鐵皮石斛檢測

1、_鐵皮石斛多糖與甘露糖檢測規(guī)程鐵皮石斛TiepishihuDENDROBII OFFICMALIS CAULIS本品為蘭科植物鐵皮石斛Dendrobium officinale Kimu-ra et M1go的干燥莖。 11 月至翌年3 月采收，除去雜質(zhì)，剪去部分須根，邊加熱邊扭成螺旋形或彈簧狀，烘干；或切成段，干燥或低溫烘干，前者習(xí)稱“鐵皮楓斗”(耳環(huán)石斛 )；后者習(xí)稱“鐵皮石斛”?！拘誀睢胯F皮楓斗本品呈螺旋形或彈簧狀.通常為 2 6 個(gè)旋紋，莖拉直后長3.5 8cm ，直徑 O.2 O.4cm 。表面黃綠色或略帶金黃色，有細(xì)縱皺紋，節(jié)明顯，節(jié)上有時(shí)可見殘留的灰白色葉鞘；一端可見莖基部留下的

2、短須根。質(zhì)堅(jiān)實(shí)，易折斷，斷面平坦，灰白色至灰綠色，略角質(zhì)狀。氣微，味淡，嚼之有黏性。鐵皮石斛本品呈圓柱形的段，長短不等。【鑒別】(1) 本品橫切面：表皮細(xì)胞1 列，扁平，外壁及側(cè)壁稍增厚、微木化，外被黃色角質(zhì)層， 有的外層可見無色的薄壁細(xì)胞組成的葉鞘層?；颈”诮M織細(xì)胞多角形，大小相似，其問散在多數(shù)維管束，略排成4 5 圈，維管束外韌型，外圍排列有厚壁的纖維束，有的外側(cè)小型薄壁細(xì)胞中含有硅質(zhì)塊。含草酸鈣針晶束的黏液細(xì)胞多見于近表皮處。(2) 取本品粉末 1g ，加甲醇 50m1 ，超聲處理 30 分鐘， 濾過，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?15ml使溶解，用石油醚(60 90 )洗滌 2 次，每次20

3、ml ，棄去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗滌2 次，每次 20ml ，棄去洗液， 用水飽和的正丁醇振搖提取2 次，每次 20ml ，合并正丁醇液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml 使溶解，作為供試品溶液。另取鐵皮石斛對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(附錄 B) 試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各2 5 l，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，使成條狀，以乙醇-丁酮 -乙酰丙酮 -水 (15 ：15 ：5：85) 為展開劑，展開，取出，烘干，噴以三氯化鋁試液，在105 烘約 3 分鐘，置紫外光燈(365nm) 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。-可編輯修改 -_【檢查】甘露

4、糖與葡萄糖峰面積比取葡萄糖對照品適量，精密稱定，加水制成每1ml 含 50pg 的溶液，作為對照品溶液。精密吸取O.4m1 ，按 含量測定 甘露糖項(xiàng)下方法依法測定。供試品色譜中，甘露糖與葡萄糖的峰面積比應(yīng)為2.4 8.0 。水分不得過 12.O (附錄H 第一法 )。總灰分不得過 6.O (附錄K) ?！窘鑫铩空沾既苄越鑫餃y定法(附錄XA)項(xiàng)下的熱浸法測定，用乙醇作溶劑，不得少于6.5 ?！竞繙y定】（一）多糖1.1 試劑6% 苯酚：先配置80% 苯酚： 80g 苯酚（分析純重蒸餾試劑）加20g 水使之溶解，可置冰箱中避光長期儲存。再配置 5% 苯酚：取 73ml80% 苯酚于容量瓶中，加

5、水至48g（每次測定均需現(xiàn)配） ，測定的時(shí)候就用5% 的苯酚來測！無水乙醇乙醇濃硫酸1.2 設(shè)備：10ml 具塞試管，試驗(yàn)前檢查塞子的密封性，不得有泄漏，10 至 15ml 離心管，使管口離離心液液面1cm 以上，以防離心液甩出。紫外一可見分光光度計(jì)冰箱與冰塊粉碎機(jī)，耐酸薄手套。2.2 對照品溶液的制備取無水葡萄糖對照品0.1g ，精密稱定，加水制成每1m1 含 100 g 的溶液，即得。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品溶液0ml 、0.1ml 、O.2ml 、O.4ml 、 O.6m1 、O.8ml ，分別置 10ml 具塞試管中（用前注意檢查塞子的密封性），各加水補(bǔ)至1.0ml ，精密加入5-

6、可編輯修改 -_苯酚溶液1ml( 臨用配制 )，搖勻，再精密加硫酸5ml ，搖勻，置沸水浴中加熱20 分鐘，取出，置冰浴中冷卻5 分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外一可見分光光度法(附錄 V A) ，在 488nm的波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。20130723曲線y=0.0088x+0.1128， y 為濃度 .ug ； x 為吸光度。備注： 1.檢測液位濃稠硫酸樣液，腐蝕性很強(qiáng)倒皿時(shí)一定小心不要弄到手上，最好帶上合適的手套。 2檢測液為濃稠硫酸樣液，且總體積只有7ml （共 2 皿），連續(xù)檢測多個(gè)樣品時(shí)，比色皿用水洗凈，盡量甩干，再用少量待測液潤洗，待測樣品放

