藥物分析抗生素ppt課件

1、根本要求根本要求一、掌握抗生素類藥物的構(gòu)造特點(diǎn)與分析方法一、掌握抗生素類藥物的構(gòu)造特點(diǎn)與分析方法之間的關(guān)系。之間的關(guān)系。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。二、掌握抗生素類藥物的鑒別原理與方法。三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原三、掌握抗生素類藥物法定含量測定方法的原理、測定方法與計(jì)算。理、測定方法與計(jì)算。四、熟習(xí)抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。四、熟習(xí)抗生素類藥物雜質(zhì)檢查的方法。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。五、了解抗生素類藥物中高分子聚合物檢查。第一節(jié)第一節(jié) 概述概述1. 抗生素藥物的特點(diǎn)抗生素藥物的特點(diǎn)化學(xué)純度較低化學(xué)純度較低活性組分易發(fā)生變異活性組分易發(fā)生變異穩(wěn)定性差穩(wěn)定

2、性差2. 微生物學(xué)法與理化法的比較微生物學(xué)法與理化法的比較微生物檢定法微生物檢定法理化法理化法以抗生素對微生物的殺傷或抑制程以抗生素對微生物的殺傷或抑制程度為目的衡量抗生素的生物效價(jià)度為目的衡量抗生素的生物效價(jià) 根據(jù)抗生素構(gòu)造特點(diǎn)，利用其根據(jù)抗生素構(gòu)造特點(diǎn)，利用其特有的理化性質(zhì)測定其含量特有的理化性質(zhì)測定其含量知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精致品或知或新發(fā)現(xiàn)的抗生素、精致品或粗制品均能測定粗制品均能測定 測定化學(xué)構(gòu)造知、已提純的測定化學(xué)構(gòu)造知、已提純的抗生素抗生素靈敏度高、樣品需用量小、反映抗靈敏度高、樣品需用量小、反映抗生素的醫(yī)療價(jià)值，但操作步驟多、生素的醫(yī)療價(jià)值，但操作步驟多、費(fèi)時、誤差大費(fèi)時、誤差

3、大 迅速、準(zhǔn)確、專屬性高、樣品迅速、準(zhǔn)確、專屬性高、樣品需用量小、操作簡單、省時需用量小、操作簡單、省時3.3.抗生素的活性以效價(jià)單位來表示：抗生素的活性以效價(jià)單位來表示： 每每mlml或每或每mgmg中含有某種抗生素的有效成中含有某種抗生素的有效成分的多少，用單位分的多少，用單位u u或或g g 表示。表示。 1mg 1mg青霉素青霉素G G鈉鹽定為鈉鹽定為16671667單位單位 1mg 1mg青霉素青霉素G G鉀鹽的單位鉀鹽的單位u u =1667=1667356.4/372.5=1595u/mg356.4/372.5=1595u/mg分類按構(gòu)造與性質(zhì)：分類按構(gòu)造與性質(zhì)： 內(nèi)酰胺類、氨基

4、糖苷類、內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、 四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、 氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類氯霉素類、多肽類、抗腫瘤類 林可霉素類、其他抗生素類林可霉素類、其他抗生素類第二節(jié)第二節(jié) 內(nèi)酰胺類抗生素內(nèi)酰胺類抗生素 青霉素類青霉素類NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核母核6-6-氨基青霉烷酸氨基青霉烷酸AB頭孢菌素類頭孢菌素類7654321NONHSCH2R1COOH母核（7-氨基頭孢菌烷酸）RCOABCONSOHNCOOHCH3CH3CH2青霉素青霉素青霉素鉀、鈉青霉素鉀、鈉NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH2氨芐西林氨芐西林氨芐青霉素氨芐青霉素阿莫西林阿

5、莫西林羥氨芐青霉素羥氨芐青霉素NH2CONSOHNCOOHCH3CH3HOCH2C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素頭孢氨芐頭孢氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2頭孢拉啶頭孢拉啶CH2NH2CONONHSCH3COOH頭孢羥氨芐頭孢羥氨芐NONHSCH3COOHOCNH2CH2HO頭孢噻吩鈉頭孢噻吩鈉SCH2CONONHSCH2OCOCH3COONaNSOHNCOOKCH3CH3OCCH2酸性酸性構(gòu)造特點(diǎn)與性質(zhì)構(gòu)造特點(diǎn)與性質(zhì)一、一、NaNa與堿金屬與堿金屬(Na+(Na+、K+)K+)成鹽成鹽 一羧基一羧基 易溶于水

