抗生素微生物檢定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程042

1、山 西 振 東 制 藥起草部門：質(zhì)量保證部題目：抗生素微生物檢定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程第 1 頁 共 22 頁起草人審核人審核人審核人批準(zhǔn)人部門/職務(wù)部 門部門負(fù)責(zé)人質(zhì)量保證部生產(chǎn)負(fù)責(zé)人質(zhì)量受權(quán)人簽 名日 期版本號(hào)：00頒發(fā)部門：生效日期：分發(fā)部門：目 的：建立抗生素微生物檢定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程范 圍：抗生素類藥依 據(jù)：中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2010年版 責(zé) 任：化驗(yàn)員 嚴(yán)格按操作規(guī)程操作班組長(zhǎng) 對(duì)檢驗(yàn)人員的操作進(jìn)行監(jiān)督和指導(dǎo)中心化驗(yàn)室主任 對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行培訓(xùn)考核，并對(duì)檢驗(yàn)人員操作進(jìn)行監(jiān)督和指導(dǎo)內(nèi) 容：1 術(shù)語或定義本法系在適宜條件下，根據(jù)量反應(yīng)平行線原理設(shè)計(jì)，通過檢測(cè)抗生素對(duì)微生物的抑制作用，計(jì)算抗生素活

2、性（效價(jià)）的方法?？股匚⑸餀z定包括兩種方法，即管碟法和濁度法。2 程序2.1 操作前準(zhǔn)備抗生素管碟測(cè)定法2.1.1.1 儀器與用具操作室光線明亮，操作室應(yīng)分為兩部分，彼此分開，其中一部分為一般操作室，一部分為半無菌操作室。半無菌操作室應(yīng)設(shè)有紫外線滅菌燈，并附設(shè)空氣凈化（空氣凈化級(jí)別為10010000級(jí)）及空調(diào)設(shè)備，控制室溫度在2025之間，達(dá)到無菌或半無菌狀態(tài)。操作臺(tái)應(yīng)穩(wěn)固，臺(tái)面用玻璃板，并用水平儀調(diào)節(jié)至水平。注意操作，避免室內(nèi)抗生素污染。雙碟內(nèi)徑約90mm高1617mm硬質(zhì)玻璃或塑料培養(yǎng)平皿，碟底厚薄均勻，水平透明，無色斑氣泡。碟底平度檢查，可將雙碟放在水平臺(tái)上，下墊一張白紙碟內(nèi)加水23

3、ml，再滴加藍(lán)墨水，觀察藍(lán)色深淺是否一致。陶瓦蓋內(nèi)徑約203mm，外徑108mm，平坦，吸水性強(qiáng)，應(yīng)定期清洗、干燥或干熱滅菌。鋼管內(nèi)徑（6.0±0.1）mm，高（10.0±0.1）mm，外徑（8.0±0.1）mm或（7.8±0.1）mm，每套鋼管重量差異不超過±0.05g，內(nèi)外壁及兩端平坦，管壁厚薄一致。每次使用后應(yīng)置1:1000新潔爾滅溶液內(nèi)，浸泡2h以上，滅菌后再洗滌，先用水洗滌，超聲波超聲30min后用沾有去污粉的紗布條串擦內(nèi)外壁，水沖洗，瀝干，再用蒸餾水沖洗3次后，置帶蓋的容器內(nèi)，在150160干熱滅菌2h，備用。鋼管放置器有6孔和4孔

4、兩種。放置于無菌或半無菌的操作平臺(tái)上，鋼管下落時(shí)應(yīng)垂直平穩(wěn)、位置正確。雙碟升降平穩(wěn)。應(yīng)保持清潔，防止抗生素污染。可定期用75%乙醇棉擦拭落管筒及儲(chǔ)管杯。置鋼管的玻璃管應(yīng)定期干烤滅菌。恒溫培養(yǎng)箱以隔水式為宜，溫度平穩(wěn)，波動(dòng)小。除另有規(guī)定外，依各品種項(xiàng)下要求設(shè)定溫度，溫度波動(dòng)范圍為3537或2426，箱內(nèi)網(wǎng)狀隔板上放置帶孔的玻璃板并調(diào)節(jié)至水平。滅菌刻度吸管用于吸取菌液及培養(yǎng)基。用后應(yīng)立即置5%石炭酸或1:1000新潔爾滅溶液中消毒后，再按玻璃容器的常規(guī)洗滌法洗滌。洗滌瀝干后在吸口處塞入脫脂棉（松動(dòng)、透氣），置適宜容器中，在120以上干熱滅菌2h或121蒸氣滅菌30min，烘干備用。玻璃容器包括定量

5、移液管、刻度吸管、容量瓶等，均應(yīng)符合“常用玻璃量器國家計(jì)量檢定規(guī)程”的規(guī)定。每次使用前用清潔液浸泡，水沖洗，并用蒸餾水或去離子水沖洗3次，瀝干。稱量瓶重量在10g以下。用畢先用水沖洗，瀝干，置清潔液浸泡2h以上，然后分別用水、蒸餾水或去離子水沖洗3次，置潔凈平皿中，在120干熱滅菌3h，待冷置6070時(shí)，取出置于干燥器中備用。滴管用玻璃管拉制，管口平滑。使用前在清潔液浸泡，分別用水、蒸餾水或去離子水沖洗3次，置適宜容器中，在120干熱滅菌3h后，備用。天平分析天平，精密度0.1mg，經(jīng)計(jì)量檢定。抑菌圈直徑（面積）測(cè)量?jī)x應(yīng)符合“抑菌圈測(cè)量?jī)x檢定規(guī)程”的規(guī)定。游標(biāo)卡尺精度0.02mm，長(zhǎng)度150m

6、m。超凈工作臺(tái)有效工作面局部潔凈度100級(jí)。用于試驗(yàn)菌的接種傳代或菌懸液制備。超凈工作臺(tái)須置潔凈工作室或半無菌室內(nèi)。2.1.1.2試液滅菌緩沖液制備緩沖液的試劑應(yīng)為分析純，制備后的緩沖液應(yīng)澄明，分裝于玻璃容器內(nèi)，經(jīng)121蒸汽滅菌30min備用。磷酸鹽緩沖液（pH5.6）取磷酸二氫鉀9.07g，加水使成1000ml，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5.6，濾過，在115滅菌30分鐘。磷酸鹽緩沖液（pH6.0）取磷酸氫二鉀2g與磷酸二氫鉀8g，加水使成1000ml，濾過。磷酸鹽緩沖液（pH7.0）取磷酸氫二鉀9.39g與磷酸二氫鉀3.5g，加水使成1000ml，濾過。磷酸鹽緩沖液（pH7.8

