活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)測定

1、 深圳市沙井人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號：SJ/QS-26-OP-XY-059版本版次：A/01臨床血液作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：第 1 頁 ，共 2 頁活化部分凝血活酶時(shí)間測定（APTT）1. 項(xiàng)目名稱: 活化部分凝血活酶時(shí)間(Activated Partial Thromboplastin Time,APTT)2.檢驗(yàn)?zāi)康?.1手術(shù)前的檢測2.2 DIC的協(xié)診2.3抗凝藥物治療監(jiān)測2.4凝血因子檢查2.5循環(huán)血液中抗凝物質(zhì)和一些疾病協(xié)診等3.檢驗(yàn)原理：3.1檢測原理:全自動(dòng)血凝儀測定,散射光凝固法檢測確定量的血漿樣本（50l）經(jīng)過一定時(shí)間（3min）溫育后，加入部分凝血活酶時(shí)間反應(yīng)試劑（50l），加溫

2、1min，加入0.025MCaCl250l，加溫4min,采用波長660nm的光照射反應(yīng)物，通過測量散射光光強(qiáng)度的改變來測定凝血過程(纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白)中的濁度變化,從散射光光強(qiáng)度的測定可得凝集曲線，反應(yīng)物凝固的時(shí)間即活化部分凝血活酶時(shí)間。3.2反應(yīng)方法學(xué)溯源:37條件下,以鞣花酸激活因子和,以腦磷脂(部分凝血活酶)代替血小板,在Ca2+參與下,觀察貧血小板血漿凝固所需時(shí)間,即為活化部分凝血活酶時(shí)間,是內(nèi)源凝血系統(tǒng)較敏感和常用的篩選試驗(yàn).4.性能參數(shù)4.1重復(fù)性:CV2%4.2分析和計(jì)算參數(shù):報(bào)告單位 秒(S)4.3樣本量:50ul,試劑量:50ul激活劑,50ul CaCl24.4檢

3、驗(yàn)時(shí)間:在最長檢驗(yàn)時(shí)間之內(nèi)測出結(jié)果,標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置最長檢驗(yàn)時(shí)間:190秒4.5精密度范圍:1.36.0%5原始樣品系統(tǒng):血漿6.容器和添加劑類型容器采用真空負(fù)壓專用抗凝管,添加劑類型為0.109M枸櫞酸鈉7.試劑及配套品7.1激活劑:Cephaloplastin試劑(Dade Actin Activated Cephaloplastin Reagent)商標(biāo):德靈(DADE BEHRING)7.1.2包裝規(guī)格:10×2ml貨號:B4218-17.1.4成分:腦磷脂(從干燥兔腦粉中提取)加入含有緩沖液、穩(wěn)定劑和防腐劑的1.0×10-4M的鞣花酸溶液7.1.5使用方法:液體試劑,直接

4、使用7.1.6儲(chǔ)存:未開封試劑28貯存到說明書上有效期，開蓋后28有效期7天,不能冰凍。未被污染的試劑穩(wěn)定期是：283年、18251年、372天;7.2氯化鈣溶液(Calcium Chloride Solution)商標(biāo):德靈(DADE BEHRING)7.2.2包裝規(guī)格:10×15ml7.2.3貨號:ORHO377.2.4成分:0.025mol/L的氯化鈣溶液7.2.5使用方法:液體試劑,直接使用.7.2.6儲(chǔ)存:沒開蓋試劑放28存放至試劑瓶上有效期.開蓋后28有效期7天.7.3清洗液(Clean I):用于測定過程中的吸樣針沖洗商標(biāo):希森美康(Sysmex)7.3.2包裝規(guī)格:5

5、0ml貨號:GSA500A7.3.4成分:1%次氯酸鈉及活性成分7.3.5使用方法;液體試劑,直接使用7.3.6儲(chǔ)存:沒開蓋試劑放28存放至包裝有效期,開蓋后放于儀器內(nèi)有效期僅存4小時(shí)7.4校準(zhǔn)質(zhì)控血漿(Ci-Trol)商標(biāo): 德靈(DADE BEHRING)7.4.2貨號:Level 1(Normai),291070 10×1ml Level 2(Abnormal),291071 10×1ml Level 3(Abnormal),291072 10×1ml7.4.3使用方法:1ml蒸餾水溶解置室溫15分鐘后使用7.4.4儲(chǔ)存:室溫:2h, 28:4h,冷凍分裝保

