實驗五微生物的大小2ppt課件

1、實驗五實驗五 大腸桿菌生長曲線的大腸桿菌生長曲線的測定、微生物大小及數(shù)量測定測定、微生物大小及數(shù)量測定了解光電比濁計數(shù)法的原理。了解光電比濁計數(shù)法的原理。 學習、掌握光電比濁計數(shù)的操作方法。學習、掌握光電比濁計數(shù)的操作方法。經(jīng)過細菌數(shù)量的丈量了解大腸桿菌的生物經(jīng)過細菌數(shù)量的丈量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長曲線。特征和規(guī)律，繪制生長曲線。 實驗實驗( (一一) ) 大腸桿菌生長曲線的測定大腸桿菌生長曲線的測定一、實驗目的一、實驗目的生長曲線生長曲線 將少量純種單細胞微生物接種到將少量純種單細胞微生物接種到定量的液體培育基中，定時取樣測定定量的液體培育基中，定時取樣測定細胞數(shù)量，以培育時

2、間為橫坐標，以細胞數(shù)量，以培育時間為橫坐標，以菌數(shù)為縱坐標作圖，得到一條反映單菌數(shù)為縱坐標作圖，得到一條反映單細胞微生物在整個培育期間菌數(shù)變化細胞微生物在整個培育期間菌數(shù)變化規(guī)律的曲線。規(guī)律的曲線。二、實驗原理二、實驗原理一個典型的生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、一個典型的生長曲線分為延緩期、對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個時期穩(wěn)定期和衰亡期四個時期稀釋平板計數(shù)法稀釋平板計數(shù)法對樣品稀釋培育，據(jù)構成的菌落數(shù)計數(shù)。對樣品稀釋培育，據(jù)構成的菌落數(shù)計數(shù)。優(yōu)點：活菌計數(shù)方法，對設備要求不高。優(yōu)點：活菌計數(shù)方法，對設備要求不高。缺陷：操作復雜。缺陷：操作復雜。顯微鏡直接計數(shù)法顯微鏡直接計數(shù)法運用血球計數(shù)板在顯微鏡

3、下直接計數(shù)。運用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計數(shù)。優(yōu)點：操作簡便，計數(shù)直觀。優(yōu)點：操作簡便，計數(shù)直觀。缺陷：計數(shù)結果為活細菌和死菌體的總和。缺陷：計數(shù)結果為活細菌和死菌體的總和。光電比濁法光電比濁法光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細光電比濁法是利用在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比的原理。當細菌細胞在胞濃度與透光度成反比的原理。當細菌細胞在溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計中溶液中數(shù)量越多，濁度越大，在光電比色計中測定時所吸收的光線越多。測定時所吸收的光線越多。優(yōu)點：簡便快速，適宜于自動控制。優(yōu)點：簡便快速，適宜于自動控制。 缺陷：測定結果受培育液成分影響；某些樣品缺陷：測定結

4、果受培育液成分影響；某些樣品 樣品不適宜用此法。樣品不適宜用此法。 菌種菌種 培育不同時段的大腸桿菌。培育不同時段的大腸桿菌。儀器或其他器具儀器或其他器具 分光光度計，比色皿等。分光光度計，比色皿等。三、實驗器材三、實驗器材開電源，儀器預熱開電源，儀器預熱20 min20 min，將波長調(diào)至，將波長調(diào)至600 600 nmnm處。處。翻開樣品室，將擋光體插入比色皿架，將翻開樣品室，將擋光體插入比色皿架，將其推或拉入光路。其推或拉入光路。蓋好樣品室蓋，在蓋好樣品室蓋，在T MODET MODE下，按下，按0%T0%T鍵調(diào)零鍵調(diào)零透射比。透射比。取出擋光體，按取出擋光體，按100%T/OA100%

5、T/OA鍵調(diào)鍵調(diào)100%100%透射比。透射比。四、實驗步驟四、實驗步驟1.1.樣品測試前的調(diào)試樣品測試前的調(diào)試2.2.樣品測定樣品測定將參比溶液未接種的將參比溶液未接種的LBLB液體培育基以及液體培育基以及被測溶液倒入比色皿中。被測溶液倒入比色皿中。翻開樣品室蓋，將參比溶液放在樣品架的第翻開樣品室蓋，將參比溶液放在樣品架的第一個槽位中，將被測溶液依次放入其它槽位。一個槽位中，將被測溶液依次放入其它槽位。將參比溶液推入光路，按將參比溶液推入光路，按100%T/OA100%T/OA鍵調(diào)滿度。鍵調(diào)滿度。按按MODEMODE，將測試方式調(diào)至吸光度方式，將測試方式調(diào)至吸光度方式A A。此時此時, ,顯

