TU1901紫外可見分光光度培訓(xùn)

1、1TU-1901紫外可見分光光度計使用與維護2一、紫外可見分光光度法l1、檢測原理 紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子和分子軌道上的電子在電子能級間的躍遷，可用于定性分析，廣泛應(yīng)用于無機和有機物質(zhì)的定量分析。 3光電比色法目視比色法分光光度法紫外分光光度法可見分光光度法紫外可見分光光度法2、紫外可見分光光度法分類比色分析法：利用比較待測溶液本身的顏色或加入試劑后呈現(xiàn)的顏色深淺來 測定溶液中待測物質(zhì)的濃度的方法按檢測器不同分:目視比色法和光電比色法。以人的眼睛來檢測顏色深淺的方法稱目視比色法；以光電轉(zhuǎn)換器為檢測器

2、來區(qū)別顏色深淺的方法稱光電比色法；根據(jù)物質(zhì)對不同波長的單色光的吸收程度不同而對物質(zhì)進行定量分析的方法稱為分光光度法。4 紫外可見分光光度法特點q 靈敏度高，可用于測定試樣中1%0.001%的微量組分，甚至可測定低至10-610-7的痕量成分；q準確度較高，測定的相對誤差為2%5%，采用精密的分光光度計測量，相對誤差可減少到1%2%；q 分析速度快，操作簡便；q 價格低廉，應(yīng)用廣泛。 紫外可見分光光度法應(yīng)用q 紫外吸收光譜可用于芳香化合物及含共軛體系化合物的鑒定與結(jié)構(gòu)分析q 紫外與可見分光光度法均可用于定量分析。q紫外與可見分光光度法還可用于化學(xué)反應(yīng)平衡的研究。5q 按波長范圍劃分： 可見分光光

3、度計（400-780nm） 紫外可見分光光度計(200-1000nm) 紫外可見分光光度計類型類型q 按光路劃分： 單光束分光光度計 雙光束分光光度計 雙波長分光光度計6光的吸收程度與光程長的關(guān)系？ 朗伯定律7 比爾定律光的吸收程度與濃度的關(guān)系？8l2、朗伯比耳定律l 朗伯比耳定律是光吸收的基本定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)。l 當入射光波長一定時，溶液的吸光度A是吸物質(zhì)的濃度C及吸收介質(zhì)厚度（吸收光程）的函數(shù)。其常用表達式為，式中為系數(shù)：l A = C9二、紫外可見分光光度計l一、基本結(jié)構(gòu) 光源、單色器、吸收池、檢測器及信號指示系統(tǒng)五個結(jié)成部分。10分光光度計的主要部件和工作原理：0.57

4、5光源光源單色單色器器吸收吸收池池檢測檢測器器顯顯示示11TU-1901單波長雙光束分光光度計單波長雙光束分光光度計比比值值光源光源單色單色器器吸收池吸收池檢測器檢測器顯顯示示光束分裂器光束分裂器12（一）光源 紫外可見分光光度計理想的光源應(yīng)具有整個紫外可見光域的連續(xù)輻射，強度應(yīng)高，且隨波長變化能量變化不大。在可見光區(qū)，常用鎢絲燈（鹵鎢燈）為光源，波長范圍為3202500nm。在紫外光區(qū)，常用氫燈、氘燈為光源，波長范圍為200375nm。 TU-1901紫外可見分光光度計光源：鹵鎢燈與氘燈。 以下圖片是該儀器的光源室及光源燈： 13TU-1901光源室圖片光源室聚光鏡14TU-1901光源燈圖

5、片鎢燈氘燈15l （二）單色器l 單色器是將光源發(fā)射的復(fù)合光分解為單色光的光學(xué)裝置。l 單色器一般由五部分組成：入光狹縫，準光器，色散器，投影器，出光狹縫。l 色散器是單色器的核心部分，常用的色散元件是棱鏡和光柵。TU-1901采用全息光柵，進一步降低儀器的雜散光，使儀器分析更加準確。l 單色器的狹縫設(shè)計一定的寬度，經(jīng)過狹縫的單色光是一個具有一定光譜寬度的譜帶，稱為光譜帶寬。從理論上講，狹縫的寬度愈小，波長愈接近單色光，但帶寬太小，將使單色光的強度減小，使光電流信號減弱，降低信噪比。 16l 由于分子吸收光譜的吸收峰比較寬和平滑，一般情況下光譜帶寬26nm對分析結(jié)果影響不大。TU-1901配置

