種子活力測(cè)定

1、種子活力測(cè)定第1頁(yè)，共18頁(yè)。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解測(cè)定種子活力和發(fā)芽率的方法。第2頁(yè)，共18頁(yè)。溴麝香草酚蘭法（溴麝香草酚蘭法（BTB法）法） 實(shí)驗(yàn)原理：凡活細(xì)胞必有呼吸作用，吸收空氣中的O2,放出CO2, CO2溶于水成為H2CO3。H2CO3解離為H+和HCO3_,使得種胚周圍環(huán)境的酸度增加。用溴麝香草酚蘭（BTB）來(lái)測(cè)定酸度的改變。BTB的變色范圍為PH6.07.6,酸性呈黃色，堿性呈藍(lán)色中間經(jīng)過(guò)綠色（變色點(diǎn)為H7.1）。色澤差異顯著，易于觀察。 第3頁(yè)，共18頁(yè)。材料：小麥種子儀器：恒溫箱、培養(yǎng)皿、天平、燒杯、鑷子、漏斗、濾紙?jiān)噭?.1%BTB溶液：稱取BTB0.1g,溶解于煮沸過(guò)的自來(lái)水

2、中（因配置指示劑的應(yīng)為微堿性，使溶液呈藍(lán)色或藍(lán)綠色，而蒸餾水為微酸性不宜用），然后用濾紙去殘?jiān)V液若呈黃色，可加數(shù)滴稀氨水，使之變?yōu)樗{(lán)色或藍(lán)綠色。此液可長(zhǎng)時(shí)期貯存于棕色瓶中。第4頁(yè)，共18頁(yè)。1%BTB瓊脂凝膠：取0.1%BTB溶液100ml至于燒瓶中，另將1g瓊脂剪碎后加入，用小火加熱并不斷攪拌。待瓊脂完全溶解后，趁熱倒入數(shù)個(gè)干凈的培養(yǎng)皿中，使成為一均勻的薄層冷卻后備用。 第5頁(yè)，共18頁(yè)。方法與步驟：方法與步驟：1、 浸種：為了增強(qiáng)種胚的呼吸強(qiáng)度，使BTB反應(yīng)迅速而鮮明,必須預(yù)先充分浸種。取小麥種子50粒，在3050oC條件下，浸種35小時(shí)，第6頁(yè)，共18頁(yè)。2、 播種：將充分吸脹的種子

3、整齊排列于培養(yǎng)皿的中央。種子的間距應(yīng)大些，使各種子的胚部相互離開(kāi)（直徑10厘米的培養(yǎng)皿不宜超過(guò)50粒）。務(wù)必使種子的胚部都向下，腹溝向上，當(dāng)凝膠溫度降至40oC時(shí)，沿玻棒仔細(xì)倒入各種子之間，成一均勻薄層（0.2-0.4cm為宜），使種胚埋沒(méi)與膠層之中。第7頁(yè)，共18頁(yè)。3、 觀察及計(jì)數(shù)：將培養(yǎng)皿放于3050oC條件下小麥1-2小時(shí)，就可對(duì)光觀察，并初次計(jì)數(shù)。（觀察時(shí)要從透射光下看）。在藍(lán)色背景下，凡局限于種胚附近，出現(xiàn)較深的黃暈色圈的是活種子，無(wú)黃暈色圈的可能是死種子。結(jié)果計(jì)數(shù)。4、 用沸水殺死吸漲的種子，與正常種子進(jìn)行對(duì)比觀察，方法同上。5、 BTB計(jì)數(shù)后，可將小麥種子種胚翻轉(zhuǎn)向上，數(shù)日后，

4、測(cè)定其真實(shí)發(fā)芽率。 第8頁(yè)，共18頁(yè)。第9頁(yè)，共18頁(yè)。紅墨水染色法紅墨水染色法 原理：原理：凡生活細(xì)胞的原生質(zhì)膜具選擇性吸收能力，而死的種子細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失這種能力，于是染料便進(jìn)入死細(xì)胞而使胚著色。 第10頁(yè)，共18頁(yè)。儀器、材料與試劑：儀器、材料與試劑：培養(yǎng)皿、鑷子、刀片、5%紅墨水（紅墨水5ml+95ml自來(lái)水）、玉米種子。 第11頁(yè)，共18頁(yè)。方法與步驟：方法與步驟： 1、 浸種：（同BTB法）2、 染色：取已吸脹的種子200粒，沿胚和中線切為兩半，將一半置于培養(yǎng)皿中，加入5%紅墨水（以淹沒(méi)種子為度），染色5-10分鐘，（溫度高時(shí)時(shí)間可短些）。染色后，倒去紅墨水液，用水沖洗多次，至沖洗

5、液為無(wú)色止。檢查種子死活。結(jié)果凡種胚不著色或著色很淺的為活種子，凡種胚與胚乳著色程度相同的為死種子?？捎梅兴畾⑺赖姆N子為對(duì)照觀察。3、 計(jì)數(shù)種胚不著色或著色淺的種子數(shù)，算出其發(fā)芽率。 第12頁(yè)，共18頁(yè)?；罘N子活種子死種子死種子第13頁(yè)，共18頁(yè)。紙上熒光法紙上熒光法 原理：原理：凡有生活力的種子和已經(jīng)死亡的種子，它們的種皮對(duì)物質(zhì)的透性是不同的，而許多植物的種子中又都含有熒光物質(zhì)。利用對(duì)熒光物質(zhì)的不同透性來(lái)區(qū)分種子的死活，方法簡(jiǎn)單，特別是對(duì)十字花科植物的種子，尤為適用。 第14頁(yè)，共18頁(yè)。儀器、材料與試劑：儀器、材料與試劑：紫外分析儀、培養(yǎng)皿、鑷子、濾紙（無(wú)熒光）、油菜種子。第15頁(yè)，共18頁(yè)。方法與步驟：方法與步驟：1、 將完整無(wú)損的種子（油菜、白菜等十字花科植物的種子）100粒，于2530oC水中浸泡2-3小時(shí)。2、 把已吸脹的種子，以3-5mm間隔整齊的排列在培養(yǎng)皿中的濕潤(rùn)濾紙上，濾紙上水分不能太多，以免熒光物質(zhì)流散。培養(yǎng)皿可以不必加蓋，放置1.5-2小時(shí)取出種子，將濾紙陰干。取出的種子仍按原來(lái)順序排列在另一皿中（以備驗(yàn)證） 第16頁(yè)，共18頁(yè)。3、 將濾紙置于紫外分析儀下進(jìn)行觀察，觀察如能在暗室中進(jìn)行，效果更好。4、 結(jié)果：有的放過(guò)種子的位置上可見(jiàn)一熒