生化分析儀檢測原理ppt課件

1、臨床生化檢驗反響原理及報告審核檢驗科檢驗科 黃小虎黃小虎全自動生化分析儀全自動生化分析儀生化分析儀特點優(yōu)點亮點亮點自動化機械化的儀器設(shè)備模擬 替代手工操作提高了任務(wù)效率 減少了客觀誤差靈敏 準確 快速 規(guī)范化生化分析儀分類1按構(gòu)造原理分管道延續(xù)流動式分立式常用離心式干片式急診常用2按測定速度分小型中型大型超大型模塊式3按自動化程度分半自動全自動2019 生化分析儀主要構(gòu)成生化分析儀主要構(gòu)成加樣系統(tǒng)供排水系統(tǒng)比色系統(tǒng)光源 比色杯 單色器 檢測器數(shù)據(jù)處置系統(tǒng)樣品轉(zhuǎn)盤 試劑倉 取樣安裝根本原理臨床生化分析儀最常運用的是分光光度法分光光度法是經(jīng)過測定被測物質(zhì)在特定波優(yōu)點或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該

2、物質(zhì)進展定性和定量分析的方法。 光吸收曲線溶液對不同波長光的吸收程度，通常用光吸收曲線來描畫。溶液對不同波長光的吸收程度，通常用光吸收曲線來描畫。 在分光光度法中, 以吸光度為縱坐標, 以波長為橫坐標作圖可得光吸收曲線。 濃度不同的同種溶液, 在該種曲線中其最大吸收波長一樣，相應(yīng)的吸光度大小那么不同，同一波長下摩爾吸數(shù)一樣。Lambert-Beer朗伯-比爾定律當一束平行單色光經(jīng)過均勻的非散射樣品時，樣品對光的吸光度與樣品的濃度及厚度成正比 A=kcbA-吸光度 k-吸光系數(shù) c-溶液濃度 b-液層厚度吸光系數(shù)定義：吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時測得的吸光度。K值的大小取決于吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入

3、射光波長、溶液溫度和溶劑性質(zhì)等，與溶液濃度大小和液層厚度無關(guān)。但K值大小因溶液濃度所采用的單位的不同而異。 討 論：1.Lamber-Beer定律的適用條件前提:入射光為單色光溶液是均勻，無散射溶液2.該定律適用于固體、液體和氣體樣品3.在同一波長下，各組分吸光度具有加和性，假設(shè) 溶液中同時存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì) ,那么測得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性 物質(zhì)吸光度的總和，即： Aa+b+cAaAbAc運用：多組分測定定量分析方法(1) 規(guī)范曲線法 (2) 規(guī)范溶液對比法(3) 吸光系數(shù)法規(guī)范曲線法規(guī)范曲線法最經(jīng)典方法最經(jīng)典方法前提：固定儀器和固定條件 A= K*BC 過程：配置規(guī)

4、范溶液系列 分別測定 A 得CA曲線 樣品 測定A樣 查得C樣規(guī)范溶液對比法在一樣的條件下，配制濃度為cs的規(guī)范溶液和濃度為cx的樣品溶液，在最大吸收波優(yōu)點，分別測定二者的吸光度值為As、Ax ，根據(jù)朗伯-比爾定律得: As=Kbcs Ax=Kbcx 那么: cx = cs*Ax /AssCiCCX吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法又稱絕對法，是直接利用朗伯-比爾定律的數(shù)學表達式AKbc進展計算的定量分析方法。在手冊中查出待測物質(zhì)在最大吸收波長 處的吸光系數(shù) 或 ,并在一樣條件下丈量樣品溶液的吸光度A，那么其濃度為： AcLLEA%1cm1max%1cm1E或檢測方法1.終點法 2.固定時間法3.延續(xù)監(jiān)測法

