體內藥分考試題目和答案

1、 與常規(guī)藥物分析相比，體內藥物分析有哪些特點？體內藥物分析（Biopahrmaceutical Analysis），是一門新興學科，是藥物分析的重要分支，也是現(xiàn)代藥學的創(chuàng)新、延伸和發(fā)展。體內藥物分析旨在通過各種分析手段，了解藥物在體內的數量與質量變化，獲得藥物動力學的各種參數、藥物在體內的生物轉化、代謝方式和途徑等信息。 特點：a干擾雜質多：生物樣品中含有的蛋白質、內源性物質和藥物的代謝產物都會干擾分析測定，樣品一般需經過分離、凈化才能進行分析。b樣品量少（ng/ml ug/ml），不易重新獲得。在測定前需要濃縮、富集。C由于藥物濃度低，對分析方法的靈敏度和專屬性要求高 。d要求較快提供結果（

2、臨床用藥監(jiān)護，中毒解救等）e要有可以進行復雜樣品分析的設備。f工作量大，測定數據的處理和結果的闡明不太容易。g有時由于濃度太低，需要測定其綴合物及代謝產物。 影響血藥濃度的因素有哪些？當藥物進入體內后，大多數藥物借助血液分布到作用部位或受體部位，當血藥濃度達到一定水平時，才能產生相應的藥理效應。 藥物進入體內到產生一定的血藥濃度，要經過一系列的過程，包括吸收、分布、代謝、排泄，而這一系列過程會受到多種因素的影響，從而影響藥物在體內的藥理效應。1) 機體因素a生理因素（年齡、性別、婦女妊娠等）年齡： 嬰幼兒 肝、腎等臟器發(fā)育不全，影響吸收、分布、代謝、排泄，藥動參數與成人不同。老年人機體各組織生

3、理功能退化，胃酸分泌減少，血中白蛋白濃度下降，肝腎血流量減少，藥酶活性下降。 性別：婦女因激素水平影響生理功能，在藥物吸收、蛋白結合率，分布容積及代謝方面與男性有所不同。2) 病理因素胃、腸道疾病影響吸收，肝臟疾病影響代謝，腎臟疾病影響排泄3) 遺傳因素（代謝酶活性差異）酶活性有先天差異，用藥個體代謝有快型和慢型之分,如乙?；D移酶4) 藥物因素a劑型因素藥物的粒子大小、晶型、輔料、工藝等影響藥物在體內的溶解度。（例地高辛、苯妥英鈉）b手性藥物對映體相互作用藥效學和藥動學相互作用（拮抗或協(xié)同作用），在藥動學方面的相互作用表現(xiàn)在吸收、分布、代謝、排泄過程中的競爭性抑制作用和受體對兩對映體的選擇性

4、作用。5) 環(huán)境因素a化學物質和合并用藥藥酶誘導劑、藥酶抑制劑、大氣污染，煙，酒，茶，食品添加劑等b人體晝夜節(jié)律、營養(yǎng)和精神狀態(tài)營養(yǎng)不良對藥物作用敏感精神憂郁對藥物反應較重綜上所述，影響血藥濃度的因素很多，同一種給藥方案難以對每一個病人都達到理想的治療效果。因此，為做到用藥安全、合理、有效，必須設計個體化給藥方案，這需要進行“治療藥物監(jiān)測（therapeutic drug monitoring，TDM）”，以血藥濃度為指標，達到個體化用藥。 試述體內藥物分析在藥學領域中的作用和地位a.在新藥評價和新藥開發(fā)中的意義 藥代動力學和生物利用度研究隨著醫(yī)藥工業(yè)的發(fā)展，人們已認識到要達到臨床安全、有效、

5、合理用藥，不僅要從管理、生產、應用等各環(huán)節(jié)對藥品進行全面質量管理，而且還需進行臨床藥理學和臨床藥學的研究，給新藥一個確切的評價。 代謝物研究為設計和發(fā)現(xiàn)新藥提供信息部分藥物生物轉化后的代謝產物較原型藥物活性更高，故可利用藥物代謝的知識來設計新藥或對原型藥物進行結構改造，從而產生新的作用特點的藥物。對藥物及其制劑的體內藥代動力學研究，也是設計新劑型的基礎要開展以上研究工作，首先要解決的問題是體內微量藥物及其代謝物的分離分析方法。b.在臨床合理用藥中的意義 藥物進入體內后，大多數藥物借助血液分不到作用部位或受體部位，當血藥濃度達到一定水平時，才能產生相應的藥理效應。 臨床上的合理用藥、個性化給藥都

