篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選課件

1、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選2.2.2 2.2.2 動(dòng)物動(dòng)物(dngw)(dngw)細(xì)胞融合與單克隆抗體細(xì)胞融合與單克隆抗體第一頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選1 1、概念概念(ginin)(ginin) 動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合也稱細(xì)胞雜交也稱細(xì)胞雜交，是指是指兩個(gè)或多個(gè)兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞形成動(dòng)物細(xì)胞形成一個(gè)一個(gè)(y )細(xì)胞的過程細(xì)胞的過程2 2、原理：、原理： 膜的流動(dòng)性膜的流動(dòng)性第二頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選4 4、誘導(dǎo)、誘導(dǎo)(yudo)(yudo)方法：方法： 聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）、）、 滅活的病毒、電激等。滅活的病毒、電激等。第三頁，共二十七頁。

2、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選5 5、過程、過程(guchng)(guchng)：第四頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選3 3、過程、過程(guchng)(guchng)：細(xì)胞相互細(xì)胞相互(xingh)凝凝集集膜上蛋白質(zhì)分子膜上蛋白質(zhì)分子(fnz)和脂質(zhì)分子和脂質(zhì)分子(fnz)重新重新排布排布細(xì)胞膜打開細(xì)胞膜打開細(xì)胞發(fā)生融合細(xì)胞發(fā)生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜的糖蛋白發(fā)生作用，使夠與細(xì)胞膜的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞相互凝集。細(xì)胞相互凝集。第五頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選6 6、優(yōu)點(diǎn)、優(yōu)點(diǎn)(yudin)(yudin)： 突破了有性雜交

3、的局限，使突破了有性雜交的局限，使遠(yuǎn)緣遠(yuǎn)緣(yun yun)雜交成為可能雜交成為可能第六頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交動(dòng)植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么或融合過程有什么(shn me)(shn me)影響？影響？問題討論問題討論動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過程中不動(dòng)物細(xì)胞無細(xì)胞壁，動(dòng)物細(xì)胞融合過程中不須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。須去除細(xì)胞壁和再生出細(xì)胞壁。第七頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選問題問題(wnt)討論討論、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？理

4、是否相同？相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性相同，都是細(xì)胞膜的流動(dòng)性第八頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選問題問題(wnt)討討論論第九頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得獲得(hud)(hud)雜種植雜種植株株物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學(xué)（聚乙二醇）化學(xué)（聚乙二醇）使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性用途用途誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法步驟步驟

5、融合的原理融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目第十頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選？第十一頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選（一）獲得抗體的傳統(tǒng)（一）獲得抗體的傳統(tǒng)(chuntng)方法方法1、方法：、方法： 向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射某種抗原(kngyun)，使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，從動(dòng)物血清中分離所需使動(dòng)物產(chǎn)生抗體，從動(dòng)物血清中分離所需抗體?？贵w。2、缺點(diǎn)：、缺點(diǎn)： .第十二頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選3、解決問題的設(shè)想、解決問題的設(shè)想: 免疫反應(yīng)過程中，免疫反應(yīng)過程中，每一個(gè)每一個(gè)B淋巴細(xì)淋巴細(xì)胞胞只分泌

6、一種只分泌一種特異性抗體。特異性抗體。 克隆單一的克隆單一的B淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞淋巴細(xì)胞，形成細(xì)胞群，獲得大量的單一抗體。群，獲得大量的單一抗體。4、面臨的新問題：、面臨的新問題： 一個(gè)一個(gè)B淋巴細(xì)胞不可能在體外培養(yǎng)淋巴細(xì)胞不可能在體外培養(yǎng)條件條件(tiojin)下無限增殖的。下無限增殖的。 .第十三頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選1 1、如何、如何(rh)(rh)獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？獲得化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體？問題問題(wnt)討討論論提示提示(tsh)：2 2、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？、瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞有何區(qū)別？第十四頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選第

7、十五頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選2 2、單克隆抗體單克隆抗體(kngt)(kngt)制備過制備過程程 注射抗原注射抗原B B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、細(xì)胞融合、篩選篩選(shixun)雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)篩選篩選，繼續(xù)培養(yǎng)，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量足夠數(shù)量(shling)的、能產(chǎn)的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體（選擇性培養(yǎng)基）（選擇性培養(yǎng)基）誘導(dǎo)其融合的誘導(dǎo)其融合的方法有哪些？方法有哪些？第十六頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選單克隆抗體(kngt)的制備 第十七頁，共

8、二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選單克隆抗體(kngt)的制備第十八頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選B BB B BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種、細(xì)胞融合后培養(yǎng)液中有幾種(j zhn)細(xì)胞？細(xì)胞？篩選雜種細(xì)胞篩選雜種細(xì)胞思考思考(sko)：雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞(xbo)、制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？、制備過程中應(yīng)用哪些細(xì)胞工程技術(shù)手段？第十九頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選3、單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念(ginin)： 化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體化學(xué)性質(zhì)單一，特異性強(qiáng)的抗體4、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)： 特異性強(qiáng)，靈敏