6、為固定狹縫，光譜帶寬為2nm。17l （三）吸收池l 吸收池是盛放樣品溶液的容器，它具有兩個相互平行、透光且具有精確厚度的平面。q 主要有石英吸收池和玻璃吸收池兩種。q 在紫外區(qū)須采用石英吸收池，可見區(qū)一般用玻璃吸收池。q 主要規(guī)格0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm注意事項：使用比色皿時，手執(zhí)比色皿兩側(cè)的毛面，嚴禁拿比色注意事項：使用比色皿時，手執(zhí)比色皿兩側(cè)的毛面，嚴禁拿比色 皿的透光面，盛放液體不能超過容積四分之三高度。皿的透光面，盛放液體不能超過容積四分之三高度。18l （四）檢測器l 檢測器是利用光電效應(yīng)將透過吸收池的光信號變成可測的電信號。 常用的檢測器有光電池

7、、光電管及光電倍增管。 光電池 光電管 光電倍增管 TU-1810所用19三、分光光度計的檢驗和維護l（一）分光光度計的檢驗l 為保證測試結(jié)果的準確可靠，新制造、使用中和修理后的分光光度計都應(yīng)定期進行檢定。單光束紫外-可見分光光度計的檢定周期為1年，在此期間內(nèi)，儀器經(jīng)修理或?qū)y量結(jié)果有懷疑時，應(yīng)及時進行檢定。20紫外可見分光光度計主要檢驗的幾項技術(shù)指標l 1、穩(wěn)定度l 2、波長準確度l 3、透射比準確度l 4、基線平直度l 5、噪聲l 6、吸收池配套性l 現(xiàn)購買儀器因配置不定，檢驗技術(shù)指標參數(shù)有所不一，用戶檢驗時用依據(jù)廠家提供的指標參數(shù)進行檢驗。21吸收池的配套方法l 在同一光徑的石英吸收池裝

8、蒸餾水在220nm、700nm處測定；玻璃池收池裝30mg/L的重鉻酸鉀溶液在440nm處測定，裝蒸餾水在700nm處測定。l 實際工作中，可采用如下校準方法：在測定波長下，將吸收池磨砂面用鉛筆編號，于干凈的吸收池中裝入測定用溶劑，以其中一個為參比，測定其它吸收池的吸光度，若測定的吸光度為零或兩個吸收池的吸光度相等，即為配對吸收池。若不能配對，可選出吸光度最小的吸收池為參比，測定其它吸收池的吸光度，求出修正值。22l（二）TU-1901分光光度計測量條件的選擇l1、測量波長的選擇l 通常都是選擇最強吸收帶的最大吸收波長max作為測量波長，稱為最大吸收原則，以獲得最高的分析靈敏度。l2、適宜吸光

9、度范圍的選擇l 任何光度計都有一定的測量誤差，這是由于測量過程中光源的不穩(wěn)定、讀數(shù)的不準確或?qū)嶒灄l件的偶然變動造成的。23l 一般來說，當透射比為15%65%（吸光度0.20.8)時,濃度測量的相對誤差較小,當A=0.434時,濃度的相對誤差最小。在實際工作中，可通過調(diào)節(jié)待測溶液的濃度或選用適當厚度的吸收池的方法，使測得的吸光度落在所要求的范圍內(nèi)。l 3、儀器狹縫寬度的選擇l 狹縫的寬度會直接影響到測定的靈敏度和校準曲線的線性范圍。l 狹縫寬度過大時，入射光的單色光降低，校準曲線偏離比耳定律，靈敏度降低；狹縫寬度過窄時，光強變?nèi)酰瑒荼匾岣邇x器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測量不利。24