6、與血藥濃度的檢測密切相關。 常用生物樣本有哪些？如何采集、儲存。1) 血液采集：待藥物在血液中分布均勻后取樣，從靜脈采血。制備：血漿(plasma)：全血 + 抗凝劑（肝素等）離心上清液（淡黃色）血清(serum)：全血靜置一段時間離心上清液（淡黃色）全血(whole blood)：全血 + 抗凝劑（肝素等）混合儲存：采血后即使分離，不超過2h，分離后置于冰箱或冷凍柜中保存；若不予先分離，血凝后冰凍保存；短期4，長期-20。2) 尿液：尿中藥物以原型、代謝物或綴合物形式存在。采集：自然排尿，常用涂蠟的一次性紙杯或玻璃杯制備：尿液加入適當的防腐劑于儲尿瓶儲存：主要成分是水、尿素、鹽類，易長細菌，

7、短期可置4冷藏或加防腐劑，若保存時間長則需冷凍（-20）保存。3) 唾液采集：漱口15min后，用插入漏斗的試管收集口內自然流出或經舌在口內攪動后流出的混合唾液采集時間至少10min制備：唾液除去泡沫部分放置分層離心上清液。儲存：4以下保存冷凍的樣品測定時需解凍，最好一次性測定完畢，不要反復冷凍-解凍-冷凍-解凍，以免藥物含量下降。 生物樣品測定前為什么要除去蛋白質？除去蛋白質的常用方法有哪些？去蛋白質的意義：使結合型藥物釋放出來，以便測定藥物的總濃度；得到較“干凈”的提取液，減少乳化，消除對測定的干擾；保護儀器，延長使用期限。常用的方法：1) 蛋白質沉淀法a生成不溶性鹽加入酸類（TCA、HC

8、lO4等）加入重金屬鹽（Zn2+ 、Cu2+ 、Ag+ ）b鹽析和脫水加入中性鹽（(NH4)2SO4、NaCl ）加入與水混溶的有機溶劑（甲醇、乙腈、丙酮）c組織酶消化法（蛋白水解酶）酶消化法是在一定的pH范圍、一定的溫度和一定的反應時間下完成的。其特點是：水解條件溫和，水解效率高，無乳化生成。有時可合用一些蛋白酶增活劑，以減少酶用量和縮短消化時間。d超濾法 e加熱法：熱變性蛋白質 影響液-液提取和液-固提取效率的因素分別有哪些？液-液提取1) 水相pH堿性藥物：PH高于藥物的pKa 23單位；酸性物質：pKa 23單位2) 提取溶劑提取溶劑的選擇既要考慮提取的選擇性，同時也要考慮操作是否方便

9、，在滿足提取效率的同時選取極性盡可能小的溶劑，使既有合適的回收率，又可將干擾物質降到最低。一般可根據相似相溶原則進行選擇，選擇沸點低的溶劑。當樣品中藥物性質未知時，可用乙醚、氯仿分別作為酸性和堿性藥物的提取溶劑。 3) 離子強度 在水相中加中性鹽，如NaCl，可增加離子強度，使溶液中水分子與無機離子強烈締合，導致與藥物締合的水分子減少，使藥物在水相中溶解度變小，有利于有機溶劑提取。4) 有機相和水相體積 1:1或2:1液-固提取分離度和回收率是反映提取效率的重要指標，影響提取率的主要因素是：1) 洗脫液流速流速太快，分離度下降，樣品流失，回收率低，重現(xiàn)性差。2) 樣品裝載量有效裝載量取決于被測

