實(shí)驗(yàn)八 病毒雞胚接種與細(xì)培養(yǎng)

1、 獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)課件獸醫(yī)微生物實(shí)驗(yàn)教學(xué)課件（動(dòng)物醫(yī)學(xué)本科專業(yè)）（動(dòng)物醫(yī)學(xué)本科專業(yè)）動(dòng)物醫(yī)學(xué)系動(dòng)物醫(yī)學(xué)系 實(shí)驗(yàn)八實(shí)驗(yàn)八 病毒雞胚接種與培養(yǎng)病毒雞胚接種與培養(yǎng)目的要求：目的要求：1 1、了解不同日齡雞胚接種的途徑和應(yīng)用。、了解不同日齡雞胚接種的途徑和應(yīng)用。2 2、掌握雞新城疫病毒雞胚尿囊腔接毒、收毒方法。、掌握雞新城疫病毒雞胚尿囊腔接毒、收毒方法。3 3、掌握雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和新城疫病毒接種、掌握雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和新城疫病毒接種、病變觀察、病變觀察及收毒。及收毒。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：1 1、雞胚的選擇和接種途徑：雞胚發(fā)育正常時(shí)，可見清晰的血管和活、雞胚的選擇和接種途徑：雞胚發(fā)育正常時(shí)，可見

2、清晰的血管和活的雞胚，血管及其主要分支均明顯，呈鮮紅色，雞胚可以活動(dòng)。的雞胚，血管及其主要分支均明顯，呈鮮紅色，雞胚可以活動(dòng)。 卵黃囊接種：卵黃囊接種：6-86-8日齡的雞胚；日齡的雞胚； 絨毛尿囊腔接種：絨毛尿囊腔接種：9-139-13日齡的雞胚；日齡的雞胚； 雞胚血管注射：雞胚血管注射：12-1312-13日齡雞胚；日齡雞胚； 羊膜腔和腦內(nèi)注射：羊膜腔和腦內(nèi)注射：1010日齡雞胚。日齡雞胚。2 2、雞新城疫病毒接種液或接種病料的處理；照蛋、打孔；接種。接、雞新城疫病毒接種液或接種病料的處理；照蛋、打孔；接種。接種后的檢查和收毒。種后的檢查和收毒。3 3、雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和新城疫病毒接種、

3、病變觀察及收毒。雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)和新城疫病毒接種、病變觀察及收毒。 病毒分離培養(yǎng)病毒分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)：動(dòng)物接種分離培養(yǎng)：動(dòng)物接種原動(dòng)物原動(dòng)物/ /實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雞胚接種雞胚接種尿囊腔、卵黃囊、尿囊膜、羊膜腔等尿囊腔、卵黃囊、尿囊膜、羊膜腔等 細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞原代細(xì)胞 cpecpe觀察空斑觀察空斑 二倍體細(xì)胞二倍體細(xì)胞 基因克隆基因克隆/ /擴(kuò)增擴(kuò)增 傳代細(xì)胞傳代細(xì)胞 組織塊培養(yǎng)組織塊培養(yǎng)腸管、氣管環(huán)等腸管、氣管環(huán)等在無菌條件下采取在無菌條件下采取9 91010日齡雞胚日齡雞胚除去頭除去頭( (或僅除去喙和眼或僅除去喙和眼) )、爪和內(nèi)臟，并剪成塊、爪和內(nèi)臟，并剪成塊用用Hanks

4、Hanks液等充分沖洗液等充分沖洗剪將其剪成剪將其剪成lmmlmm大小的碎塊大小的碎塊加入加入HanksHanks液或其他洗液，充分沖洗液或其他洗液，充分沖洗約約4 4倍量的倍量的0.250.25胰酶，并調(diào)整胰酶，并調(diào)整pHpH至至7.67.67.87.83737水浴中感作水浴中感作3030分鐘，每分鐘，每1010分鐘輕輕搖動(dòng)一次分鐘輕輕搖動(dòng)一次吸棄上層胰酶溶液吸棄上層胰酶溶液用洗液輕洗用洗液輕洗2 2次后次后吸管充分吹打，直至形成均勻的細(xì)胞懸液吸管充分吹打，直至形成均勻的細(xì)胞懸液準(zhǔn)備細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)備細(xì)胞計(jì)數(shù)單層細(xì)胞培養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)程序：雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)程序：雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)：細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)：每個(gè)細(xì)胞的生理特性基本一致；每個(gè)細(xì)胞的生理特性基本一致；感染病毒的細(xì)胞可通過細(xì)胞病變觀察結(jié)果；感染病毒的細(xì)胞可通過細(xì)胞病變觀察結(jié)果；免疫學(xué)和核酸技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)有無培養(yǎng)病毒；免疫學(xué)和核酸技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)有無培養(yǎng)病毒；從感染的組織分離病毒和病毒克隆。從感染的組織分離病毒和病毒克隆。實(shí)驗(yàn)報(bào)告：實(shí)驗(yàn)報(bào)告：1 1、常用雞胚方法有幾種，說明各接種途徑的日齡。、常用雞胚方法有幾種，說明各接種途徑的日齡。