金銀花葉茶制作工藝及功能性成分含量研究

1、金銀花葉制作綠茶工藝及主要功能性成分含量研究摘要：金銀花葉片有著與金銀花同樣的功效，以封丘金銀花葉片為原料，按綠茶制作工藝，探討金銀花葉制作綠茶方法；溫度作為影響綠茶品質(zhì)的重要因素，設(shè)計(jì)不同溫度條件下制作的金銀花綠茶，用紫外-可見(jiàn)分光光度法和高效液相色譜法分別測(cè)定金銀花葉及綠茶的總黃酮和綠原酸含量，結(jié)果表明：金銀花葉制作綠茶后總黃酮和綠原酸含量相當(dāng)可觀；結(jié)合金銀花葉綠茶的感官評(píng)價(jià)，建立金銀花葉綠茶制作工藝及理論數(shù)據(jù)；綜合開(kāi)發(fā)利用金銀花，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值。關(guān)鍵詞：金銀花葉綠茶工藝綠原酸黃酮金銀花（學(xué)名：Lonicerajaponica）為忍冬科植物，具有清熱解毒1-2、抗菌消炎之功效，是最常用的中

2、藥之一。金銀花和葉都含綠原酸、黃酮類等有效成分，具有較為廣泛的抗菌消炎作用，金銀花葉中綠原酸含量稍低于花的含量，但葉中的總黃酮含量高于花的含量，表明金銀花葉片跟花有著同樣的功效3。文獻(xiàn)報(bào)道，金銀花葉粗提取物的抑菌效果與花粗提取物相同或高于花4。近年來(lái)，金銀花價(jià)格低迷，金銀花產(chǎn)量低，不易采摘，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，且無(wú)法機(jī)械化生產(chǎn)，農(nóng)民種金銀花積極性下降，甚至有些農(nóng)民開(kāi)始?xì)У糇约河H手種的金銀花。因此綜合開(kāi)發(fā)利用金銀花，提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值，增加農(nóng)民收入成為當(dāng)務(wù)之急。經(jīng)過(guò)多次去金銀花基地考察，發(fā)現(xiàn)金銀花葉產(chǎn)量大，資源非常豐富，金銀花每年需要3-4整形修剪，產(chǎn)生了大量的廢棄葉片；通過(guò)制茶工藝，制作出金銀花葉為原料的綠

3、茶，測(cè)其制茶后的功能性成分含量，結(jié)合外觀，顏色，口感等感官評(píng)價(jià)，找到最佳金銀花葉片制茶工藝，提高葉片利用率，增加農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入，提高種植金銀花的積極性。提高其經(jīng)濟(jì)價(jià)值，獲得社會(huì)效益。材料與方法1.1 材料與處理2015年9月20日在新鄉(xiāng)市封丘縣陳固鎮(zhèn)金銀花種植基地，采集第三次整形修剪后的金銀花葉片。鮮葉采集后應(yīng)及時(shí)攤放，厚度5cm左右,每隔2小時(shí)翻1次,攤放時(shí)間7小時(shí)左右，至葉質(zhì)變軟，葉色由綠變暗綠，鮮葉減重率為10溢右時(shí)為宜。攤放后，葉質(zhì)萎軟，韌性加大，殺青過(guò)程中茶汁不易外溢，又有利于鮮葉中原始香氣成分裂解,產(chǎn)生更多的芳香物質(zhì)，從而提高成茶品質(zhì)2。1.2 儀器與試劑茶葉滾筒殺青機(jī)（浙江上洋機(jī)械

4、有限公司）；茶葉揉捻機(jī)6CR-35（雷鋒茶葉機(jī)械廠）；雷鋒牌茶葉烘干機(jī)（雷鋒茶葉機(jī)械廠）；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)TU-1810;北京普析通用有限公司；安捷倫公司高效液相色譜儀agilent1200;高速萬(wàn)能粉碎機(jī)FE-100，北京永光明醫(yī)療儀器廠；電子天平FA-2004,上海越平科學(xué)儀器有限公司。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，無(wú)水乙醇都是分析純；自制高純水。1.3 金銀花葉綠茶制作工藝1.3.1 殺青：通過(guò)高溫破壞和鈍化鮮葉中的氧化酶活性，抑制鮮葉中的一系列酶的氧化，蒸發(fā)鮮葉部分水分，使葉片變?nèi)彳?，保持顏色翠綠，又便于揉捻