7、）取磷酸氫二鉀5.59g與磷酸二氫鉀0.41g，加水使成1000ml，濾過。磷酸鹽緩沖液（pH10.5）取磷酸氫二鉀35g，加10mol/L氫氧化鉀溶液2ml，加水使成1000ml，濾過。2.1.1.3培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的各成分原料質(zhì)量對(duì)抑菌圈邊緣清晰度及試驗(yàn)結(jié)果影響較大，因此應(yīng)對(duì)原材料進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，挑選適當(dāng)?shù)钠放剖褂?。制成的培養(yǎng)基不應(yīng)有沉淀，如產(chǎn)生沉淀，可在配制培養(yǎng)基后，于115加熱20min融化，趁熱用紙漿減壓或適宜方法過濾，調(diào)節(jié)pH，分裝滅菌備用。中國藥典2010年版二部附錄的抗生素微生物檢定法中收載了13種不同處方的培養(yǎng)基及制備方法。目前，已有市售干燥培養(yǎng)基，使用方便。臨用時(shí)，按照使用說明

8、進(jìn)行配制，但應(yīng)注意核對(duì)培養(yǎng)基的pH，必要時(shí)需調(diào)節(jié)pH，使其符合規(guī)定。另外，市售干燥培養(yǎng)基的質(zhì)量也存在差異注意選擇合適的產(chǎn)品。2.1.1.4菌種的復(fù)蘇檢定用標(biāo)準(zhǔn)菌種為冷凍干燥品，由中國藥品生物制品檢定所提供。取凍干菌管、滅菌1ml毛細(xì)滴管、雙碟、鑷子、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂斜面，移入接種室操作臺(tái)或超凈工作臺(tái)、將凍干菌種管外壁用碘酒（碘伏）擦拭消毒，稍干，用75%乙醇棉球擦凈，放在滅菌雙碟內(nèi)，待干。點(diǎn)燃酒精燈，將菌種管的封口一端在火焰上燒灼紅熱，用滅菌毛細(xì)管吸取營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，滴在上述灼熱的菌種管封口端，使其驟冷炸裂。取滅菌鑷子，在酒精燈火焰上方，將炸裂的管口打開，放入滅菌雙碟內(nèi)，另取一支滅菌毛

9、細(xì)滴管，在火焰旁吸取營養(yǎng)肉湯少許，加置菌種管底部，將凍干菌塊攪動(dòng)使其溶解，隨即吸出管內(nèi)菌液，分別接種至營養(yǎng)瓊脂斜面及普通肉湯內(nèi)，并將毛細(xì)滴管及菌種管投入消毒液內(nèi)，將已接種的營養(yǎng)肉湯及營養(yǎng)瓊脂斜面置3537培養(yǎng)2224h。取出培養(yǎng)物，仔細(xì)觀察菌苔形態(tài)、有無雜菌，涂片并進(jìn)行格蘭染色鏡檢，如呈典型菌落，則轉(zhuǎn)種3代即可使用。菌落不典型時(shí)，可進(jìn)行平板分離單菌落。.5 菌種的接種與保存準(zhǔn)備需用的培養(yǎng)基培養(yǎng)基應(yīng)新鮮制備，如斜面已無冷凝水者，不宜再使用。在標(biāo)簽上注明菌名及接種日期。從冷藏箱中取出菌種斜面后，應(yīng)在室溫放置約30min，待溫度平衡后再移入接種室或超凈工作臺(tái)。點(diǎn)燃酒精燈或煤氣燈等，左手握住菌種斜面，

10、將管口靠近火焰上方，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅約30秒，隨后將接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。右手用無名指、小指及掌部夾住管塞，左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手再輕輕拔開管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻在移至菌苔上，刮取少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰上方。塞上管塞，左手見菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面底部，由底向上，接種環(huán)輕帖斜面的表面曲折蛇形移動(dòng)，使細(xì)菌接種在斜面的表面上。取出接種環(huán)，在火焰上方將培養(yǎng)基管蓋上塞子，然后將接種過細(xì)菌的接種環(huán)在火焰上燒灼滅菌。將已接種的細(xì)菌管置3537培養(yǎng)222

11、4h，霉菌管一般置2425培養(yǎng)2425h霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7天。培養(yǎng)后放入4冷藏箱內(nèi)保存，一般13個(gè)月轉(zhuǎn)種一次。.6 菌懸液的制備枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis CMCC(B)63 501懸液取枯草芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，加滅菌水12ml將菌苔洗下，制成懸液，用吸管將此懸浮液接種至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，均勻分布，在3537培養(yǎng)7日。取菌苔少許涂片，革蘭染色法涂片鏡檢，應(yīng)有芽孢85%以上。用滅菌水10ml將芽孢洗下，制成芽孢懸液，合并至滅菌大試管內(nèi)，在65水浴中加熱30分鐘將菌體殺死，待冷卻后置4冷藏箱儲(chǔ)藏。此菌液為濃菌液。日常試驗(yàn)用菌液 取上述濃菌液，用滅

12、菌水1：3稀釋至滅菌試管中，冷藏箱保存?zhèn)溆谩６绦⊙挎邨U菌Paullus pumilus CMCC(B)63 202懸液取短小芽孢桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照上述方法制備芽孢懸液。金黃色葡萄球菌Staphylocouuc aureus CMCC(B)26 003懸液取金黃色葡萄球菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用接種環(huán)取菌苔少許接種至營養(yǎng)瓊脂斜面上，在3537培養(yǎng)2022小時(shí)。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，制成懸液。置4冷藏箱保存，可使用3天。藤黃微球菌 Micrococcus luteus CMCC(B)28 001懸液取藤黃微球菌工作用菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，用1ml培養(yǎng)基將菌苔洗下，用

13、吸管移至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的扁培養(yǎng)瓶中，均勻攤布，將培養(yǎng)瓶倒置于培養(yǎng)箱中2627培養(yǎng)24小時(shí)取出，用吸管吸取培養(yǎng)基或9%的滅菌氯化鈉溶液5ml至培養(yǎng)瓶中，將菌苔洗下，合并菌液至滅菌大試管中備用。置4冰箱保存，可使用12個(gè)月。大腸桿菌Eschehchia coli CMCC(B)44 103懸液取大腸桿菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照金黃色葡萄球菌菌懸液項(xiàng)下的方法制備菌懸液，供當(dāng)日使用。肺炎克雷伯菌Klebosiella Pneumoniae CMCC(B)46 117懸液取肺炎克雷伯菌工作用菌種營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，照金黃色葡萄球菌菌懸液項(xiàng)下的方法制備菌懸液，供當(dāng)日使用。啤酒酵母菌Saccha

