流感病毒的分離鑒定(二)ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)十實(shí)驗(yàn)十流感病毒的分別鑒定二流感病毒的分別鑒定二1、血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)、血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)2、血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)、血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn) 目的：熟習(xí)病毒血凝、血凝抑制實(shí)驗(yàn)的方法及其運(yùn)用。目的：熟習(xí)病毒血凝、血凝抑制實(shí)驗(yàn)的方法及其運(yùn)用。 原理：流感病毒顆粒外表有血凝素原理：流感病毒顆粒外表有血凝素,具有使雞、豚鼠具有使雞、豚鼠等血細(xì)胞凝集的才干。把一定濃度的雞紅細(xì)胞加到待等血細(xì)胞凝集的才干。把一定濃度的雞紅細(xì)胞加到待檢的雞胚尿囊液或羊水中，如出現(xiàn)血細(xì)胞凝集景象，檢的雞胚尿囊液或羊水中，如出現(xiàn)血細(xì)胞凝集景象，即表示有病毒存在；如血凝陽(yáng)性，那么可進(jìn)一步用血即表示有病毒存在；如血凝陽(yáng)性，那么可進(jìn)一步用血凝抑制

2、實(shí)驗(yàn)進(jìn)展病毒鑒定，流感病毒的血凝性，可被凝抑制實(shí)驗(yàn)進(jìn)展病毒鑒定，流感病毒的血凝性，可被免疫血清中的特異性抗體所抑制，使其失去凝集作用，免疫血清中的特異性抗體所抑制，使其失去凝集作用，借此可用知抗體鑒定未知病毒及病毒的型、亞型。借此可用知抗體鑒定未知病毒及病毒的型、亞型。 實(shí)驗(yàn)資料實(shí)驗(yàn)資料 (1)接種流感病毒的雞胚。接種流感病毒的雞胚。 (2)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為05的雞紅細(xì)胞懸液。的雞紅細(xì)胞懸液。 (3)流感病毒型與亞型免疫血清。流感病毒型與亞型免疫血清。 (4)碘酒，酒精消毒棉球。碘酒，酒精消毒棉球。 (5)滅菌的鑷子、剪刀。滅菌的鑷子、剪刀。 (6)無(wú)菌小試管，毛細(xì)滴管，吸管。無(wú)菌小試管，

3、毛細(xì)滴管，吸管。 (7)生理鹽水。生理鹽水。 (8)試管、試管架。試管、試管架。 實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)方法： 1、血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn)、血細(xì)胞凝集實(shí)驗(yàn) (1)收獲尿囊液：雞胚孵育收獲尿囊液：雞胚孵育3d后后,放放4度冰箱過(guò)夜度冰箱過(guò)夜,次次日取出雞胚日取出雞胚,消毒氣室端卵殼消毒氣室端卵殼,用小鑷子在無(wú)大血管用小鑷子在無(wú)大血管處撕破卵膜處撕破卵膜,以無(wú)菌毛細(xì)管汲取尿囊液以無(wú)菌毛細(xì)管汲取尿囊液,放入無(wú)菌試放入無(wú)菌試管中。管中。 (2)取尿囊液取尿囊液01mL,作作1：10稀釋。稀釋。(3)取取10支小試管，按給各管參與生理鹽水支小試管，按給各管參與生理鹽水0.2mL。(4)取取1：10稀釋的尿囊液稀釋的尿囊

4、液02mL，加人第，加人第1個(gè)試管個(gè)試管中，混勻后，再吸出中，混勻后，再吸出02mL參與第參與第2個(gè)試管中；個(gè)試管中；混勻后，從第混勻后，從第2個(gè)試管吸出個(gè)試管吸出02mL參與第參與第3個(gè)試個(gè)試管管依次作倍比稀釋至第九管，混勻后自第依次作倍比稀釋至第九管，混勻后自第9個(gè)試管中取出個(gè)試管中取出02mL棄掉。這樣各管液體量均棄掉。這樣各管液體量均為為02mL，從第，從第1-9個(gè)試管的尿囊液稀釋度為個(gè)試管的尿囊液稀釋度為1:20，1:40，1:5120，第，第10個(gè)試管為生理個(gè)試管為生理鹽水對(duì)看管。鹽水對(duì)看管。 (5)稀釋終了后加人體積分?jǐn)?shù)為稀釋終了后加人體積分?jǐn)?shù)為05的壓積雞紅的壓積雞紅細(xì)胞懸液，

5、每管細(xì)胞懸液，每管02mL,室溫放置室溫放置3060mn。 流感病毒血凝實(shí)驗(yàn)試管號(hào)試管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理鹽水生理鹽水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 棄棄0.2病毒稀釋度病毒稀釋度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 對(duì)對(duì)照照0.5%雞紅細(xì)胞雞