6、易溶于水 與有機(jī)堿與有機(jī)堿( (普魯卡因普魯卡因) )成鹽成鹽 難溶于水難溶于水普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567二手性二手性C C 87654321NOS頭孢菌素類頭孢菌素類 C6 C7青霉素類青霉素類 C3 C5 C3 C5 C6 C6 旋光性旋光性 三共軛體系三共軛體系 NSO頭孢菌素類頭孢菌素類 母核有共軛體系母核有共軛體系 青霉素類青霉素類 母核無明顯母核無明顯UVUV 多數(shù)有苯環(huán)取代基多數(shù)有苯環(huán)取代基 NOS UV四四內(nèi)酰胺環(huán)內(nèi)酰胺環(huán) 水溶液水溶液 不穩(wěn)定不穩(wěn)定 枯燥純真枯燥純真 穩(wěn)定穩(wěn)定 不

7、穩(wěn)定不穩(wěn)定性要素性要素四元環(huán)張力大四元環(huán)張力大 酰胺鍵易水解酰胺鍵易水解 青霉素類青霉素類 某些氧化劑某些氧化劑酸、堿、青霉素酶酸、堿、青霉素酶某些金屬離子某些金屬離子 溫度溫度降解降解失效失效例例青霉素的降解反響青霉素的降解反響青青霉霉素素青霉噻唑酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑青霉噻唑?；u胺酸?；u胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2頭孢菌素類頭孢菌素類酸、堿、胺類酸、堿、胺類 -內(nèi)酰胺酶內(nèi)酰胺酶降解降解失效失效一呈色反響一呈色反響1. 1. 羥肟酸鐵反響羥肟酸鐵反響-內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類呈色呈色羥肟酸衍生

8、物羥肟酸衍生物Fe3+/3H+鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別實(shí)驗(yàn) 二、二、NaOH2 2HClNOHH- - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類NSONSCOHNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3 紅、棕、褐紅、棕、褐NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH22. 茚三酮反響茚三酮反響 - -氨基氨基 -氨基氨基茚三酮茚三酮 藍(lán)紫色藍(lán)紫色3. 雙縮脲反響雙縮脲反響- - -CONH開環(huán)分解開環(huán)分解 - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類堿性酒石酸銅堿性酒石酸銅紫紫4. 與重氮苯磺酸反響與重氮苯磺酸反響橙黃色橙黃色重氮苯磺酸重氮苯磺酸- - -5 56 6OHHC巧合巧合酚羥基酚羥基頭孢哌酮頭孢哌酮5. 與變色酸

9、與變色酸-硫酸反響硫酸反響活潑活潑“-CH2-青霉素青霉素阿莫西林阿莫西林氨芐西林氨芐西林HCHOCHSOH- - - 2 22 2”羰羰基基側(cè)側(cè)鏈鏈含含“分解分解變色酸變色酸顯色顯色1. K+、Na+的火焰反響的火焰反響二各種鹽的反響二各種鹽的反響 焰色焰色鮮黃色鮮黃色 + 醋酸氧鈾鋅醋酸氧鈾鋅黃黃 Na+ 焰色焰色紫色紫色 + 0.1%四苯硼鈉四苯硼鈉 + Ac白白 K+2. 沉淀反響青霉素鹽沉淀反響青霉素鹽遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素鈉青霉素鈉青霉素鉀青霉素鉀緘緘+ +H3. 重氮化重氮化 - 巧合反響巧合反響 青霉素青霉素普魯卡因普魯卡因普魯卡因青霉素普魯卡因青霉素+ + + +H重

10、氮化重氮化-巧合反響巧合反響紅紅 芳伯氨基芳伯氨基4. 與三硝基苯酚反響與三硝基苯酚反響 三硝基苯酚三硝基苯酚二芐基乙二胺二芐基乙二胺芐星青霉素芐星青霉素NaOH二芐基乙二胺二芐基乙二胺三硝基苯酚三硝基苯酚H2OHOH-HCONSOHNCOOHCH3CH3CH2CH2NCH2CH2NHCH2OHNO2O2NNO2CH2NCH2CH2NHCH2光譜法光譜法三三1、 UV法法樣品、分解產(chǎn)物樣品、分解產(chǎn)物nm339HA + +苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+A,Emin,max,%1cm1 光光譜譜圖圖頭孢氨芐頭孢氨芐 max = 262nm青霉素青霉素V鈉鈉 A280nm/A2