14、romyces cerevisiaeATCC 9763懸液取啤酒酵母菌的V號(hào)培養(yǎng)基瓊脂斜面培養(yǎng)物，用接種環(huán)取菌苔少許接種于培養(yǎng)基斜面上，在3235培養(yǎng)24小時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，放置含有滅菌玻璃珠的試管中，振搖均勻，以當(dāng)日使用為宜。試驗(yàn)菌的菌齡對(duì)抑菌圈邊緣清晰度有一定影響，應(yīng)保持菌種新鮮。對(duì)易變異的菌株如藤黃微球菌等，宜在制備菌懸液前進(jìn)行單菌落的分離，選擇典型菌落以保持菌懸液中菌群的一致性，以使所得的抑菌圈邊緣清晰、整齊。 抗生素微生物比濁法.1 環(huán)境、儀器與用具操作室 要求同管碟法儀器 可采用自動(dòng)濁度法測(cè)定儀或分光光度計(jì)。自動(dòng)濁度測(cè)定儀 主要由光源、樣品室、檢測(cè)器、記錄儀、顯示系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處

15、理系統(tǒng)等部分組成。環(huán)境條件 防止強(qiáng)光照射，儀器應(yīng)平穩(wěn)放置在工作臺(tái)上，便于操作，周圍無強(qiáng)烈的機(jī)械運(yùn)動(dòng)和電磁干擾。儀器使用前，應(yīng)預(yù)先穩(wěn)定23h后，再進(jìn)行測(cè)量。吸收池 應(yīng)使用容量在15ml左右的石英吸收池。當(dāng)吸收池中裝入蒸餾水，在530nm、580nm、650nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各吸收池的吸光度，差異應(yīng)不大于0.005。溫度準(zhǔn)確度 實(shí)測(cè)溫度與設(shè)定溫度差異應(yīng)在±0.1內(nèi)。實(shí)測(cè)溫度與設(shè)定溫度30min內(nèi)漂移偏差應(yīng)在±0.1內(nèi)。測(cè)定樣品室4個(gè)不同位置處的溫度，差異應(yīng)在±0.1內(nèi)。波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的允差范圍在530nm、580nm、650nm波長(zhǎng)處，允許誤差在±2.0nm。攪拌

16、控制 各吸收池應(yīng)配有轉(zhuǎn)子攪拌裝置，攪拌部分應(yīng)正常運(yùn)轉(zhuǎn)，攪拌速度均勻。濁度測(cè)定儀 根據(jù)其結(jié)構(gòu)和測(cè)量方式，其光源分為單通道光源和多通道光源兩類。對(duì)于多通道光源，在530nm、580nm、650nm波長(zhǎng)處測(cè)定國家計(jì)量認(rèn)可的濾光片的吸光度，不同通道光源間的差異應(yīng)不大于0.003。重復(fù)性 在530nm、580nm、650nm波長(zhǎng)處測(cè)定的濾光片的吸光度，連續(xù)測(cè)定5次，差異應(yīng)不大于0.005。在530nm、580nm、650nm波長(zhǎng)處測(cè)定濾光片的吸光度，4 h內(nèi)吸光度的差異應(yīng)不大于0.003。吸收池應(yīng)采用隨機(jī)區(qū)組或其它統(tǒng)計(jì)學(xué)方法排列放置，以消除支間測(cè)定差異的影響。樣品測(cè)定時(shí)，應(yīng)放置1個(gè)陰性管和一個(gè)陽性管。測(cè)

17、定儀的吸光度測(cè)定帶有自動(dòng)扣除陰性空白的功能。實(shí)驗(yàn)報(bào)告除出具標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的吸光度和統(tǒng)計(jì)計(jì)算結(jié)果外，還應(yīng)提供陽性菌的生長(zhǎng)曲線，各管的培養(yǎng)終止時(shí)間應(yīng)處于實(shí)驗(yàn)菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)。根據(jù)陽性菌的生長(zhǎng)曲線，如陽性菌生長(zhǎng)不佳，則實(shí)驗(yàn)不成立，應(yīng)重新實(shí)驗(yàn)。分光光度計(jì) 應(yīng)有數(shù)字顯示功能和自動(dòng)記錄裝置，數(shù)顯精度應(yīng)在小數(shù)點(diǎn)后三位。其各項(xiàng)指標(biāo)應(yīng)符合紫外可見分光光度計(jì)的檢定規(guī)程。玻璃大試管 20.5mm×2.5mm或適宜的試管，應(yīng)大小一致，厚薄均勻，玻璃質(zhì)地相同，使用同一品牌和批號(hào)。使用過的試管經(jīng)滅菌后，將培養(yǎng)基傾出，用水清洗，瀝干，再用硫酸一重鉻酸鉀洗液浸泡，清水沖洗干凈后，晾干，在160干烤23 h滅菌，保持

18、潔凈，備用。注意避免污染毛點(diǎn)、纖維等，以免干擾測(cè)定結(jié)果。移液管 10ml或20ml刻度容量，管口需磨粗（大），以便快速分裝培養(yǎng)基。恒溫水浴箱 工作體積600 mm×300mm×150mm（長(zhǎng)×寬×高），電熱恒溫水浴。電動(dòng)攪拌器 將二臺(tái)電動(dòng)攪拌器的漿葉置于恒溫水浴的大試管隨機(jī)區(qū)組培養(yǎng)方列的兩側(cè)，于水中攪動(dòng)，以使水溫均勻。本身帶攪拌或循環(huán)水系統(tǒng)的恒溫水浴箱，可不再配備電動(dòng)攪拌器。分光光度計(jì)用吸收池 方形玻璃吸收池或石英吸收池，用硝酸一硫酸混合液（取濃硫酸95ml，加濃硝酸35 ml，混勻）浸泡148h（浸泡時(shí)間視是否能去除附著污物而定），先后用水、去離子水（

