生化分析儀檢測(cè)原理ppt課件

1、臨床生化檢驗(yàn)反響原理及報(bào)告審核檢驗(yàn)科檢驗(yàn)科 黃小虎黃小虎全自動(dòng)生化分析儀全自動(dòng)生化分析儀生化分析儀特點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)亮點(diǎn)亮點(diǎn)自動(dòng)化機(jī)械化的儀器設(shè)備模擬 替代手工操作提高了任務(wù)效率 減少了客觀誤差靈敏 準(zhǔn)確 快速 規(guī)范化生化分析儀分類1按構(gòu)造原理分管道延續(xù)流動(dòng)式分立式常用離心式干片式急診常用2按測(cè)定速度分小型中型大型超大型模塊式3按自動(dòng)化程度分半自動(dòng)全自動(dòng)2019 生化分析儀主要構(gòu)成生化分析儀主要構(gòu)成加樣系統(tǒng)供排水系統(tǒng)比色系統(tǒng)光源 比色杯 單色器 檢測(cè)器數(shù)據(jù)處置系統(tǒng)樣品轉(zhuǎn)盤 試劑倉(cāng) 取樣安裝根本原理臨床生化分析儀最常運(yùn)用的是分光光度法分光光度法是經(jīng)過(guò)測(cè)定被測(cè)物質(zhì)在特定波優(yōu)點(diǎn)或一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)光的吸收度，對(duì)該

2、物質(zhì)進(jìn)展定性和定量分析的方法。 光吸收曲線溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度，通常用光吸收曲線來(lái)描畫。溶液對(duì)不同波長(zhǎng)光的吸收程度，通常用光吸收曲線來(lái)描畫。 在分光光度法中, 以吸光度為縱坐標(biāo), 以波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)作圖可得光吸收曲線。 濃度不同的同種溶液, 在該種曲線中其最大吸收波長(zhǎng)一樣，相應(yīng)的吸光度大小那么不同，同一波長(zhǎng)下摩爾吸數(shù)一樣。Lambert-Beer朗伯-比爾定律當(dāng)一束平行單色光經(jīng)過(guò)均勻的非散射樣品時(shí)，樣品對(duì)光的吸光度與樣品的濃度及厚度成正比 A=kcbA-吸光度 k-吸光系數(shù) c-溶液濃度 b-液層厚度吸光系數(shù)定義：吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)測(cè)得的吸光度。K值的大小取決于吸光物質(zhì)的性質(zhì)、入

3、射光波長(zhǎng)、溶液溫度和溶劑性質(zhì)等，與溶液濃度大小和液層厚度無(wú)關(guān)。但K值大小因溶液濃度所采用的單位的不同而異。 討 論：1.Lamber-Beer定律的適用條件前提:入射光為單色光溶液是均勻，無(wú)散射溶液2.該定律適用于固體、液體和氣體樣品3.在同一波長(zhǎng)下，各組分吸光度具有加和性，假設(shè) 溶液中同時(shí)存在兩種或兩種以上的吸光性物質(zhì) ,那么測(cè)得的該溶液的吸光度等于溶液中各吸光性 物質(zhì)吸光度的總和，即： Aa+b+cAaAbAc運(yùn)用：多組分測(cè)定定量分析方法(1) 規(guī)范曲線法 (2) 規(guī)范溶液對(duì)比法(3) 吸光系數(shù)法規(guī)范曲線法規(guī)范曲線法最經(jīng)典方法最經(jīng)典方法前提：固定儀器和固定條件 A= K*BC 過(guò)程：配置規(guī)

4、范溶液系列 分別測(cè)定 A 得CA曲線 樣品 測(cè)定A樣 查得C樣規(guī)范溶液對(duì)比法在一樣的條件下，配制濃度為cs的規(guī)范溶液和濃度為cx的樣品溶液，在最大吸收波優(yōu)點(diǎn)，分別測(cè)定二者的吸光度值為As、Ax ，根據(jù)朗伯-比爾定律得: As=Kbcs Ax=Kbcx 那么: cx = cs*Ax /AssCiCCX吸光系數(shù)法吸光系數(shù)法又稱絕對(duì)法，是直接利用朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表達(dá)式AKbc進(jìn)展計(jì)算的定量分析方法。在手冊(cè)中查出待測(cè)物質(zhì)在最大吸收波長(zhǎng) 處的吸光系數(shù) 或 ,并在一樣條件下丈量樣品溶液的吸光度A，那么其濃度為： AcLLEA%1cm1max%1cm1E或檢測(cè)方法1.終點(diǎn)法 2.固定時(shí)間法3.延續(xù)監(jiān)測(cè)法