10、物的容量因子、固定相量和樣品濃度。過載，導致樣品流失。3) 樣品的前處理血樣血清、血漿可直接上樣進行固相萃取，但若藥物與蛋白結合，則會降低萃取回收率 如何根據所取樣本、待測物的理化性質設計前處理方法？舉例說明。藥物的理化性質和存在形式。首先是藥物的酸堿性質(pK。)、未電離分子的親脂性、揮發(fā)性等物理參數。這些涉及藥物的提取性質、是否會有揮發(fā)損失以及能否采用氣相色譜法分析測定。藥物的光譜特性及官能團性質涉及分析儀器的選擇以及是否需要進行化學衍生化和是否需要應用特殊檢測器。藥物的化學穩(wěn)定性也涉及樣品處理條件的選擇。同時應注意藥物在體內的存在形式及血漿蛋白結合率數值，以便采取適宜的預處理方法。選用的

11、生物樣品類型樣品預處理應根據所選用的待測生物樣品的類型不同而變化。如血漿、血清常需去除蛋白質然后提取，而唾液樣品則主要采用離心沉淀除去粘蛋白，取上清液測定藥物濃度。要測定尿液中的綴合物常需采用酸水解法或酶水解法使綴合物水解。示例2慶大霉素血藥濃度測定慶大霉素(gentamicin)血藥濃度范圍為412mgml，在體內不被代謝，以原型存在，蛋白結合率為30。慶大霉素與蛋白質結合率低，在沉淀蛋白時較易釋放。蛋白沉淀劑有乙腈、甲醇、高氯酸等。慶大霉素分子中的苷鍵在強酸條件下易水解，故不宜選高氯酸等強酸除蛋白。慶大霉素水溶液在pH212范圍內穩(wěn)定，用乙腈或甲醇去蛋白時，上清液pH為8595，因此可選這

12、兩種溶劑作為蛋白沉淀劑，特別是乙腈具有弱堿性，藥物一蛋白結合物在堿性下更易于釋放，而且蛋白質經乙腈沉淀后形成團塊狀，易黏附于容器壁上，使上清液澄清便于用吸樣器吸取、轉移。慶大霉素結構中含多個羥基，使其具有較強的極性和水溶性，導致無法直接采用經典的液一液萃取法。從慶大霉素結構看，分子中含有多個游離氨基(伯胺)，可以用1-氟-2，4-二硝基苯FDNB等紫外衍生試劑，也可以用鄰苯二醛0PA等熒光衍生試劑，使慶大霉素變?yōu)榫哂凶贤馕栈驘晒獾难苌?。因熒光檢測靈敏度比紫外檢測要高13個數量級，故選擇熒光衍生化試劑OPA?？紤]到柱后衍生需要附加裝置，所以采用人工的柱前衍生化法，生成的衍生物可用溶劑萃取，萃

13、取液直接進樣或蒸干后加流動相或適當溶劑溶解后進樣分析。萃取溶劑以乙酸乙酯較好。慶大霉素的強極性和解離性，使其更適合固相萃取分離，可采用硅膠和陽離子交換劑作為固相填料。當在萃取柱上直接衍生化后，生成的衍生物可用乙醇洗脫。根據實驗室的條件，血漿樣品預處理方法為：乙腈沉淀血漿蛋白后，用OPA柱前衍生化，再以乙酸乙酯萃取熒光衍生物。然后采用RP-HPLC分離，熒光檢測血漿中慶大霉素濃度。 基質效應產生的原因、影響、確認方法以及消除。 與標準樣品和QC樣品相比，生物樣品在進行LC-ESI-MS時，會產生明顯的基質效應。 原因：生物樣品中的內源性物質、代謝產物或一同服用的其它藥物，因在色譜分析中與目標化合

14、物分離不完全或未被檢測到而進入質譜后產生基質效應。影響：顯著降低或增加目標離子的生成效率及離子強度，進而影響測定結果的精密度和準確度。確認方法：(1) 標準曲線測定法：本法需配制3組不同的標準曲線。每組包括5條標準曲線，每條標準曲線包括從低到高的7個濃度點，共需測定3×5×7=105個樣品。通過比較3組標準曲線待測組分的絕對響應值、待測組分與內標的響應值比值和標準曲線的斜率，可以確定基質效應對定量的影響。(2) 柱后灌注法：將空白生物樣品的提取液和空白溶劑分別進樣進行液質分析，同時利用注射泵將含相同濃度待測物的標準溶液通過色譜柱與質譜接口之間的三通注人到色譜柱流出液中。如果

