粗多糖含量測定方法學(xué)驗證

1、v1.0 可編輯可修改1粗多糖含量測定方法學(xué)研究資料一、.儀器與試藥1二、.方法的研究21. 檢測波長的測定.22. 樣品及對照制備方法 .2三、.方法學(xué)驗證31. 線性.32. 精密度實驗.43. 穩(wěn)定性實驗.44. 重復(fù)性試驗.55. 中間精密度實驗.56. 準確度試驗.6v1.0 可編輯可修改1芪參顆粒粗多糖含量測定方法起草說明標志性成分粗多糖含量測定的方法來源于保健食品功效成分檢測方法白鴻主編(中國中醫(yī)藥出版社)的第二法，該方法的原理是：多糖經(jīng)乙醇沉淀分離后，去除其他可溶性糖 及雜質(zhì)的干擾，糖與硫酸在沸水浴中加熱脫水生成羥甲基呋喃甲醛(羥甲基呋喃糠醛)，再與蒽酮縮合成藍綠色化合物，其顯

2、色強度與溶液中糖的濃度成正比，在 625nm 波長下比色測主要研究資料如下：一、儀器與試藥1、儀器(1)離心機(湘南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司，型號TD25-WS ；(2)離心管：50ml;(3)水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司，型號DK-S26)；(4)旋渦混合器(DioCote，SA8)；(5) SHIMADZU UV-1800 紫外可見光分光光度計；(6) JB760-68 石英比色皿(宜興市偉鑫儀器有限公司)；(7) TU-1901 雙光束紫外可見光分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)；2、試藥(1)葡萄糖：廣州化學(xué)試劑廠，分析純，批號為 -1 ；(2)無水乙醇：西隴化學(xué)股份有限

3、公司，分析純，批號為 160802 1 ；(3)蒽酮：國藥集團化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號為；(4)硫酸：廣州化學(xué)試劑廠，分析純，批號為 -1 ；(5)葡萄糖標準液：標準稱取干燥恒重的分析純級葡萄糖，加水溶解，并定容至50ml，此溶液 1ml 含 10mg 葡萄糖，用前稀釋 100 倍為使用液(ml)。v1.0 可編輯可修改2(6)9 蒽酮硫酸溶液(W/V)：準確稱取蒽酮置于燒杯中，緩緩加入100ml 80%硫酸溶解，溶解后呈黃色透明溶液?，F(xiàn)用現(xiàn)配。3、試樣v1.0 可編輯可修改3樣品顆粒：XXXXX 有限公司提供。、方法的研究粗多糖含量測定的方法來源于 保健食品功效成分檢測方法 白鴻主編（

4、中國中醫(yī)藥出 版社）的第二法，本研究針對葡萄糖對照以及樣品的的吸光度進行檢測波長測定， 如下所示： 1.檢測波長的測定取葡萄糖對照品溶液、樣品溶液進行紫外光譜掃描，結(jié)果顯示對照品和樣品均在 625nm波長附近有最大吸收。2.樣品及對照制備方法（1）樣品提?。悍Q取混合均勻的固體樣品，置于100ml 容量瓶中，加水 80ml 左右，于沸水浴中加熱 1 小時，冷卻至室溫后補加水至刻度（V1）,混勻后過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀粗多糖。（2） 沉淀粗多糖：準確吸取上濾液（或液體樣品）（V2）,置于 50ml 離心管中（或于0 292序號波長吸光度12序號波長吸光度1葡萄糖對照品紫外波長吸收圖芪

5、參顆粒樣品溶液紫外波長吸收圖OQ34L2D9 67 4CX) OQ2v1.0 可編輯可修改415ml 具塞離心管中），加入無水乙醇20ml （或 8ml）,混勻，于 4C冰箱靜置 4 小時以上，以4000r/min 離心 5min，棄去上清液，殘渣用 80% （V/V）乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄去上 清液，反復(fù)操作 3 次。殘渣用水溶解并定容至 10ml （V3）。（3） 標準曲線的繪制：準確吸取葡萄糖標準使用液 0ml.（相當于葡萄糖 0mg.）置于 10ml 比色管中，補加水，加入蒽酮硫酸溶液 6ml，在旋渦混合器上混勻，置沸水浴中加 熱 10min，取出，在流水中冷卻 20min 后，