10、l 選擇狹縫寬度的方法是：測量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個范圍內(nèi)，吸光度是不變的，當狹縫寬度大到某一程度時，吸光度開始減小。因此，在不減小吸光度時的最大狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。25（三）分光光度計的保養(yǎng)和維護l 分光光度計是精密光學(xué)儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。l 1、對儀器工作環(huán)境的要求：l （1）儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為1535，相對濕度不超過80%。l （2）儀器應(yīng)放置在堅固的平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的震動或持續(xù)的震動。l （3）室內(nèi)照明不宜太強，且應(yīng)避免直射日光的照射。26l （4）電扇不宜直接向儀

11、器吹風，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。l （5）盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。l （6）供給儀器的電壓AC220V10%，頻率50HZ1HZ單向交流電，最好配置交流穩(wěn)壓器，功率不小于500VA,室內(nèi)應(yīng)有地線并保證儀器良好接地。l （7）避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。27l 2、儀器保養(yǎng)和維護方法l （1）光源 光源的壽命是有限的，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時間的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。l 儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用，最好間歇30min。l 如果光源燈亮度明

12、顯減弱或不穩(wěn)定，應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦試。28TU-1901分光光度計對光源的使用要求：l 1、分光光度計安裝調(diào)試正常后，如無特殊情況不能隨意搬動儀器機體，避免帶來的震動引起光源燈及聚光鏡等螺絲松動，導(dǎo)致光斑偏離。l 2、正常情況下嚴禁分析人員打開光源室頂蓋，避免灰塵及其他物質(zhì)進入影響聚光鏡面。l 3、儀器開機在自檢過程中如提示鎢燈或氘燈檢測錯誤，聯(lián)機使用時工作站初始化可能提示鎢燈強度弱等現(xiàn)象，可關(guān)機后兩分鐘重新啟動，若仍是此現(xiàn)象報告相關(guān)技術(shù)人員等待處理或直接聯(lián)系廠家工程師到現(xiàn)場處理。29l 4、該儀器配

13、備的氘燈屬日本進口，使用壽命在5000小時左右，因現(xiàn)有檢測項目使用光源均來自鎢燈光源，為延長氘燈的使用期限，請在儀器開機自檢完成后進入系統(tǒng)應(yīng)用將其關(guān)閉。30l 5、如光源燈需要更換，請技術(shù)人員按照說明書上光源的更換方法進行更換。l （2）單色器 單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑（硅膠）。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應(yīng)立即更換。l （3）吸收池 必須正確使用吸收池，在使用后應(yīng)立即洗凈應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。生物樣品、膠體或其它在池窗上形成薄膜的物質(zhì)要用適當?shù)娜軇┫礈?。有色物質(zhì)污染，可用3mol/L

14、HCl和等體積乙醇的混合液洗滌。31l （4）檢測器 光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光，且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。l （5）當儀器停止工作時，必須切斷電源。l （6）為了避免儀器積灰和玷污，在停止工作時，應(yīng)蓋上防塵罩，可在樣品室及光源室內(nèi)放置硅膠袋防潮，但開機時一定要取出。l （7）儀器若暫時不用要定期通電，每次不少于2030min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。l （8）每次使用后應(yīng)檢查樣品室是否積存有溢出溶液，經(jīng)常擦試樣品室，以防廢液對部件或光路系統(tǒng)的腐蝕。32 （9）定期進行性能指標檢測，發(fā)現(xiàn)問題即與廠家或銷售部門聯(lián)系解決。33(四)TU-1901紫外可見分光光度計的故障診

15、斷與維修34現(xiàn) 象原 因判 斷解 決接通電源儀器不動作A.電源線接觸不良A.檢查電源線A.接好電源線B.保險管熔斷B.檢查保險管B.換保險管(2A)C.電路故障C.整機檢查C.請與廠家聯(lián)系不能打印譜圖A.打印機故障A.檢查打印機A-B.請與廠家聯(lián)系B.儀器CPU板故障B.查CPU板故障C.儀器打印機連線松動C.檢查打印連線是否松動C.將連線插緊初始化異常ROM檢查A.內(nèi)存程序故障A.再次開機檢查A.請與廠家聯(lián)系波長原點A.波長原點異常A.再次開機檢查樣品池原點A.樣品池架驅(qū)動原點異常A.移動池架檢查A.取出妨礙物狹縫定位(TU-1901/TU-1810SPC)A.狹縫機構(gòu)故障B.機械連接松脫A

