遺傳病的診斷精

1、會(huì)計(jì)學(xué)1遺傳病的診斷精遺傳病的診斷精遺傳病的常規(guī)診斷Chapter 01病史、癥狀和體征病史、癥狀和體征細(xì)胞遺傳學(xué)檢查系譜分析生物化學(xué)檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷助孕情況助孕情況( (接受供卵或供精接受供卵或供精) )，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，流產(chǎn)史，死胎，終止妊娠，兒童的收養(yǎng)或過(guò)繼，近親婚配和非婚生情況；兒童的收養(yǎng)或過(guò)繼，近親婚配和非婚生情況；對(duì)于先天畸形，還需采集懷孕時(shí)父母身體健康情況和年齡對(duì)于先天畸形，還需采集懷孕時(shí)父母身體健康情況和年齡、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長(zhǎng)和活動(dòng)情、妊娠早期歷史、暴露致畸物的情況、胎兒生長(zhǎng)和活動(dòng)情況、詳細(xì)的出生記錄，家庭其他成員的異常

2、、發(fā)病年齡、況、詳細(xì)的出生記錄，家庭其他成員的異常、發(fā)病年齡、病程特點(diǎn)，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關(guān)資料。病程特點(diǎn)，未受累者現(xiàn)在的年齡、種族等有關(guān)資料。l智力發(fā)育不全智力發(fā)育不全l毛發(fā)黃毛發(fā)黃l腐臭味腐臭味l副性征發(fā)育不良副性征發(fā)育不良l繼發(fā)繼發(fā)/ /原發(fā)性閉經(jīng)原發(fā)性閉經(jīng)l身體矮小身體矮小l肘外翻肘外翻病史、癥狀和體征細(xì)胞遺傳學(xué)檢查系譜分析系譜分析生物化學(xué)檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷1.孟德?tīng)栠z傳?。? 1）常染色體顯性遺傳?。┏Ｈ旧w顯性遺傳病(AD)(AD)（2 2）常染色體隱性遺傳?。┏Ｈ旧w隱性遺傳病(AR)(AR)（3 3）X X連鎖隱性遺傳病連鎖隱性遺傳病(XR)(

3、XR)（4 4）X X連鎖顯性遺傳病連鎖顯性遺傳病(XD)(XD)（5 5）Y Y連鎖遺傳病連鎖遺傳病基因多效性基因多效性(pleiotropy)：是指某一基因與多種不同的看起來(lái)是指某一基因與多種不同的看起來(lái)似乎無(wú)關(guān)的表型有關(guān)。似乎無(wú)關(guān)的表型有關(guān)。多效性等位基因的每種效應(yīng)都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不多效性等位基因的每種效應(yīng)都可表現(xiàn)為不同的外顯率和不同的表現(xiàn)度。同的表現(xiàn)度。環(huán)境因素的影響：環(huán)境因素的影響：內(nèi)在的和外在的內(nèi)在的和外在的體細(xì)胞突變：體細(xì)胞突變：體細(xì)胞突變的體細(xì)胞突變的“二次打擊二次打擊”動(dòng)態(tài)突變：動(dòng)態(tài)突變：不穩(wěn)定的三核苷酸重復(fù)序列的預(yù)期現(xiàn)象不穩(wěn)定的三核苷酸重復(fù)序列的預(yù)期現(xiàn)象遺傳背景的影

4、響：遺傳背景的影響：與其他基因座發(fā)生相互作用與其他基因座發(fā)生相互作用遺傳異質(zhì)性遺傳異質(zhì)性是產(chǎn)生是產(chǎn)生ARAR表型表達(dá)不規(guī)律的原因表型表達(dá)不規(guī)律的原因先天聾啞先天聾啞X X連鎖的女性雜合子，由于連鎖的女性雜合子，由于X X染色體的染色體的LyonLyon化導(dǎo)致化導(dǎo)致的染色體隨機(jī)失活使女性的癥狀不像男性那么嚴(yán)重的染色體隨機(jī)失活使女性的癥狀不像男性那么嚴(yán)重。臨床表型雜合子臨床表型雜合子(manifesting heterzygote)(manifesting heterzygote)：X X連鎖基連鎖基因的女性雜合攜帶者，由于因的女性雜合攜帶者，由于X X染色體的隨機(jī)染色體的隨機(jī)LyonLyon化，

5、導(dǎo)致化，導(dǎo)致部分組織的細(xì)胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍部分組織的細(xì)胞大部分突變基因所在的染色體處于活躍狀態(tài)而患病。狀態(tài)而患病。很少見(jiàn)。很少見(jiàn)。全男性傳遞。全男性傳遞。2. 非孟德?tīng)栠z傳?。? 1）線粒體遺傳病）線粒體遺傳病 (2) (2) 多基因病多基因病許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟許多出生缺陷和慢性晚發(fā)型疾病，家族性聚集性類似于孟德?tīng)栠z傳，但不嚴(yán)格遵循孟德?tīng)柗蛛x率。德?tīng)栠z傳，但不嚴(yán)格遵循孟德?tīng)柗蛛x率。近期研究結(jié)果表明：原來(lái)認(rèn)為是多基因病的一些疾病中，近期研究結(jié)果表明：原來(lái)認(rèn)為是多基因病的一些疾病中，相當(dāng)一部分是由于遺傳異質(zhì)性所致。相當(dāng)一部分是由于遺傳異質(zhì)性所致。遺

