第六章加壓液相柱色譜

1、根據(jù)制備型分離中所用壓力的大小，可分為列幾種色譜方法：一、快速色譜一、快速色譜 約約2bar/30psi二、低壓液相色譜二、低壓液相色譜 20bar/300psi (1 bar 105Pa = 100kPa = 760mmHg)低、中、高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交叉，只是為了區(qū)分方便，才如此劃分。 l應(yīng)用普通柱分離法解決了所制備化合物不能用重結(jié)晶、分餾、蒸餾等方法分離純化的問題。l然而傳統(tǒng)的柱分離往往是非常耗時，當(dāng)樣品1g or 2g，一天、兩天、一星期是經(jīng)常的。同時伴隨著t增長，l造成拖尾現(xiàn)象而收率降低；l敏感的化合物易分解。 l快速柱層析（FCC）可克服普通柱分離的缺陷，它具有快

2、速省時、分離效率高、簡單易行的優(yōu)點(diǎn)，所以國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室基本都傾向于用此法。l對于0.01-10g的樣品，Rf值0.15的情況下，在10-15分鐘可快速得到分離。l該法首先由still于1978年詳細(xì)介紹，1981年獲專利保護(hù)。1、吸附劑硅膠：選用60埃，粒度為40-63um (230-400目)。過大、過小都會使分離度減少。分離度通常用保留時間r對半峰寬w/2的比值表示。 l由實(shí)驗(yàn)獲得硅膠顆粒大小與分離度以及峰寬w(w/v)相關(guān)的關(guān)系圖。l由圖可知，在給定的標(biāo)準(zhǔn)條件下，常用硅膠60（70230 mesh, 63-200um）表現(xiàn)出最差的分辨率，l而硅膠60 （4063um）的固定相可得到最好的分

3、辨率。lA 、通常以TLC層析條件為依據(jù)，對被分離成分 ，要求Rf值在0.35左右l B、選擇在TLC板上對混合成分有良好的分離。要求Rf0.15 Rf值=0.1時，上樣量小時也能分離。lC、流速：由實(shí)驗(yàn)證實(shí)，使用硅膠60 （4063um）作為固定相，流速為2in/min時，可得到最好的分辨率 l硅膠高度5-6in15cm左右，裝柱法與普通法相同。l溶劑加入后，加壓，排除空氣，并使硅膠溶劑化。 l采用40-63um硅膠為吸附劑時，柱的大小、硅較用量、加樣量、每次收集的體積見表表 l一般要求0.4-0.3Kg/cm2 即可。l約2bar/30psi.(每平方英吋磅)，l可通過控制流速 2in/m

4、in 來實(shí)現(xiàn)。與層析柱上端相接的塞子是一個壓力控制伐，可調(diào)節(jié)壓力而調(diào)節(jié)流速 如圖所示?？焖僦V的條件與步驟：l（1）選用對欲分離成分在TLC板上有較好的分離效能的洗脫劑，Rf值0.35；Rf0.15l（2）選擇合適的層析柱，內(nèi)裝粒度40-63um（230-400目）的硅膠，高度56inch，l（3）加入洗脫劑，在壓力下快速將硅膠中空氣排除。l（4）上樣后，加洗脫劑洗脫，控制(壓力)流速2.0in/min （約5cm/min），l以上是快速柱色譜的必要條件 （The crucial for successful separation by this method）l（5）一般的樣品在15min即可分離出。l對于光學(xué)異構(gòu)體1和2的分離，選擇5的乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑，Rf值分別為0.35和0.24，Rf0.09，1g的1與2的混合物，用直徑的40mm層析柱，65ml為一個流分，在7分鐘內(nèi)，可迅速分離。洗脫劑總體積為500ml.Bu3SnOHBuBu3SnBuOH12l1、快速干柱色譜 2、反向快速干柱色譜l（化學(xué)鍵合相填充柱） l本法是用直徑、高度不同的玻璃柱，二端制成螺紋接口。內(nèi)裝粒度較小填充劑，配成一定機(jī)械附件，用含氟塑料細(xì)管相連，使操作半自動化。l它不需要HPLC那樣的高精密度輸液泵(20bar/300psi l