19、蒸餾水）沖洗干凈，晾干，備用。如仍不能除去附著污物，可用1%2%硝酸鈉的濃硫酸溶液浸泡后，再經(jīng)水洗滌。其他分析天平、稱量瓶、量瓶、25 ml 及50 ml 滴定管、定量吸管或刻度吸管、秒表、濾紙及鏡頭紙等。.2 試液除同管碟法的要求外，比濁法用的緩沖液應(yīng)澄清無色。緩沖液配制后用垂熔玻璃漏斗濾過，除去沉淀等不溶物，使溶液澄清。使用前滅菌。.3 培養(yǎng)基除同管碟法的要求外，比濁法使用的培養(yǎng)基應(yīng)澄明，顏色以盡量淺為佳，培養(yǎng)后培養(yǎng)基本身不得出現(xiàn)渾濁。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后不得發(fā)生沉淀。根據(jù)這一原則，通過對(duì)培養(yǎng)基原材料的預(yù)試，挑選合適品牌廠家的產(chǎn)品使用。目前，已有一些種類的市售干燥培養(yǎng)基，如營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、改良馬

20、丁培養(yǎng)基等，使用方便。.4試驗(yàn)用菌液金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）懸液取金黃色葡萄球菌CMCC(B)26003的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在3537培養(yǎng)2022h。臨用時(shí)，用滅菌水或0.9%滅菌氯化鈉溶液將菌苔洗下，備用。大腸桿菌（Escherichia coli）懸液 取大腸桿菌CMCC(B)44 103的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在3537培養(yǎng)2022h。臨用時(shí)，用滅菌水將菌苔洗下，備用。白色念珠菌（Candida albicans）懸液 取白色念珠菌CMCC(F)98 001的改良馬丁瓊脂斜面的新鮮培養(yǎng)物，接種于1

21、0ml培養(yǎng)基中，在3537培養(yǎng)8h，再用培養(yǎng)基稀釋至適宜濃度，備用。2.2 操作方法抗生素管碟測(cè)定法2.2.1.1 稱量稱量前先將標(biāo)準(zhǔn)品從冰箱中取出，使其溫度與室溫平衡。供試品與標(biāo)準(zhǔn)品稱量應(yīng)使用同一架天平；對(duì)于吸濕性較強(qiáng)的抗生素，應(yīng)在稱量前12h更換天平內(nèi)干燥劑。標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱量盡量一次取樣稱取，不得將以取出的稱量物倒回原容器內(nèi)。標(biāo)準(zhǔn)品的稱取量不得少于20mg，取樣后立即將盛有樣品的稱量瓶或適宜的容器用蓋蓋好，以免吸水。稱量樣計(jì)算：W=V·CP式中 W為需稱量標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的重量（mg）；V為溶解標(biāo)準(zhǔn)品或供試品制成濃溶液時(shí)所用容量瓶的體積（ml）；C為標(biāo)準(zhǔn)品或供試品濃溶液的濃度（

22、u/ml或g/ml）；P為標(biāo)準(zhǔn)品的純度或供試品的估計(jì)效價(jià)（u/ml或g/ml）；.2稀釋稀釋操作應(yīng)遵照容量分析操作規(guī)程進(jìn)行。用于溶解及稀釋標(biāo)準(zhǔn)品或供試品的容量瓶和移液管等玻璃量器，應(yīng)按“常用玻璃量器國家計(jì)量檢定規(guī)程”進(jìn)行標(biāo)定，符合A級(jí)要求。每步稀釋，量取量不得少于2ml，稀釋步驟一步不超過3步。舉例：量取貯備液（1000/ml）,進(jìn)行以下稀釋。第一步精密量取5ml（1000/ml）50ml量瓶，稀釋至刻度 100/ml第二步精密量取5ml（100/ml）50ml量瓶，稀釋至刻度 10/ml（H）精密量取5ml（100/ml）100ml量瓶，稀釋至刻度5/ml（L）量取供試液盡量使用刻度移液管，

23、正式量取前用供試液流洗23次，吸取供試液溶液后，用濾紙將外幣多余液體拭去，從起始刻度開始放溶液。標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液應(yīng)使用統(tǒng)一緩沖液（溶劑）稀釋，以避免應(yīng)pH或濃度不同而影響測(cè)定結(jié)果。稀釋時(shí)，每次加液至接近量瓶刻度前，稍放置片刻，待瓶壁的液體完全流下，再準(zhǔn)確補(bǔ)加至刻度。二劑量（2.2）法的標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液高、低濃度之比為2：1或4：1。三劑量（3.3）法的標(biāo)準(zhǔn)品溶液及供試品溶液高、中、低濃度之比為1：0.8。但所選用的濃度必須在劑量反應(yīng)直線范圍內(nèi)。.3雙碟制備雙碟的制備應(yīng)在半無菌室或潔凈室內(nèi)進(jìn)行，并注意避免微生物及抗生素的污染。培養(yǎng)基應(yīng)在水浴中或微波爐內(nèi)融化，避免火加熱。底層用滅菌大口

24、20ml吸管或其它滅菌分裝器，吸取已融化的培養(yǎng)基20ml注入雙碟內(nèi)，待凝固后更換干燥的陶瓦蓋，放置于3537培養(yǎng)箱中保溫，使菌層易于攤布。菌層取出試驗(yàn)用菌懸液，按預(yù)試好的加菌量（2.2）法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在1822mm，（3.3）法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的中心濃度所致的抑菌圈直徑在1518mm，用滅菌吸管吸取菌懸液適量，加入已融化并保溫在水浴中（水浴溫度，細(xì)菌為4850，芽孢可至60）的培養(yǎng)基內(nèi)，搖勻，作為菌層培養(yǎng)基用。取出加有底層培養(yǎng)基的雙碟，用滅菌大口5ml、10ml吸管或其它適宜分裝器，吸取菌層培養(yǎng)基5ml，加于底層培養(yǎng)基上，使其均勻攤布，用干燥陶瓦蓋覆蓋，放置2030min，待凝

25、固。放置鋼管用鋼管放置器，將滅菌的鋼管放入貯管筒（杯）內(nèi)，按說明書要求操作，使鋼管平穩(wěn)的落在培養(yǎng)基上，注意使鋼管下落的高度基本一致。如無鋼管放置器，可用小眼科鑷子夾持鋼管，輕輕的放置在培養(yǎng)基上，相應(yīng)劑量的鋼管對(duì)角均勻放置。鋼管放妥后，應(yīng)使雙碟靜置510min，鋼管在瓊脂上沉穩(wěn)后，再開始滴加抗生素溶液。2.2.1.4滴加抗生素溶液每批供試品取不少于6個(gè)雙碟，滴加溶液用滅菌毛細(xì)滴管或微量加樣器（調(diào)節(jié)加樣量約為200300l）在滴加之前需用溶液洗23次。滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品溶液順序，應(yīng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法不同而異。（2.2）法，在雙碟的4個(gè)鋼管中分別成“Z”字行滴加標(biāo)準(zhǔn)品（S）及供試品（T）高（H）、低（L）