11、64nm = 1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHpH3.8分子重排分子重排2、IR法法3180cm-1N-H內(nèi)酰胺內(nèi)酰胺 C=O1780cm-13470cm-1O-H1690cm-1仲酰胺仲酰胺C=O1250cm-1C-O以阿莫西林為例以阿莫西林為例色譜法色譜法四四1、 TLC法法對照品對照法對照品對照法和和斑斑點(diǎn)點(diǎn)顏顏色色比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件fR2、 HPLC法法Rt比比較較供供試試品品對對照照品品相相同同條條件件三、雜質(zhì)檢查三、雜質(zhì)檢查 藥物藥物 檢查工程檢查工程 檢查方

12、法檢查方法 頭孢他啶頭孢他啶 聚合物聚合物 HPLC法法 頭孢曲松鈉頭孢曲松鈉 頭孢哌酮鈉頭孢哌酮鈉 頭孢噻肟鈉頭孢噻肟鈉 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯 有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體 HPLC法法 頭孢氨芐頭孢氨芐 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì) 反相反相TLC法法 青霉素鉀鈉青霉素鉀鈉 吸收度吸收度 紫外分光光度法紫外分光光度法 1. 1.頭孢他啶聚合物的測定頭孢他啶聚合物的測定 固定相：葡聚糖凝膠固定相：葡聚糖凝膠G-10G-10 40120 40120m m 流動相流動相A A：3.5%3.5%硫酸銨的硫酸銨的0.01mol/L0.01mol/L磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液 流動相流動相B B：0.01%0.

13、01%十二烷基硫酸鈉十二烷基硫酸鈉 對照品溶液：頭孢他啶對照品對照品溶液：頭孢他啶對照品 100 100g/mlg/ml1 1系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：實(shí)際塔板數(shù)和拖尾因子系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：實(shí)際塔板數(shù)和拖尾因子用用1mg/ml1mg/ml藍(lán)色葡聚糖藍(lán)色葡聚糖20002000、流動相、流動相A A測定；反測定；反復(fù)性用對照品溶液、流動相復(fù)性用對照品溶液、流動相B B測定。測定。 N N不低于不低于900900，拖尾因子，拖尾因子0.751.50.751.5，峰面積的，峰面積的RSDRSD應(yīng)小于應(yīng)小于5.0%5.0%。2 2測定方法測定方法 進(jìn)樣供試液，用流動相進(jìn)樣供試液，用流動相A A；進(jìn)樣對照液，；進(jìn)樣對

14、照液，用流動相用流動相B B。以外標(biāo)法計(jì)算，含頭孢他啶聚合。以外標(biāo)法計(jì)算，含頭孢他啶聚合物以頭孢他啶計(jì)不得超越物以頭孢他啶計(jì)不得超越0.3%0.3%。2.2.頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查頭孢呋辛酯中有關(guān)物質(zhì)和異構(gòu)體的檢查 固定相：固定相：ODSODS 流動相：流動相：0.2mol/L0.2mol/L磷酸二氫銨磷酸二氫銨- -甲醇甲醇62:3862:38 1 1頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2-2-異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛異構(gòu)體的制備：頭孢呋辛酯對酯對 照品照品+ +流動相流動相 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯2-2-異構(gòu)體。異構(gòu)體。2 2系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：各異構(gòu)體之間的系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)：各異構(gòu)體之間的R1.5R1

15、.5，以，以 頭孢呋辛酯頭孢呋辛酯A A異構(gòu)體計(jì)算異構(gòu)體計(jì)算n1500n1500。 3異構(gòu)體：異構(gòu)體： tR1 相對保管時間相對保管時間 r12=- 1-被測物被測物 tR2 2-規(guī)范物規(guī)范物異構(gòu)體異構(gòu)體 相對保管時間相對保管時間 判別判別B異構(gòu)體異構(gòu)體 0.85 供試液譜圖中供試液譜圖中A異構(gòu)體的峰面積異構(gòu)體的峰面積A異構(gòu)體異構(gòu)體 1.0 與與A、B異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng)異構(gòu)體峰面積和之比應(yīng) 為為0.480.55。 3.3.頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查頭孢氨芐中有關(guān)物質(zhì)的檢查-反相反相TLCTLC法法 固定相：活化后的硅膠固定相：活化后的硅膠G G板置板置5%5%V/VV/V正正十四十四 烷的正己