6、示器顯示顯示器顯示“0.0000.000。將被測溶液推入光路，顯示器顯示為被測樣將被測溶液推入光路，顯示器顯示為被測樣品的吸光值。品的吸光值。 在600 nm波長下，用未接種的LB液體培育基作空白對照，分別對培育了0、4、8、12、16和20 h的大腸桿菌培育液，進展光電比濁測定。 比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必需經(jīng)待測樣比色皿經(jīng)蒸餾水清洗后，必需經(jīng)待測樣品潤洗。比色皿的毛面用吸水紙擦干，而光品潤洗。比色皿的毛面用吸水紙擦干，而光面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。面只能用吸水紙吸干，以免光面被劃破。 比色皿之間吸光度進展比較。比色皿之間吸光度進展比較。四、實驗結果四、實驗結果 記錄不同大腸桿菌培育

7、液的記錄不同大腸桿菌培育液的OD600OD600值，值，并繪制大腸桿菌的生長曲線。并繪制大腸桿菌的生長曲線。 培養(yǎng)時間培養(yǎng)時間（h） 4 8 12 16 20 光密度值光密度值OD600五、思索題五、思索題光電比濁計數(shù)的原理是什么？這種計數(shù)法有何光電比濁計數(shù)的原理是什么？這種計數(shù)法有何優(yōu)缺陷？優(yōu)缺陷？學習運用鏡臺測微尺和目鏡測微尺學習運用鏡臺測微尺和目鏡測微尺在顯微鏡下測定微生物大小的方法。在顯微鏡下測定微生物大小的方法。實驗實驗( (二二) ) 微生物大小的測定微生物大小的測定一、目的要求一、目的要求 對于病毒、細菌、放線菌、真菌和原生動物等不同類對于病毒、細菌、放線菌、真菌和原生動物等不同

8、類型的微生物來說，它們的大小存在很大的差別。型的微生物來說，它們的大小存在很大的差別。 在同一類型中不同種類的微生物，或同一種類中不同在同一類型中不同種類的微生物，或同一種類中不同時期的微生物個體，它們的大小也存在很大的差別。時期的微生物個體，它們的大小也存在很大的差別。二、實驗原理二、實驗原理 鏡臺測微尺是中央部分刻有準確等分線的載玻片，普通鏡臺測微尺是中央部分刻有準確等分線的載玻片，普通是將是將l mml mm等分為等分為100100格，每格長格，每格長0.01 mm(0.01 mm(即即10 um) 10 um) ，用于校，用于校正目鏡測微尺每格的相對長度。正目鏡測微尺每格的相對長度。

9、目鏡測微尺是一塊中央有準確的等分刻度的圓形小玻片，目鏡測微尺是一塊中央有準確的等分刻度的圓形小玻片，置于接目鏡中的隔板上。目鏡測微尺每小格所代表的實踐長置于接目鏡中的隔板上。目鏡測微尺每小格所代表的實踐長度不一樣，丈量前，必需先用鏡臺測微尺進展校正。度不一樣，丈量前，必需先用鏡臺測微尺進展校正。目鏡測微尺鏡臺測微尺利用鏡臺測微尺測利用鏡臺測微尺測定目鏡測微尺的每定目鏡測微尺的每格絕對值格絕對值目鏡測微尺測定微目鏡測微尺測定微生物大小生物大小三、實驗器材三、實驗器材1 1、菌種：、菌種：釀酒酵母釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae Saccharomyces cerevisi

10、ae 2 2、器材：、器材： 顯微鏡、鏡臺測微尺、目鏡測微尺顯微鏡、鏡臺測微尺、目鏡測微尺三、實驗步驟三、實驗步驟1 1、目鏡測微尺的校正、目鏡測微尺的校正 鏡臺測微尺有刻度的一面朝上，置顯微鏡載物臺上，鏡臺測微尺有刻度的一面朝上，置顯微鏡載物臺上，先在低倍鏡下，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野先在低倍鏡下，將鏡臺測微尺有刻度的部分移至視野中央。轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的中央。轉(zhuǎn)動目鏡使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行。利用挪動器挪動鏡臺測微尺，使兩尺在某刻度平行。利用挪動器挪動鏡臺測微尺，使兩尺在某一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，分別數(shù)出兩重合線之間鏡臺一區(qū)域內(nèi)兩線完全重合，分別數(shù)

