生化實驗基本操作

1、生物化學(xué)實驗基本操作生物化學(xué)實驗基本操作 一一. 玻璃儀器的洗滌玻璃儀器的洗滌 在生化實驗中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果在生化實驗中，玻璃儀器潔凈與否，是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的重要環(huán)節(jié)。的重要環(huán)節(jié)。潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，潔凈的玻璃儀器內(nèi)壁應(yīng)十分明亮光潔，無水珠附著在玻壁上。無水珠附著在玻壁上。 常用的洗滌方法：常用的洗滌方法： 1.1.一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合一般儀器，如燒杯、試管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用成洗滌劑仔細(xì)刷洗。然后用自來水反復(fù)沖洗，最后用少量蒸餾水沖洗少量蒸餾水沖洗2-32-3次，倒置在器皿架上晾干或置于烘次

2、，倒置在器皿架上晾干或置于烘箱烤干備用。箱烤干備用。 2.2.容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不容量分析儀器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時用自來水多次沖洗，細(xì)能用毛刷刷洗。用后應(yīng)及時用自來水多次沖洗，細(xì)心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方心檢查潔凈程度，根據(jù)掛不掛水珠采取不同處理方法。（法。（1 1）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法）如不掛水珠，用蒸餾水沖洗、干燥，方法同上；同上； （2 2）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡）如掛水珠，則應(yīng)瀝干后用重鉻酸鉀洗液浸泡4-64-6小時，然后按上法順序操作，即先用自來水沖洗，小時，然后按上法順序操作，

3、即先用自來水沖洗，再用蒸餾水沖洗，最后干燥。再用蒸餾水沖洗，最后干燥。 4.新購置的玻璃儀器，應(yīng)先置于新購置的玻璃儀器，應(yīng)先置于1-2%1-2%稀鹽酸溶稀鹽酸溶液中浸泡液中浸泡2-62-6小時，除去附著的游離堿，再用小時，除去附著的游離堿，再用自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗自來水沖洗干凈，最后用蒸餾水沖洗2-32-3次。次。 總的原則：凡用過的玻璃儀器，均應(yīng)立總的原則：凡用過的玻璃儀器，均應(yīng)立即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及即洗滌，久置干涸后洗滌十分困難。如不能及時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，時洗滌，先用流水初步?jīng)_洗后浸泡在清水中，待后按常規(guī)處理。待后按常規(guī)處理。 3.3.

4、粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方粘附有血漿的刻度吸量管等，有三種洗滌方法：法：（1 1）先用）先用45%45%尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，尿素溶液浸泡，使血漿蛋白溶解，然后用自來水沖洗；然后用自來水沖洗；（2 2）也可用）也可用1%1%氨水浸泡，使血漿溶解，然后再氨水浸泡，使血漿溶解，然后再依次用依次用1%1%稀鹽酸溶液、自來水沖洗；稀鹽酸溶液、自來水沖洗；（3 3）以上二法如達(dá)不到清潔要求，可浸泡于重）以上二法如達(dá)不到清潔要求，可浸泡于重鉻酸鉀洗液鉻酸鉀洗液4-64-6小時，再用大量自來水沖洗，小時，再用大量自來水沖洗，最后用蒸餾水沖洗最后用蒸餾水沖洗2-32-3次。次。 二二. 吸

5、量管的使用吸量管的使用 吸量管和定量吸吸量管和定量吸( (移移) )液器液器( (微量加樣器微量加樣器) )均為用均為用來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。來轉(zhuǎn)移一定體積溶液的量器。 吸量管：吸量管：生化實驗中常用的有三種，最常用生化實驗中常用的有三種，最常用的是刻度吸量管。的是刻度吸量管。1.1.刻度吸量管：刻度吸量管： 刻度吸量管的種類：刻度吸量管的種類： 按容量規(guī)格來分，有按容量規(guī)格來分，有0.10.1、0.20.2、0.250.25、0.50.5、1 1、2 2、5 5、10ml10ml等數(shù)種。其精密度按不同的容等數(shù)種。其精密度按不同的容積可達(dá)移取量的積可達(dá)移取量的0.1-1%0.1-1%。通常