26、兩種濃度溶液，即滴加溶液的順序?yàn)镾HTHTLSL；（3.3）法的6個(gè)鋼管中間隔3個(gè)鋼管中分別滴加標(biāo)準(zhǔn)品及供試品高（H）、中（M）、低（L）3種濃度溶液，并使相同濃度成對(duì)角，滴加順序?yàn)镾HTHSMTMSLTL。滴加溶液至鋼管口平滿，注意滴加溶液的間隔不可過長(zhǎng)，否則因鋼管內(nèi)溶液的擴(kuò)散時(shí)間不同會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。每份滴加的溶液為同一單位，但雙碟數(shù)每次不超過5個(gè)，如1份溶液滴加雙碟數(shù)碼多，可分次滴加。每種溶液各用1支毛細(xì)滴管。滴加完畢，用陶瓦蓋覆蓋雙碟，平穩(wěn)至于雙碟托盤內(nèi)，雙碟疊放不可超過3層，以免受熱不均，影響抑菌圈大小。將雙碟托盤水平平穩(wěn)地移入培養(yǎng)箱中間位置，在3537或該藥品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的溫度下培養(yǎng)至所

27、需時(shí)間。2.2.1.5抑菌圈測(cè)量將培養(yǎng)好的雙碟取出，拿掉陶瓦蓋，將鋼管倒入盛有1：1000新潔爾滅（苯扎溴銨）溶液或其它消毒液內(nèi)滅菌，換以玻璃蓋；測(cè)量抑菌圈前，應(yīng)檢查抑菌圈是否圓整，如有破圈或圈不完整，應(yīng)舍棄該碟，切忌主觀挑選雙碟或抑菌圈，以免造成測(cè)定結(jié)果的偏倚。測(cè)量抑菌圈可以使用抑菌圈測(cè)量?jī)x，也可用游標(biāo)卡尺；使用的抑菌圈測(cè)量?jī)x應(yīng)經(jīng)過檢定，并符合檢定規(guī)程要求，操作時(shí)應(yīng)按儀器的操作規(guī)程進(jìn)行；使用游標(biāo)卡尺測(cè)量時(shí)，眼睛視線應(yīng)與讀數(shù)刻度垂直，用卡尺的尖端與抑菌圈直徑的切點(diǎn)成垂直方向測(cè)量。2.2.1.6記錄與計(jì)算記錄試驗(yàn)記錄應(yīng)包括抗生素藥品名稱、規(guī)格、批號(hào)、生產(chǎn)廠家、檢品編號(hào)、檢驗(yàn)依據(jù)、檢驗(yàn)日期、溫度、

28、相對(duì)濕度、標(biāo)準(zhǔn)品名稱、標(biāo)準(zhǔn)品批號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)品來源及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)示含量、試驗(yàn)菌名稱，及菌懸液濃度、培養(yǎng)基名稱、來源及批號(hào)，緩沖液名稱及pH、供試品估計(jì)效價(jià)、抑菌圈測(cè)量?jī)x型號(hào)及編號(hào)、標(biāo)準(zhǔn)品與供試品的稱量、稀釋步驟、試驗(yàn)人與校核人，抑菌圈測(cè)量及數(shù)據(jù)處理結(jié)果。當(dāng)用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑時(shí)，應(yīng)將測(cè)得數(shù)據(jù)按相應(yīng)劑量濃度以列表形式記錄。用測(cè)量?jī)x測(cè)量抑菌圈面積或直徑時(shí)，應(yīng)將儀器的測(cè)量、數(shù)據(jù)處理、統(tǒng)計(jì)分析及計(jì)算結(jié)果打印后粘附于記錄頁面上。計(jì)算二計(jì)量法（2.2）效價(jià)計(jì)算公式P=log -1T2+T1-S2-S1×IX100%T2+S2-T1-S1式中 P為供試品效價(jià)（相當(dāng)于標(biāo)示量或估計(jì)效價(jià)的百分?jǐn)?shù)）； S2為標(biāo)

29、準(zhǔn)品高濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和； S1為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和； T2為供試品高濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；T1為供試品低濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；I為高、低濃度劑量之比的對(duì)數(shù)值，2:1時(shí)。I=0.301。4:1時(shí)，I=0.602。舉例乳糖酸紅霉素效價(jià)測(cè)定及計(jì)結(jié)果抑菌圈面積測(cè)量結(jié)果碟數(shù)抑菌圈面積S2S1T2T11157112761581126821481119915231173315231302149712634151812141533122651573123715431268615461219158012247149512601

30、5261240815301237154812639160512561593129310164912721608132015491124721553212528估計(jì)效價(jià)（AT）=603u/mg劑距（I）=0.301P=log-115532+12528-15491-12472×0.301×100%=101.1%15491+15532-12472-12528效價(jià)（PT）=P×AT=101.1%×603u/mg=609.8u/mg三劑量法（3.3法）效價(jià)計(jì)算公式P=log-10.1292(T3+T2+T1-S3-S2-S1)×100%S3+T3-S1-

31、T1式中 S3為標(biāo)準(zhǔn)品高濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；S2為標(biāo)準(zhǔn)品中間濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；S1為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；T3為供試品高濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；T2為供試品中濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；T1為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致抑菌圈直徑（或面積）的總和；I為高、低濃度劑量之比的對(duì)數(shù)值，1：0.8時(shí)，I=0.0969。舉例新霉素效價(jià)測(cè)定及計(jì)算結(jié)果。抑菌圈直徑測(cè)量結(jié)果碟數(shù)抑菌圈直徑S1S2S3T1T2T3116.0516.2016.5015.8016.3516.60216.2016.4516.6516.2016.45

32、16.70316.0016.4516.7016.0516.3516.70415.9516.3516.6016.0016.2516.60515.7016.2516.6015.8516.2516.60615.5516.2016.5515.7016.2016.60715.6516.2016.4015.8016.1516.40815.9016.1016.4515.8016.1016.50915.6016.0016.3015.7015.9516.30142.60146.20148.75142.90146.05149.00估計(jì)效價(jià)（AT）=670u/mg劑距（I）=0.0969P=log-10.1292(