5、成型。滾筒殺青機(jī)預(yù)熱三分鐘；分別把殺青機(jī)調(diào)至260C、300C、340c經(jīng)行殺青，根據(jù)葉片變化、顏色確定最佳殺青時(shí)間。1.3.2 回潮：殺青后的葉片放入整理箱加蓋回潮80min,使殺青后的葉片水分重新均勻分布。使茶葉質(zhì)軟、好成形、折而不碎，保證美觀的條索。達(dá)到手握成團(tuán)無(wú)脆聲，稍有彈性，葉質(zhì)較柔軟，折梗不斷。1.3.3 揉捻：利用機(jī)械力使殺青葉在揉桶內(nèi)受到推、壓、扭、和摩擦等多種力的相互作用形成緊結(jié)的條索。揉捻還使葉片細(xì)胞組織破碎，促使部分多酚類物質(zhì)氧化，減少炒青金銀花葉茶的苦澀味，增加濃醇味。將葉片加入揉捻機(jī)，揉捻5min加葉片，葉片加滿后，揉捻20min加壓，揉捻50min。成條率90%U上

6、。1.3.4 攤涼：茶葉揉捻后均勻攤開(kāi)，促使葉內(nèi)水分分布均勻，為烘干打下基礎(chǔ)。1.3.5 烘干：干燥是綠白最后一道工序，也是決定品質(zhì)的最后一關(guān)，干燥采用烘干機(jī)烘干。目的（1）利用高溫停止酶促氧化作用;（2）蒸發(fā)水分，緊縮茶條，使茶葉充分干燥，防止非酶促氧化，利于品質(zhì)的相對(duì)固定，便于貯藏;（3）散失青臭氣，進(jìn)一步提高和發(fā)展茶香。分別用3個(gè)溫度經(jīng)行烘干，看品質(zhì)口感及成分80c烘干-50min7攤涼包裝110c烘干-40min7攤涼包裝140c烘干-30min7攤涼包裝攤?cè)~厚度1cm-2cm,烘干時(shí)間不超過(guò)60min。葉含水量控制在4%-6%,茶葉折梗即斷，手捻茶條成粉末，茶香明顯即可。1.4 利用

7、綠原酸、總黃酮含量和感官評(píng)價(jià)三個(gè)指標(biāo)評(píng)價(jià)茶葉1.4.1 總黃酮含量測(cè)定1.4.1.1 金銀花葉溶液的制備：室溫陰干的金銀花葉片與80C、110C、140c條件下烘干的金銀花葉綠茶，分別編號(hào)樣品1,樣品2,樣品3,樣品4;粉粹成細(xì)粉，各精密稱定1.00g,分別置25ml塞錐形瓶中，加入60%L醇7液25mL浸712小時(shí),超聲處理(60C,功率250W,頻率35kHz)1h,放冷，濾過(guò)定容到100ml容量瓶中，搖勻，作為金銀花供試品溶液。1.4.1.2 紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定金銀花及其葉中總黃酮的含量1.4.1.3對(duì)照品溶液的制備：精密稱取蘆丁對(duì)照品0.020g,加無(wú)水乙醇置水浴上微熱使其溶解，

8、放冷，加無(wú)水乙醇至100ml容量瓶中，搖勻配制成0.20mg/ml的對(duì)照品溶液備用。1.4.1.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對(duì)照品溶液2.00,4.00,6.00,8.00,10.00mL分別置50mL量瓶中，各加高純水10.0mL;力口5%亞硝酸鈉溶液2.00mL,混勻，放置6min;力口10%肖酸鋁溶液2.00mL,搖勻，放置6min;加4圖氧化鈉試液20mL;再加水至刻度，搖勻，放置15min?？瞻讓?duì)照直接加蒸儲(chǔ)水10ml,其余試劑同上至刻度。在510nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以測(cè)定的吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程為Y=0.0119x-0.001,R2=

9、0.9999。-0y=0.011x-0.00R2=0.99951015202530354045濃度.5/oO,321OooO吸光度圖1黃酮標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性關(guān)系1.4.2高效液相色譜法測(cè)定綠原酸含量1.4.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性確定：采用乙睛-0.5%乙酸溶液-水（2：1:7）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm;色譜柱：美國(guó)Agilent公司的ZORBAXSB-C18流速0.8ml/min,進(jìn)樣量10ul;柱溫20C。1.4.2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.005g,加70%甲醇定容于50ml棕色量瓶中，制成每1mL含100Hg的對(duì)照品儲(chǔ)備液（10C以下保存）。1.4.2.3