11、出兩重合線之間鏡臺微尺和目鏡微尺所占的格數(shù)。計算微尺和目鏡微尺所占的格數(shù)。計算40 x40 x下目鏡測微尺的下目鏡測微尺的校正值。校正值。目鏡測微尺每格長度目鏡測微尺每格長度umum兩重合線間鏡臺測微尺兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)格數(shù)10/10/兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)2 2、細胞大小的丈量、細胞大小的丈量 酵母菌懸液滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，置顯微酵母菌懸液滴在載玻片上，蓋上蓋玻片，置顯微鏡載物臺上。用目鏡測微尺丈量細胞寬和長。鏡載物臺上。用目鏡測微尺丈量細胞寬和長。三、實驗結果三、實驗結果計算出目鏡測微尺校正結果以及酵母菌大小測計算出目鏡測微尺校正結果以及酵母菌大小測定

12、結果定結果 四、思索題四、思索題1 1、為什么改換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，、為什么改換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必需用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進展校正？必需用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進展校正？1 1、明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理。、明確血細胞計數(shù)板計數(shù)的原理。2 2、掌握運用血細胞計數(shù)板進展微生、掌握運用血細胞計數(shù)板進展微生 物計數(shù)的方法。物計數(shù)的方法。 實驗實驗( (三三) ) 微生物數(shù)量的測定微生物數(shù)量的測定一、目的要求一、目的要求二、實驗原理二、實驗原理顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載液置于一種特別

13、的具有確定面積和容積的載玻片上玻片上( (又稱計菌器又稱計菌器) )，于顯微鏡下直接計數(shù)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種方法。的一種方法。顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速。缺顯微鏡直接計數(shù)法的優(yōu)點是直觀、快速。缺陷是所測得的結果通常是死菌體和活菌體的陷是所測得的結果通常是死菌體和活菌體的總和。目前已有一些方法可以抑制這一缺陷，總和。目前已有一些方法可以抑制這一缺陷，如結合活菌染色，微室培育等方法來到達只如結合活菌染色，微室培育等方法來到達只計數(shù)活菌體的目的。計數(shù)活菌體的目的。 血細胞計數(shù)板由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫血細胞計數(shù)板由四條槽構成三個平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成

14、兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室是由一個大方格為九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。計數(shù)室是由一個大方格分成分成2525個中方格，而每個中方格又分成個中方格，而每個中方格又分成1616個小方格；合計個小方格；合計400400個小個小方格。每一個大方格的面積為方格。每一個大方格的面積為1 mm21 mm2，蓋玻片與計數(shù)區(qū)之間的高度，蓋玻片與計數(shù)區(qū)之間的高度為為0.1 mm0.1 mm，所以計數(shù)室的容積為，所以計數(shù)室的容積為0.1 mm3 0.1 mm3 。計數(shù)時，通常在計數(shù)時

15、，通常在4040下數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方下數(shù)五個中方格的總菌數(shù)，然后求得每個中方格的平均值，以及大方格中的總菌數(shù)，再換算成格的平均值，以及大方格中的總菌數(shù)，再換算成1 ml1 ml菌液中的總菌菌液中的總菌數(shù)。數(shù)。(1ml=? mm3)(1ml=? mm3)個計數(shù)室個計數(shù)室mmmm包含包含個中方格個中方格個中方格個中方格個小方格個小方格三、實驗器材三、實驗器材 1 1、菌種：、菌種： 釀酒酵母釀酒酵母 2 2、器材：、器材： 顯微鏡、血球計數(shù)板顯微鏡、血球計數(shù)板三、實驗步驟三、實驗步驟 1 1、在、在1010和和4040下找到計數(shù)室。下找到計數(shù)室。2 2、蓋上蓋玻片將搖勻的釀酒酵

16、母菌或大腸桿菌、蓋上蓋玻片將搖勻的釀酒酵母菌或大腸桿菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細浸透懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細浸透作用自動進入計數(shù)室。如滴入過多，溢出并流入兩側槽作用自動進入計數(shù)室。如滴入過多，溢出并流入兩側槽內(nèi)，使蓋玻片浮起，體積改動，會影響計數(shù)結果，需用內(nèi)，使蓋玻片浮起，體積改動，會影響計數(shù)結果，需用濾紙把多余的溶液吸出，以槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入濾紙把多余的溶液吸出，以槽內(nèi)沒有溶液為宜。如滴入溶液過少，經(jīng)多次充液，易產(chǎn)生氣泡，應洗凈計數(shù)室，溶液過少，經(jīng)多次充液，易產(chǎn)生氣泡，應洗凈計數(shù)室，枯燥后重做?？菰锖笾刈?。3 3、靜置，先用低倍鏡將計數(shù)室移至視野中央。、靜置，先用低倍鏡將計數(shù)室移至視野中央。4 4、在高倍下計數(shù)：每個計數(shù)室選、在高倍下計數(shù)：每個計數(shù)室選5 5個中格個中格(4(4個角和中個角和中央的一個中格央的一個中格) )中的菌體進展計數(shù)。對于分布在刻線上中的菌體進展計數(shù)。對于分布在刻線上的細菌