6、傳印記遺傳印記動(dòng)態(tài)突變動(dòng)態(tài)突變3.1 遺傳印記來(lái)自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不來(lái)自父母雙親的等位基因和染色體區(qū)域的表達(dá)不是等同的，這些等位基因在雙親的配子細(xì)胞中經(jīng)過(guò)修是等同的，這些等位基因在雙親的配子細(xì)胞中經(jīng)過(guò)修飾，在子代中的表達(dá)不一樣。飾，在子代中的表達(dá)不一樣。等位基因按孟德?tīng)柗绞竭z傳，但在表達(dá)上受傳遞等位基因按孟德?tīng)柗绞竭z傳，但在表達(dá)上受傳遞的雙親性別影響。的雙親性別影響。母源印記：母源印記：母源的等位基因處于失活狀態(tài)母源的等位基因處于失活狀態(tài)父源印記：父源印記：父源的等位基因處于失活狀態(tài)父源的等位基因處于失活狀態(tài)3.2 3.2 動(dòng)態(tài)突變動(dòng)態(tài)突變?cè)谌塑账嶂貜?fù)序列擴(kuò)展所致的疾病中

7、，處于突變狀態(tài)在三核苷酸重復(fù)序列擴(kuò)展所致的疾病中，處于突變狀態(tài)的基因在世代傳遞甚至在體細(xì)胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定的基因在世代傳遞甚至在體細(xì)胞的世代傳遞中表現(xiàn)為不穩(wěn)定，其重復(fù)單元的數(shù)目會(huì)發(fā)生改變。，其重復(fù)單元的數(shù)目會(huì)發(fā)生改變。AUGCGGGAACAGCTGCGGTAAFra XFraXE11BGlnHDSCA1DRPLAMJDSBMAFRDAXF16ADM細(xì)胞遺傳學(xué)檢查細(xì)胞遺傳學(xué)檢查系譜分析生物化學(xué)檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷病史、癥狀和體征骨髓骨髓, ,胸腹水胸腹水, ,活檢組織活檢組織( (如絨毛膜如絨毛膜, ,手術(shù)手術(shù)取材的腫瘤組織等取材的腫瘤組織等),),組織培養(yǎng)物組織培

8、養(yǎng)物( (如原如原代培養(yǎng)的細(xì)胞代培養(yǎng)的細(xì)胞) )羊水等都可以作為檢查羊水等都可以作為檢查材料材料. .人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)PHA淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞秋水仙素秋水仙素分裂中期的細(xì)胞分裂中期的細(xì)胞X染色體染色體Y染色體染色體13號(hào)染色體號(hào)染色體18號(hào)染色體號(hào)染色體21號(hào)染色體號(hào)染色體細(xì)胞遺傳學(xué)檢查系譜分析生物化學(xué)檢查生物化學(xué)檢查Chapter 01 遺傳病的常規(guī)診斷病史、癥狀和體征 苯苯 丙丙 酮酮 尿尿 癥癥 酶活性檢查酶活性檢查 苯丙氨酸羥化酶苯丙氨酸羥化酶 肝肝 臟臟 血液濾片法血液濾片法 枯草桿菌抑制試驗(yàn)枯草桿菌抑制試驗(yàn) FeCl3顯色反應(yīng)顯色反應(yīng) 苯丙酮酸苯丙酮酸 綠

9、綠 色色 上海：上海：1981198119871987年對(duì)年對(duì)284,396284,396名新生兒進(jìn)行名新生兒進(jìn)行PKUPKU篩篩查，查出查，查出PKUPKU患兒患兒1515名，高苯丙氨酸血癥名，高苯丙氨酸血癥4 4名。名。苯丙酮尿癥的生化檢查遺傳病的基因診斷Chapter 02原理：原理：將待檢測(cè)的將待檢測(cè)的DNADNA分子用分子用/ /不用限制性內(nèi)切酶消化不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標(biāo)記物標(biāo)

10、記的上，固定后再與同位素或其它標(biāo)記物標(biāo)記的DNADNA或或RNARNA探針進(jìn)行反應(yīng)。如果待檢物中含有與探針互補(bǔ)的序列探針進(jìn)行反應(yīng)。如果待檢物中含有與探針互補(bǔ)的序列，則二者通過(guò)堿基互補(bǔ)的原理進(jìn)行結(jié)合，游離探針洗，則二者通過(guò)堿基互補(bǔ)的原理進(jìn)行結(jié)合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而顯示滌后用自顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而顯示出待檢的片段及其相對(duì)大小。出待檢的片段及其相對(duì)大小。用途：用途：檢測(cè)樣品中的檢測(cè)樣品中的DNADNA及其含量，了解基因的狀態(tài)及其含量，了解基因的狀態(tài), , 如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等。如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等。 Southern Blot 操作步驟：操