16、烷溶液中，展至頂部，烷的正己烷溶液中，展至頂部，涼干涼干 展開劑：展開劑：0.1mol/L0.1mol/L枸櫞酸枸櫞酸-0.2mol/L-0.2mol/L磷酸磷酸氫二氫二 鈉鈉- -丙酮丙酮120120：8080：3 3 供試液：本品供試液：本品 50mg/ml 50mg/ml 對照液對照液1 1：本品：本品 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 對照液對照液2 2：-苯甘氨酸苯甘氨酸 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 對照液對照液3 3：7-7-氨基去乙酰氧基頭孢烷氨基去乙酰氧基頭孢烷酸酸 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml結(jié)果判別：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對結(jié)果判別：供試液如顯雜

17、質(zhì)斑點(diǎn)，與對照液照液2 23 3位置一樣上所的斑點(diǎn)比位置一樣上所的斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑較，其顏色不得更深；如顯其他雜質(zhì)斑 點(diǎn)，與對照液點(diǎn)，與對照液1 1所顯的主斑點(diǎn)比較，所顯的主斑點(diǎn)比較，其顏色不得更深。其顏色不得更深。4.4.青霉素鈉鉀的吸收度檢查：青霉素鈉鉀的吸收度檢查： 供試液供試液 1.80mg/ml 1.80mg/ml， 結(jié)果判別：結(jié)果判別：A280A280不得大于不得大于0.100.10- -8 8I2 2 I+ +H碘量法碘量法一一1. 原理原理水解產(chǎn)物水解產(chǎn)物6 6 2 2 2 22 22 22 2OSNaNaIOSNaI定量過量定量過量剩余剩余ChP四、含

18、量測定四、含量測定水解水解NaOH頭孢菌素族頭孢菌素族青霉素族青霉素族反響分兩步進(jìn)展：反響分兩步進(jìn)展：1. 1. 水解反響水解反響( (按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)展按化學(xué)計(jì)算量進(jìn)展) )2. 2. 氧化氧化- -復(fù)原反響復(fù)原反響( (無固定的量關(guān)無固定的量關(guān)系，受溫度、系，受溫度、PHPH值和時間等要素值和時間等要素影響，應(yīng)嚴(yán)厲控制反響條件并采影響，應(yīng)嚴(yán)厲控制反響條件并采用規(guī)范品平行對照測定用規(guī)范品平行對照測定) )NSCH3CH3COOHOHNRCORCOHHNCOONaCH3CH3SNCOONaI24+ 5H2O+ 2HClNaOHCCH3CH3SO3HCHNH2COOHCHNHCORCOOH2+2N

19、aCl+8HI第一步第一步第二步第二步V樣樣空空V樣樣對照液對照液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 V對空對空V對對2. 方法方法供試液供試液+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴+堿堿+酸酸+緩沖液緩沖液+碘液碘液+回滴回滴 空白實(shí)驗(yàn)空白實(shí)驗(yàn)A、消除樣品已降解產(chǎn)物的干擾、消除樣品已降解產(chǎn)物的干擾B、消除樣品中其他耗費(fèi)碘的雜、消除樣品中其他耗費(fèi)碘的雜 質(zhì)的干擾質(zhì)的干擾C、消除碘揮發(fā)呵斥的誤差、消除碘揮發(fā)呵斥的誤差 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定以未經(jīng)水解的樣品作空白測定空白空白樣品樣品I2Na2S2O3I-I2 采用規(guī)范品平行對照測定采用規(guī)范品平行對照測

20、定A、可消除溫度、可消除溫度、pH、操作、環(huán)、操作、環(huán) 境等條件的影響境等條件的影響B(tài)、使本法測定結(jié)果與微生物檢定、使本法測定結(jié)果與微生物檢定 法一致法一致3. 條件條件1弱酸性弱酸性 pH4.5堿堿 I2 IO3- + I-酸酸 普魯卡因與碘在酸性條件普魯卡因與碘在酸性條件 下會產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀下會產(chǎn)生復(fù)鹽沉淀2溫度溫度 2426溫度溫度38 未水解的供試品亦耗費(fèi)碘未水解的供試品亦耗費(fèi)碘3水解時間水解時間以水解以水解2020分鐘后的耗碘量最大分鐘后的耗碘量最大4反響時間反響時間反響反響2020分鐘后，耗碘量隨時間的分鐘后，耗碘量隨時間的變化較小，可減小含量測定的誤變化較小，可減小含量測定的誤差。