5、 終點法 終點分析法是基于反響到達平衡時反響產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對光吸收強度的大小，對物質(zhì)進展定量的一類分析方法。反響混合物進展一定時間反響后，到達平衡終點，即在顯色反響處于穩(wěn)定階段時，監(jiān)測其顏色對光的吸收強度，以此計算待測物濃度。終點時間確實認：一、根據(jù)時間-吸光度曲線 如:Trinder偶聯(lián)終點比色法反響測尿酸，反響曲線上3-5分鐘時其A趨向穩(wěn)定,故可將5分鐘作為反響終點。二、根據(jù)被測物反響終點，結(jié)合干擾物的反響情況來確定 如:溴甲酚綠法測血潔白蛋白 分 類終點法： 一點終點法 二點終點法 免疫比濁法 雙波長法一點終點法一點終點法在時間-吸光度曲線上吸光度不再改動時，選擇一個時間點測定吸

6、光度值。通常在反響終點附近延續(xù)讀兩個吸光度，求出兩點的平均值，并根據(jù)兩點的差值判別反響能否到達平衡。一點終點法的設(shè)置：以R和S混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測定計算基點，以反響到達平衡的吸光度讀數(shù)減去空白讀數(shù)，校準曲線經(jīng)過零點且成直線，對于反響速度比較快的實驗多用。 多見于單試劑工程，如：總蛋白，白蛋白等。2022-4-1721Am T時間時間AS+R(吸光度吸光度一點終點法反響曲線 計算公式： C=(Am-Ab)*KAm-終點讀數(shù)點的吸光 Ab-試劑空白吸光度 K-校正系數(shù)TP反響曲線蛋白質(zhì)+Cu2+Cu-蛋白質(zhì)絡(luò)合物 550nm處吸收峰二點終點法第二試劑參與以前，選擇某一

7、點讀取吸光度Am，經(jīng)過一定時間后反響達終點后測第二個吸光度值A(chǔ)n,利用兩吸光度之差計算結(jié)果。第一點吸光度值由樣本本身或第一試劑與樣品的非特異性反響有關(guān)，相當于樣品空白，可有效的消除樣品本身的吸光度，如溶血，黃疸，脂血等的干擾。AnTAR2AmS+R1(吸光度吸光度時間時間兩點終點兩點終點樣本空白樣本空白=S+R1S+R1+R2體積校正因子體積校正因子k0 計算公式計算公式 C=(An-K0 C=(An-K0* *Am)Am)* *K K CRE反響曲線肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2，H2O2和4-氨基氨替比林反響生成紅色醌類物質(zhì)，在540nm處有吸收峰。Mg反響曲線在堿性溶液中，Mg與二甲

8、苯胺藍構(gòu)成重氮鹽類的紫色復合物，Mg2+濃度可由二甲苯胺藍吸光度的下降，經(jīng)過光度測定法來測定。免疫比濁法 經(jīng)過物質(zhì)對光的散射或透射來測定物質(zhì)含量的 方法： 散射比濁：特定蛋白分析儀 透射比濁：自動生化分析儀 通常作兩點終點法分析，多采用多點校準。 運用：用Ab測定Ag主要為微量蛋白：IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等，要求Ab過量，此時Ag-Ab復合物的生成量隨Ag的添加而遞增，光散/透射強度與抗原量成正比。免疫比濁法優(yōu)點： 方法簡便 結(jié)果準確 可用于自動化儀器檢測缺陷：抗體用量大 達平衡時間長雙波長法 消除樣品中對測定有干擾的物質(zhì)的影響； 在試樣中含有兩個組分a和b時，假設(shè)要

9、測定組分b,組分a有干擾，應(yīng)設(shè)法消除組分a的吸收干擾。首先選擇待測組分b的最大吸收波長1作為丈量波長，然后用作圖的方法選擇參比波長2 ，使組分a在這兩個波優(yōu)點的吸光度相等。 試樣溶液在2和1兩個波優(yōu)點的吸光度之差，只與待測組分的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無關(guān)干擾物質(zhì)1.脂血：吸收光譜300-600nm呈下降趨勢2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰3.膽紅素：300-500nm有吸收峰 可見它們的吸收峰都較寬，且同測定波長有重疊景象。雙波長法雙波長測定優(yōu)點 ： 消除噪音干擾 減少雜散光影響 減少樣品本身光吸收的干擾 固定時間法 指在時間-吸光度曲線上選擇兩個測光點

