試驗(yàn)三發(fā)芽測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)三發(fā)芽測(cè)定一、目的在室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定種批的最大發(fā)芽潛力，使測(cè)定結(jié)果能在最接近于隨機(jī)樣本變異的范圍內(nèi)重現(xiàn)，據(jù)此比較不同種批的品質(zhì)并估計(jì)田間播種價(jià)值。二、定義1 .發(fā)芽室內(nèi)測(cè)定一粒種子發(fā)芽，是指幼苗出現(xiàn)并生長(zhǎng)到某個(gè)階段，其基本結(jié)構(gòu)的狀況表明它是否能在正常的田間條件下進(jìn)一步長(zhǎng)成一株合格苗木。2 .發(fā)芽率質(zhì)量檢驗(yàn)證書上填報(bào)的發(fā)芽率，是在附錄B表B1規(guī)定的條件下及其規(guī)定的期限內(nèi)生成正常幼苗的種子粒數(shù)占供檢種子總數(shù)的百分比。3 .幼苗基本結(jié)構(gòu)對(duì)于幼苗繼續(xù)生長(zhǎng)成合格苗木必不可少的結(jié)構(gòu)。隨所檢樹種而不同，組成幼苗的是以下某些基本結(jié)構(gòu)的特定組合：根系、胚軸、子葉、初生葉、頂芽以及禾本科、棕楣科的芽鞘。4

2、.正常幼苗表現(xiàn)出具有潛力，能在土質(zhì)良好，水分、溫度、光照適宜的條件下繼續(xù)生長(zhǎng)成為合格苗木的幼苗。符合下列類型之一的可以劃為正常幼苗：a）完整幼苗：該樹種應(yīng)有的基本結(jié)構(gòu)全都完整、勻稱、健康、生長(zhǎng)良好；b）帶輕微缺陷的幼苗：該樹種應(yīng)有的基本結(jié)構(gòu)出現(xiàn)某些輕微缺陷的幼苗，但其他方面正常，生長(zhǎng)均衡，與同次測(cè)定中完整幼苗的其他方面不相上下；c）受到次生性感染的幼苗：顯然本該屬于上述a）類或b）類但受真菌或細(xì)菌感染的幼苗，條件是該粒種子不是感染源。5 .不正常幼苗表現(xiàn)出沒有潛力，在土質(zhì)良好，水分、溫度、光照適宜的條件下不能長(zhǎng)成合格苗木的幼苗。不正常幼苗有三種類型：a）損傷苗：任何基本結(jié)構(gòu)缺失，或損傷嚴(yán)重?zé)o法

3、恢復(fù)正常，不能指望均衡生長(zhǎng)的幼苗；b）畸形苗或不勻稱苗：生長(zhǎng)孱弱或生理紊亂，或基本結(jié)構(gòu)畸形或失衡的幼苗;c）腐壞苗：由于原發(fā)性感染（即該粒種子就是感染源），該樹種的任何基本結(jié)構(gòu)染病或腐壞，停止正常生長(zhǎng)的幼苗。6 .多苗種子單位能夠產(chǎn)生多株幼苗的種子單位。有以下幾種類型：a）種子單位內(nèi)含的真種子多于一粒，例如柚木（Tectonagrandis）的堅(jiān)果和楝樹（Meliaazedarach）的核果；b）真種子內(nèi)含的胚多于一枚。有些種這是正?，F(xiàn)象（多胚現(xiàn)象），有些種則是偶爾出現(xiàn)（孚生現(xiàn)象）。如果是李生胚，通常是其中一株幼苗弱小纖細(xì)，但偶爾也會(huì)是兩株幼苗都接近正常大??；c）融合胚：偶爾會(huì)從一粒種子中生出