6、紅細(xì)胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 搖勻置室溫?fù)u勻置室溫6090分鐘分鐘結(jié)結(jié) 果果 + + + + + + + 試管號(hào)試管號(hào) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10生理鹽水生理鹽水 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2病毒液病毒液 (1:10) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 棄棄0.2病毒稀釋度病毒稀釋度 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 1:20 1:40 1:80 1:160 1:

7、320 1:640 1:1280 1:2560 1:5120 對(duì)照對(duì)照0.5%雞紅細(xì)胞雞紅細(xì)胞 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 搖勻置室溫?fù)u勻置室溫6090分鐘分鐘結(jié)結(jié) 果果 + + + + + + + (6)結(jié)果察看結(jié)果察看察看時(shí)要輕拿、勿搖，首先察看對(duì)看管應(yīng)無(wú)凝集，然察看時(shí)要輕拿、勿搖，首先察看對(duì)看管應(yīng)無(wú)凝集，然后再察看實(shí)驗(yàn)管，各管出現(xiàn)的凝集程度以后再察看實(shí)驗(yàn)管，各管出現(xiàn)的凝集程度以“+、“+、“+、“+、“表示，判別規(guī)范如下：表示，判別規(guī)范如下： “+：全部紅細(xì)胞凝集，凝集的紅細(xì)胞鋪滿管底，：全部紅細(xì)胞凝集，凝集的紅細(xì)胞鋪滿管底，邊緣不整齊

8、。邊緣不整齊。 “+：大部分紅細(xì)胞凝集，在管底鋪成薄膜狀，但尚有少數(shù)紅細(xì)胞不：大部分紅細(xì)胞凝集，在管底鋪成薄膜狀，但尚有少數(shù)紅細(xì)胞不凝，在管底中心構(gòu)成小紅點(diǎn)。凝，在管底中心構(gòu)成小紅點(diǎn)。 “+：約有半數(shù)紅細(xì)胞凝集，在管底鋪成薄膜，面積較小，不：約有半數(shù)紅細(xì)胞凝集，在管底鋪成薄膜，面積較小，不凝集的紅細(xì)胞在管底中心聚成小圓點(diǎn)。凝集的紅細(xì)胞在管底中心聚成小圓點(diǎn)。 “+：只需少數(shù)紅細(xì)胞凝集，不凝集的紅細(xì)胞在管底中心聚成?。褐恍枭贁?shù)紅細(xì)胞凝集，不凝集的紅細(xì)胞在管底中心聚成小圓點(diǎn)，凝集的紅細(xì)胞在小圓點(diǎn)的周圍。圓點(diǎn)，凝集的紅細(xì)胞在小圓點(diǎn)的周圍。 “：不凝集，紅細(xì)胞沉于管底，呈一邊緣整齊的致密圓點(diǎn)。：不凝集，

9、紅細(xì)胞沉于管底，呈一邊緣整齊的致密圓點(diǎn)。 凝集效價(jià)：能使紅細(xì)胞呈“+凝集的病毒最高稀釋度為凝集效價(jià)，表示含有一個(gè)單位血凝抗原。 如表，第6個(gè)試管為“+，且病毒稀釋度最高，那么該病毒懸液效價(jià)為1:640，即該病毒懸液稀釋到1：640時(shí)，每02mL中含有一個(gè)血凝單位，配制4個(gè)血凝單位的病毒懸液時(shí)，病毒液應(yīng)稀釋成(1：640)X4，即1：160。2、血細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn) 試試 管管1 待測(cè)待測(cè) 2 待測(cè)待測(cè)3 血清對(duì)照血清對(duì)照4 抗原對(duì)照抗原對(duì)照5 紅細(xì)胞對(duì)照紅細(xì)胞對(duì)照 生理鹽水生理鹽水1：5血清血清4u病毒液病毒液0.5雞紅雞紅細(xì)胞細(xì)胞0.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.20.40.2按表參與資料和試劑按表參與資料和試劑 結(jié)果察看結(jié)果察看先察看先察看3支對(duì)看管，如抗原對(duì)看管出現(xiàn)完全凝集，血清對(duì)照和紅支對(duì)看管，如抗原對(duì)看管出現(xiàn)完全凝集，血清對(duì)照和紅細(xì)胞對(duì)照不發(fā)生凝集，再察看實(shí)驗(yàn)管。細(xì)胞對(duì)照不發(fā)生凝集，再察看實(shí)驗(yàn)管。血凝抑制效價(jià)：完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最高稀釋度，即該血凝抑制效價(jià)：完全抑制紅細(xì)胞凝集的血清最高稀釋度，即該血清的抑制效價(jià)。血清的抑制效價(jià)。鑒定病