控制，不能運行診斷。 數(shù)據(jù)采集中主要是分析方法和運行控制，這是我們操作中常用的。方法的的概念，方法是一個參和集，它包括分析一個樣品所需要的所有參數(shù)：數(shù)據(jù)采集參數(shù)

10、、數(shù)據(jù)分析參數(shù)及命令或宏指令等內容。方法的組成：1、方法信息；2、儀器/采集參數(shù)；3、數(shù)據(jù)分析參數(shù)；4、運行時選項表。 我想對方法的編輯大家應該都比較常用和熟悉的了，在這里我選一些也許大家不太注意的說一說吧。編輯方法儀器中，方法編輯選項里有四個可選項，1、方法信息（M）；2、儀器/采集（I）；3、數(shù)據(jù)分析（D）；4、運行時選項表（R）。首先選擇所要編輯方法哪一部分內容。需要注意的是，不選擇某一部分內容，并不意味著方法中不含有該部分內容，而僅僅意味著本次對該部分內容不進行編輯，使用原方法中設置的參數(shù)。還有，儀器參數(shù)設置四元泵的參數(shù)設置。1、停止時間：是儀器停止采集數(shù)據(jù)的時間，并不是泵停止工作的時

11、間。本例中工作站僅采集010分鐘的色譜圖，10分鐘后，不再采集數(shù)據(jù)，但泵仍然繼續(xù)工作，向系統(tǒng)提供流動相。使用自動進樣器 時一定要設置適當?shù)耐Ｖ箷r間，以保證連續(xù)進樣的要求；2、后運行時間：是指一次運行結束后，到第二次進樣前的等候時間，該時間用于系統(tǒng)為第二次進樣做好準備。例如：將不感興趣的雜質沖洗出色譜柱，或等待系統(tǒng)中的流動相真正變成下一次進樣的初始比例。做梯度洗脫時，一定要設置該數(shù)值；3、壓力限： 壓力的上下限也要合理設置。壓力上限不要高于柱子能夠承受的壓力最大值，一般比正常分析壓力高20bar左右；而壓力下限的數(shù)值一般比正常分析壓力低20bar左右；4、時間表：此處可以編輯梯度洗脫程序，規(guī)定溶

12、劑比例變化方式。要注意程序時間與停止時間和后運行時間之間的協(xié)調關系。單元泵的參數(shù)設置界面與四元泵相比少了溶劑選擇項，參數(shù)設置的要求與四元泵參數(shù)設置要求相同，只是此時只有一種溶劑可供選擇，也無法進行梯度洗脫實驗。二元泵的參數(shù)設置要求與四元泵參數(shù)設置要求相同，只是此時只有A、B兩種溶劑可供選擇。二元泵SL的參數(shù)設置可以在溶劑類型處的列表中選擇本次使用的溶劑，并寫入對溶劑描述。 系統(tǒng)將根據(jù)你所選擇的溶劑自動進行溶劑壓縮因子補償，保證流量、比例更加精確。當選擇“使用高級壓縮因子校正”選項時，將按照各個方法中泵參數(shù)部分選擇的溶劑的對應的壓縮因子來控制泵，進而保證流動相的流量和比例更加精確。有一個問題，就

13、是在數(shù)據(jù)采集完畢洗柱的時候是不用開燈的，但如果強行關燈則方法運行時會報錯，會提示儀器沒有準備就緒。怎么辦呢，在方法的運行時選項表中有“運行前命令/宏”和“運行后命令/宏”，我們可不可以在“運行前命令/宏”中設置把燈關了呢？當然可以，而且這是關燈后再洗柱方法中所必須的，但我在前面說過，先關燈，儀器會報錯，方法無法運行。其實很簡單，這是因為我們有一個細節(jié) 沒編好，在方法編輯過程中，進入儀器參數(shù)設置-檢測參數(shù)VWD設置，在右下角選“更多信息”，點擊進入后點選“特殊設置”，對“當燈關閉時可進行分析（E）”進行勾選，再在“運行前命令/宏”中輸入LAMP OFF，這樣，就可以實現(xiàn)先關燈后再運行洗柱的方法了