33、142.90+146.05+149.00-142.60-146.20-148.75)×100%=101.1%效價(jià)(PT)= PXAT=101.1%670U/mg=676.7 U/mg.7 結(jié)果判定可靠性測(cè)驗(yàn)管碟法系根據(jù)量反應(yīng)平行線原理而設(shè)計(jì)，并要求在試驗(yàn)所用的劑量（濃度）范圍內(nèi)，對(duì)數(shù)劑量（濃度）與反應(yīng)呈直線關(guān)系?？煽啃詼y(cè)驗(yàn)即通過對(duì)劑間變異的分析，以測(cè)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品和供試品的對(duì)數(shù)劑量與反應(yīng)的關(guān)系是否顯著偏離平行直線。(2.2)法的劑間變異分析為試品間、回歸和偏離平行三項(xiàng)；（3.3）法還需要再分析二次曲線和反向二次曲線。如用游標(biāo)卡尺測(cè)量抑菌圈直徑可用（2.2）法和（3.3）法的專用數(shù)據(jù)處理軟件

34、對(duì)測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和結(jié)果計(jì)算。用抑菌圈測(cè)量?jī)x測(cè)量抑菌圈時(shí)，測(cè)量與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理一次完成，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析按藥典附錄的生物檢定統(tǒng)計(jì)法進(jìn)行F的顯著性測(cè)驗(yàn)。（2.2）法要求直線回歸和劑間要非常顯著（P0.01）,偏離平行應(yīng)不顯著（P0.05）；（3.3）法除（2.2）法的上述規(guī)定外，尚需考察二次曲線和反向二次曲線，且二者均應(yīng)不顯著（P0.05），符合以上各項(xiàng)規(guī)定后，才能認(rèn)為試驗(yàn)結(jié)果可靠，方可進(jìn)行效價(jià)和可信限率計(jì)算。可信限率考核試驗(yàn)的精密度，除藥典各論另有規(guī)定外，管碟法的可信限率不得超過5%。上述各項(xiàng)都能符合者，試驗(yàn)結(jié)果成立。試驗(yàn)計(jì)算所得效價(jià)低于估計(jì)效價(jià)的90%或高于估計(jì)效價(jià)的110%，則檢驗(yàn)結(jié)果僅作為初

35、試，應(yīng)調(diào)整供試品估計(jì)效價(jià)，予以重試。原料藥效價(jià)測(cè)定一般需做雙份樣品平行試驗(yàn)，以便核對(duì)。對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果不符合規(guī)定的樣品，應(yīng)由可靠性測(cè)驗(yàn)及可信限率均符合規(guī)定，且測(cè)定結(jié)果在估計(jì)效價(jià)（原料藥）或標(biāo)示量（制劑）±10%范圍內(nèi)的至少兩個(gè)效價(jià)測(cè)定結(jié)果，必要時(shí)應(yīng)請(qǐng)其他檢驗(yàn)人員復(fù)核，才能發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。效價(jià)測(cè)定結(jié)果的有效數(shù)字按中國藥典規(guī)定及數(shù)字修約的原則取舍。 抗生素微生物比濁法.1 稱量 要求同管碟法.2 稀釋 標(biāo)準(zhǔn)品與供試品溶液的稀釋應(yīng)使用經(jīng)標(biāo)定的量瓶，每步稀釋的量取量以不少于2ml為宜，稀釋步驟一般不超過3步。.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)品溶液 按中國藥典該品種含量測(cè)定項(xiàng)下的要求，制成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液

36、。在該品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量反應(yīng)線性范圍內(nèi)，以線性濃度范圍的中間值作為中間濃度，標(biāo)準(zhǔn)品溶液選擇5個(gè)劑量，劑量間的比例應(yīng)適宜（通常為1：1.25）。供試品溶液 根據(jù)估計(jì)效價(jià)或標(biāo)示量，取供試品按標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備方法，選擇中間濃度，不少于3個(gè)試管。含試驗(yàn)菌液體培養(yǎng)基的制備臨用前，取規(guī)定的試驗(yàn)菌懸液適量（3537培養(yǎng)34h后測(cè)定的吸光度在0.30.7之間），加入到各液體培養(yǎng)基管中，混合均勻，使在試驗(yàn)條件下能得到滿意的劑量反應(yīng)關(guān)系和適宜的測(cè)定濁度（吸光度）。含試驗(yàn)菌液體培養(yǎng)基在配制后應(yīng)立即使用，必要時(shí)可適當(dāng)冷卻，以防止試驗(yàn)菌在培養(yǎng)前生長(zhǎng)。線性試驗(yàn)取適宜的大小厚度均勻的已滅菌試管，在各個(gè)試管內(nèi)分別精密加入各個(gè)

37、濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液各1.0 ml，再精密加入含試驗(yàn)菌的液體培養(yǎng)基9.0 ml，立即混勻，按隨機(jī)區(qū)組分配將各個(gè)試驗(yàn)管放置于恒溫水浴內(nèi)，在規(guī)定的條件下培養(yǎng)（通常約4 h）至適宜測(cè)量的濁度值（吸光度值）。各濃度不少于4個(gè)試管。.4 平行線測(cè)定法二劑量(2.2)和三劑量（3.3）法標(biāo)準(zhǔn)品溶液 按中國藥典該品種含量測(cè)定項(xiàng)下的要求，制成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品貯備液。在該品種項(xiàng)下規(guī)定的劑量反應(yīng)線性范圍內(nèi)，選擇2個(gè)或3個(gè)劑量，劑量間的比例應(yīng)適宜（二劑量通常為2:1或4:1，三劑量通常為1:0.8）。供試品溶液根據(jù)估計(jì)效價(jià)或標(biāo)示量，取供試品按標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備方法，選擇2個(gè)或3個(gè)劑量。含試驗(yàn)菌液體培養(yǎng)基的制備同含