5、 終點(diǎn)法 終點(diǎn)分析法是基于反響到達(dá)平衡時(shí)反響產(chǎn)物的吸收光譜特征及其對(duì)光吸收強(qiáng)度的大小，對(duì)物質(zhì)進(jìn)展定量的一類分析方法。反響混合物進(jìn)展一定時(shí)間反響后，到達(dá)平衡終點(diǎn)，即在顯色反響處于穩(wěn)定階段時(shí)，監(jiān)測(cè)其顏色對(duì)光的吸收強(qiáng)度，以此計(jì)算待測(cè)物濃度。終點(diǎn)時(shí)間確實(shí)認(rèn)：一、根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線 如:Trinder偶聯(lián)終點(diǎn)比色法反響測(cè)尿酸，反響曲線上3-5分鐘時(shí)其A趨向穩(wěn)定,故可將5分鐘作為反響終點(diǎn)。二、根據(jù)被測(cè)物反響終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反響情況來(lái)確定 如:溴甲酚綠法測(cè)血潔白蛋白 分 類終點(diǎn)法： 一點(diǎn)終點(diǎn)法 二點(diǎn)終點(diǎn)法 免疫比濁法 雙波長(zhǎng)法一點(diǎn)終點(diǎn)法一點(diǎn)終點(diǎn)法在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改動(dòng)時(shí)，選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定吸

6、光度值。通常在反響終點(diǎn)附近延續(xù)讀兩個(gè)吸光度，求出兩點(diǎn)的平均值，并根據(jù)兩點(diǎn)的差值判別反響能否到達(dá)平衡。一點(diǎn)終點(diǎn)法的設(shè)置：以R和S混合之前的空氣空白、水空白或試劑空白的吸光度值為測(cè)定計(jì)算基點(diǎn)，以反響到達(dá)平衡的吸光度讀數(shù)減去空白讀數(shù)，校準(zhǔn)曲線經(jīng)過(guò)零點(diǎn)且成直線，對(duì)于反響速度比較快的實(shí)驗(yàn)多用。 多見(jiàn)于單試劑工程，如：總蛋白，白蛋白等。2022-4-1721Am T時(shí)間時(shí)間AS+R(吸光度吸光度一點(diǎn)終點(diǎn)法反響曲線 計(jì)算公式： C=(Am-Ab)*KAm-終點(diǎn)讀數(shù)點(diǎn)的吸光 Ab-試劑空白吸光度 K-校正系數(shù)TP反響曲線蛋白質(zhì)+Cu2+Cu-蛋白質(zhì)絡(luò)合物 550nm處吸收峰二點(diǎn)終點(diǎn)法第二試劑參與以前，選擇某一

7、點(diǎn)讀取吸光度Am，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后反響達(dá)終點(diǎn)后測(cè)第二個(gè)吸光度值A(chǔ)n,利用兩吸光度之差計(jì)算結(jié)果。第一點(diǎn)吸光度值由樣本本身或第一試劑與樣品的非特異性反響有關(guān)，相當(dāng)于樣品空白，可有效的消除樣品本身的吸光度，如溶血，黃疸，脂血等的干擾。AnTAR2AmS+R1(吸光度吸光度時(shí)間時(shí)間兩點(diǎn)終點(diǎn)兩點(diǎn)終點(diǎn)樣本空白樣本空白=S+R1S+R1+R2體積校正因子體積校正因子k0 計(jì)算公式計(jì)算公式 C=(An-K0 C=(An-K0* *Am)Am)* *K K CRE反響曲線肌酐在一系列酶的作用下生成H2O2，H2O2和4-氨基氨替比林反響生成紅色醌類物質(zhì)，在540nm處有吸收峰。Mg反響曲線在堿性溶液中，Mg與二甲