16、.擰緊連接機構(gòu)濾色片定位A.濾色片機構(gòu)故障A.再次開機檢查A.請與廠家聯(lián)系鎢燈定位樣品室有擋光物A.再次開機檢查A.請與廠家聯(lián)系A(chǔ).打開樣品室A.取出擋光物A.鎢燈不亮B.打開光源室B.換鎢燈氘燈定位A.樣品室有擋光物A.打開樣品室A.取出擋光物氘燈不亮B.打開光源室B.換氘燈C.打開食品外殼C.換氘燈保險管(0.5A)波長檢查A.樣品室有擋光物A.打開樣品室A.取出擋光物B.氘燈定位錯B.打開光源室B.解決氘燈錯噪聲指標異常A.光源老化A.能量方式測量A.更換光源B.樣品室不正B.550nm處觀察B.對正樣品室C.電壓低/強磁場C.檢查電壓/磁場源C.加穩(wěn)壓器/消除干擾D.接收器老化D.能量

17、方式測量D-F.請與廠家聯(lián)系E.前放板故障E.查前放板故障F.AD轉(zhuǎn)換器異常F.查驅(qū)動板故障35四、可見分光光度法l 分光光度分析有兩種，一種是利用物質(zhì)本身對紫外及可見光的吸收進行測定，另一種是生成有色化合物即“顯色”以后測定。36（一）顯色反應(yīng)l 在光度分析中，將試樣中被測組分轉(zhuǎn)變成有色化合物的反應(yīng)叫顯色反應(yīng)。l 能與被測組分生成有色物質(zhì)的試劑稱為顯色劑。l 顯色反應(yīng)分為兩類：絡(luò)合反應(yīng)和氧化還原反應(yīng)。其中絡(luò)合反應(yīng)是最主要的顯色反應(yīng)。37l 對顯色反應(yīng)的要求：l（1）選擇性好l（2）靈敏度高l（3）有色絡(luò)合物的離解常數(shù)要小l（4）有色絡(luò)合物的組成要恒定，化學(xué)性質(zhì)要穩(wěn)定。l（5）如果顯色劑有顏色

18、，則要求有色化合物與顯色劑之間的顏色差別要大，以減小試劑空白。l（6）顯色反應(yīng)的條件要易于控制。38（二）、顯色劑l （1）、無機顯色劑l 許多無機試劑能與金屬離子發(fā)生顯色反應(yīng)用于光度分析，但由于靈敏度等原因，具有實用價值的僅有幾類。l （2）有機顯色劑l 大多數(shù)有機顯色劑本身為有色化合物，與金屬離子反應(yīng)生成的化合物一般是穩(wěn)定的螯合物。顯色反應(yīng)的選擇性和靈敏度都較高，有些有色螯合物易溶于有機溶劑，可進行萃取光度法。39質(zhì)檢中心分析中所用顯色劑：l（1）水中鐵含量的測定l 鄰菲啰啉l（2）磷酸鹽的測定l 鉬酸銨40（三）反應(yīng)條件的選擇l1、顯色劑用量l 為使顯色反應(yīng)更完全，加入過量的顯色劑是必要

19、的，但是顯色劑過量太多，有時會引起副反應(yīng)，當顯色劑本身有色時會增大試劑空白。l 顯色劑的適宜用量可通過實驗來確定。其方法是固定被測組分濃度和其它條件，取數(shù)份溶液，加入不同量的顯色劑測定其吸光度，繪制吸度光度（A）-濃度（c）關(guān)系曲線，一般可得下圖所示三種情況。41cRAAA000cRcRabba圖示 吸光度與顯色劑濃度的關(guān)系曲線（a）（b）（c）42l 上圖（a）曲線表明，在濃度ab范圍內(nèi)，吸光度出現(xiàn)穩(wěn)定值，可在ab間選擇合適的顯色劑用量。圖（b）曲線表明，顯色劑濃度在a b這一較窄的范圍內(nèi)，吸光度值比較穩(wěn)定，必須嚴格控制顯色劑濃度。圖（c）曲線表明，隨著顯色劑濃度增大，吸光度不斷增大，必須十