6、存:-20<2周,-70<6個(gè)月8.校準(zhǔn)程序:儀器的驗(yàn)證和光路系統(tǒng)校正 儀器的驗(yàn)證由生產(chǎn)商、代理商指定工程師和我科共同完成.燈泡大約半年更換一次,光路系統(tǒng)的校正由代理商完成.9.程序步驟:9.1標(biāo)本采集與要求9.1.1標(biāo)本采集:抽取靜脈血1.8ml,加入到含0.2ml109mmol/L(1:9)的枸櫞酸鈉溶液抗凝真空試管中,并輕輕顛倒10次使之充分混勻,不得有凝塊、不得形成泡沫,總量不得超過2.0±0.2ml,并在試管上做好標(biāo)識.采血應(yīng)避免溶血和脂血,故患者應(yīng)盡量空腹和避免在輸入脂肪乳過程中或其后8小時(shí)內(nèi)采血.采血后2小時(shí)內(nèi)送到檢驗(yàn)科,需要運(yùn)輸時(shí)應(yīng)在低溫條件下運(yùn)輸.采集標(biāo)

7、本時(shí)宜“一針見血”,以防止組織損傷,外源性凝血因子進(jìn)入針管,最好不與其它實(shí)驗(yàn)一起采集,否則由于標(biāo)本的分配、分裝而使血液停留在針管的時(shí)間延長.9.1.2不合格標(biāo)本的處理 對凝固、有凝塊、嚴(yán)重溶血、重度黃疸、脂血、采血量不符合要求、無條碼或無標(biāo)識等不合格的標(biāo)本,距采集時(shí)間超過2小時(shí)并且沒有按要求儲(chǔ)存的標(biāo)本,按程序文件樣品核收、登記和保存程序處理9.1.3標(biāo)本保存檢測應(yīng)在標(biāo)本采集后2小時(shí)內(nèi)完成,28保存不超過4小時(shí),分離后的血漿-20以下密封可保存2周.需長期保存的標(biāo)本在-70下不超過6個(gè)月,且只能凍融1次，分析前在37迅速解凍，以減低凝血因子的消耗，解凍后立即測試。分析后的標(biāo)本不保存.9.2檢測前

8、準(zhǔn)備 采樣后應(yīng)盡快分離血漿(60分鐘內(nèi)進(jìn)行),將標(biāo)本1500×g(3000r/min)離心10分鐘,務(wù)使血小板去除;.在進(jìn)行質(zhì)控物和病人標(biāo)本分析檢測前,進(jìn)行儀器狀態(tài)和試劑檢查,確保準(zhǔn)備完好后才能進(jìn)行分析.并將檢查結(jié)果記錄在相應(yīng)的儀器設(shè)備使用記錄表上.9.3病人標(biāo)本的檢測9.3.1開機(jī):開CA1500儀器左側(cè)電源開機(jī)后儀器進(jìn)行自檢、預(yù)熱,當(dāng)屏幕上顯示Ready時(shí)可以進(jìn)行試驗(yàn)9.3.2每日針沖洗:在主屏幕上選Rinse Probe,然后按下Execute進(jìn)行針沖洗9.3.3準(zhǔn)備試劑:按照儀器試劑位置設(shè)定,把上述每項(xiàng)的試劑準(zhǔn)備好,放在相應(yīng)的位置9.3.4準(zhǔn)備反應(yīng)杯:打開儀器頂部反應(yīng)杯儲(chǔ)存槽

9、,查看反應(yīng)杯是否足夠,需及時(shí)添加9.3.5準(zhǔn)備標(biāo)本;將離心好的樣本放在相應(yīng)的樣本架上(一個(gè)架子可放10個(gè)樣本),準(zhǔn)備好放在進(jìn)樣器上9.3.6輸入試驗(yàn)項(xiàng)目:按下主菜單上的Work List鍵,在試驗(yàn)項(xiàng)目鍵點(diǎn)擊APTT,使APTT項(xiàng)目下顯示“-”變?yōu)椤啊?按“”或“”將需要測試標(biāo)本如上操作選擇;9.3.7輸入樣本號:按下ID No.Entry,按順序輸入樣本的序號或病人的病歷號9.3.8開始檢測:待一切準(zhǔn)備工作就緒,按下屏幕右上角START鍵,儀器開始檢測9.3.9查看結(jié)果:返回主屏幕,檢測的項(xiàng)目如果由“”變?yōu)椤啊北砻鞔嗽囼?yàn)已經(jīng)完成,然后按下Stored Date(儲(chǔ)存結(jié)果)鍵,屏幕會(huì)換到結(jié)果顯示