9、度高，并可大量特異性強(qiáng)，靈敏度高，并可大量(dling)制備。制備。第二十頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選（三）（三）單克隆抗體單克隆抗體(kngt(kngt) )的應(yīng)用的應(yīng)用準(zhǔn)確準(zhǔn)確(zhnqu)、高效、簡易、快速、高效、簡易、快速（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈（導(dǎo)向作用，作為載體，生物導(dǎo)彈= =單克隆單克隆抗體抗體+ +藥物，藥物，用于用于治療腫瘤）治療腫瘤）第二十一頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選兩個(gè)兩個(gè)(lin )過程過程動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)過細(xì)胞培養(yǎng)過程程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個(gè)三個(gè)“一一”一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法一個(gè)誘導(dǎo)細(xì)胞融合的新方法

10、滅活病毒滅活病毒一個(gè)新細(xì)胞一個(gè)新細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞一個(gè)優(yōu)勢(shì)一個(gè)優(yōu)勢(shì)單克隆抗體特異性強(qiáng)、單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)勢(shì)靈敏度高的優(yōu)勢(shì)第二十二頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選 下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法下圖為某同學(xué)根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法(fngf)，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗，設(shè)計(jì)的生產(chǎn)破傷風(fēng)桿菌的抗體實(shí)驗(yàn)方案體實(shí)驗(yàn)方案2、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？、該方案能達(dá)到預(yù)期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承作為誘導(dǎo)劑，該細(xì)胞繼承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,又能又能_。1、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是、該實(shí)驗(yàn)方案的目的是_3、A是

11、從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細(xì)胞能夠產(chǎn)生該細(xì)胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細(xì)胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個(gè)階段，其培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中中_代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。代以內(nèi)的的細(xì)胞屬于細(xì)胞株。制備制備(zhbi)單克隆抗單克隆抗體體B細(xì)胞細(xì)胞(xbo)抗體抗體細(xì)胞融合細(xì)胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細(xì)胞雙親細(xì)胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞足夠數(shù)量的細(xì)胞群足夠數(shù)量的細(xì)胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC第二十三頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選 世界上第一只克隆羊世界

12、上第一只克隆羊“多莉多莉”的培育過程的培育過程(guchng)如圖所示，請(qǐng)據(jù)圖如圖所示，請(qǐng)據(jù)圖回答：回答：乙乙甲甲abcdef(1)圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙圖中的甲為蘇格蘭綿羊，乙為多莉羊。那么，為多莉羊。那么，a和和b是通過是通過(tnggu)_分裂形成的，其分裂形成的，其DNA含量是體細(xì)胞的含量是體細(xì)胞的 _ ；c肯定是肯定是_ 細(xì)細(xì)胞，乙的遺傳性狀與提供胞，乙的遺傳性狀與提供 _的綿羊的綿羊 一致一致.減數(shù)減數(shù)(jin sh)一半一半體體細(xì)胞核細(xì)胞核第二十四頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選乙乙甲甲abcdef(2)產(chǎn)生產(chǎn)生 甲和乙的過程分別是甲和乙的過程分別是和和（3）在形成乙

13、是的過程中，需要）在形成乙是的過程中，需要將將d的細(xì)胞核取出，將的細(xì)胞核取出，將c細(xì)胞核移細(xì)胞核移入入d細(xì)胞內(nèi)，此技術(shù)叫細(xì)胞內(nèi)，此技術(shù)叫。所。所需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)需的受體細(xì)胞大多采用動(dòng)物卵細(xì)胞的原因是胞的原因是（4）綿羊的白色對(duì)黑色為顯色。）綿羊的白色對(duì)黑色為顯色。若甲是白色綿羊，要判斷它是否若甲是白色綿羊，要判斷它是否純合體，選用純合體，選用(xunyng)與它交配的綿與它交配的綿羊最好是羊最好是-有性生殖有性生殖(yuxng shngzh)克隆克隆(k ln)核移植核移植卵細(xì)胞大，易于操作；卵細(xì)卵細(xì)胞大，易于操作；卵細(xì)胞具有繼續(xù)分化的潛能胞具有繼續(xù)分化的潛能。黑毛黑毛第二十五頁，

14、共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選乙乙甲甲abcdef（5）在產(chǎn)生多莉羊時(shí)，需將）在產(chǎn)生多莉羊時(shí)，需將e細(xì)細(xì)胞形成的早期胚胎移入另一頭母胞形成的早期胚胎移入另一頭母羊（羊（f）子宮里，這種技術(shù)在細(xì)胞）子宮里，這種技術(shù)在細(xì)胞工程中叫工程中叫（6）繼植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊）繼植物組織培養(yǎng)后，克隆綿羊的培育成功，證明動(dòng)物細(xì)胞也有的培育成功，證明動(dòng)物細(xì)胞也有（7）在繁殖多莉羊的過程）在繁殖多莉羊的過程(guchng)中，中，是否遵循孟德爾遺傳規(guī)律？多莉羊的是否遵循孟德爾遺傳規(guī)律？多莉羊的性狀與性狀與d羊、羊、c羊及羊及f羊的關(guān)系是什羊的關(guān)系是什么？么？胚胎胚胎(piti)移植移植全能性全能性不遵循，多莉羊的多數(shù)不遵循，多莉羊的多數(shù)(dush)性狀象性狀象c羊，個(gè)別性狀象羊，個(gè)別性狀象d羊，發(fā)育也會(huì)受到羊，發(fā)育也會(huì)受到f羊影響羊影響。第二十六頁，共二十七頁。篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選內(nèi)容(nirng)總結(jié)2