20、分嚴格地控制顯色劑用量。432、溶液酸度l 溶液的酸度對光度測定有顯著影響，它影響待測組分的吸收光譜、顯色劑的形態(tài)、待測組分的化合狀態(tài)及顯色化合物的組成。l 第一，酸度不同時，顯色化合物的組成和顏色可能不同。l 第二，溶液酸度變化，顯色劑的顏色可能發(fā)生變化，原因是很多有機顯色劑是酸堿指標劑，其顏色隨pH值變化而變化。l 第三，溶液酸度過高會降低配合物穩(wěn)定性，特別是對弱酸型有機顯色劑和金屬離子形成的配合物影響較大。l 第四，溶液酸度過低會引起金屬離子水解生成氫氧化物沉淀。l 由于酸度對顯色反應(yīng)的影響很大，因此，某一顯色反應(yīng)最適宜的酸度必須通過實驗來確定。其方法是通過實驗做吸光度A-pH關(guān)系曲線，

21、選擇曲線平坦部分對應(yīng)的pH值作為應(yīng)該控制的酸度范圍。443、溫度的影響l 大多數(shù)的顯色反應(yīng)在室溫下即可進行，有些顯色反應(yīng)加熱至一定的溫度才能完成，而有些有色配合物在較高溫度下容易分解，因此，對不同的顯色反應(yīng)應(yīng)通過實驗選擇其適宜的顯色溫度。l 由于溫度對光的吸收及顏色的深淺都有影響，因此在繪制標準曲線和進行樣品測定時，應(yīng)使溫度保持一致。454、顯色時間l 所謂顯色時間指的是溶液顏色達到穩(wěn)定時的時間。不少顯色反應(yīng)需要一定時間才能完成，而且形成的有色配合物的穩(wěn)定性也不一樣。因此必須在顯色后一定的時間內(nèi)進行比色測定。通常有以下幾種情況：l 加入顯色劑后，有色配合物立即生成，并且生成的有色配合物很穩(wěn)定。

22、此時可在顯色后較長時間內(nèi)進行測定。l 加入顯色劑后，有色配合物的形成需要一定時間，但生成的有色配合物也很穩(wěn)定。對這類反應(yīng)可在完成顯色后旋轉(zhuǎn)一些時間內(nèi)進行測定。l 加入顯色劑后，有色溶液立即生成，但在放置后又逐漸褪色，對這類反應(yīng)，應(yīng)在顯色后立即進行測定。l 適宜的顯色時間和有色溶液的穩(wěn)定程度可以通過實驗來確定。方法是配制一份顯色溶液，從加入顯色劑起計算時間，每隔幾分鐘、幾十分鐘或數(shù)小時測定一次吸光度，繪制吸光度A-時間t曲線，從曲線確定適宜的顯色時間。465、溶劑l 有機溶劑常降低有色化合物的離解度從而提高顯色反應(yīng)的靈敏度。此外，有機溶劑還可能提高顯色反應(yīng)的速度，影響有色配合物的溶解度和組成等。

23、利用有色化合物在有機溶劑中穩(wěn)定性好，溶解度大的特點，可以選擇合適的有機溶劑，采用萃取光度法來提高方法的靈敏度和選擇性。47（三）參比溶液的選擇l 用參比溶液調(diào)節(jié)分光光度計的吸光度為0，然后測定試樣溶液或標準溶液的吸光度值。參比溶液的作用除了消除吸收池壁對入射光的反射和散射等影響外，合理選用時還可消除其它干擾，使測得的吸光度正確反映被測物的濃度，提高測定的準確度。l 選擇參比溶液可分為以下幾種情況： 48l 溶劑參比 顯色劑及其它試劑均無色，被測溶液中又無其它有色離子時，可用溶劑（如蒸餾水或其它有機溶劑）作參比溶液。l 試劑參比 顯色劑本身有顏色，可用不加試樣的其它試劑作參比溶液。l 試液參比