14、。然后在“運行后命令/宏”中設置完成后關泵或關閉閉工作站，工作站， 這就是隨你所欲啦。關泵為PUMP OFF，關閉整個系統(tǒng)為STANDBY，這里要說明的是PUMP OFF和STANDBY是有區(qū)別的，前者為泵的關閉，后者為停泵至待機狀態(tài)的。如果選BACK命令，則關閉工作站。 這是關機方法中的一個小技巧，這當然不可用在分析方法上，分析方法中前后宏命令最好慎用， 特別是在VWD設置中更不可選特殊設置中勾選“當關燈時可進行分析”，不然我們的實驗操作就沒有意義了。這是為什么，大家一想就知道啦。還有，在運行時選項表中要注意的問題是，除非有特殊要求，一般不建議選擇“保存GLP數(shù)據(jù)”、“將方法和數(shù)據(jù)保存在一起

15、”選項，GLP 那如何對它進行合理積分以得到比較準確的數(shù)據(jù)這是個關鍵，這可以從積分事件中進行設置。斜率靈敏度和峰寬的數(shù)值改動要慎重，因為選用不同數(shù)值，將影響色譜峰起止點的識別，得到不同的峰面積，進而影響到所得定量結果的準確程度。一定要保證處理同一系列數(shù)據(jù)（各個標樣數(shù)據(jù)和未知樣品數(shù)據(jù)）時， 這兩個參數(shù)值是一致的。最小峰面積和最小峰高的數(shù)值大小不會影響所得峰面積，僅僅做為是否對該色譜峰進行積分的標準。積分事件表中的積分參數(shù)并不是孤立于方法的參數(shù)，它們屬于方法的一部分內容，所以保存積分參數(shù)時應先將積分事件保存到方法中，然后再保存方法，積分參數(shù)就會被保存下來。如果自動積分 和利用積分事件表設置積分參數(shù)

16、都不能滿足用戶積分的具體要求，那么退出積分事件表，即可看到上圖所示的手動積分工具欄，你可以使用手動積分的功能進行積分條件優(yōu)化，手動積分不能被直接保存到方法中，也不建議保存手動積分參數(shù)。 校正，校正即是利用某個峰的峰高或峰面積來確定其對應組分的濃度或含量，當檢測器靈敏度針對不同的組分而變化時需要進行校正，檢測器對同一組分不同含量響應值發(fā)生變化時需要進行校正。校正分單級校正和多級校正。一、單級校正：即單點校正，單點法。僅有一個濃度的標樣，無論進樣幾針取平均值，只要濃度相同，都相當于只做一次校正。單點校正的兩種假設（1、響應曲線必須是直線；2、響應曲線必須通過原點。）都不盡合理，使得單級校正定量結果

17、不準確。但其具有簡單、快速的優(yōu)點，常適用于以下情況：1、做簡單的粗定量；2、當未知樣品的濃度小于且接近于標樣濃度時，變量定量結果較準確；3、主要用于檢出實驗，即不需要準確定量未知樣品含量， 只關心未知樣品是否達標。二、多級校正。1、對每一峰需做至少兩次校正；2、可以補償檢測器的非線性響應；3、響應曲線可以不通過原點。多級校正糾正了單級校正的缺點，可以進行準確定量。液相色譜里面常用的多級校正為五級校正（即五點法）。建立校正表，它的目的目的是為了得出含量結果。校正表建立是自動計算中必須的，標準曲線制定也必須在校正表建立上。校正表編好后，也要作為方法的一部分存入方法。同時想用批處理來處理數(shù)據(jù)時首先建

18、立校正表。至于批處理方面的應用，這是高級培訓班中的內容，在基礎培訓班中只提及一下，所以我在這里也就不不多說了。在此提醒注意的是：如果使用內標法或內標百分比法定量，一定要指定內標峰，否則化學工作站會警告內標化合物丟失，無法完成定量。最后是報告處理，工作站提供了一系列的報告格式，如簡單報告，性能報告，完整報告等，其中又分為內標法，外標法，百分比法等多 種報告格式。如果你對工作站上給出的格式不滿意，可以自定義設置報告，不過，自定義報告的設置是一個令人頭痛的問題，要想得到一個較滿意的自定義報告，需要你花不少的心神。安捷倫的色譜工作站中的報告功能確實到了人人痛罵的程度。安捷倫公司難道真的這么沒文化么？一

