生物選修一精華總結(jié)版

1、1、 微生物1. 培養(yǎng)基1.1成分培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括 水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、生長因子1.1.1碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機(jī)碳源（自養(yǎng)）；糖類、石油、生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。1.1.2氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3-、NH4+（無機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。1.1.3培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌是需要

2、將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件1.2 分類1.2.1按照物理性質(zhì) 可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。1.2.2按照用途 可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。（如加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌，利用伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌）1.2.3人工

3、合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基1.3 制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.3.1配方 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂1.3.2操作 計(jì)算，稱量，融化，滅菌，倒平板稱量時(shí)，牛肉膏蛋白胨都易吸潮，稱量要迅速融化加瓊脂時(shí)要不斷攪拌，防止脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂滅菌時(shí)，裝有培養(yǎng)基的錐形瓶要用高壓蒸汽滅菌法，培養(yǎng)皿要用干熱滅菌法平板冷凝后需要倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，防止皿蓋上冷凝的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。（微生物培養(yǎng)的時(shí)候也需要倒置，另一個(gè)原因：由于重力的作用使培養(yǎng)基表面及次層能富集微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，利于微生物生長。）2 滅菌與消毒2.1消毒 較為溫和的理化方法，僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分有害微生

4、物。包括：煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑消毒（如酒精、氯氣、石炭酸等）、紫外線消毒法2.2 強(qiáng)烈理化因素，殺死物體內(nèi)外所有微生物，包括芽孢和孢子。包括：灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。2.3 滅菌 接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；（防止x的微生物污染培養(yǎng)基） 玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱 ； 培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋 。3 純化微生物的接種方法3.1平板劃線法（適用好氧菌）和稀釋涂布平板法（適用好氧菌以及兼性厭氧菌）。3.2平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌

5、種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。3.2.1操作的第一步以、每次劃線之前、劃線操作結(jié)束時(shí)均需要灼燒接種環(huán)的目的操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。3.2.3在灼燒接種環(huán)之后，要等其冷卻后再進(jìn)行劃

6、線，以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種3.2.4 最后一區(qū)不能與第一區(qū)相連，劃線力度要適中。3.3稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。3.4用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。4統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 4.1測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。4.2釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)（可以區(qū)分活死菌）4.2.1為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置32個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。4.2.2每

7、克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M 其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)菌種保存斜面保藏 4甘油管藏 204.3顯微鏡直接計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)（不能區(qū)分活死菌）利用特定的細(xì)菌計(jì)數(shù)板或者血細(xì)胞計(jì)數(shù)板2 土壤中分解尿素與纖維素的細(xì)菌的分離 2.1 原理 2.1.1細(xì)菌之所以能分解尿素CO(NH2)2，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕?將尿素分解為CO2,NH32.1.2土壤中的細(xì)菌之所以能分解纖維素，是因?yàn)樗麄兡芎铣衫w維素酶，纖維素酶是一種復(fù)合酶，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。（棉花是自然

8、界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物）2.2 選擇培養(yǎng)基 以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，富含纖維素的選擇培養(yǎng)基2.3鑒別方法 2.3.1在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，分解產(chǎn)生氨氣，指示劑變紅2.3.2在培養(yǎng)基中在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。2、 發(fā)酵1. 果酒、果醋1.1發(fā)酵：通過微生物技術(shù)的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。1.1.1 有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵 谷氨酸發(fā)酵 無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵 乳酸發(fā)酵 1.2 酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌 酵母菌的生殖方式：出芽生殖

9、(主要) 分裂生殖 孢子生殖1.2.1 在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。 C6H12O66O26CO26H2O在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。 C6H12O62C2H2OH2CO21.2.2 酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18-25 1.2.3在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧、呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。1.3醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂1.3.1當(dāng)氧氣

10、、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?2C2H2OH4O2CH3COOH6H2O1.3.2控制發(fā)酵條件的作用醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。醋酸菌最適生長溫度為3035，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。1.4實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄沖洗榨汁酒精發(fā)酵果酒（醋酸發(fā)酵果醋） 新鮮葡萄除去枝梗，沖洗以除去灰塵為目的，防止洗去野生酵母菌。1.2酒精檢驗(yàn)：重鉻酸鉀。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2L，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/

11、L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色1.5實(shí)驗(yàn)裝置1.5.1充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧/空氣。1.5.2葡萄汁裝入發(fā)酵瓶后要留有1/3的空間，目的時(shí)先讓酵母菌進(jìn)行有氧呼吸快速繁殖，耗盡氧氣后再進(jìn)行酒精發(fā)酵，防止發(fā)酵過程中產(chǎn)生CO2造成發(fā)酵液溢出。2. 腐乳2.1參與微生物多種微生物參與了豆