10、界面,按下邊第一個(gè)菜單Graph,查看凝集曲線、吸光度、結(jié)果等,檢查是否有Error錯(cuò)誤信息,有錯(cuò)誤報(bào)警的標(biāo)本需考慮重測9.3.10關(guān)機(jī)前沖洗針:關(guān)機(jī)前需要洗針,按下Rinse Probe,然后按下Execute9.3.11關(guān)機(jī):回到主屏幕下,切斷儀器電源.10.質(zhì)量控制程序:.10.1質(zhì)控物準(zhǔn)備用1ml蒸餾水溶解一瓶Dade Control質(zhì)控血漿,輕輕顛倒混勻約5秒,置于室溫30分鐘,用前搖勻即可,不要?jiǎng)×艺駬u.將未用完的質(zhì)控血漿在室溫保存2小時(shí)、284小時(shí)、-20以下冰箱中可保存24小時(shí)10.2上機(jī)檢測將質(zhì)控標(biāo)本加入樣品杯,上機(jī)檢測.具體操作詳見CA1500血液凝固分析儀作業(yè)指導(dǎo)書10.

11、3質(zhì)控規(guī)則10.3.1質(zhì)控圖正常分布規(guī)律各點(diǎn)應(yīng)分布在均值的兩側(cè),95.45%數(shù)據(jù)落在x±2s內(nèi),99.73%數(shù)據(jù)落在x±3s內(nèi).10.3.2質(zhì)控圖失控規(guī)則a)一個(gè)質(zhì)控物的測定結(jié)果超過x±3s(13s規(guī)則)；b) 一個(gè)質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次超過x2s或x-2s(22s規(guī)則)C) 一個(gè)質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)2次測定其中1次超過x2s另1次超過x-2s(R4s規(guī)則)d) 一個(gè)質(zhì)控物的測定結(jié)果連續(xù)4次超過x+1s或x-1s(41s規(guī)則)e)連續(xù)10次質(zhì)控物結(jié)果都在均數(shù)的同一側(cè)（10x規(guī)則）f)連續(xù)5次測定結(jié)果漸增或漸減（5T規(guī)則）10.4室內(nèi)質(zhì)控分析與失控處理10.4.1

12、質(zhì)控結(jié)果分析檢測人員對質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行分析,在發(fā)現(xiàn)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)違背質(zhì)控規(guī)則后,通知組長,協(xié)助處理.組長分析該失控信號的真?zhèn)?并做出是否發(fā)出與測定質(zhì)控品相關(guān)的那批病人標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告的決定,必要時(shí)由檢驗(yàn)科主任處理.檢測人員填寫失控報(bào)告.10.4.2失控原因分析極其處理過程失控信號的出現(xiàn)受多種因素的影響,包括操作上的失誤,試劑、校準(zhǔn)品或質(zhì)控品的失效,儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制限范圍、一次測定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)等.解凍的質(zhì)控血漿一定要先混勻再吸出至樣品杯中,操作時(shí)間嚴(yán)格按作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行.所以,室內(nèi)質(zhì)控失效時(shí).首先要查明失控原因,然后隨機(jī)挑選出一定比例的病人標(biāo)本進(jìn)行重新測定,對失控做出恰當(dāng)?shù)呐袛?失控的處理原

13、則見程序文件內(nèi)部質(zhì)量控制管理程序10.5質(zhì)控標(biāo)本檢測完畢后,及時(shí)將質(zhì)控血漿放回冰箱,-20以下密封保存24小時(shí).11.干擾和交叉反應(yīng) 多種藥物如雙香豆素、鏈激酶、尿酶、口服避孕藥、雌激素、天門冬酰胺酶、鈉絡(luò)酮等可影響PT結(jié)果,如出現(xiàn)異常結(jié)果,需做進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)以確定導(dǎo)致異常的原因,溶血、黃疸、脂血標(biāo)本或混濁樣本影響結(jié)果,應(yīng)重新采血.血標(biāo)本與抗凝劑比例不當(dāng)也影響檢測結(jié)果.當(dāng)紅細(xì)胞比積過大(>0.55)或過小(<0.20)可影響測定結(jié)果,這時(shí)枸櫞酸鈉的用量為V=0.00185×V1×(1.00-)×100 (注:V-枸櫞酸鈉用量, V1-血量ml,-紅細(xì)胞比積