21、差。4. 特點(diǎn)特點(diǎn)1靈敏度高靈敏度高樣品樣品 : 碘碘 = 1 : 82反響條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高反響條件、實(shí)驗(yàn)操作要求高V對、對、V對空對空V樣、樣、V樣空樣空1份含量份含量加試劑次序、反響時間、滴定速度一樣加試劑次序、反響時間、滴定速度一樣4I28I-5. 計(jì)算計(jì)算原料原料%WWVVVV對對照照品品）（）（含含量量樣樣對對對對對對空空樣樣樣樣空空 - - -相當(dāng)于標(biāo)示量%=S0 -SR0 -RCUWU0D平均裝量 100%制劑制劑電位配位滴定法汞量法電位配位滴定法汞量法二二1. 原理原理SHROH- - -青霉素族青霉素族水解水解HgRS2 2）（青霉素族青霉素族ChP+ +2 2Hg6 6

22、 .pH2. 方法方法 總總樣樣VNOHgHNONaOH2 2 醋酸鹽緩沖液醋酸鹽緩沖液pH4.6滴定滴定水解水解( (降降) )空空醋酸鹽緩沖液醋酸鹽緩沖液V(NO3)2HgpH4.6滴定滴定樣樣品品 以未經(jīng)水解的樣品作空白測定以未經(jīng)水解的樣品作空白測定3、 討論討論1水解必需完全水解必需完全2汞鹽滴定液用汞鹽滴定液用EDTA標(biāo)定標(biāo)定3空白實(shí)驗(yàn)空白實(shí)驗(yàn) 消除已降解產(chǎn)物干擾消除已降解產(chǎn)物干擾4優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 不需規(guī)范品不需規(guī)范品%WFTV%WFTV% - - 空空空空樣樣樣樣含含量量4、 計(jì)算計(jì)算%FTWVWV% - - ）（含量含量空空空空樣樣樣樣可見可見- -紫外分光光度法紫外分光光度法三三1、

23、 酸水解酸水解-銅鹽法銅鹽法穩(wěn)定劑穩(wěn)定劑nmCupHpHA22 + +2 2青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族水解水解CH2COCONHHCCH3CH3CCOOHCCNHSHCONSOHNCOOHCH3CH3CH2 pHACu+ +2 22、 硫醇汞鹽法硫醇汞鹽法1原理原理青霉烯酸硫醇汞鹽青霉烯酸硫醇汞鹽青霉素族青霉素族HgCl2咪唑咪唑nmmax 5 5 2 25 5 HgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH32 2HgCl咪唑咪唑nmmax 5 5 2 25 5 2方法方法對照品法對照品法%WWAA%對對照照品品樣樣

24、標(biāo)標(biāo)標(biāo)標(biāo)樣樣 計(jì)算計(jì)算標(biāo)標(biāo)樣樣咪咪唑唑硼硼酸酸緩緩沖沖液液標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)液液供供試試液液AAHgCl- -2pH 93留意留意 側(cè)鏈有側(cè)鏈有-NH2時，需加醋酐先時，需加醋酐先 將其乙?；蟛鸥砂l(fā)生上述將其乙?；蟛鸥砂l(fā)生上述 反響反響NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH2 22 2 pH93、 羥肟酸比色法羥肟酸比色法Fe3+/3H+紅色紅色NaOHHClNOHH2- - 內(nèi)酰胺類內(nèi)酰胺類羥肟酸衍生物羥肟酸衍生物HPLCHPLC法法ChP ChP 內(nèi)標(biāo)法校正因子內(nèi)標(biāo)法校正因子外標(biāo)法外標(biāo)法特點(diǎn)特點(diǎn) 快速、高效、靈敏快速、