12、腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是孢子生殖。2.2原理2.2.1毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。2.2.2毛霉的生長：條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的控制在1518，并保持一定的濕度。（溫度過低不利于毛霉生長，溫度高時(shí)菌絲易老化死亡，影響腐乳品質(zhì)）2.2.3來源：1.來自空氣中的毛霉孢子 2. 直接接種優(yōu)良毛霉菌種2.3實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長出毛霉加鹽腌制加鹵湯裝瓶密封腌制2.4實(shí)驗(yàn)材料 2.4.1豆腐的含水量為70左右，水分過多則腐乳不易成

13、形；過低，不利于毛霉生長。2.4.2 加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地?cái)[放在瓶中，同時(shí)逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。2.4.3 用鹽腌制時(shí)，注意控制鹽的用量（毛胚：食鹽5：1）：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會(huì)影響腐乳的口味2.4.4食鹽的作用：1.抑制微生物的生長，避免腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛3.調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌絲上的蛋白酶。2.4.5鹵湯：鹵湯、香辛料調(diào)味、殺菌防腐。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。2.4.6酒的作用：1.防止雜菌污染2.與有機(jī)酸

14、結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)味3.酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。2.5防止雜菌污染：用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。3. 泡菜3.1參與微生物及原理3.1.1 制作泡菜所用微生物是乳酸菌 ，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。在無氧條件下，降糖分解為乳酸 。分裂方式是二分裂。反應(yīng)式為：C6H12O62C3H6O3+能量。3.1.2 含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗

15、生素殺死乳酸菌。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。3.1.3 發(fā)酵溫度在18-20，過高其他雜菌活動(dòng)能力高，過低不利于乳酸菌代謝。3.2實(shí)驗(yàn)材料 3.2.1選用新鮮的蔬菜，若放置時(shí)間過長，蔬菜中的亞硝酸鹽易被還原為亞硝酸鹽。清水與鹽的質(zhì)量比是4：1。鹽水要煮沸后冷卻，煮沸的作用除去水中的氧氣殺滅水中的其他微生物。3.2.2泡菜壇壇蓋沿的水槽內(nèi)注滿水，保證乳酸菌發(fā)酵所需要的無氧環(huán)境。而且，在發(fā)酵過程中要經(jīng)常補(bǔ)水。3.3 發(fā)酵中的各類曲線 a. 有氧氣，乳酸菌活動(dòng)受到抑制b. 乳酸菌含量達(dá)到最大，抑制其他菌種活性c. 乳酸持續(xù)累積，抑制自身活性乳酸菌含量 bc a.有氧氣

16、，乳酸菌活動(dòng)受到抑制a發(fā)酵時(shí)間（d） 一般在腌制 10 天后亞硝酸鹽含量開 始降低，故在10天之后食用最好 pH持續(xù)下降10乳酸含量發(fā)酵時(shí)間（d）3.4測定亞硝酸鹽含量在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與 N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較（比色法），估算泡菜中亞硝酸鹽含量。三、植物組織培養(yǎng)3.1植物組織培養(yǎng)技術(shù)3.1.1原理 植物細(xì)胞的全能性。具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)間和空間條件下，通過基因的選擇

17、性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。細(xì)胞分化使細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率。3.1.2 基本過程 外植體愈傷組織根、芽植物體離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過細(xì)胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過程叫做再分化。3.1.3應(yīng)用實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物新品種。3.2 菊花的植物組織培養(yǎng)3.2.1 材料菊花組

18、織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。3.2.2培養(yǎng)條件一般將pH控制在5.8左右，溫度控制在1822，并且每日用日光燈照射12h 。3.2.3 培養(yǎng)基3.2.3.1 MS固體培養(yǎng)基：大量元素、微量元素和有機(jī)物（包括細(xì)胞分裂素與生長素）。（在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素，原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易）。3.2.3.2 微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。3.2.4外植體的消毒 3.2.4.1外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。

19、3.2.4.2菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動(dòng)23次，持續(xù)67s，立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中12min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。3.2.4.3對外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種78個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。3.2.4.4外植體在培養(yǎng)過程

20、中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。3.2.5 移植栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后先將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培3.2 月季的花藥培養(yǎng)3.2.1材料 完全未開放的花蕾，處于單核靠邊期的花粉。細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高3.2.2 鏡檢 確定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色3.2.3 誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體植株產(chǎn)生花粉植株的兩種