6、將管身標(biāo)明的總。通常將管身標(biāo)明的總?cè)萘糠挚虨槿萘糠挚虨?00100等分。因此，等分。因此，10ml10ml的吸量管一的吸量管一格代表格代表0.1ml0.1ml；1ml1ml的吸量管一格代表的吸量管一格代表0.01ml,0.01ml,其余類推。其余類推。 按按“零零”點位置來分，有點位置來分，有“O”O(jiān)”點在吸量管點在吸量管上端的（即讀數(shù)從上而下逐漸增大），也有上端的（即讀數(shù)從上而下逐漸增大），也有“O”O(jiān)”點在吸量管下端的（讀數(shù)從下而上逐漸點在吸量管下端的（讀數(shù)從下而上逐漸增大增大) )。兩種標(biāo)示方法，在使用時各有方便之。兩種標(biāo)示方法，在使用時各有方便之處。處。 按刻度方法來分，刻度吸量管也有

7、兩種，一按刻度方法來分，刻度吸量管也有兩種，一種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應(yīng)吹出種是刻度刻到尖端的，將液體放出時，應(yīng)吹出殘留在吸量管尖端的少量液體殘留在吸量管尖端的少量液體( (我實驗室的刻我實驗室的刻度吸量管全部是這一種度吸量管全部是這一種) )，另一種是刻度不刻，另一種是刻度不刻到尖端的。到尖端的。 選管選管（大小合適）總?cè)萘康扔诨蛏源笥谌∫毫浚ù笮『线m）總?cè)萘康扔诨蛏源笥谌∫毫繄?zhí)管執(zhí)管（左球右管）（左球右管）取液取液（一下一上、管身保持垂直）（一下一上、管身保持垂直） 插入液面下插入液面下0.5cm0.5cm，吸至最高刻度上方，吸至最高刻度上方1 12cm2cm調(diào)準(zhǔn)刻度調(diào)準(zhǔn)刻度（三

8、點一線）（三點一線） 溶液彎月面、視線和刻度線在同一水平上溶液彎月面、視線和刻度線在同一水平上放液放液（貼壁放液）（貼壁放液） 需要吹的則吹出，如要求不吹的則讓吸量管尖需要吹的則吹出，如要求不吹的則讓吸量管尖端停靠內(nèi)壁約端?？績?nèi)壁約15s15s，同時轉(zhuǎn)動吸管，重復(fù)一次。，同時轉(zhuǎn)動吸管，重復(fù)一次。放置放置（放回吸管架）（放回吸管架） 禁止平放在實驗臺面上！禁止平放在實驗臺面上！洗滌洗滌（操作結(jié)束后）（操作結(jié)束后）刻度吸量管的使用刻度吸量管的使用 2.移液吸量管：移液吸量管：也有兩種，常見的一種是吸量也有兩種，常見的一種是吸量管的上端只有一個刻度，另一種是除了在吸量管的上端只有一個刻度，另一種是除

9、了在吸量管上端有刻度外，在吸量管下端狹窄處也有一管上端有刻度外，在吸量管下端狹窄處也有一刻度線。無論哪一種，在使用時將量取的液體刻度線。無論哪一種，在使用時將量取的液體放出后，只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半放出后，只需將吸量管的尖端觸及受器壁約半分鐘即可，不得吹出尖端的液體。分鐘即可，不得吹出尖端的液體。 3.奧氏吸量管：奧氏吸量管：準(zhǔn)確度最高，使用時必需吹出準(zhǔn)確度最高，使用時必需吹出留在尖端的液體留在尖端的液體。 定量吸定量吸(移移)液器液器(微量加樣器微量加樣器)：定量吸液器是定量吸液器是吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前，因產(chǎn)吸量管的革新產(chǎn)品。由塑料制成。目前，因產(chǎn)地廠家不同其質(zhì)量、價