25、高效、靈敏 專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性好 一法多用鑒別、檢查、含測一法多用鑒別、檢查、含測第三節(jié)第三節(jié) 氨基糖苷類抗生素氨基糖苷類抗生素苷苷苷苷元元糖糖縮縮合合 + +氨氨基基糖糖苷苷苷苷元元氨氨基基糖糖縮縮合合 + +鏈霉素鏈霉素 雙氫鏈霉素雙氫鏈霉素新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素慶大霉素慶大霉素 巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素鏈霉胍鏈霉胍 + 鏈霉糖鏈霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖鏈霉雙糖胺鏈霉雙糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺N

26、H CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3鏈霉胍鏈霉胍鏈霉糖鏈霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺+ +脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺+D-+D-核糖核糖+ +巴龍霉糖巴龍霉糖巴龍胺巴龍胺苷元苷元巴龍二糖胺巴龍二糖胺 糖糖 D-D-葡萄糖胺葡萄糖胺脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺D-D-核糖核糖巴龍霉糖巴龍霉糖OOOOHOCH2OHHONH2HOOOHNH2NH2OHOOHR2NH2CH2OH*R1慶大霉素慶大霉素 糖糖 苷元苷元絳紅糖胺絳紅糖胺 + 脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 糖糖 ROC R1R2HN

27、NH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺ROC R1R2HNNH2OOHH2NNH2OOOHNHCH3OHCH3絳紅糖胺絳紅糖胺紫素胺紫素胺2-脫氧鏈霉胺脫氧鏈霉胺加洛糖胺加洛糖胺N-甲基甲基-3-去氧去氧-4-甲甲基戊糖胺基戊糖胺慶大霉素慶大霉素C復(fù)合物復(fù)合物 慶大霉素慶大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 慶大霉素慶大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 慶大霉素慶大霉素C1a R、R1、R2=H 慶大霉素慶大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H 慶大霉

28、素慶大霉素C2b R=R1=H R2=CH3一、一、構(gòu)造與性質(zhì)構(gòu)造與性質(zhì)多與硫酸成鹽多與硫酸成鹽鏈霉素鏈霉素 3個個慶大霉素慶大霉素 5 5個個堿性中心堿性中心堿性堿性一一水溶性水溶性溶解性溶解性二二鏈霉素鏈霉素 pH5 pH57.57.5慶大霉素慶大霉素 pH2 pH212 12 穩(wěn)定穩(wěn)定穩(wěn)定性穩(wěn)定性四四UV三三NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3坂口反響坂口反響N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反響糖胺反響麥芽酚反響麥芽酚反響二、二、 鑒別鑒別 茚三酮反響茚三酮反響一一藍(lán)藍(lán)紫紫色色慶慶大大霉霉素素鏈鏈霉霉素素茚茚三三酮酮羥基胺構(gòu)造羥基胺構(gòu)

29、造 Molisch 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)二二氨基糖苷類氨基糖苷類H+ 糠醛糠醛羥甲基糠醛羥甲基糠醛 -萘萘酚酚 蒽酮蒽酮呈色呈色OHOH2CCHOOHOH2CCHOHOHOH紅紫色紅紫色N-N-甲基葡萄糖胺反響甲基葡萄糖胺反響三三甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺巴龍霉素巴龍霉素鏈霉素鏈霉素水解水解- -N乙酰丙酮乙酰丙酮 OH-吡咯衍生物吡咯衍生物對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+紅色紅色Elson-Morgan反響反響慶大霉素慶大霉素NHCH3NHNHNH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNCH3COCH3HHOCH2CHOH3(縮合縮合)323COCHCOCHCH

30、- -OHHHH3CH3CCHNNCOCH3CH3COCH3CH3N紅色紅色對二甲氨基苯甲醛對二甲氨基苯甲醛H+NCH3COCH3HHOCH2CHOH3 麥芽酚反響麥芽酚反響四四 鏈霉素特征反鏈霉素特征反響響鏈鏈霉霉糖糖鏈鏈霉霉素素- -OH麥麥芽芽酚酚紫紫紅紅色色 + +3FeH+分子重排分子重排NH C NH2HOOHOHNHCH2NOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHNHNHCH3H2O NaOHOOOHCH3OOCH3Fe3+H+OFe33+/紫紅紫紅麥芽酚麥芽酚鏈霉胍特有反響鏈霉胍特有反響橙紅橙紅羥基喹啉羥基喹啉鏈霉胍鏈霉胍鏈霉素鏈霉素次溴酸鈉次溴酸鈉- - -8OH或或-