7、在冰水浴中，測一個(gè)拿一個(gè)。 3.試劑添加順序：樣品-5% 苯酚 -濃硫酸，不可顛倒；樣品加濃硫酸前要搖勻，加之后也要搖勻，注意塞子密封，小心漏液。4 ，用過的濃硫酸中會(huì)有炭絲，若檢測液中黑炭絲的顏色有擴(kuò)散的話，OD 值會(huì)升高，需重處理復(fù)測。供試品溶液的制備鮮莖 100g 以上，剪成2-3mm 段， 105 鼓風(fēng)烘干，過40 目篩分別裝入樣品袋 （鮮莖少的話，烘干后用錘子錘碎）稱重，按篩上下重量比例取本品共約O.3g ，精密稱定，加水200ml ，加熱回流2 小時(shí)，放冷，轉(zhuǎn)移至250ml 量瓶中，用少量水分次洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2mI ，置15ml

8、離心管中，精密加入無水乙醇10ml ，搖勻，冷藏 1 小時(shí)，取出，離心 (轉(zhuǎn)速為每分鐘4000轉(zhuǎn))20 分鐘，棄去上清液 (必要時(shí)濾過，觀察上清液是否有沉淀，若有再離心或過濾)，沉淀加 80乙醇洗滌2 次，每次8ml ，離心 ( 轉(zhuǎn)速為每分鐘4000 轉(zhuǎn) )20 分鐘，棄去上清液，沉淀加 60-80 度熱水溶解，轉(zhuǎn)移至25ml 量瓶中，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。測定法精密量取供試品溶液1m1 ，置 10ml 具塞試管中， 照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入 5苯酚溶液1ml ”起，依法測定吸光度A，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無水葡萄糖的量，計(jì)算，即得。多糖含量%= （A-0.1124

9、 ） /0.0088*250*25/（ 2*m*1000000 ）*100 其中（ A-0.1124 ）/0.0088 為檢測液濃度ug ，250*25/ （ 2*m ）樣品稀釋倍數(shù)， 1000000為單位換算系數(shù)1g=1000000ug。本品按干燥品計(jì)算，含鐵皮石斛多糖以無水葡萄糖(C 6H 12O 6) 計(jì)，不得少于25.O 。二）甘露糖照高效液相色譜法(附錄B) 測定。-可編輯修改 -_2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-O.02mol L 的乙酸銨溶液(20 ：80) 為流動(dòng)相； 檢測波長為250nm 。理論板數(shù)按甘露糖峰計(jì)算應(yīng)不低于。t000 。2

10、.2 試劑鹽酸氨基葡萄糖內(nèi)標(biāo)溶液12mg/ml苯基 -3- 甲基 -5- 吡唑啉酮 )甲醇溶液O.5mol/L鹽酸溶液O.3mol L ， 3mol/L氫氧化鈉溶液O.3mol L， 3mol/L2.3 校正因子測定取鹽酸氨基葡萄糖適量，精密稱定，加水制成每1ml 含 12mg 的溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘露糖對照品約10mg ，精密稱定，置100ml 量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液 1m1 ，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，吸取400 1 ，加 O.5m01/L的 PMP(1-苯基 -3- 甲基 -5- 吡唑啉酮 )甲醇溶液與O.3mol L 的氫氧化鈉溶液各400 1，混勻， 70 水浴反應(yīng)

11、100 分鐘。再加O.3mol L 的鹽酸溶液500 l，混勻，用三氯甲烷洗滌3 次，每次2ml ，棄去三氯甲烷液，水層離心后，取上清液，注入液相色譜儀，測定，計(jì)算校正因子。測定法取本品粉末 (過三號篩 )約 O.12g ，精密稱定， 置索氏提取器中，加 80 乙醇適量，加熱回流提取4 小時(shí)，棄去乙醇液， 藥渣揮干乙醇， 濾紙筒拆開置于燒杯中，加水 100ml ，再精密加入內(nèi)標(biāo)溶液2ml ，煎煮 1 小時(shí)并時(shí)時(shí)攪拌，放冷，加水補(bǔ)至約100ml ，混勻，離心，吸取上清液1ml ，置安瓿瓶或頂空瓶中，加 3.Omol/L 的鹽酸溶液O.5ml ，封口，混勻，110 水解 1 小時(shí)，放冷，用3.Omol L 的氫氧化鈉溶液0.5ml 調(diào)節(jié) pH 值至中性，吸取400 l，照校正因子測定方法，自“加O.5mol L 的 PMP 甲醇溶液”起，依法操作，取上清液101 ，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含甘露糖(C 6H 1206 )應(yīng)為 13.