4、兩株融合在一起的幼苗。7 .未萌發(fā)粒在附錄B表B1給定的測(cè)定條件下測(cè)定期結(jié)束時(shí)仍未發(fā)芽的種子?？梢詤^(qū)分成幾個(gè)類型：a）硬粒：在測(cè)定條件下未能吸水而在測(cè)定期未仍然堅(jiān)硬的種子。一種休眠形態(tài)，常見于豆科，也能出現(xiàn)于其他某些科；b）新鮮粒，在測(cè)定條件下能夠吸水但發(fā)芽進(jìn)程受阻，外形依舊良好，堅(jiān)實(shí)硬朗,仍然具有生出正常幼苗潛力的種子；c）死亡粒：測(cè)定期未既非硬粒，又非新鮮粒，又未萌出幼苗任何結(jié)構(gòu)的種子，通常包被物極軟、變色、發(fā)霉且毫無生出幼苗的征兆；d）其他類型根據(jù)送檢單位的要求，未萌發(fā)粒還可以細(xì)分為以下幾類，它們?cè)跍y(cè)定樣品中所占的百分?jǐn)?shù)填入質(zhì)量檢驗(yàn)證書的備注欄：空粒一一完全空癟或僅含某種殘遺組織的種子；

5、澀粒一一杉木、柳杉胚珠受精后敗育，內(nèi)含物為紫黑色單寧類物質(zhì)的種子；無胚粒一一種子內(nèi)有新鮮胚乳或配子體組織，但其中既無胚腔，也沒有胚；蟲害粒一一內(nèi)有昆蟲的幼蟲或蟲糞或有其他跡象表明受到過昆蟲浸害，影響發(fā)芽能力的種子。三、發(fā)芽床用作發(fā)芽床的紙應(yīng)是疏松、通氣、無毒、容易向種子不斷提供水分的濾紙或其他類型的紙，或者是潔凈無毒的紗布、脫脂棉。種子排放在床面。為了向種子提供足夠的水分，可以用多層的紙，也可以在紙下加墊紗布或脫脂棉。作床材料的pH值應(yīng)在6.07.5范圍內(nèi)。發(fā)芽測(cè)定用紙應(yīng)在干燥涼爽的室內(nèi)存放并適當(dāng)包裝，避免污損破傷，必要時(shí)使用前應(yīng)當(dāng)滅菌，消除存放期中可能感染的霉菌。2 .沙床作床的沙應(yīng)當(dāng)顆粒均

6、勻一致，能通過直徑為0.8mm的篩孔，而截留在孔眼直徑為0.05mm的篩子上，沙必須無菌無毒，不含任何種子。沙的pH值應(yīng)在6.07.5范圍內(nèi)。沙不能重復(fù)使用。3 .土床只有在紙床、沙床上發(fā)芽的幼苗出現(xiàn)植物毒性癥狀，或者對(duì)紙床上的幼苗的鑒定發(fā)生懷疑時(shí)，才可以使用質(zhì)地疏松、結(jié)構(gòu)良好、不會(huì)板結(jié)的壤土作床，使用時(shí)不能擠壓。質(zhì)地緊密的土壤應(yīng)適當(dāng)混加蛭石或沙。土中不能混有任何種子。土的pH值應(yīng)在6.07.5之間。土不能重復(fù)使用。四、發(fā)芽設(shè)備1 .發(fā)芽盒用于紙床的帶蓋的、內(nèi)具有孔隔板的透明發(fā)芽容器。盒的長(zhǎng)度和寬度應(yīng)能容納四次或至少兩次重復(fù)的種粒。盒高應(yīng)略大于受檢樹種正常幼苗的高度。發(fā)芽床鋪放在具有孔眼的隔板

7、上。隔板同盒底之間的空間用于存水，使盒內(nèi)的相對(duì)濕度盡可能接近100%。2 .直立板發(fā)芽盒有機(jī)玻璃制成的長(zhǎng)方形盒，盒高約20cm。盒內(nèi)可以垂直嵌入若干塊中心距約2cm的有機(jī)玻璃板。在玻板頂邊之下適當(dāng)距離處播放一排種子并覆以同玻板等大的濕濾紙。濾紙下端浸入盒底的水中向種子供水。改變?yōu)V紙下端入水的深度可以控制供水量。蓋上盒蓋可以保持盒內(nèi)空氣濕度。從玻板的反面可以清晰地觀察種子的發(fā)芽狀況。3 .帶有水箱的發(fā)芽裝置主體是鍍鋅鋼板或不銹鋼板制作的水箱，水箱頂板上排放鐘形發(fā)芽皿。鐘形發(fā)芽皿的芯帶穿過頂板上的孔眼或窄縫伸入水箱吸水。水溫由控溫器控制，為發(fā)芽環(huán)境提供所需的溫度。水箱上方懸放冷白熒光燈管。4 .發(fā)