8、苯胺藍(lán)構(gòu)成重氮鹽類的紫色復(fù)合物，Mg2+濃度可由二甲苯胺藍(lán)吸光度的下降，經(jīng)過(guò)光度測(cè)定法來(lái)測(cè)定。免疫比濁法 經(jīng)過(guò)物質(zhì)對(duì)光的散射或透射來(lái)測(cè)定物質(zhì)含量的 方法： 散射比濁：特定蛋白分析儀 透射比濁：自動(dòng)生化分析儀 通常作兩點(diǎn)終點(diǎn)法分析，多采用多點(diǎn)校準(zhǔn)。 運(yùn)用：用Ab測(cè)定Ag主要為微量蛋白：IG、 C、APOA1/B、ASO、RF、CRP等，要求Ab過(guò)量，此時(shí)Ag-Ab復(fù)合物的生成量隨Ag的添加而遞增，光散/透射強(qiáng)度與抗原量成正比。免疫比濁法優(yōu)點(diǎn)： 方法簡(jiǎn)便 結(jié)果準(zhǔn)確 可用于自動(dòng)化儀器檢測(cè)缺陷：抗體用量大 達(dá)平衡時(shí)間長(zhǎng)雙波長(zhǎng)法 消除樣品中對(duì)測(cè)定有干擾的物質(zhì)的影響； 在試樣中含有兩個(gè)組分a和b時(shí)，假設(shè)要

9、測(cè)定組分b,組分a有干擾，應(yīng)設(shè)法消除組分a的吸收干擾。首先選擇待測(cè)組分b的最大吸收波長(zhǎng)1作為丈量波長(zhǎng)，然后用作圖的方法選擇參比波長(zhǎng)2 ，使組分a在這兩個(gè)波優(yōu)點(diǎn)的吸光度相等。 試樣溶液在2和1兩個(gè)波優(yōu)點(diǎn)的吸光度之差，只與待測(cè)組分的濃度成正比，而與干擾組分的濃度無(wú)關(guān)干擾物質(zhì)1.脂血：吸收光譜300-600nm呈下降趨勢(shì)2.Hb：350nm、400nm、540nm、580nm 吸收峰3.膽紅素：300-500nm有吸收峰 可見(jiàn)它們的吸收峰都較寬，且同測(cè)定波長(zhǎng)有重疊景象。雙波長(zhǎng)法雙波長(zhǎng)測(cè)定優(yōu)點(diǎn) ： 消除噪音干擾 減少雜散光影響 減少樣品本身光吸收的干擾 固定時(shí)間法 指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)測(cè)光點(diǎn)

10、，這兩點(diǎn)既非反響初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，利用這兩點(diǎn)吸光度差值計(jì)算結(jié)果。 如：苦味酸法測(cè)肌酐 計(jì)算公式： C=(A2-A1)*KA1A2T(吸光度吸光度 測(cè)定底物的耗費(fèi)或產(chǎn)物生成的速度的化學(xué)方法稱為延續(xù)監(jiān)測(cè)法又稱動(dòng)態(tài)分析法、速率法或動(dòng)力學(xué)法。在反響速度恒定期零級(jí)反響期來(lái)延續(xù)察看和記錄一定反響時(shí)間內(nèi)底物或產(chǎn)物量的變化。經(jīng)過(guò)測(cè)定一段時(shí)間內(nèi)吸光度的變化速率 A/min 來(lái)計(jì)算待測(cè)物的濃度。 酶活性測(cè)定如ALT、AST、ALP、GGT等常用延續(xù)監(jiān)測(cè)法速率法延續(xù)監(jiān)測(cè)法速率法酶促反響曲線延續(xù)監(jiān)測(cè)法 即零級(jí)反響速率法,亦稱斜率法 在較長(zhǎng)反響時(shí)間區(qū)段內(nèi)(90-180秒)，每隔一定時(shí)間(530秒)讀取一次吸光度