38、試驗(yàn)菌液體培養(yǎng)基的制備方法標(biāo)準(zhǔn)品及供試品測(cè)定 取適宜的大小厚度均勻的已滅菌試管，在各個(gè)試管內(nèi)分別精密加入2個(gè)或3個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和供試品溶液各1.0 ml，再精密加入含試驗(yàn)菌的液體培養(yǎng)基9.0 ml，立即混勻，按隨機(jī)區(qū)組分配將各管在規(guī)定條件下培養(yǎng)至適宜測(cè)量的濁度值（通常約為4h），各濃度不少于4個(gè)試管。.5 空白試驗(yàn)另取2支試管各加入藥品稀釋劑1.0ml，再分別加入含試驗(yàn)菌的液體培養(yǎng)基9.0 ml，其中在一支試管中立即加入12%甲醛溶液0.5 ml，混勻，作為空白對(duì)照，另一支試管同法培養(yǎng)作為試驗(yàn)菌生長(zhǎng)對(duì)照。.6 吸光度的測(cè)量在線測(cè)定各試管的吸光度或濁度，或取出試管立即加入12%甲醛溶液0.5 m

39、l以終止微生物的生長(zhǎng)，在530nm或580nm波長(zhǎng)處測(cè)定各管的吸光度或濁度。.7培養(yǎng)時(shí)間 觀察試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)曲線，測(cè)定時(shí)間應(yīng)處在試驗(yàn)菌的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期內(nèi)，且測(cè)定的吸光度應(yīng)在0.30.7之間。另外，還可考慮吸光度一供試品濃度（對(duì)數(shù)值）的反應(yīng)曲線，如較平坦，可考察選擇不同的培養(yǎng)時(shí)間，如反應(yīng)曲線斜率增加，則可增高試驗(yàn)的靈敏度。一般培養(yǎng)時(shí)間為34h。測(cè)定效價(jià)時(shí)，選擇一個(gè)培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的吸光度即可。.8 標(biāo)準(zhǔn)曲線法記錄與計(jì)算試驗(yàn)記錄要求與管碟法相同。效價(jià)計(jì)算 按下式計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率b和截距a，從而得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程。 斜率（b）=（x- x）（y- y）（x- x）2截距（a）=y - b x標(biāo)準(zhǔn)曲線

40、線性方程Y=bX+a式中x為抗生素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度或濃度的數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換值；x 為抗生素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度或濃度的數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換值的平均值；y 為各標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度或濁度；y為標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度或濁度的平均值。計(jì)算各濃度試管供試品溶液吸光度或濁度的平均值，自標(biāo)準(zhǔn)曲線上或按標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程，求得抗生素的量，再乘以供試品溶液的稀釋度，即得供試品中抗生素的效價(jià)含量?；貧w系數(shù)的顯著性測(cè)驗(yàn)判斷回歸得到的方程是否成立，即X、Y是否存在著回歸關(guān)系，可采用t檢驗(yàn)。X、Y應(yīng)具有直線回歸關(guān)系。計(jì)算方法如下：假設(shè)H0：b=0，在假設(shè)H0成立的條件下，按公式計(jì)算t值。 估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差：SY，X=（yi-Y）2/（n-2）1/2 回

41、歸系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)誤差：Sb=SY，X/（xi- x）2 1/2 t=（b-0）/Sb式中yi為標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)際吸光度；Y為估計(jì)吸光度或濁度（由標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程計(jì)算得到）；y為標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)際吸光度或濁度的均值； xi為抗生素標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際濃度lg值；x為抗生素標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際濃度lg值的均值。對(duì)于相應(yīng)自由度（2n-4）給定的顯著性水平（通常=0.05），查表得t/2(n-2)，若tt/2(n-2)，則拒絕H0，認(rèn)為回歸效果顯著，即X、Y具有直線回歸關(guān)系；認(rèn)為回歸效果不顯著，即X、Y不應(yīng)具有直線回歸關(guān)系?？尚畔蘼蕼y(cè)驗(yàn)試驗(yàn)的精密度，除藥典各論令有規(guī)定外，本法的可信限率不得超過5%。按下試計(jì)算得到的抗生素濃度lg值在

42、95%置信水平（=0.05）的可信限及可信限率。X0的可信限：FL=X0±t/2（n-2）·（SY，X/b）·1/m+1/n+（X0- x）2/xi2- xxi1/2式中 n為標(biāo)準(zhǔn)品的濃度數(shù)乘以平行測(cè)定數(shù)； m為供試品的平行測(cè)定數(shù)； X0為根據(jù)線性方程計(jì)算得到的抗生素的濃度lg值； Y0為抗生素樣品吸光度的均值?？尚畔蘼蔉L=（X0高限-X0低限）/2X0×100上述各項(xiàng)規(guī)定都能符合者，試驗(yàn)結(jié)果成立。.9 平行線測(cè)定法記錄與計(jì)算效價(jià)計(jì)算二劑量(2.2)法效價(jià)計(jì)算公式P=log-1T2+T1-S2-S1)×I×100%T2+S2-T1-

43、S1式中 P為供試品效價(jià)（相當(dāng)于標(biāo)志量或估計(jì)效價(jià)的百分?jǐn)?shù)）； S2為標(biāo)準(zhǔn)品高濃度溶液所致吸光度或濁度的總和； S1為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致吸光度或濁度的總和； T2為供試品高濃度溶液所致吸光度或濁度的總和； T1為供準(zhǔn)品低濃度溶液所致吸光度或濁度的總和；I為高、低濃度劑量之比的對(duì)數(shù)值，2：1時(shí)，I=0.301；4：1時(shí)，I=0.602。三劑量法效價(jià)計(jì)算公式P=log-10.1292(T3+T2+T1-S3-S2-S1)×100%S3+T3-S1-T1式中S3為標(biāo)準(zhǔn)品高濃度溶液所致吸光度的總和；S2為標(biāo)準(zhǔn)品中間濃度溶液所致吸光度或濁度的總和；S1為標(biāo)準(zhǔn)品低濃度溶液所致吸光度或濁度的總和；

44、T3為供試品高濃度溶液所致吸光度或濁度的總和; T2為供試品中間濃度溶液所致吸光度或濁度的總和； T1為供試品低濃度溶液所致吸光度或濁度的總和；I為高、低濃度劑量之比的對(duì)數(shù)值，1：0.8時(shí)，I=0.0969?？煽啃詼y(cè)驗(yàn)計(jì)算方法及要求同管碟法二劑量（2.2）和三劑量（3.3）法。即（2.2）法，回歸、劑間P0.01，偏離平行P0.05。（3.3）法，除符合（2.2）法的要求外，二次曲線、反向二次曲線P0.05?？尚畔蘼势淇尚畔蘼食碛幸?guī)定外，應(yīng)不大于5%。實(shí)驗(yàn)計(jì)算所得效價(jià)低于估計(jì)效價(jià)的90%或高于估計(jì)效價(jià)的110%，則檢驗(yàn)結(jié)果僅作為初試，應(yīng)調(diào)整供試品估計(jì)效價(jià)，予以重試。原料藥效價(jià)測(cè)定一般需做雙份