8、芽箱能調(diào)控溫度、濕度和光照的密閉箱體。好的發(fā)芽箱應(yīng)具有加熱和降溫兩個(gè)系統(tǒng)，隔熱性能良好，能提供發(fā)芽所需的光照條件，且能控制濕度，能使箱內(nèi)的相對(duì)濕度接近100%0箱內(nèi)的隔板承放紙床，直接排放供檢樣品。隔板的間距應(yīng)使同一時(shí)間里能夠測(cè)定盡可能多的樣品。五、測(cè)定程序1 .提取測(cè)定樣品測(cè)定樣品從凈度分析所得的、經(jīng)過充分混拌的純凈種子中按照隨機(jī)原則提取?？梢杂盟姆址▽⒓儍舴N子區(qū)分成4份，從每份中隨機(jī)數(shù)取25粒組成100粒，共取4個(gè)100粒，即為4次重復(fù)。種粒大的，可以將100粒的每個(gè)重復(fù)以50?；?5粒為組，以組為單位在發(fā)芽床上排放，由這樣的2個(gè)組或4個(gè)組組成1次重復(fù)，使種粒之間有足夠的距離。附錄B表B1

9、規(guī)定采用稱量發(fā)芽測(cè)定法的樹種，或因種粒特小決定采用稱量發(fā)芽測(cè)定法的其他樹種，用符合第3章規(guī)定的程序從送檢樣品中提取測(cè)定樣品，共取4個(gè)重復(fù)。每個(gè)重復(fù)的重量見附錄B表B1。2 .測(cè)定樣品的預(yù)處理對(duì)測(cè)定樣品作預(yù)處理的目的是解除休眠。預(yù)處理的方法已分樹種列在附錄B表B1的備注欄。也可以采用其他有效的預(yù)處理方法，但必須在質(zhì)量檢驗(yàn)證書中注明。附錄B表B1所列的測(cè)定時(shí)間不包括預(yù)處理時(shí)間。帶翅的種子可以去翅，但不能傷及種子。3 .置床和管理(1)種粒在發(fā)芽床上應(yīng)保持一定距離，避免病菌蔓延、根系纏繞，也便于點(diǎn)數(shù)。(2)采用沙床(土床)時(shí)，需光種子壓入沙(土)的表層，忌光種子播在疏松而平整的沙(土)之上，再均勻疏

10、松地加蓋厚度為1020mm的沙(土)。(3)發(fā)芽容器和直立板發(fā)芽盒中的直立板應(yīng)當(dāng)編號(hào)。(4)經(jīng)常檢查測(cè)定樣品及其水分、通氣、溫度、光照條件。檢查的間隔時(shí)間由檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)根據(jù)樹種特性和樣品狀況等自行確定。輕微發(fā)霉的種粒可以揀出作清水沖洗后放回原發(fā)芽床。發(fā)霉種粒較多的要及時(shí)更換發(fā)芽床或發(fā)芽容器。4 .測(cè)定條件(1)水發(fā)芽床的用水不應(yīng)含有雜質(zhì)。水PH值應(yīng)在6.07.5之間。如果當(dāng)?shù)氐乃|(zhì)不符合要求，可以使用蒸儲(chǔ)水或去離子水。發(fā)芽床應(yīng)始終保持濕潤(rùn)，不斷地向種子提供所需的水分。但供水過量也會(huì)影響種子的通氣。對(duì)種子的供水量取決于受檢樹種的特性、發(fā)芽床的性質(zhì)及發(fā)芽盒的種類。各重復(fù)間的供水量應(yīng)當(dāng)一致。(2)通氣置