10、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線及測(cè)定：取綠原酸對(duì)照品溶液（100wgmL）0、0.40、0.80、1.20、1.60、2.00、2.40mL,置10mL棕色量瓶中，力口70獅醇適量，按上述色譜條件經(jīng)0.22u有機(jī)濾膜分別注入進(jìn)樣瓶進(jìn)樣10wL,測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，綠原酸量（wg）為橫坐標(biāo),2繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。得出回歸萬(wàn)程Y=30593x-38.049,R=0.9971。分別吸取1、2、3、4供試品溶液各2mL,經(jīng)0.22u有機(jī)濾膜分別注入進(jìn)樣瓶測(cè)定。圖2綠原酸標(biāo)準(zhǔn)曲線和線性關(guān)系2結(jié)果與分析2.1樣品總黃酮含量結(jié)果樣品重量（g）A含量（）樣品1（干葉）1g0.4620.39%樣品2(80C)1g0.3930

11、.33%樣品3(110C)1g0.3620.30%樣品4(140C)1g0.2210.19%表1樣品總黃酮含量2.2樣品綠原酸含量結(jié)果樣品質(zhì)量保留時(shí)間（min）峰面積含量（衿樣品11g6.460693.5211.44%樣品21g6.455686.4501.42%樣品31g6.473609.9751.27%樣品41g6.478586.2381.22%表2樣品綠原酸含量2.3感官評(píng)價(jià):湯色滋味樣品1綠，無(wú)條形綠苦味較強(qiáng)顯青氣味重樣品2色澤綠潤(rùn)，條形緊湊綠散發(fā)輕微花香徽苦回甘樣品3色澤綠潤(rùn)，條形緊湊綠香氣弱，略顯青氣滋味淡薄，白苦味樣品4黃綠，條形緊湊黃綠有焦糊氣味滋味淡薄不同工藝綠茶感官品質(zhì)的比較

12、riAU34圖3綠原酸標(biāo)品的HPLCffl譜V62.4結(jié)果表明：260c殺青一葉片變深褐色，失綠，水分含量高，葉片柔軟；溫度低。300c殺青一,葉片淺褐色，稍有綠色，柔軟，手握無(wú)脆聲，水分含量高；溫度稍低。340c殺青一,葉片鮮綠轉(zhuǎn)為翠綠，以鮮葉失去光澤，梗折不斷，葉片稍卷，葉緣干燥；溫度合適。80c烘干泡茶水清湯綠葉，口感稍苦，散發(fā)金銀花香氣。110c烘干泡茶水清湯綠葉，口感苦澀，有青草氣重。140c烘干泡茶葉片呈現(xiàn)褐色，茶湯褐色，口感微苦，微青草氣兼有焦糊氣。保留時(shí)間：綠原酸標(biāo)品(6.472min)樣品1(6.460min)樣品2(6.455min)樣品3(6.473min)樣品4(6.4

13、78min),綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品與4個(gè)樣品保留(出峰)時(shí)間一致，確定是綠原酸；根據(jù)總黃酮和綠原酸的含量，可以看出金銀花葉制茶后，總黃酮和綠原酸略微減少，可能是在采摘葉片后，儲(chǔ)運(yùn)過(guò)程中的降解，制茶工藝未促進(jìn)總黃酮和綠原酸的降解；在80c條件下烘干總黃酮和綠原酸含量較高，效果較好。3討論與結(jié)論按照：采摘鮮葉一殺青一回潮一揉捻一攤涼一烘干，制做金銀花葉綠茶。340c殺青效果最好，殺青后葉片翠綠，保證了綠茶顏色；回潮80分鐘手握成團(tuán)無(wú)脆聲，稍有彈性，葉質(zhì)較柔軟，折梗不斷；以110c條件下烘干泡茶清湯綠葉，口感較好、散發(fā)金銀花香氣是最佳效果；總黃酮和綠原酸含量在80c條件下烘干呈現(xiàn)最大值，并且含量相當(dāng)可觀。綜

14、合因素，在340c殺青，80c下烘干，金銀花葉綠茶黃酮和綠原酸含量最高，顏色，口感最佳。制作出來(lái)的金銀花葉綠茶條形緊湊，顏色翠綠；沖泡出來(lái)的茶水清湯綠葉，香氣濃郁，湯色嫩綠清澈，葉底嫩勻肥厚明亮，有金銀花香味；亦有清熱解毒、抗菌消炎功效。本實(shí)驗(yàn)將綠茶制作工藝與金銀花葉片結(jié)合起來(lái)，找到了最佳制茶工藝，收集每年3-4次整形修剪后的葉片，制成金銀花葉綠茶，提高的金銀花的附加值和葉片利用率，增加農(nóng)民經(jīng)濟(jì)收入，提高種植金銀花的積極性，獲得社會(huì)效益。參考文獻(xiàn)：1ShangXF,PanH,LiMX,etal.LonicerajaponicaThunb.:Ethnopharmacology,phytochemistryandpharmacologyofanim-portanttraditionalChinesemedicineJ.JournalofEthnopharmacology,2