10、，這兩點既非反響初始吸光度亦非終點吸光度，利用這兩點吸光度差值計算結(jié)果。 如：苦味酸法測肌酐 計算公式： C=(A2-A1)*KA1A2T(吸光度吸光度 測定底物的耗費或產(chǎn)物生成的速度的化學方法稱為延續(xù)監(jiān)測法又稱動態(tài)分析法、速率法或動力學法。在反響速度恒定期零級反響期來延續(xù)察看和記錄一定反響時間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化。經(jīng)過測定一段時間內(nèi)吸光度的變化速率 A/min 來計算待測物的濃度。 酶活性測定如ALT、AST、ALP、GGT等常用延續(xù)監(jiān)測法速率法延續(xù)監(jiān)測法速率法酶促反響曲線延續(xù)監(jiān)測法 即零級反響速率法,亦稱斜率法 在較長反響時間區(qū)段內(nèi)(90-180秒)，每隔一定時間(530秒)讀取一次吸光度

11、值，至 少讀取4點，得到3個以上A，最后算出 反響速率A/min。uTuuuVVltALU610/酶促反響進程曲線2022-4-1738A1TAS+R1R2A2(吸光度吸光度時間時間延續(xù)監(jiān)測法延續(xù)監(jiān)測法A/min=(A2-A1 )-(空白空白)/(t2-t1)t2t1延續(xù)監(jiān)測法特點 與固定時間法相比，屬于即時觀測，無需停頓酶促反響、不需添加其他呈色試劑，且可將多點的測定結(jié)果繪圖連線，快速、直觀查看酶促反響進程，很容易找到呈直線的線性期，檢查到能否偏離零級反響。典型酶聯(lián)法反響曲線ALT反響曲線AMY反響曲線生化結(jié)果報告審核責任心不強，未對結(jié)果進展仔細審核責任心不強，未對結(jié)果進展仔細審核對檢測儀器

12、或試劑方法學不夠了解對檢測儀器或試劑方法學不夠了解任務(wù)閱歷缺乏任務(wù)閱歷缺乏對儀器檢測的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過于置信對儀器檢測的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過于置信1.結(jié)合質(zhì)控判別結(jié)果在控在控GLO=TPALB偏高2.結(jié)合臨床資料審核結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核 例：某病人檢測的例：某病人檢測的TPTP為為110g/L110g/L，該標本沒有脂血等影，該標本沒有脂血等影響檢測結(jié)果的要素響檢測結(jié)果的要素 臨床診斷：多發(fā)性骨髓瘤臨床診斷：多發(fā)性骨髓瘤 另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對結(jié)果的影響另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對結(jié)果的影響檢驗工

13、程間的內(nèi)在聯(lián)絡(luò)各檢測參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系各檢測參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系例：例：TC HDL-C+LDL-CTC HDL-C+LDL-C、 TBI DBI TBI DBI CK CK-MB CK CK-MB LDH-HBDH LDH-HBDH影響檢驗結(jié)果的要素 試劑線性范圍： 了解檢驗工程試劑的線性范圍，對超越或低于范圍的工程，必需進展相應(yīng)的減量稀釋或增量后重新測定。線性范圍 在實踐任務(wù)中，用延續(xù)監(jiān)測法會遇到檢驗在實踐任務(wù)中，用延續(xù)監(jiān)測法會遇到檢驗結(jié)果為結(jié)果為0 0或者負值的情況，此時不能盲目置信或者負值的情況，此時不能盲目置信該結(jié)果低就出具低值報告，應(yīng)查看其反響曲線該結(jié)果低就出

14、具低值報告，應(yīng)查看其反響曲線例：某病人的尿液例：某病人的尿液AMYAMY檢測結(jié)果為檢測結(jié)果為0U/L0U/L 其反響曲線如以下圖：其反響曲線如以下圖：AMY反響曲線AMY反響曲線分析分析：由于測定物質(zhì)濃度過高分析：由于測定物質(zhì)濃度過高處置：對測定物質(zhì)進展十倍左右的稀釋再測定，處置：對測定物質(zhì)進展十倍左右的稀釋再測定，直到反響曲線恢復正常結(jié)果才可靠直到反響曲線恢復正常結(jié)果才可靠AMY反響曲線AMY反響曲線第一次稀釋后檢測工程的方法學 分析：分析：CKCK是由是由M M和和B B兩類亞基組成的二聚兩類亞基組成的二聚體，其構(gòu)成為體，其構(gòu)成為CK-MB(CK-MB(心型心型) )約占約占0-3%0-3