11、床的種子要保持通氣良好，但不能使發(fā)芽床過度失水而影響萌發(fā)。(3)溫度附錄B表B1所列的溫度是指發(fā)芽床上種子所處水平層次的溫度，因設(shè)備性能而產(chǎn)生的溫度變化不能超過±1C。為發(fā)芽種子提供光照時(shí)不能使溫度發(fā)生波動(dòng)。附錄B表B1列出帶有幅度的溫度指的是變溫，每24h內(nèi)應(yīng)有16h保持較低的那個(gè)溫度，其余8h保持較高的那個(gè)溫度。溫度的轉(zhuǎn)換最好在3h內(nèi)逐漸完成，休眠性種子可以在1h內(nèi)完成。周末或節(jié)假日不能按要求轉(zhuǎn)換溫度時(shí)，應(yīng)使發(fā)芽環(huán)境保持在較低的那個(gè)溫度水平上。(4)光除非確已證實(shí)某個(gè)樹種的發(fā)芽會(huì)受到光抑制，否則發(fā)芽測(cè)定中的每個(gè)24h都應(yīng)當(dāng)給予8h的光照，使幼苗長(zhǎng)勢(shì)良好，不容易遭受微生物侵害，也便

12、于評(píng)定。施加的光指的是不含或極少含遠(yuǎn)紅光的冷白色熒光。提供的光應(yīng)均勻一致地使種子表面接受75012501X的照度。對(duì)于變溫發(fā)芽的樹種，是在給予高溫的那個(gè)8h內(nèi)提供光照。5 .測(cè)定的持續(xù)時(shí)間(1)各樹種發(fā)芽測(cè)定的持續(xù)時(shí)間在附錄B表B1中以末次記數(shù)的天數(shù)表示，自置床之日起算，不包括預(yù)處理的時(shí)間。(2)如果測(cè)定樣品在規(guī)定時(shí)間里發(fā)芽的種粒不多、可以適當(dāng)延長(zhǎng)測(cè)定時(shí)間。延長(zhǎng)的時(shí)間最多不應(yīng)超過規(guī)定時(shí)間的二分之一。如果在規(guī)定的結(jié)束時(shí)間之前樣品已經(jīng)充分發(fā)芽，且后期連續(xù)三天每天的發(fā)芽粒數(shù)不超過各重復(fù)供試種子粒數(shù)的1%,則該次測(cè)定可以提前結(jié)束。無論是延長(zhǎng)還是提前結(jié)束，測(cè)定的實(shí)際天數(shù)應(yīng)在質(zhì)量檢驗(yàn)證書中注明。(3)中期

13、計(jì)數(shù)的次數(shù)由檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)自行確定，除有特殊要求外，通常不宜過多，盡量減少對(duì)尚未充分生長(zhǎng)的幼苗造成傷害。6 .觀察、評(píng)定和記載(1)發(fā)芽測(cè)定的情況要定期觀察記載。觀察記載的間隔時(shí)間由檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)根據(jù)樹種和樣品情況自行確定，但初次計(jì)數(shù)和末次計(jì)數(shù)必須有記載。(2)生長(zhǎng)到一定階段，必要的基本結(jié)構(gòu)都已展現(xiàn)的每株幼苗都必須進(jìn)行評(píng)定，并在記數(shù)后從發(fā)芽床上揀出。嚴(yán)重腐壞的幼苗也應(yīng)揀出，以免造成次生性感染。呈現(xiàn)其他缺陷的不正常幼苗則應(yīng)保留在發(fā)芽床上直至末次計(jì)數(shù)。揀出的幼苗數(shù)同發(fā)芽床上剩余的種粒數(shù)應(yīng)當(dāng)?shù)扔谇耙淮斡涊d時(shí)的剩余種粒數(shù)。揀出幼苗時(shí)要防止影響正在發(fā)芽生長(zhǎng)的幼苗。(3)一個(gè)多苗種子單位常能生出兩株或幾株幼苗，都記為