6、用分光光度計在 625nm 波長處以試劑空白為參比， 1cm 比色皿測定吸光度值。以葡萄糖質(zhì)量為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。（4） 樣品測定：準確吸取樣品待測液（含糖量20100 卩 g），按標準曲線繪制步驟于625nm 波長下測定吸光度值并求出樣品含量。三、方法學(xué)驗證1.線性取適量葡萄糖對照品，精密稱定，加水制成ml 的葡萄糖對照品儲備溶液，分別精密吸取葡萄糖對照品儲備溶液0ml.，置于10ml 比色管中，補加水，依法測定。得標準曲線儲備液。依法測定，分別制成含葡萄糖為0、卩 g、卩 g、卩 g、卩 g、卩 g、g的溶液，以吸光度（Y）為縱坐標，葡糖糖對照品的含量 （X）為橫坐標

7、，繪制標準曲線，見下圖，其回歸方程為：y=+ (r=)，試驗表明葡萄糖對照品在 0ug范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。見表 1。表 1 線性考察結(jié)果含量（卩 g）0吸光度（Y回歸方程y=+ r=粗多糖標準曲線如下:v1.0 可編輯可修改52.精密度實驗取一供試品溶液，連續(xù)測定 6 次，記錄吸光度，結(jié)果見表 2。試驗結(jié)果 RSDc%( RSD=%, n= 6),說明儀器精密度良好。表 2 儀器精密度試驗測定結(jié)果序號吸光度平均吸光度RS%123.穩(wěn)定性實驗取同一樣品，按以下時間測定，記錄吸光度，結(jié)果見表3。表 3 粗多糖穩(wěn)定性試驗結(jié)果v1.0 可編輯可修改6吸光度時間Omi n30mi n1h2h3h4h0

8、3313v1.0 可編輯可修改71hRSD(%)2hRSD(%)4hRSD(%)結(jié)果表明供試品溶液在顯色反應(yīng)完成后4 小時內(nèi)穩(wěn)定。4. 重復(fù)性試驗取同一供試品，按供試品制備方法制備 6 份供試品溶液，并按樣品及對照制備方法測定 粗多糖含量，結(jié)果見表 4。表 4 粗多糖重復(fù)性試驗測定結(jié)果(單位：mg/100g)樣品編號123456含量(mg/100ml)348343335330335338平均含量338RSD( %結(jié)果表明 6 份供試品溶液按照粗多糖的檢測方法測定重復(fù)性好。5. 中間精密度實驗取同一供試品(批號：150401)，由另一操作者于不同時間、不同儀器操作，按供試品制備方法制備 6 份供

9、試品溶液，并按 樣品及對照制備方法 測定粗多糖含量，結(jié)果見表5。表 5 粗多糖中間精密度試驗測定結(jié)果(單位：mg/100g)標準曲線結(jié)果：含量0(卩 g)吸光度(Y 0回歸方程y=+ r=v1.0 可編輯可修改8樣品測定結(jié)果：樣品編號123456含量（mg/100ml）294285297273297287平均含量289RSD（ %結(jié)果表明 6 份供試品溶液按照粗多糖的檢測方法測定進行的中間精密度實驗精密度良好。6.準確度試驗采用加樣回收法，精密稱取本品（批號：150401，平均含量：338mg/100g，平均吸光度：） 各 6 份，按照樣品及對照制備方法 中制備得樣品待測液 6 份，分別從 6 份待測液中吸取 1ml 置于 10ml 比色皿中，再分別精密加入1ml 100 淞度的對照品溶液（濃度：ml）,依法進行測定，記錄吸光度，以吸光度計算回收率，結(jié)果見表 6。6 份樣品回收率均