24、顯色劑無色，被測溶液中有其它有色離子，可采用不加顯色劑的被測溶液作參比溶液。l 其它參比 當顯色劑有色，試液中的有色成分干擾測定的可在一份試液中加入適當?shù)难诒蝿?，將被測組分掩蔽起來，然后加入顯色劑和其它試劑，以此作為參比溶液。另一種方法是用不含被測組分的試樣，與被測試樣同時進行相同的處理得到平行操作參比溶液。49（四）定量分析l 工作曲線法l 對于單一組分的測定，工作曲線是實際工作中用得最多的一種定量方法。l 工作曲線的制作方法為：根據(jù)待測溶液的大概濃度，配制一系列濃度不等的標準溶液，使其濃度范圍覆蓋待測溶液的濃度，以空白溶液為參比溶液，在選定的波長下，分別測定吸光度。以標準溶液濃度為橫從標，

25、吸光度為縱坐標，繪制工作曲線。l 在測定樣品時按同樣方法制備待測樣品溶液，測定其吸光度，在工作曲線上即可查出待測物的濃度。待測物濃度應(yīng)在工作曲線范圍內(nèi)（且使待測溶液濃度在曲線范圍中部最佳）。l 雜質(zhì)用標準溶液濃度0.1g/L可在1525溫度下保存2個月， 濃度0.1g/L的雜質(zhì)用標準溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用。50l 在一定條件下，工作曲線是一條直線，直線的斜率和截距可以用最小二乘法求得。l 工作曲線可以用一元線性方程表示：l y = a bl 式中，為標準溶液的濃度， y為相應(yīng)的吸光度。l 使用最小二乘法確定的直線稱為回歸線，a、b稱為回歸系數(shù)。l b是直線的斜率l a是直線的截距51圖示 工作曲線=5

26、10nm 可以用相關(guān)系數(shù)來表示線性關(guān)系的好壞。 相關(guān)系數(shù)越接近于1線性關(guān)系越好。一般的光度方法r0.999 工作曲線應(yīng)定期校準。當條件有變動時，例如儀器經(jīng)過修理、更換光源、更換標準溶液、試劑（如顯色劑）重新配，都應(yīng)重新制作工作曲線。 質(zhì)檢產(chǎn)品分析的所有比色工作曲線制作周期為一年，校驗周期三個月。校驗方法采用單點對照法：配制兩組與所需校正的曲線相符合的標準溶液，在工作波長下測定其吸光度，利用該工作曲線計算出相應(yīng)濃度，與配制的標準濃度相比較，測得其回收率在95105%之間，說明該工作曲線可繼續(xù)使用，如不符合需重新制作曲線。52（五）分光光度法的誤差l 1、方法誤差l 方法誤差是指分光光度法本身所產(chǎn)

27、生的誤差。誤差主要由溶液偏離比耳定律及溶液中干擾物質(zhì)影響所引起。l （1）溶液偏離比耳定律 分光光度法的理論基礎(chǔ)是朗伯-比耳定律l A=c bl 但在工作中常會碰到工作曲線發(fā)生彎曲的現(xiàn)象。大多是由于化學(xué)變化所引起的，使有色溶液的濃度與被測物的總濃度不成正比。53l （2）反應(yīng)條件的改變 顯色反應(yīng)多是分步進行。溶液酸度、溫度、及顯色時間等反應(yīng)條件的改變，都會引起有色配合物的組成發(fā)生變化，從而使溶液顏色的深淺度發(fā)生變化，因而產(chǎn)生誤差。l 2、儀器誤差l 儀器誤差是指由使用分光光度計所引入的誤差。l （1）儀器的非理想性引起的誤差 復(fù)色光引起對比耳定律的偏離;波長標度尺未作校正時引起光譜測量的誤差,吸光度測量受吸光度標度尺的誤差影響。l （2）儀器噪聲的影響 光度測定的準確度和精密度受儀器噪聲的限制，測量樣品的