14、一株正常幼苗。(4)測(cè)定結(jié)束根據(jù)定義7給出的條件區(qū)分未發(fā)芽粒。六、測(cè)定結(jié)果的計(jì)算1 .發(fā)芽測(cè)定結(jié)束時(shí)按定義2計(jì)算發(fā)芽率。2 .按表3檢查重復(fù)間發(fā)芽百分?jǐn)?shù)的差異是否為隨機(jī)誤差。如果各重復(fù)發(fā)芽百分?jǐn)?shù)的最大值同最小值的差距沒有超過表3的容許范圍，就用各重復(fù)發(fā)芽百分率的平均數(shù)作為該次測(cè)定的發(fā)芽率。表3發(fā)芽測(cè)定容許差距平均發(fā)芽百分率最大容許差距1r239925983697479658956993-947-81091-929-101189-9011-121287-8813-141384-8615-171481-8318-201578-8021-231673-7724-281767-7229-3418566

15、635-451951-5546-50203.稱量發(fā)芽測(cè)定法的測(cè)定結(jié)果用單位重量樣品中的正常幼苗數(shù)表示，單位為株/克。計(jì)算時(shí)，利用表6檢查重復(fù)間的差異是否為隨機(jī)誤差。先計(jì)算4個(gè)重復(fù)正常幼苗的總數(shù)，在表4第1欄找出該總數(shù)所在范圍，并在第2欄中查到最大容許差距。如果4個(gè)重復(fù)中正常幼苗數(shù)的最大值和最小值之間等于或小于最大容許差距，該次測(cè)定可靠，以4個(gè)重復(fù)單位重量的正常幼苗數(shù)的平均數(shù)作為測(cè)定結(jié)果填報(bào)。表4稱量發(fā)芽測(cè)定容許差距供檢樣品總重量中的正常發(fā)芽粒數(shù)最大容許差距供檢樣品總重量中的正常發(fā)芽粒數(shù)最大容許差距12H12064161174277-1061751882811-1481892022915-189

16、2032163019-22112172303123-26122312443227-30132452563331-38142572703439-50152712883551-56162893023657-62173033213763-70183223383871-82193393583983-90203593784091102213794024110311222403420421131222342143843123134244394604413514625>46045147160264.重新測(cè)定有下列情況之一時(shí)應(yīng)重新布置測(cè)定。重新測(cè)定仍按規(guī)定計(jì)算結(jié)果并檢查誤差。a）懷疑是休眠干擾測(cè)定結(jié)果時(shí)

17、，可以仍按附錄B表B1的發(fā)芽條件，但選用一種或幾種解除休眠的方法重新布置一次或同時(shí)布置幾次測(cè)定，將其中最好的結(jié)果作為測(cè)定結(jié)果填報(bào)，并注明所用方法。b）由于病毒或真菌、細(xì)菌蔓延干擾測(cè)定結(jié)果時(shí)，可以使用沙床或土床重新布置一次或同時(shí)布置幾次測(cè)定。必要時(shí)還可以加大種粒間的距離。將所得的最好結(jié)果作為測(cè)定結(jié)果填報(bào)，并注明所用方法。c）難于評(píng)定的幼苗數(shù)量較多而干擾測(cè)定結(jié)果時(shí)，可以仍按附錄B表B1的發(fā)芽條件，用沙床或土床重新布置一次或同時(shí)布置幾次測(cè)定。將所得的最好結(jié)果作為測(cè)定結(jié)果填報(bào)，并注明所用方法。d）由于測(cè)定條件、幼苗評(píng)定或計(jì)數(shù)顯然有誤時(shí)，應(yīng)當(dāng)按原用方法重新測(cè)定，并填報(bào)重新測(cè)定的結(jié)果。e）由于其他不明因素使得各重復(fù)問的最大差距超過表3規(guī)定的容許誤差時(shí)，應(yīng)當(dāng)提取測(cè)定樣