10、格差異十分懸殊。地廠家不同其質(zhì)量、價格差異十分懸殊。 1.定量吸液器的優(yōu)點：使用方便，取、加樣迅定量吸液器的優(yōu)點：使用方便，取、加樣迅速，計量準(zhǔn)確，不易破損，能吸取多種樣品速，計量準(zhǔn)確，不易破損，能吸取多種樣品（只換吸嘴即可）。（只換吸嘴即可）。 2.定量吸液器的類型：定量吸液器的類型：有兩種類型。有兩種類型。 固定式：固定式：只能取加一定容量的試劑，不能隨只能取加一定容量的試劑，不能隨意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有意調(diào)節(jié)取加樣量。其規(guī)格有10l、20l、25l、30l、50l、100l、200l、250l、300l、400l、500l、1000l等。等。 可調(diào)式：可調(diào)式：在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要

11、進(jìn)行在一定容量范圍內(nèi)可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為調(diào)節(jié)取加樣量。例如規(guī)格為50200l的可調(diào)的可調(diào)式定量吸液器，可以在式定量吸液器，可以在50到到200l的范圍內(nèi)根的范圍內(nèi)根據(jù)需要調(diào)節(jié)成設(shè)計容許的各種取加樣容量據(jù)需要調(diào)節(jié)成設(shè)計容許的各種取加樣容量（60l、85l、110l、170l、200l等）。等）。一般來講，固定式吸液器比較準(zhǔn)確，可調(diào)式吸一般來講，固定式吸液器比較準(zhǔn)確，可調(diào)式吸液器使用較為方便。液器使用較為方便。 3.定量吸液器的使用方法：定量吸液器的使用方法： 選擇適當(dāng)?shù)奈浩鳌Ｎ呵跋劝盐焯自谖x擇適當(dāng)?shù)奈浩?。吸液前先把吸嘴套在吸引管上，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴(yán)

12、密。管上，套上后要輕輕旋緊一下，以保證結(jié)合嚴(yán)密。 持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液持法：右手四指（除大拇指外）并攏握住吸液器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇器外殼（使外殼突起部分搭在食指近端），大拇指輕輕放在吸液器的按鈕上。指輕輕放在吸液器的按鈕上。 取樣取樣(吸液吸液)：用大拇指按下按鈕到第一停止點，：用大拇指按下按鈕到第一停止點，以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣以排出一定容量的空氣，隨后把吸嘴尖浸入取樣液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復(fù)原，液內(nèi)，徐徐松開大拇指，讓按鈕慢慢自行復(fù)原，取樣即告完成。取樣即告完成。 排液：將吸液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，排液：將吸

13、液器的吸嘴尖置于加樣容器壁上，用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留用大拇指慢慢地將按鈕按下到第一停止點，停留1秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應(yīng)適當(dāng)延長）。秒鐘（粘性較高的溶液停留時間應(yīng)適當(dāng)延長）。然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁然后再把按鈕按到第二停止點上，讓吸嘴沿管壁向上滑動。當(dāng)吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方向上滑動。當(dāng)吸嘴尖與容器壁或溶液離開時，方可釋放按鈕，使其恢復(fù)到初始位置?？舍尫虐粹o，使其恢復(fù)到初始位置。 吸液器用后應(yīng)及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水吸液器用后應(yīng)及時取下吸嘴。將吸嘴用自來水沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)（以防干涸），待實驗沖洗后浸入盛水的容器內(nèi)（以防干涸），待實驗結(jié)

14、束后集中仔細(xì)清洗。結(jié)束后集中仔細(xì)清洗。 三三. 溶液的混勻溶液的混勻 混勻的目的：混勻的目的： 使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接使反應(yīng)體系內(nèi)的各種物質(zhì)分子很好地互相接觸，充分進(jìn)行反應(yīng)；觸，充分進(jìn)行反應(yīng)； 使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。使欲稀釋的溶液成為濃度均一的溶液。 電動離心機(jī)的使用方法：電動離心機(jī)的使用方法： 1.1.將欲離心的液體，置于離心管或小試管內(nèi)。將欲離心的液體，置于離心管或小試管內(nèi)。并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機(jī)的并檢查離心管或小試管的大小是否與離心機(jī)的套管相匹配。套管相匹配。 2.2.取出離心機(jī)的全部套管，并檢查套管底部是取出離心機(jī)的全部套管，并檢查套管底部是