21、途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑，一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。3.2.4 培養(yǎng)條件 培養(yǎng)溫度控制在25左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般經(jīng)過2030天培養(yǎng)后,會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂,長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。3.2.5

22、比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類型細(xì)胞來源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向根尖分生組織受精卵正方形無液泡緊密分化成多種細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個(gè)體相同點(diǎn)都通過有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖3.2.6 生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素使用的先后順序、用量的比例影響使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果先生長素，后細(xì)胞分裂素有利于分裂但不分化先細(xì)胞分裂素，后生長素細(xì)胞既分裂也分化同時(shí)使用分化頻率提高生長素 細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果比值高時(shí)促根分化，抑芽形成比值低時(shí)促芽分化，抑根形成比值適中促進(jìn)愈傷組織生長 3、 植物有效成分的提取3.1植物芳香油的提取3.1.1 芳香油的提取方法：蒸餾、壓榨、萃取

23、。3.1.2 芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以萜類化合物及其衍生物為主。3.1.3 水蒸氣蒸餾法3.1.3.1原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。3.1.3.2方法： 水中蒸餾：原料放在沸水中加熱蒸餾。水上蒸餾：原料隔放在沸水上加熱蒸餾。水汽蒸餾：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸餾。3.1.3.3不足：有些原料不適宜于水中蒸餾，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。3.1.3.4蒸餾裝置鐵架臺(tái)、酒精燈、石棉網(wǎng)、蒸餾瓶、橡膠塞、蒸餾頭、溫度計(jì)、直型冷凝管、接液管、錐形瓶，橡皮管。所有儀器必須事先干燥，保證無水安裝儀器一般都按照自下而上、從左到右的順序。拆卸儀器

24、的順序與安裝時(shí)相反。具體安裝順序和方法如下。（1）固定熱源酒精燈。（2）固定蒸餾瓶，并且保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺(tái)的水平面垂直。（3）安裝蒸餾頭，使蒸餾頭的橫截面與鐵架臺(tái)平行。（4）連接冷凝管。保證上端出水口向上，通過橡皮管與水池相連；下端進(jìn)水口向下，通過橡皮管與水龍頭相連。（5）連接接液管（或稱尾接管）。（6）將接收瓶瓶口對準(zhǔn)尾接管的出口。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接受器，接收瓶應(yīng)在實(shí)驗(yàn)前稱重，并做好記錄。（7）將溫度計(jì)固定在蒸餾頭上，使溫度計(jì)水銀球的上限與蒸餾頭側(cè)管的下限處在同一水平線上。（8）蒸餾裝置安裝完畢后，在蒸餾瓶中加幾粒沸石，防止液體過度沸騰。在整個(gè)蒸餾過程中，應(yīng)保證溫度計(jì)的水

25、銀球上常有因冷凝作用而形成的液滴。控制蒸餾的時(shí)間和速度，通常以每秒12滴為宜。蒸餾完畢，應(yīng)先撤出熱源，然后停止通水，最后拆卸蒸餾裝置。3.1.4 壓榨法3.1.4.1原理：通過機(jī)械壓力將芳香油從果皮中分離出來3.1.4.2方法:石灰水浸泡漂洗壓榨、過濾、靜置再次過濾3.1.4.3不足：分離困難，出油率低3.1.5萃取法3.1.5.1原理：芳香油易溶于有機(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。3.1.5.2方法：原料浸泡在溶劑中得到浸泡液有機(jī)溶劑揮發(fā)芳香油。3.1.5.3不足：有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì) 3.2玫瑰精油的提取3.2.1 試劑目的 0.1g/mL氯化鈉溶液：促使

26、油水混合物（乳濁液）中油和水的分離。無水硫酸鈉：吸收油層中的水分。3.2.2實(shí)驗(yàn)步驟采集玫瑰花：采集盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。裝入蒸餾原料：稱取50g玫瑰花放入蒸餾瓶，添加200mL蒸餾水。4：1安裝蒸餾裝置：按照從左向右、自下到上次序安裝水蒸氣蒸餾裝置。加熱蒸餾：控制蒸餾時(shí)間和速度（12滴/秒），獲得乳白色乳濁液；拆卸裝置。分離油層：向乳濁液加入NaCl溶液后，利用分液漏斗分離出上面的油層。除去水分：向油層中加入無水硫酸鈉，24h后過濾，得到玫瑰油。3.2.3注意事項(xiàng)：蒸餾時(shí)間不能過短，溫度不能過高。3.3 橘皮精油的提取3.3.1橘皮精油的主要成分：檸檬烯，主要分布在橘皮