45、樣品平行試驗(yàn)，以便核對(duì)。對(duì)于檢驗(yàn)結(jié)果不符合規(guī)定的樣品，應(yīng)有可靠性測(cè)驗(yàn)及可信限率均符合規(guī)定，且測(cè)定結(jié)果在估計(jì)效價(jià)（原料藥）或標(biāo)示量（制劑）+10%范圍內(nèi)的至少兩個(gè)效價(jià)測(cè)定結(jié)果，必要時(shí)應(yīng)請(qǐng)其他檢驗(yàn)人員復(fù)核，才能發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告。效價(jià)測(cè)定結(jié)果的有效數(shù)字按中國藥典規(guī)定及數(shù)字修約的原則取舍。3 注意事項(xiàng)3.1 抗生素原料藥不含輔料的藥物制劑原料，一般其效價(jià)以純度（U/mg或g、mg）表示。檢驗(yàn)時(shí)，可參考該品種的藥品標(biāo)準(zhǔn)純度限度規(guī)定或廠方提供的純度估計(jì)效價(jià)，取樣試驗(yàn)，如估計(jì)效價(jià)與實(shí)際效價(jià)相差較遠(yuǎn)時(shí)，即測(cè)定所得效價(jià)超出估計(jì)效價(jià)的±10%時(shí)，則重新估計(jì)效價(jià)，再做準(zhǔn)確測(cè)定。原料藥一般皆以干燥品或無水物折算

46、效價(jià)，需先測(cè)其含水或未折干效價(jià)，再根據(jù)供試品的水分或干燥失重測(cè)定結(jié)果折算成無水物或干燥品的效價(jià)。 干燥品或無水物效價(jià)（U/mg）=濕品（或未這干品）效價(jià)（U/mg）1供試品干燥失重或水分%3.2抗生素制劑3.2.1粉針劑 指注射用無菌粉末或凍干品，用西林瓶橡膠塞鋁蓋封裝或熔封在安瓿內(nèi)，一般測(cè)定其純度（U/mg或g/mg）或整瓶效價(jià)。取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，稱取適量（50 mg以上，根據(jù)標(biāo)示量及平均裝量折算估計(jì)效價(jià)，并按估計(jì)效價(jià)及量瓶體積計(jì)算取樣量），置量瓶中，加標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溶劑溶解，稀釋，測(cè)定，計(jì)算取1 mg的效價(jià)單位數(shù)，再根據(jù)平均裝量及標(biāo)示量計(jì)算平均每瓶的百分含量。 水針劑（注射液） 即抗生

47、素的滅菌水溶液，標(biāo)示量一般按每毫升含效價(jià)單位計(jì)。效價(jià)測(cè)定時(shí)，量取平均裝量項(xiàng)下的內(nèi)容物或510支的內(nèi)容物，混勻，用干燥的刻度吸管吸取一定量的供試品，將吸管外壁用濾紙拭凈，再棄去多余的溶液，使供試品至吸管刻度，沿量瓶頸部?jī)?nèi)壁緩緩流放入已盛有一定量溶劑（以免抗生素結(jié)晶析出）的量瓶?jī)?nèi)，混勻，繼續(xù)加溶劑至刻度，搖勻，再量取適量稀釋至規(guī)定的濃度。 片劑 包括素片、薄膜衣片、糖衣片及腸溶片。素片、薄膜衣片 稱取20片的總量，求出平均片重，研細(xì)混勻后，精密稱取適量（約相當(dāng)于1片的重量或根據(jù)標(biāo)示量按平均片重及所用量瓶體積折算取樣量），置量瓶中，用標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的溶劑溶解，并稀釋至刻度，搖勻。再量取適量稀釋至規(guī)定濃度

48、。注意點(diǎn)：研磨時(shí)應(yīng)注意環(huán)境干燥，可在干燥操作柜內(nèi)操作，研磨要迅速，避免吸濕，因片劑內(nèi)含輔料較多，輔料可能漂浮于溶液表面，稀釋時(shí)量取供試溶液應(yīng)該讀取輔料下層的溶液切面；如沉淀較多，須待其下沉后再量取上層液；有些輔料吸附抗生素，應(yīng)加以注意。為節(jié)約供試品，可與重量差異檢查結(jié)合進(jìn)行。糖衣片、腸溶片 取標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的片數(shù)，置于乳缽中，研細(xì)，分次加入規(guī)定的溶劑，研磨使其溶解，將研磨液轉(zhuǎn)移至瓶口放有小漏斗的量瓶中，量瓶體積根據(jù)供試品的標(biāo)示量、所取片數(shù)及抗生素儲(chǔ)備液濃度（一般為1000U/ml）選定，用規(guī)定溶劑稀釋至刻度，搖勻，靜置，使輔料下沉而抗生素已溶解在溶液內(nèi)，精密吸取量瓶中的上層液適量，作進(jìn)一步稀釋。個(gè)

49、別品種標(biāo)準(zhǔn)如同時(shí)收載了糖衣片和薄膜衣片，可能規(guī)定薄膜衣片也取整片制備供試溶液。 膠囊劑 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混合均勻，研細(xì)，根據(jù)平均裝量，精密稱取約相當(dāng)于1粒膠囊的量或按標(biāo)示量、量瓶體積及抗生素儲(chǔ)備液濃度等計(jì)算的取樣量，置于量瓶中，加規(guī)定的溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，如供試品含有較多的輔料，則照片劑項(xiàng)下的方法進(jìn)行。 顆粒劑、干混懸劑 取裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，根據(jù)平均裝量，精密稱取約相當(dāng)于1袋（包）的量或按標(biāo)示量、量瓶體積及抗生素儲(chǔ)備液濃度等計(jì)算的取樣量，置于量瓶中，加規(guī)定的溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻。量取適量稀釋制成供試品溶液。測(cè)得效價(jià)后，再根據(jù)裝量差異項(xiàng)下的平均裝量，計(jì)算出平均每袋（包）的效價(jià)，根據(jù)表示量即可算出含量。 軟膏劑、眼膏劑 擦凈軟膏劑或眼膏劑軟管的外壁，切開封口，置于干燥器內(nèi)約1h，取干燥的潔凈分液漏斗，戴手套操作，將膏