11、值，至 少讀取4點(diǎn)，得到3個(gè)以上A，最后算出 反響速率A/min。uTuuuVVltALU610/酶促反響進(jìn)程曲線2022-4-1738A1TAS+R1R2A2(吸光度吸光度時(shí)間時(shí)間延續(xù)監(jiān)測(cè)法延續(xù)監(jiān)測(cè)法A/min=(A2-A1 )-(空白空白)/(t2-t1)t2t1延續(xù)監(jiān)測(cè)法特點(diǎn) 與固定時(shí)間法相比，屬于即時(shí)觀測(cè)，無(wú)需停頓酶促反響、不需添加其他呈色試劑，且可將多點(diǎn)的測(cè)定結(jié)果繪圖連線，快速、直觀查看酶促反響進(jìn)程，很容易找到呈直線的線性期，檢查到能否偏離零級(jí)反響。典型酶聯(lián)法反響曲線ALT反響曲線AMY反響曲線生化結(jié)果報(bào)告審核責(zé)任心不強(qiáng)，未對(duì)結(jié)果進(jìn)展仔細(xì)審核責(zé)任心不強(qiáng)，未對(duì)結(jié)果進(jìn)展仔細(xì)審核對(duì)檢測(cè)儀器

12、或試劑方法學(xué)不夠了解對(duì)檢測(cè)儀器或試劑方法學(xué)不夠了解任務(wù)閱歷缺乏任務(wù)閱歷缺乏對(duì)儀器檢測(cè)的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過(guò)于置信對(duì)儀器檢測(cè)的結(jié)果及室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果過(guò)于置信1.結(jié)合質(zhì)控判別結(jié)果在控在控GLO=TPALB偏高2.結(jié)合臨床資料審核結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核結(jié)合病人的性別、年齡、臨床診斷、其他檢查結(jié)果審核 例：某病人檢測(cè)的例：某病人檢測(cè)的TPTP為為110g/L110g/L，該標(biāo)本沒(méi)有脂血等影，該標(biāo)本沒(méi)有脂血等影響檢測(cè)結(jié)果的要素響檢測(cè)結(jié)果的要素 臨床診斷：多發(fā)性骨髓瘤臨床診斷：多發(fā)性骨髓瘤 另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對(duì)結(jié)果的影響另：胰島素與低血糖、病人輸注藥物對(duì)結(jié)果的影響檢驗(yàn)工

13、程間的內(nèi)在聯(lián)絡(luò)各檢測(cè)參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系各檢測(cè)參數(shù)間存在大小、比例、邏輯關(guān)系例：例：TC HDL-C+LDL-CTC HDL-C+LDL-C、 TBI DBI TBI DBI CK CK-MB CK CK-MB LDH-HBDH LDH-HBDH影響檢驗(yàn)結(jié)果的要素 試劑線性范圍： 了解檢驗(yàn)工程試劑的線性范圍，對(duì)超越或低于范圍的工程，必需進(jìn)展相應(yīng)的減量稀釋或增量后重新測(cè)定。線性范圍 在實(shí)踐任務(wù)中，用延續(xù)監(jiān)測(cè)法會(huì)遇到檢驗(yàn)在實(shí)踐任務(wù)中，用延續(xù)監(jiān)測(cè)法會(huì)遇到檢驗(yàn)結(jié)果為結(jié)果為0 0或者負(fù)值的情況，此時(shí)不能盲目置信或者負(fù)值的情況，此時(shí)不能盲目置信該結(jié)果低就出具低值報(bào)告，應(yīng)查看其反響曲線該結(jié)果低就出

14、具低值報(bào)告，應(yīng)查看其反響曲線例：某病人的尿液例：某病人的尿液AMYAMY檢測(cè)結(jié)果為檢測(cè)結(jié)果為0U/L0U/L 其反響曲線如以下圖：其反響曲線如以下圖：AMY反響曲線AMY反響曲線分析分析：由于測(cè)定物質(zhì)濃度過(guò)高分析：由于測(cè)定物質(zhì)濃度過(guò)高處置：對(duì)測(cè)定物質(zhì)進(jìn)展十倍左右的稀釋再測(cè)定，處置：對(duì)測(cè)定物質(zhì)進(jìn)展十倍左右的稀釋再測(cè)定，直到反響曲線恢復(fù)正常結(jié)果才可靠直到反響曲線恢復(fù)正常結(jié)果才可靠AMY反響曲線AMY反響曲線第一次稀釋后檢測(cè)工程的方法學(xué) 分析：分析：CKCK是由是由M M和和B B兩類亞基組成的二聚兩類亞基組成的二聚體，其構(gòu)成為體，其構(gòu)成為CK-MB(CK-MB(心型心型) )約占約占0-3%0-3