19、點沒考慮中國國情還一味在中國 吹捧他的的儀器，非也，這是因為安捷倫公司另有打算而已，也可以說他心太黑太狠。用過WATERS工作站么？其報告功能是不是值得稱道。特別是令正在用安捷倫的工作站的兄弟姐妹們羨慕不已吧？其實，WATERS的工作站就是安捷倫公司賣給WATERS的，奇怪吧？沒什么，這是老外玩的把戲， 安捷倫公司把儀器和軟件分開來賣，所以買了他們的儀器，還得買他們的軟件，對安捷倫來說，色譜方面的軟件分為COM軟件和STATION軟件，前者有強大的數(shù)據(jù)處理功能，后者的就是工作站，WATERS就是把買回來的COM和STATION整合在一起，明白么？所以要想擁有強大的數(shù)據(jù)處理功能就得花錢去買安捷倫

20、的COM數(shù)據(jù)處理軟件吧,不然你只好將就著用啦。 維護篇1、為什么溶劑和樣品要過濾? 溶劑和樣品過濾非常重要，它會對色譜柱、儀器起到保護作用，消除由于污染對分析結果的影響。色譜柱：由于填料顆粒很細，色譜柱內腔很小，溶劑和樣品中的細小顆粒會使色譜柱和毛細管容易堵塞。儀器：溶劑和樣品中的細小顆粒會增加進樣閥的堵塞和磨損，同時也會增加泵頭內的藍寶石活塞桿和活塞的磨損。樣品過濾頭的類型：30mm內徑：適用于大進樣量的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格,材料有纖維素,醋酸纖維,聚四氟乙烯。處理樣品體積少于50l。13mm內徑：適用于范圍廣的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格,材料為纖維素。3mm內徑：

21、適用于小進樣量的過濾，由0.2m和0.45m兩種規(guī)格。處理樣品體積為7l。濾膜類型濾膜類型：聚四氟乙烯濾膜：適用于所有溶劑，酸和鹽，并無任何可溶物。 醋酸纖維濾膜：不適用于有機溶劑，特別適用于水基溶液，推薦用于蛋白質和其相關樣品。尼龍66濾膜：適用于絕大多數(shù)有機溶劑和水溶液，可用于強酸，70%乙醇、二氯甲烷、不適用于二甲基甲酰胺。再生纖維素濾膜：具有蛋白吸收低，同樣適用水溶性樣品和有機溶劑。 2、為什么HPLC用緩沖鹽時要加在線Seal-wash選項？ HPLC用緩沖鹽時,由于泵頭內的緩沖鹽溶液存在高壓析鹽現(xiàn)象,析出的細小鹽粒非常堅硬,它附著在藍寶石活塞桿上,隨著藍寶石活塞桿的往復運動,容易產

22、生劃痕,并磨損密封墊,造成漏液等故障現(xiàn)象。在線Seal-wash選項能有效的帶走可能存在的緩沖鹽結晶。緩沖鹽的濃度在0.1mol或大于0.1mol時,必須使用該在線沖洗選項。清洗液配制: 90%水+10%異丙醇.該混合液可抑制菌類生長和減小水的表面張力。以2-3滴/min的速度虹吸流下，不能干涸。3、為什么、為什么Agilent 1200LC的流動相管路非常細的流動相管路非常細? 在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應”對分析結果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù)比在氣體中小45個數(shù)量級，液體流動相的流速也比氣相慢1-2個數(shù)量級。因此，樣品進入色譜柱后，在柱子以外的任何死體積（進樣器

23、、柱接頭、連接管、檢測器）中，樣品分子的擴散和滯留，都會引起色譜峰的展寬，而使柱效降低 。為使柱外效應減之最小，獲得理想的分析結果，Agilent 1200LC 使用加工工藝難度高的毛細管線作為流動相管路。 毛細管線分類：0.17mm內徑綠色 ;0.12mm內徑紅色。 PEEK 管線：內徑 0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。 毛細管線優(yōu)點: 柔韌性好. Agilent 公司同時備有1/16in 的粗外徑毛細管線,適用于不同習慣的用戶 ,優(yōu)點是剛性好,但柔韌性差一些。 4、流動相使用前為什么要脫氣？、流動相使用前為什么要脫氣？ 流動相使用前必須進行脫氣處理 ，以除去其中溶解的