15、同空白溶劑的萃取離子圖譜相比，空白提取液的萃取離子圖譜的響應信號明顯減弱或增強，則表明存在基質效應的影響。基質效應的消除： 選擇合適的樣品制備方法最有效：實驗時可同時次啊用幾種不同的樣品制備方法，從中選擇基質效應最小的樣品制備方法。 改善色譜分析條件：適當地增加保留時間(>3rain)、改善多組分間的色譜分離、減少進樣體積。 優(yōu)化質譜分析條件：改變離子化方式，如APCI。 內標的選擇：穩(wěn)定同位素標記物 分析方法的確證包括哪些內容。 特異性：在樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準確、專一地測定分析物的能力。內源性物質、代謝產物、配伍藥物的干擾等 標準曲線、定量范圍、定量下限（LLOQ

16、）：標準曲線反映了所測物質濃度與儀器響應值之間的關系，一般用回歸分析方法所得的回歸方程來評價。其到底濃度范圍為定量范圍。標準曲線上的最低濃度點，表示測定樣品中符合準確度和精密度要求的最低藥物濃度 準確度：在分析條件下，測得值與真實值的接近程度。準確度的測定通常使用模擬生物樣品，以測得的濃度與添加的理論濃度比較計算求得。準確度用回收率表示。 精密度：表示一組測量值彼此符合的程度。常用標準差（SD）、相對標準差（RSD）或變異系數（CV）表示。批內精密度、批間精密度 穩(wěn)定性：包括方法穩(wěn)定性和生物樣品穩(wěn)定性兩個方面。要求：取高、中、低三個濃度的質控樣品考察；在不同的存放條件下，存放時間要求不同；需要

17、考慮生物樣品從收集到分析的所有步驟的穩(wěn)定性。長期貯存穩(wěn)定性考察、短期室溫穩(wěn)定性 萃取回收率：從生物樣本基質中回收得到分析物質的響應值與標準品產生的響應值的百分比即為分析物的萃取回收率。應考察高、中、低三個濃度的萃取回收率。萃取回收率應大于70%且穩(wěn)定。萃取回收率不同于提取回收率。 基質效應 方法學質控10.闡述定量限與檢測限的定義及區(qū)別、表示方法。檢測限LOD系指試樣中被測物能被檢測出的最低量。是限度試驗參數，無需定量測定。常用%、ppm、ppb表示。常用的方法：非儀器分析目視法、信噪比法一般以信噪比（S/N）31或21時的相應濃度或注入儀器的量確定檢測限。定量限LOQ 指樣品中被測物能被定量

18、測定的最低量，結果應具有一定準確度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。 常用信噪比法確定定量限，一般以信噪比（S/N）為10定量限在數值上總應高于檢出限。與檢測限不同，定量限不僅受到測定噪聲限制，而且還受到空白背景絕對水平的限制，只有當分析信號比噪聲和空白背景大到一定程度時才能可靠地分辨與檢測出來。11.比較比色法、紫外法、熒光法的異同點 。比色法：以可見光作光源，比較溶液顏色深淺度以測定所含有色物質濃度的方法。紫外法：可見光、紫外線照射某些物質，主要是由于物質分子中價電子能級躍遷對輻射的吸收，而產生化合物的可見紫外吸收光譜。熒光法同點： 都以朗伯-比爾定律(Abc)為基礎。 都屬于光譜分析

19、法異點：比色法和紫外法 光源：比色法使用的是混色光源，紫外法使用的是單色光源。 比色法使用的是色階和人的眼睛，相對誤差較大，紫外法和熒光法使用的是儀器和光電檢測器，相對誤差較小 比色法主要是定性的，而紫外法和熒光法是定量、定性 本質：紫外法為吸收光譜；熒光法為發(fā)射光譜。 靈敏度：熒光法10-10-10-1；紫外法10-4-10-72；比色法較低低 選擇性：紫外和比色法一般；熒光高 應用：熒光法的應用沒有紫外廣。12.紫外法消除干擾的方法有哪些？說明原理和應用條件。 差示分光光度法原理：利用被測物在兩種不同溶液中吸收光譜發(fā)生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測定兩種溶液的吸