14、)有下列濃度的物質(zhì)存在時(shí),對APTT的干擾小于10%標(biāo)本類型甘油三酯(mg/dL)血色素(mg/dL)結(jié)合膽紅素（mg/dL）正常不正常780605505208361012.結(jié)果計(jì)算程序的原理由儀器測定反應(yīng)物凝固的時(shí)間即為活化部分凝血活酶時(shí)間13.生物參考區(qū)間: 21.1-36.5 S（患者結(jié)果超過正常對照10S上有臨床意義）14.患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間21124秒15.警告/危急值A(chǔ)PTT：20S 或80S16.實(shí)驗(yàn)室解釋16.1APTT常用于內(nèi)源性凝血系統(tǒng)（、因子）的篩選及肝素抗凝治療的監(jiān)測16.2 APTT延長：見于先天性凝血因子缺乏（如血友病甲、乙，接觸因子、缺乏、VWF等）；多種凝

15、血因子缺乏（如嚴(yán)重肝病、維生素K缺乏、DIC、纖溶亢進(jìn)等）；血液中有抗凝物質(zhì)存在如凝血因子抑制物、狼瘡抗凝物、華法林或肝素水平增高，F(xiàn)、F及F、F缺乏，大量輸入庫血。16.3 APTT縮短：見于DIC高凝期和妊娠高血壓綜合癥等高凝狀態(tài)以及血栓前狀態(tài)、血栓性疾病。16.4 是監(jiān)測肝素治療的首選指標(biāo)。要注意APTT測定結(jié)果必須與肝素治療范圍的血漿濃度呈線性關(guān)系，否則不宜使用。一般在肝素治療期間，APTT維持在正常對照的1.53.0倍為宜.16.5對內(nèi)源凝血途徑因子(、)缺乏較CT敏感(血小板異常不影響APTT)能檢出:C小于25%的輕型血友病.對凝血酶原、纖維蛋白原缺乏則不夠敏感,故APTT延長的

16、最常見疾病為血友病.此時(shí)可進(jìn)一步做糾正試驗(yàn),即于患者血漿中加入1/4量的正常新鮮血漿、硫酸鋇吸附血漿或正常血清(試劑參見凝血酶原消耗試驗(yàn)的糾正試驗(yàn)),再做APTT,如正常血漿和吸附血漿能糾正延長的結(jié)果而血清不能糾正,則為因子缺乏;如吸附血漿不能糾正,其余兩者都能糾正,則為因子缺乏;如三者都不能糾正,則為病理性循環(huán)抗凝物質(zhì)。17.安全性防護(hù)措施17.1在操作儀器時(shí)應(yīng)按照儀器作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行操作,防止受傷、觸電等17.2在進(jìn)行維護(hù)和檢查工作時(shí),請帶上橡膠手套,使用專用的工具和部件,在工作完成后,用消毒液清洗雙手,以免發(fā)生感染17.3在處理血樣時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎,應(yīng)始終戴上橡膠手套,以避免發(fā)生細(xì)菌感染,若樣

17、本濺入眼睛或者傷口,須用大量清水沖洗,并立即就診17.4在處理廢液以及裝卸相關(guān)部件時(shí),請勿接觸廢液.如果其中包含血樣,可能導(dǎo)致感染發(fā)生.如果無意接觸血液,首先用消毒液清洗,然后用肥皂清洗17.5在處理試劑時(shí):如果試劑不慎落入眼睛,立即用大量清水沖洗,并接受治療;如果不慎吞入試劑,立即向醫(yī)生求助,喝入大量清水,并盡量嘔出吞入試劑;如果試劑沾上皮膚或者手,用大量清水沖洗;在丟棄廢液和消耗品時(shí),請按照處理醫(yī)療、傳染性、工業(yè)性廢水的步驟進(jìn)行處理,如果其中含有血樣,可能導(dǎo)致細(xì)菌感染.18.變異的潛在來源18.1冷凍血漿可減低APTT對狼瘡抗凝物以及對、HMWK、PK缺乏的靈敏度；室溫下，F(xiàn)易失去活性，因此恰當(dāng)?shù)臉?biāo)本處理非常重要。18.2高脂血癥可使APTT延長18.3抗凝劑：草酸鹽、EDTA、肝素不適用于APTT檢查18.4標(biāo)本采集處理不當(dāng),如血與抗凝劑未充分混勻，出現(xiàn)凝塊，有組織液混入,混勻時(shí)過分用力使標(biāo)本溶血，造成結(jié)果變異。如果抽血過慢或不太順利,可能激活凝血系統(tǒng),試驗(yàn)結(jié)果將會(huì)顯示凝血因子活性增高,如果采血時(shí)產(chǎn)生泡沫,可能導(dǎo)致纖維蛋白原和V因子及因子變性.18.5纖溶藥物的影響（如雙香豆素、鏈激酶、尿酶等），超劑量使用肝素。18.6FDP增加使凝固時(shí)間延長。