31、萘酚萘酚NOH8-8-羥基喹啉羥基喹啉坂口反響坂口反響五五-萘酚萘酚OHONBrRNHCO NH六六- -24SO反響反響白白 - -2 2 + +2 2BaSOSOBaH+UV法法七七慶大霉素?zé)o慶大霉素?zé)oUVUV吸收吸收nmmax22 鏈霉素鏈霉素八色譜法八色譜法1 1TLCTLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 點(diǎn)樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色點(diǎn)樣：供試液：展開、涼干、碘蒸氣中顯色 對照液對照液 判別：供試液與對照液所顯斑點(diǎn)的顏色與位判別：供試液與對照液所顯斑點(diǎn)的顏色與位 置應(yīng)一致。置應(yīng)一致。 點(diǎn)樣：供試液點(diǎn)樣：供試液 對照液：硫酸鏈霉素規(guī)范品對照液：硫酸鏈霉素規(guī)范品 對

32、照液：硫酸鏈霉素規(guī)范品對照液：硫酸鏈霉素規(guī)范品 + + 硫酸硫酸 新霉素規(guī)范品新霉素規(guī)范品+ + 硫酸卡那霉素規(guī)范品硫酸卡那霉素規(guī)范品斷定法：供試液中主斑點(diǎn)的位置、顏色、大小斷定法：供試液中主斑點(diǎn)的位置、顏色、大小 應(yīng)與對照液應(yīng)與對照液 一樣，一樣， 對照液應(yīng)顯示分別明晰的對照液應(yīng)顯示分別明晰的3 3個斑點(diǎn)個斑點(diǎn) 否那么實(shí)驗(yàn)無效。否那么實(shí)驗(yàn)無效。2 2HPLCHPLC法：硫酸慶大霉素的鑒別法：硫酸慶大霉素的鑒別 比較供試液與對照液各組分的保管時間比較供試液與對照液各組分的保管時間。三、三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查鏈霉素雜質(zhì)鏈霉素雜質(zhì)一一鏈霉素鏈霉素B B甘露糖鏈霉素甘露糖鏈霉素 方法方法 T

33、LC中的對照品法中的對照品法BP1. 來源來源 反響中間體反響中間體對微生物的活性無明顯差別對微生物的活性無明顯差別毒副作用和耐藥性不同毒副作用和耐藥性不同發(fā)酵菌種不同發(fā)酵菌種不同工藝差別工藝差別C C組分比例組分比例不一致不一致規(guī)定控制各組分的相對百分含量規(guī)定控制各組分的相對百分含量ChPUSPBPJP慶大霉素慶大霉素C C組分的測定組分的測定二二+ + + .pH吲哚衍生物吲哚衍生物巰基醋酸巰基醋酸鄰苯二醛鄰苯二醛氨基氨基max = 330nm衍生化原理衍生化原理 1.1.1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基烷基異吲哚衍生物異吲哚衍生物RNH2+HSCH2COOHOH-CHOCHONRSCH2C

34、OOHRPHPLC方法方法 2.規(guī)定規(guī)定 C1 2550% C1 2550% C1a 1540% C1a 1540% C2a +C2 2050% C2a +C2 2050%計(jì)算計(jì)算 3.%AAAAA%ACCCCiiaa + + + + 2 22 2 峰面積歸一化法峰面積歸一化法四、四、 含量測定含量測定微生物檢定法微生物檢定法 各國藥典主要采用各國藥典主要采用HPLC法法 常用于體內(nèi)藥分常用于體內(nèi)藥分 2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R1第四節(jié)第四節(jié) 四環(huán)素類抗生素四環(huán)素類抗生素ABCD2CH3NRR3HOHCONH2OOHOHOOHR2R11234567891011122

35、CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO四環(huán)素四環(huán)素TCtetracycline2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOCl金霉素金霉素 (CTC) chlortetracycline氯四環(huán)素氯四環(huán)素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HOOH土霉素土霉素 (OTC) oxytetracycline氧四環(huán)素氧四環(huán)素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3OH多西環(huán)素多西環(huán)素 (DOXC) doxycycline脫氧土霉素脫氧土霉素美他環(huán)素美他環(huán)素METC metacyclineHOHCONH2OOHOHOOHN CH3 2OHCH22CH3NRR3HO