24、氣體（如O2），以防止在洗脫過程中當流動相由色譜柱流至檢測器時，因壓力降低而產生氣泡。氣泡會增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無法分析。溶解的氧氣還會導致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用FLD，可能會造成熒光猝滅。 常用的脫氣方法比較：常用的脫氣方法比較： 氦氣脫氣法：氦氣脫氣法：利用液體中氦氣的溶解度比空氣低，連續(xù)吹氦脫氣，效果較好，但成本高。加熱回流法：加熱回流法：效果較好，但操作復雜，且有毒性揮發(fā)污染。抽真空脫氣法：抽真空脫氣法：易抽走有機相。超聲脫氣法：超聲脫氣法：流動相放在超聲波容器中，用超聲波振蕩10-15min，此法效果最差。在線真空脫氣法：Ag

25、ilent1100LC真空脫機利用膜滲透技術, 在線脫氣,智能控制,無需額外操作,成本低,脫氣效果明顯優(yōu)于以上幾種方法，并適用于多元溶劑體系。 5、如何防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞，以及堵塞后的處理？ 溶劑的質量或污染以及藻類的生長會堵塞溶劑過濾器，從而影響泵的運行，尤其水溶液或磷酸鹽緩沖液（PH=47）。以下幾種方法可以有效防止溶劑瓶內溶劑過濾器的堵塞。A：請嚴格執(zhí)行溶劑過濾。B：請勿使用多日存放的蒸餾水及磷酸鹽緩沖液 。C:在溶劑瓶內溶劑的上方小流量連續(xù)吹氬氣,以隔絕空氣。D:避免使溶劑瓶暴露在直射陽光下，盡量使用琥珀色的溶劑瓶盛放水溶液或磷酸鹽緩沖液。堵塞后的處理法方法：將過濾頭從組件中

26、取下，在濃硝酸（35%）中浸泡1h，然后用二次蒸餾水沖洗干凈并超聲處理。6、Agilent 1200LC泵如何維護？Agilent 1200LC泵給色譜柱提供穩(wěn)定、無脈動、流量準確的流動相,及時合理的維護非常重要。A：流動相使用前請必須脫氣、過濾。B：使用緩沖鹽時，要加在線Seal-wash選項。C：關機前，用 100%的水沖洗系統(tǒng)20分鐘，然后用有機溶劑沖洗系統(tǒng)10分鐘（如甲醇），然后關泵，（適于反相色譜柱）。正相色譜柱用適當?shù)娜軇_洗 D：及時更換Purge Valve內的過濾芯。（當打開Purge Valve時，壓力高于10bar，表明過濾芯已堵）。E：使用合適的密封圈。7、如何選擇合適

27、的泵頭活塞密封圈？、如何選擇合適的泵頭活塞密封圈？ 泵頭活塞的標準密封圈能適合于大多數(shù)應用，但使用正相溶劑（如正己烷），不適合使用標準活塞密封圈，特別是長時間使用時，需更換另一種不同的密封圈，我們建議使用聚四氟乙烯密封圈。*注意：聚四氟乙烯密封圈的壓力范圍為：0200bar；建議在泵的壓力限制中，將最大壓力設為200bar。8、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事項？、使用梯度比例發(fā)時要注意那些事項？ 當鹽溶液與有機溶劑溶液混合時，鹽溶液能與有機溶劑溶液完全混溶，而不會出現(xiàn)沉淀。但是在比例閥的混合點，重力作用使鹽顆粒沉淀下來，通常，閥A接水相/鹽溶液，D接有機溶劑，此法連接可有效使鹽回落到鹽溶液中，并

28、被溶解。若顛倒過來，鹽可能落在有機溶劑中，出現(xiàn)問題。強烈建議：強烈建議：當使用緩沖鹽溶液和有機溶劑時，推薦將緩沖鹽通道接在A通道上，有機溶劑通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水沖洗所有的通道，以除去閥口上可能出現(xiàn)的鹽沉淀。 9、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？、在線真空脫氣機使用要注意那些事項？ 一般來說，Agilent 1100LC 的真空脫氣機無需過多維護，只需注意幾個注意事項就可以了。A：第一次使用，要用隨儀器附帶的注射器抽滿脫氣機腔體；更換不同類型的溶劑時，要先抽空，再抽滿。B：不用的通道要充滿溶劑或密閉起來。10、更換色譜柱時要注意什么事項、更換色譜柱時要注意什么事項?在使用HPLC時,應特別注意”柱外效應柱外效應”對分析結果的影響，由于樣品分子在液體流動相中的擴散系數(shù)比在氣體中小45個數(shù)量級，