11、作步驟：DNA 瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳 印跡轉(zhuǎn)移印跡轉(zhuǎn)移 預(yù)雜交預(yù)雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或顯色放射自顯影或顯色鐮形紅細(xì)胞貧血癥的分子診斷鐮形紅細(xì)胞貧血癥的分子診斷1.35Kb1.15Kb脯纈谷脯纈谷脯谷谷脯谷谷第號(hào)第號(hào)染色體染色體Mst II識(shí)別順序識(shí)別順序Mst IIMst IIC C T N A G G1.35Kb1.15Kb凝凝 膠膠 電電 泳泳 圖圖HbAHbAHbAHbSHbSHbS操作過(guò)程操作過(guò)程 mRNAmRNA提取提取 甲醛變性電泳甲醛變性電泳 印跡轉(zhuǎn)移印跡轉(zhuǎn)移 預(yù)雜交預(yù)雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或化學(xué)發(fā)光放

12、射自顯影或化學(xué)發(fā)光1989年，年，Orita等建立的等建立的PCR產(chǎn)物單鏈產(chǎn)物單鏈DNA凝凝膠電泳技術(shù)。膠電泳技術(shù)。1 2 3 4 5a b1：正常人：正常人 2,4,5：純合體患者：純合體患者 3：雜合體：雜合體(2的弟弟的弟弟)左為泳動(dòng)變位模式：左為泳動(dòng)變位模式：a 正常人；正常人；b 純合體患者純合體患者應(yīng)用PCR-RFLP法檢測(cè)軟骨發(fā)育不全 家系STR位點(diǎn)名稱DXS102DXS8094DXS1192DXS1211DXS8013DXS1227家系A(chǔ)YYNYNN家系BYYYYYN家系CNYYYYN1 1，6 6，1111：待診胎兒外祖父；：待診胎兒外祖父；2 2，7 7，1212：孕婦；：

13、孕婦；3 3，8 8，1313：待診胎兒：待診胎兒4 4，9 9，1414：待診胎兒外祖母；：待診胎兒外祖母；5 5，1010，1515：先證者（待診胎兒舅舅：先證者（待診胎兒舅舅）家系家系A(chǔ)產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜產(chǎn)前診斷電泳分析圖譜基因芯片（基因芯片（gene chipgene chip）是利用點(diǎn)樣機(jī)等機(jī)械裝置，在玻璃等）是利用點(diǎn)樣機(jī)等機(jī)械裝置，在玻璃等支持物表面整齊地點(diǎn)上高密度的、成千上萬(wàn)個(gè)支持物表面整齊地點(diǎn)上高密度的、成千上萬(wàn)個(gè)“點(diǎn)點(diǎn)”，每個(gè)，每個(gè)“點(diǎn)點(diǎn)”含有可與一種基因雜交的一條探針。由于芯片含有可與一種基因雜交的一條探針。由于芯片上有序地排列著探針，因此也被稱為微陣列（上有序地排列著探

14、針，因此也被稱為微陣列（）。在芯片上滴加樣品后，在合適的條件下）。在芯片上滴加樣品后，在合適的條件下，樣品中含有的各種核酸片段（或）就與，樣品中含有的各種核酸片段（或）就與相應(yīng)的探針雜交。由于核酸片段上已標(biāo)記有熒光素，激發(fā)后相應(yīng)的探針雜交。由于核酸片段上已標(biāo)記有熒光素，激發(fā)后產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度就與樣品中所含有的相應(yīng)核酸片段的量成正產(chǎn)生的熒光強(qiáng)度就與樣品中所含有的相應(yīng)核酸片段的量成正比，也就代表該基因的表達(dá)量。經(jīng)激光共聚焦掃描儀等裝置比，也就代表該基因的表達(dá)量。經(jīng)激光共聚焦掃描儀等裝置掃描后，所獲得的信息經(jīng)專用軟件分析處理，即可獲得成千掃描后，所獲得的信息經(jīng)專用軟件分析處理，即可獲得成千上萬(wàn)種基因的表達(dá)情況。上萬(wàn)種基因的表達(dá)情況。遺傳病診斷的三個(gè)層次遺傳病診斷的三個(gè)層次Chapter 03現(xiàn)癥病人診斷現(xiàn)癥病人診斷癥狀前診斷癥狀前診斷產(chǎn)前診斷產(chǎn)前診斷Thanks youfor your attention!2. 非孟德?tīng)栠z傳?。? 1）線粒體遺傳病）線粒體遺傳病 (2) (2) 多基因病多基因病 Southern Blot 操作步驟：操作步驟：DNA 瓊脂糖電泳瓊脂糖電泳 印跡轉(zhuǎn)移印跡轉(zhuǎn)移 預(yù)雜交預(yù)雜交 雜交（變性探針）雜交（變性探針） 洗膜洗膜 放射自顯影或顯色放射自顯影或顯色1 1，6 6，1111：待診胎兒外