15、否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎否鋪有軟墊，有無玻璃碎片或漏孔（有玻璃碎片必須取出，漏孔應(yīng)該用蠟封住）。檢查合格片必須取出，漏孔應(yīng)該用蠟封?。z查合格后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，后，將盛有離心液的兩個試管分別放入套管中，然后連套管一起分置于粗天平的兩側(cè)，通過往然后連套管一起分置于粗天平的兩側(cè)，通過往離心管與套管之間滴加水來調(diào)節(jié)兩邊的重量使離心管與套管之間滴加水來調(diào)節(jié)兩邊的重量使之達(dá)到平衡。之達(dá)到平衡。 混勻的方法通常有以下幾種：混勻的方法通常有以下幾種：1. 顛倒混勻：用玻璃紙堵住管口，上下顛倒混顛倒混勻：用玻璃紙堵住管口，上下顛倒混勻。勻。2.叩擊混勻叩擊混勻:左手執(zhí)

16、試管上端，用右手指輕擊試左手執(zhí)試管上端，用右手指輕擊試管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運動。管下半部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)運動。3.利用旋渦混合（振蕩）器混勻。利用旋渦混合（振蕩）器混勻。4.振蕩混勻：右手執(zhí)試管上部，手腕抖動混勻。振蕩混勻：右手執(zhí)試管上部，手腕抖動混勻。5.不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。不得已時可用干燥清潔的玻璃棒攪勻。 混勻的注意事項：混勻的注意事項： 防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。防止盛器內(nèi)的液體濺出或被污染。 嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。嚴(yán)禁用手指堵塞管口或瓶口震蕩混勻。 四四. 離心機(jī)的使用離心機(jī)的使用 離心法是分離沉淀的一種方法。它是利用離心離心法是分離沉淀的一種方

17、法。它是利用離心機(jī)轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力，使比重較大的物質(zhì)沉積機(jī)轉(zhuǎn)動產(chǎn)生的離心力，使比重較大的物質(zhì)沉積在管底，以達(dá)到與液體分離的目的。因液體在在管底，以達(dá)到與液體分離的目的。因液體在沉淀的上部，故稱清亮的液體部分為上清液。沉淀的上部，故稱清亮的液體部分為上清液。 實驗一無蛋白血濾液的制備實驗一無蛋白血濾液的制備實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模?1.1.掌握玻璃儀器的洗滌、刻度吸量管的使用、掌握玻璃儀器的洗滌、刻度吸量管的使用、溶液的混勻、離心機(jī)的使用等基本操作；溶液的混勻、離心機(jī)的使用等基本操作； 2.2.熟悉制備無蛋白質(zhì)血濾液的基本方法、原熟悉制備無蛋白質(zhì)血濾液的基本方法、原理、臨床意義；理、臨床意義； 3.

18、3.了解定量移液器的使用。了解定量移液器的使用。 3.3.將已平衡的兩只裝有離心管的套管，分別放將已平衡的兩只裝有離心管的套管，分別放入離心機(jī)相互對應(yīng)的兩插孔內(nèi)。蓋上離心機(jī)蓋。入離心機(jī)相互對應(yīng)的兩插孔內(nèi)。蓋上離心機(jī)蓋。打開電源開關(guān)。逐檔扭動旋鈕，緩慢增加離心打開電源開關(guān)。逐檔扭動旋鈕，緩慢增加離心機(jī)轉(zhuǎn)速，直至所需數(shù)值。達(dá)到離心所需時間后，機(jī)轉(zhuǎn)速，直至所需數(shù)值。達(dá)到離心所需時間后，將轉(zhuǎn)速旋鈕逐步回零，關(guān)閉電源，讓離心機(jī)自將轉(zhuǎn)速旋鈕逐步回零，關(guān)閉電源，讓離心機(jī)自然停止轉(zhuǎn)動后（不可人為制動），取出離心管。然停止轉(zhuǎn)動后（不可人為制動），取出離心管。 實驗原理：實驗原理： 用沉淀蛋白質(zhì)的方法除去血液中的蛋白用沉淀蛋白質(zhì)的方法除去血液中的蛋白質(zhì)，本是采用生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)。質(zhì)，本是采用生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)。 生物堿試劑生物堿試劑: :是能引起生物堿沉淀