20、收度差值（A值），根據A與被測物濃度C的線性關系進行定量測定。應用條件：必須使被測物在兩種溶液中以不同的化學形式存在，且兩種化學形式的吸收光譜應有顯著差異。根據被測物理化性質，可選擇不同的處理方法，除酸、堿外，還可用緩沖液、氧化劑等。但應使被測物在一種溶液中以一種形式存在，光譜純度不低于99%。 雙波長法：主要用于二元混合物或渾濁樣品的測定。原理：在l測處：A測= A樣A雜在l參處：A參=A樣A雜A = A測A參 =（A樣A雜）（A樣A雜） 因為：A雜= A雜 所以： A= A樣 A樣，與干擾物無關。應用條件：l測被測物吸收峰附近 l參干擾物在l測處的等吸收點，即干擾物在此兩波長處A值相等 導

21、數光譜法原理：如果干擾吸收隨波長呈線性時，可用直線方程表示 A混=E測·C測·Lab，對上述公式求導：dA混/d=dE測/d·C測·Lb，干擾物質的吸收由隨波長呈線性變成了常數。對于非線性干擾，可近似地用二次曲線表示A=E·C·L+t+u+w2，對上式求二階導數，可使雜質干擾的二階曲線t+u+w2變成常數w，從而消除干擾。應用條件：根據干擾物質的吸收光譜圖形，選擇導數階數，不同階導數曲線如下13.如何進行激發(fā)光譜和熒光光譜的測定？激發(fā)光譜：將熒光單色器的波長鬧定在比激發(fā)單色器波長長的某一任意波長上，以激發(fā)單色器波長掃描，測得不同波長的

22、相應熒光強度，繪制曲線。發(fā)射光譜：將激發(fā)單色器的波長固定在物質的最大吸收波長處，將熒光單色器波長大于激發(fā)波長的不同范圍內掃描，測得不同波長下的相應熒光強度，繪制曲線。14.GC常用檢測器有哪些？各有何特點？以氣體為流動相的色譜法稱為氣相色譜法。檢測器 氫焰離子化檢測器FID為質量型檢測器，峰面積（A）取決于單位時間進入檢測器中組分的質量，峰高（H）與載氣流速成正比，當用H定量時，需保持載氣流速恒定。特點適于有機物檢測，應用范圍廣，線性寬，響應快。 氮-磷檢測器NPD特點：為含N、P藥物的專屬檢測器，選擇性高，與FID相比，靈敏度分別高50、500倍，線性寬。 電子捕獲檢測器ECD是電負性有機化

23、合物的專屬檢測器特點：具有較高的選擇性和靈敏度，可用于測定某些含藥物濃度較低的生物樣品。15.如何選擇進樣室、色譜柱、檢測室溫度？色譜條件選擇柱溫：關鍵因素。使最難分離的組分有盡可能好的分離的前提下，盡可能采取較低柱溫，以tR值適中，不拖尾為原則。程序升溫：對于含理化性質差異較大的多組分樣品，可采用程序升溫方式測定，但此法不適合于臨床治療藥濃監(jiān)測，因儀器平衡時間長，不能滿足臨床要求。進樣室溫度一般進樣室溫度樣品沸點（不超過沸點50），通常較柱溫高1050。檢測室溫度要求比柱溫大30或等于進樣室溫度，并不能低于100，以免色譜柱流出物在檢測器中冷凝而污染檢測器。16.GC 中常用定量方法有哪些？

24、如何選擇內標？有外標法、內標法和標準加入法內標法在GC測定中，前處理步驟多，難控制各步操作一致。同時進樣量小，溶解殘渣的溶劑揮發(fā)性又大，每次進樣量不可能一致。樣品提取過程中轉移出的溶劑體積也不可能相等。鑒于上述原因，GC法通常采用內標法定量。對內標的要求： 內標物必須是樣品中不含有的組分 保留時間應與待測物tR值相近，R1.5 有足夠的純度內標選擇原則： 內標與被測物相差一個化學元素 內標與被測物為同系物 內標與被測物結構相似 內標與被測物理化性質相似17.什么是鍵合相色譜，在HPLC 中常用鍵合相色譜有哪幾類？固定液通過化學反應的方法鍵合在載體表面上的固定相稱為化學鍵合相。以化學鍵合相為固定

