臨床檢驗ABO血型鑒定

1、東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗實驗室文件編號：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁碼：第1 頁，共5 頁測定原理 根據(jù)紅細胞上有或無A抗原或和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型4種?？衫眉t細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒定ABO血型。所謂正定型，是用已知抗A和抗B分型血清來測定紅細胞上有無相應的A抗原或和B抗原；所謂反定型，是用已知A細胞和B細胞來測定血清中有無相應的抗A或和抗B。 試劑和儀器 1批批檢的抗A(B型血)、抗B(A型血)及抗A十B(O型血)分型血清。 2批批檢的5 A、B及O型試劑紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注； 3離心機，顯微鏡。標本收

2、集與處理 1，受檢者血清； 2，枸緣酸鈉抗凝血或未稍取血，受檢者血液制成5 紅細胞鹽水懸液使用，制備方法見本節(jié)附注。 3，標本出現(xiàn)中度溶血者，為不合格標本，不能用于檢測。操作步驟 1試管法 (1) 取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標明抗A、抗B和抗A十B，用滴管分別加抗A、抗B和抗A十B分型血清各l滴（約50 ul）于試管底部，再以滴管分別加入受檢者5紅細胞鹽水懸液1滴，混和。 (2) 另取潔凈小試管(內(nèi)徑10mm×60mm)3支，分別標明A、B和O細胞。用滴管分別加入受檢者血清l滴于試管底部，再分別以滴管加入A、B和O型5試劑紅細胞懸液l滴，混和。 (3)

3、 立即以1000rmin離心 3 min。 (4) 將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上，再以低倍鏡檢查。 (5) 觀察結(jié)果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于A、B亞型、類B或cisAB的發(fā)現(xiàn)。 東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗實驗室文件編號：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁碼：第2 頁，共5 頁 (6) 凝集強度判斷標準 4十 紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。 3十 紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。 2十 紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。 1十 肉眼可見大顆粒，周圍有

4、較多游離紅細胞。 土 鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞。 MF混合凝集外觀(mixed field)是指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。 一 表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。 2玻片法 (1) 取清潔玻片1張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標明抗-A、抗-B和抗-A十B，分別用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清 l滴于標明的方格內(nèi)，再各加受檢者2紅細胞懸液1滴，混和。 (2) 另取潔凈玻片一張(或白瓷板1塊)，用蠟筆劃成方格，標明A細胞、B 細胞和O細胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細胞懸液1滴。 (3)

5、 將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細胞充分混勻，連續(xù)約15 min，先以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應；再在低倍鏡下觀察結(jié)果。 結(jié)果判定 ABO血型正反定型結(jié)果 分型血清+受檢者紅細胞 受檢者血型 受檢者血清+試劑紅細胞 抗-A 抗-B 抗-A十B A細胞 B細胞 O細胞 十 十 A 十 十 十 B 十 一 O 十 十 十 十 十 AB 注：十為凝集；一為不凝集。 東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗實驗室文件編號：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁碼：第3 頁，共5 頁質(zhì)量控制與附注1， 分型血清必須為批批檢試劑，且在有效期內(nèi)使用；質(zhì)量性能符合要求。試劑開封后必

6、須貼上開封日期、開封人標簽，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污染。試劑開封后有效期為一周。 2， 試劑紅細胞以3個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌 1次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原?；蚴褂煤细竦纳唐吩\斷紅細胞。試劑紅細胞有效期：自制的為15天，商品的為試劑有效期。試劑開封后必須貼上開封日期、開封人標簽，用畢后應放置冰箱保存，以免細菌污染。試劑開封后有效期為一周。 3， 生理鹽水啟用后，有效期為二周。4， 所有試劑在開封或使用時，必須檢查是否有變質(zhì)；凡可疑者，必須更換新的試劑進行檢測工作。 5，試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。 6，操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再

7、加紅細胞懸液，以便容易核實是否漏加血清。 7，按理IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以4為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾，一般仍在室溫(2024)內(nèi)進行試驗，37可使反應減弱。 8，離心時間不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性或假陰性結(jié)果。 9，觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排列的區(qū)別。 10，判斷結(jié)果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。 11，對于可能存在不完全抗原的時候，應在各反應方加入凝聚胺試劑，以檢驗不完全抗原的存在。12，對于可疑結(jié)果，必須更換所用的試劑，重新檢測。13，5%紅細胞懸液的配制：用生理鹽水洗滌紅細胞3次。根據(jù)下表進行紅細胞懸液的配制。

8、懸液濃度（%） 壓積紅細胞（滴） 鹽水（滴）- 2 1 2ml(40) 5 1 0.8ml(16) 10 1 0.4ml(8) 20 1 0.2ml(4)東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗實驗室文件編號：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁碼：第4 頁，共5 頁正反定型結(jié)果不一致的原因 （一） 原因： 有技術(shù)性問題或紅細胞和血清本身的問題，常見者有以下幾種： 1， 分型血清效價太低、親和力不強。如抗A血清效價不高，可將A亞型誤定為O型，AB型誤定為B型。 2， 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯，誤判為陰性反應。 3， 受檢者紅細胞上抗原位點過少(如亞

9、型)或抗原性減弱(見于白血病或惡性腫瘤：以及類B或cisAB等。 4，受檢者血清中蛋白紊亂(高球蛋白血癥)，或?qū)嶒灂r溫度過高，常引起紅細胞呈緡錢狀排列。 5，受檢者血清中缺乏應有的抗-A及或抗B抗體，如丙種球蛋白缺乏癥。 6，各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時，可溶性血型物質(zhì)中和了相應的抗體. 7，由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。 8，血清中有意外抗體，如自身抗I，常引起干擾。 9，老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結(jié)果不一致的解決辦法如發(fā)現(xiàn)ABO正反定型結(jié)果不一致，先要重復作試驗1次。嚴格執(zhí)行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細心觀察和解釋試

10、驗結(jié)果，就可解決明顯的問題，對一些疑難問題月必須進一步研究。 （二）檢查步驟： 1， 另從受檢者采取l份新鮮血液標本這樣可以糾正因污染或搞錯樣本造成的不符合。 2，將紅細胞洗滌數(shù)次，配成5鹽水細胞懸液，用抗A、抗B、抗Al，抗A十B及抗H做試驗可以得到其它有用的信息。 3，對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結(jié)果呈陽性，表示紅細胞已被抗體致敏。 4，用A1、A2、B、O紅細胞及自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑是抗I，用O型(或ABO相合的)臍血紅細胞檢查。 5，如果試驗結(jié)果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和4放置30min，用顯微鏡檢查核實。 6，如疑為A抗原或B抗原減弱，則可將受檢紅細胞

11、與抗A或抗B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作A、B、H血型物質(zhì)測定。后者只對80HAB分泌型的人有用。東莞常平醫(yī)院 臨床檢驗實驗室文件編號：DGCPH-CL-SOP-07-09ABO血型鑒定版序：2005-1頁碼：第5 頁，共5 頁 7，如試驗結(jié)果紅細胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水l滴，混和，往往可使絹錢現(xiàn)象消失。應注意不應先加鹽水l滴于受檢者血清中而后和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。 8，如受檢者為A型血而疑為有類B抗原時，可用下列方法進行鑒別(1) 觀察細胞與抗A及抗B的凝集強度，與抗A的反應要比與抗B的反應強。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。 （2） 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗B不凝集自身紅細胞上的類B抗原。(3) 檢查唾液中是否有A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出A物質(zhì)而無B物質(zhì)。(4) 核對患者的診斷，類B抗原的形成與結(jié)腸癌、直腸癌、革蘭陰性桿菌感