15、%、 CK-MM( CK-MM(肌肌型型) )約占約占97-100%97-100%、 CK-BB CK-BB腦型約占腦型約占0-1%0-1% 影響檢驗結(jié)果的要素 檢測工程的方法學：檢測工程的方法學： 要了解該工程試劑采用的方法學：要了解該工程試劑采用的方法學： 例：某病人在測定心肌酶譜時，其例：某病人在測定心肌酶譜時，其CK:246U/LCK:246U/L、CK-MB:286U/LCK-MB:286U/L，標本無溶血等要素影響，標本無溶血等要素影響, ,其結(jié)其結(jié)果中果中CK-MBCK-MBCKCKCK-MBCK-MB采用的檢測方法為免疫抑制法采用的檢測方法為免疫抑制法 正常人體中，正常人體中，

16、CKCK同工酶中同工酶中CK-MMCK-MMCK-MBCK-MBCK-BB,CK-BB,其中其中CK-BBCK-BB含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略立于忽略CK-BBCK-BB的根底上。采用抗體抑制其的根底上。采用抗體抑制其M M亞基亞基活性，使活性，使CK-MMCK-MM失去活性，而失去活性，而CK-MBCK-MB失去一半的活失去一半的活性。單測定性。單測定B B亞基的活性，其結(jié)果亞基的活性，其結(jié)果2 2即為即為CK-MBCK-MB活活性。性。由于在患輕度或中度腦損傷、腦血管不測及腦手由于在患輕度或中度腦損傷、腦血管不測及腦手術(shù)后術(shù)后 呵斥腦組織發(fā)

17、生本質(zhì)性損害的病人中，呵斥腦組織發(fā)生本質(zhì)性損害的病人中，CK-BB會升高，這時該方法測定的會升高，這時該方法測定的CK-MB的活性相當?shù)幕钚韵喈斢谑怯谑荂K-MB+2CK-BB的活性之和，呵斥的活性之和，呵斥CK-MB活性假性升高?；钚约傩陨?。檢驗標本的影響 標本脂血會使反響濁度添加，透光度下降，標本脂血會使反響濁度添加，透光度下降，吸光度添加，從而呵斥檢驗結(jié)果不準確。如吸光度添加，從而呵斥檢驗結(jié)果不準確。如TPTP、TGTG、UAUA顯著增高，顯著增高，GGTGGT顯著下降或為顯著下降或為0 0 標本溶血會使標本溶血會使K+K+、ALTALT、ASTAST、LDHLDH等檢驗結(jié)果等檢驗結(jié)果

18、顯著升高顯著升高抗凝劑的錯誤運用抗凝劑的錯誤運用儀器性能影響 儀器老化、缺點、清洗管道堵塞、水質(zhì)不純等儀器老化、缺點、清洗管道堵塞、水質(zhì)不純等均會對檢驗結(jié)果呵斥影響均會對檢驗結(jié)果呵斥影響 光路老化：表現(xiàn)為光路老化：表現(xiàn)為CK-MB,ALP,ALTCK-MB,ALP,ALT、ASTAST等工程等工程結(jié)果反復性較差結(jié)果反復性較差 水質(zhì)不純、反響杯清洗不干凈：表現(xiàn)為無機物水質(zhì)不純、反響杯清洗不干凈：表現(xiàn)為無機物質(zhì)結(jié)果不準質(zhì)結(jié)果不準檢驗結(jié)果的總體趨勢 即使質(zhì)控在控，也要留意當日檢驗結(jié)果的總體的分布趨勢 如K+的參考區(qū)間為3.55.5，中值為4.5，假設(shè)當日結(jié)果大部分甚至全部低于4.5，即使當日質(zhì)控在控，任要思索結(jié)果能否偏低，應(yīng)重新校準、質(zhì)控后再測定 如在質(zhì)控中TC(-1S),HDL