25、相的色譜法稱為鍵合相色譜。 正相HPLC：流動相極性<固定相 反相HPLC：流動相極性>固定相,本法主要用于非極性至中等極性的各類分子型化合物。 離子對色譜:主要用來分離強極性有機酸和有機堿 離子抑制色譜:本法適用于pKa 3的弱酸和pKa 8的弱堿。 離子交換色譜：適用于無機物和有機物的分離。18.什么叫正相色譜？什么叫反相色譜？如何調整流動相極性、pH，使被測物的容量因子在合適范圍，分離度、對稱性滿意。正相色譜（normal phase，NP）：流動相極性小于固定相極性的分配色譜稱為正相色譜。反相色譜（reversed phase ，RP）：流動相極性大于固定相極性的分配色譜稱

26、為反相色譜。流動相極性增加，洗脫能力降低，溶質的容量因子k值增大，保留時間增大；結構類似組分，極性大的先出峰，調整流動相極性，可控制k值在所要求的范圍內。改變流動相組成、比例、pH值，比較： 柱效 n = 5.54（tR/W1/2 ）2 分離度 R = 2（tR2 tR1）/（W1+W2）對稱因子 T = W0.05h /2d1 合適的tR 19.HPLC常用檢測器有哪些？使用范圍？ 紫外檢測器最常用，用于具有-共軛及n-共軛結構的化合物。固定波長檢測器（254nm），可變波長檢測器在190-700nm波長范圍內可任選，選擇合適波長可提高檢測靈敏度和選擇性。 光電二極管陣列檢測器DAD 熒光檢

27、測器FD：用于能產生熒光或其衍生物能發(fā)熒光的物質 電化學檢測器：包括安培檢測器、電導檢測器和極譜檢測器等，適用于具有氧化還原性質的化合物的檢測 蒸發(fā)光散射檢測器ELSD：主要用于糖類、高分子化合物、高級脂肪酸、氨基酸等無紫外吸收的化合物。20.什么是離子抑制色譜？什么是離子對色譜？兩者的區(qū)別？離子抑制色譜法ISC是在反相色譜法的基礎上，通過在流動相中加入少量弱酸(常用醋酸)，弱堿(常用氨水)或緩沖鹽(常為磷酸鹽及醋酸鹽)作為抑制劑，以調節(jié)溶液的pH，抑制待測組分的解離，增加組分在固定相中的溶解度，以達到分離有機弱酸、有機弱堿的目的。離子對色譜IPC原理：將平衡離子（反離子）加入到流動相中，在一

28、定pH 條件下，與呈解離狀態(tài)的藥物作用，生成脂溶性的中性離子對結合物，從而增加了被測物在固定相上的保留，改善分離效果。區(qū)別 離子抑制色譜是在流動相中加弱酸或弱堿，抑制被測物電離。而離子對色譜是在流動相中加入反離子，與待測離子形成離子對，以提高脂溶性。 分析對象（適用范圍）不同： 離子抑制色譜適用于弱酸、弱堿 離子對色譜適用于不同強度的酸、堿、兩性物、酸堿混合物。21.掌握色譜法定量計算。定量方法有外標法、內標法和標準加入法等。內加法（第二標準加入法）將內標法與標準加入法相結合，可以克服標準加入法樣品耗量多，不適宜大量樣品測定和操作繁、難平行一致的缺點。將被測 物分成兩等分：甲 等量內標（r）

29、等量溶劑 乙 藥物標準（i） 同法處理、測定，得各自圖譜，計算。 求藥物與內標峰的比值：R甲= Ad/Ar， R乙= Adi/Ar，求比值差R：R= R乙R甲= Adi/Ar-Ad/Ar計算被測物濃度（md）：md=（Ad/Ar）/（Adi/Ar- Ad/Ar ）×mi = mi×（R甲/R）mi為加入的標準品濃度；r內標；d藥物；i藥物標準22.GC/MS中常用離子源？各有何特點？接口的作用是什么？離子源離子源的作用是接受樣品產生離子。 電子轟擊離子化EI特點：電離效率高，能量分散小，結構簡單，操作方便。圖譜具有特征性，化合物分子碎裂大，能提供較多信息，對化合物的鑒別和結構解析十分有利。所得分子離子峰不強，有時不能識別。本法不適合于高分子量和熱不穩(wěn)定的化合物。 化學離子化CICI 特點不會發(fā)生象EI中那么強的能量交換