27、中。3.3.2試劑目的 石灰水：防止壓榨時(shí)滑脫，提高出油率，降低壓榨液黏稠度，過濾不堵塞篩眼。小蘇打、硫酸鈉：促進(jìn)油和水的分離（用量分別為橘皮質(zhì)量的0.25和5）。3.3.3實(shí)驗(yàn)步驟橘皮的處理：將新鮮橘皮用清水清洗瀝干。石灰水浸泡：用78石灰水浸泡橘皮24h。清水漂洗：浸泡好的橘皮用流水徹底漂洗干凈，瀝干。粉碎和壓榨：將橘皮粉碎，加入小蘇打和硫酸鈉后，用壓榨機(jī)壓榨得到壓榨液。過濾壓榨液：用布袋過濾，濾液再高速離心處理，分離出上層橘皮油。靜置處理：將橘皮油在510冰箱中靜置57d，分離出上層澄清橘皮油。再次過濾：將下層橘皮油用濾紙過濾，濾液與上層橘皮油合并，得到橘皮精油。3.3.4 靜置處理目的

28、：除去果蠟和水分。3.4 胡蘿卜素的提取3.4.1胡蘿卜素性質(zhì)：橘黃色結(jié)晶，化不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有機(jī)溶劑。依據(jù)碳碳雙鍵的數(shù)目劃分為、 三類。其中最主要的組成成分為-胡蘿卜素。3.4.2 提取 胡蘿卜素的方法主要有三種：從植物中提取從大面積養(yǎng)殖的巖藻中獲得利用微生物的發(fā)酵生產(chǎn)3.4.3萃取劑的選擇（影響萃取的主要因素）水溶性的：乙醇、丙酮 水不溶性的：石油醚、乙酸乙酯、 乙醚、苯、四氯化碳等（石油醚沸點(diǎn)最高最合適）選擇：具有較高的沸點(diǎn)，能夠充分溶解胡蘿卜素，并且不與水混溶。3.4.4 實(shí)驗(yàn)步驟 粉碎干燥萃取過濾濃縮粉碎：使原料與有機(jī)溶劑充分接觸，增大溶解度。干燥：脫水溫度太高，

29、干燥時(shí)間太長會(huì)導(dǎo)致胡蘿卜素分解。3.4.5裝置的設(shè)計(jì)萃取過程應(yīng)該避免明火加熱，采用水浴加熱，這是因?yàn)橛袡C(jī)溶劑都是易燃物，直接使用明火加熱容易引起燃燒爆炸。為了防止加熱時(shí)有機(jī)溶劑揮發(fā)，還要在加熱瓶口安裝回流冷凝裝置。萃取液的濃縮可直接使用蒸餾裝置。在濃縮之前，還要進(jìn)行過濾，除去萃取液中的不溶物。3.4.6鑒定：紙層析法濾紙：1830基線：濾紙下端距底邊2處做一基線，在基線上取A、B、C、D四點(diǎn)。點(diǎn)樣：用最細(xì)的注射器針頭（毛細(xì)吸管）吸取樣品進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣應(yīng)該快速細(xì)致，在基線上形成直徑左右的圓點(diǎn)，每次點(diǎn)樣后，可用吹風(fēng)機(jī)將溶劑吹干，注意保持濾紙干燥。等濾紙上的點(diǎn)樣液自然揮發(fā)干后，將濾紙卷成圓筒狀，至于

30、裝有深的石油醚的密封玻璃瓶中。等各種色素完全分開后，觀察標(biāo)準(zhǔn)樣品中位于展開劑前沿的胡蘿卜素層析帶。4、 酶、DNA、細(xì)胞固化4.1 酶4.1.1 果膠酶4.1.1.1 果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要成分之一，不溶于水4.1.1.2果膠酶不特指某一種，是一類酶的統(tǒng)稱，包括多聚半乳糖醛酸酶，果膠分解酶和果膠酯酶4.1.1.3果膠酶的主要作用是分解果膠變成可溶性的半乳糖醛酸，從而使果汁變得澄清，提升水果的出汁率4.1.1.4探究果膠酶活性 因素： T、pH、酶抑制劑單一變量原則分別預(yù)熱、預(yù)pH處理，再混合最適用量：增加酶用量，直至果汁量不再 增加。最適用量與T、pH有關(guān)。4.1.2 加酶洗衣粉4.1.