36、HCONH2OOHOHOOHR2R1一、一、 構(gòu)造與性質(zhì)構(gòu)造與性質(zhì)兩性兩性一一1. 與酸、堿均能成鹽與酸、堿均能成鹽2.強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中溶解度 酚羥基、烯醇型羥基酚羥基、烯醇型羥基 弱酸性弱酸性二甲胺基二甲胺基 弱堿性弱堿性與金屬離子生成有色配位化合物與金屬離子生成有色配位化合物Ca2+ Mg2+ Fe3+ Al3+ UV UV和熒光性質(zhì)和熒光性質(zhì)三三與金屬離子絡(luò)合與金屬離子絡(luò)合四四pH3 7.5 熒光熒光 二旋光性二旋光性HOHOCaOOOOHOHOO不穩(wěn)定性不穩(wěn)定性五五1. 差向異構(gòu)化差向異構(gòu)化差向金霉素差向金霉素差向四環(huán)素差向四環(huán)素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素- - - - 6

37、 62 2pH淡黃淡黃黑黑藍(lán)色熒光藍(lán)色熒光OHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHO差向四環(huán)素差向四環(huán)素2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HO2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHR2R1HO土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化土霉素、多西環(huán)素不易差向異構(gòu)化2. 降解反響降解反響1酸性下降解酸性下降解max = 445nmmax = 435nm橙黃色橙黃色脫水金霉素脫水金霉素脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素金霉素金霉素四環(huán)素四環(huán)素 2 2pH2CH3NHOHCONH2OOHOHOOHCH3HON CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OH脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素2CH3NHOHCO

38、NH2OOHOHOOHCH3HOpH26pH26TCOHCONH2OOHOHOOHCH3HCH32NHOETCN CH3 2HOHCONH2OOHOOHCH3OHATCN2CH3OHCONH2OOHOHOHOCH3HEATCpH2pH22堿性下降解堿性下降解異四環(huán)素異四環(huán)素四環(huán)素四環(huán)素- -OHHOHCONH2OOHOHOOHCH3ON CH3 2二、二、 鑒別實(shí)驗(yàn)鑒別實(shí)驗(yàn) 濃濃H2SO4H2SO4反響反響一一黃色黃色朱紅色朱紅色綠綠藍(lán)藍(lán)深紫色深紫色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 2 2SOH鹽酸美他環(huán)素鹽酸美他環(huán)素橙紅色橙紅色FeCl3反

39、響反響二二褐色褐色橙褐色橙褐色深褐色深褐色紅棕色紅棕色鹽酸多西環(huán)素鹽酸多西環(huán)素鹽酸土霉素鹽酸土霉素鹽酸金霉素鹽酸金霉素鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素 FeClTLCTLC法法三三鹽酸土霉素的鑒別鹽酸土霉素的鑒別 HPLC HPLC法法五五EDTA EDTA 抑制痕量金屬呵斥的抑制痕量金屬呵斥的 拖尾景象拖尾景象比較保管時間比較保管時間三、三、 特殊雜質(zhì)檢查特殊雜質(zhì)檢查 4-差向四環(huán)素差向四環(huán)素ETC 脫水四環(huán)素脫水四環(huán)素ATC 差向脫水四環(huán)素差向脫水四環(huán)素EATC 鹽酸金霉素鹽酸金霉素CTC 有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)一一HPLCHPLC法法20002000版版鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素四環(huán)素有關(guān)物質(zhì)四環(huán)素有關(guān)物質(zhì)TL

40、CTLC圖圖I. 供試液供試液( 5 mg/ml)ETC( 0.2 mg/ml) ATC( 0.025 mg/ml)IV. EATC ( 0.025 mg/ml)CTC ( 0.1 mg/ml)VI. 混合液混合液40.50.52吸收度吸收度二二nmmax5555268268 、鹽酸四環(huán)素鹽酸四環(huán)素雜質(zhì)吸收度雜質(zhì)吸收度 取供試品配成每毫升取供試品配成每毫升10mg/ml10mg/ml的溶液的溶液至至4cm4cm的吸收池中，在的吸收池中，在530nm530nm處測定，其處測定，其吸收度不得超越吸收度不得超越0.120.12。應(yīng)嚴(yán)厲控制溫度和時間應(yīng)嚴(yán)厲控制溫度和時間四、四、 含量測定含量測定HPLCHPLC法法