15、%、 CK-MM( CK-MM(肌肌型型) )約占約占97-100%97-100%、 CK-BB CK-BB腦型約占腦型約占0-1%0-1% 影響檢驗(yàn)結(jié)果的要素 檢測(cè)工程的方法學(xué)：檢測(cè)工程的方法學(xué)： 要了解該工程試劑采用的方法學(xué)：要了解該工程試劑采用的方法學(xué)： 例：某病人在測(cè)定心肌酶譜時(shí)，其例：某病人在測(cè)定心肌酶譜時(shí)，其CK:246U/LCK:246U/L、CK-MB:286U/LCK-MB:286U/L，標(biāo)本無(wú)溶血等要素影響，標(biāo)本無(wú)溶血等要素影響, ,其結(jié)其結(jié)果中果中CK-MBCK-MBCKCKCK-MBCK-MB采用的檢測(cè)方法為免疫抑制法采用的檢測(cè)方法為免疫抑制法 正常人體中，正常人體中，

16、CKCK同工酶中同工酶中CK-MMCK-MMCK-MBCK-MBCK-BB,CK-BB,其中其中CK-BBCK-BB含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建含量極少，可忽略。免疫抑制法正是建立于忽略立于忽略CK-BBCK-BB的根底上。采用抗體抑制其的根底上。采用抗體抑制其M M亞基亞基活性，使活性，使CK-MMCK-MM失去活性，而失去活性，而CK-MBCK-MB失去一半的活失去一半的活性。單測(cè)定性。單測(cè)定B B亞基的活性，其結(jié)果亞基的活性，其結(jié)果2 2即為即為CK-MBCK-MB活活性。性。由于在患輕度或中度腦損傷、腦血管不測(cè)及腦手由于在患輕度或中度腦損傷、腦血管不測(cè)及腦手術(shù)后術(shù)后 呵斥腦組織發(fā)

17、生本質(zhì)性損害的病人中，呵斥腦組織發(fā)生本質(zhì)性損害的病人中，CK-BB會(huì)升高，這時(shí)該方法測(cè)定的會(huì)升高，這時(shí)該方法測(cè)定的CK-MB的活性相當(dāng)?shù)幕钚韵喈?dāng)于是于是CK-MB+2CK-BB的活性之和，呵斥的活性之和，呵斥CK-MB活性假性升高。活性假性升高。檢驗(yàn)標(biāo)本的影響 標(biāo)本脂血會(huì)使反響濁度添加，透光度下降，標(biāo)本脂血會(huì)使反響濁度添加，透光度下降，吸光度添加，從而呵斥檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。如吸光度添加，從而呵斥檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確。如TPTP、TGTG、UAUA顯著增高，顯著增高，GGTGGT顯著下降或?yàn)轱@著下降或?yàn)? 0 標(biāo)本溶血會(huì)使標(biāo)本溶血會(huì)使K+K+、ALTALT、ASTAST、LDHLDH等檢驗(yàn)結(jié)果等檢驗(yàn)結(jié)果

18、顯著升高顯著升高抗凝劑的錯(cuò)誤運(yùn)用抗凝劑的錯(cuò)誤運(yùn)用儀器性能影響 儀器老化、缺點(diǎn)、清洗管道堵塞、水質(zhì)不純等儀器老化、缺點(diǎn)、清洗管道堵塞、水質(zhì)不純等均會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果呵斥影響均會(huì)對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果呵斥影響 光路老化：表現(xiàn)為光路老化：表現(xiàn)為CK-MB,ALP,ALTCK-MB,ALP,ALT、ASTAST等工程等工程結(jié)果反復(fù)性較差結(jié)果反復(fù)性較差 水質(zhì)不純、反響杯清洗不干凈：表現(xiàn)為無(wú)機(jī)物水質(zhì)不純、反響杯清洗不干凈：表現(xiàn)為無(wú)機(jī)物質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn)質(zhì)結(jié)果不準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果的總體趨勢(shì) 即使質(zhì)控在控，也要留意當(dāng)日檢驗(yàn)結(jié)果的總體的分布趨勢(shì) 如K+的參考區(qū)間為3.55.5，中值為4.5，假設(shè)當(dāng)日結(jié)果大部分甚至全部低于4.5，即使當(dāng)日質(zhì)控在控，任要思索結(jié)果能否偏低，應(yīng)重新校準(zhǔn)、質(zhì)控后再測(cè)定 如在質(zhì)控中TC(-1S),HDL