磁珠分離細(xì)胞技術(shù)優(yōu)秀課件

1、磁珠分選技術(shù)磁珠分選技術(shù)2磁珠分選技術(shù)磁珠分選技術(shù)免疫學(xué)免疫學(xué)+ +細(xì)胞生物學(xué)細(xì)胞生物學(xué)+ +磁力學(xué)磁力學(xué)基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別：免疫磁珠基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、而與細(xì)胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、生物素磁珠、Oligo dTOligo dT磁珠磁珠在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中達(dá)到磁性分離的目在高強(qiáng)度、梯度磁場(chǎng)中達(dá)到磁性分離的目的：分離細(xì)胞、蛋白、核酸、細(xì)菌等的：分離細(xì)胞、蛋白、核酸、細(xì)菌等3v磁珠磁珠v磁力架磁力架v分離柱或分離試管分離柱或分離試管 MACS，D

2、ynal，BD，StemCell，R&D磁珠分選系統(tǒng)磁珠分選系統(tǒng)4管式分選管式分選 DynalbeadsDynalbeads分離試管分離試管磁力架磁力架56柱式分選柱式分選 7未標(biāo)記的細(xì)胞未標(biāo)記的細(xì)胞先行流出先行流出MACS微珠進(jìn)微珠進(jìn)行磁性標(biāo)記行磁性標(biāo)記撤去磁場(chǎng)，將標(biāo)撤去磁場(chǎng)，將標(biāo)記的細(xì)胞洗出記的細(xì)胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下磁性鐵珠在分選器作用下形成強(qiáng)大的磁場(chǎng)，使含磁形成強(qiáng)大的磁場(chǎng)，使含磁珠的細(xì)胞懸浮在磁場(chǎng)中珠的細(xì)胞懸浮在磁場(chǎng)中8v MACS d50nm，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細(xì)，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細(xì)胞生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細(xì)胞胞

3、生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細(xì)胞(10-8);v Dynal d=4.5um2.8um1um，多聚材料包被的氧化鐵超順磁，多聚材料包被的氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適用于細(xì)胞活化；微球；均一性好；也適用于細(xì)胞活化；v BD d200nm，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量的，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量的BD抗體；抗體；v StemCell 管式；柱式管式；柱式;v R&D d150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體，鏈酶親和素磁珠，類膠體.9直標(biāo)直標(biāo)間標(biāo)間標(biāo)抗鏈酶親和素磁珠抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠抗熒光素磁珠10在沒有直接標(biāo)記微

4、珠可選時(shí)在沒有直接標(biāo)記微珠可選時(shí)使用自備抗體或配體的磁性分選中使用自備抗體或配體的磁性分選中分選或去除用多個(gè)抗體混合物標(biāo)記分選或去除用多個(gè)抗體混合物標(biāo)記的多種細(xì)胞的多種細(xì)胞分選稀有細(xì)胞和抗原弱表達(dá)的細(xì)胞分選稀有細(xì)胞和抗原弱表達(dá)的細(xì)胞間標(biāo)擴(kuò)展了分選范圍間標(biāo)擴(kuò)展了分選范圍11分選策略分選策略v陽性分選陽性分選v去除分選去除分選v多重分選多重分選12用磁珠標(biāo)記用磁珠標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞目標(biāo)細(xì)胞目標(biāo)細(xì)胞滯留目標(biāo)細(xì)胞滯留在分選柱內(nèi)在分選柱內(nèi)目標(biāo)細(xì)胞被洗目標(biāo)細(xì)胞被洗脫，收集脫，收集目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，作為陽性的標(biāo)記組分作為陽性的標(biāo)記組分直接分選出來。直接分選出來。高純度，高回收率，高純度，高回

5、收率，操作簡單，尤其是富操作簡單，尤其是富集稀少細(xì)胞。集稀少細(xì)胞。13分選前分選前陰性組分陰性組分(未未滯留在分選柱滯留在分選柱上的細(xì)胞上的細(xì)胞)陽性組分陽性組分(滯滯留在分選柱上留在分選柱上的細(xì)胞的細(xì)胞)應(yīng)用應(yīng)用anti-CD19anti-CD19磁珠分選磁珠分選人外周血中的人外周血中的B B細(xì)胞細(xì)胞14非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，作為陰性的組分滯后，作為陰性的組分滯留在分選柱上，未標(biāo)記留在分選柱上，未標(biāo)記的目的細(xì)胞被分選出來。的目的細(xì)胞被分選出來。去除不需要的細(xì)胞去除不需要的細(xì)胞缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）不需要抗體和目的

6、細(xì)胞不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合，即細(xì)胞不被刺激結(jié)合，即細(xì)胞不被刺激（如（如T T細(xì)胞、細(xì)胞、B B細(xì)胞、細(xì)胞、NKNK細(xì)細(xì)胞功能分析）胞功能分析）需進(jìn)一步通過陽性選擇需進(jìn)一步通過陽性選擇分選細(xì)胞亞群。分選細(xì)胞亞群。標(biāo)記非目的細(xì)胞標(biāo)記非目的細(xì)胞非目的細(xì)胞滯留在非目的細(xì)胞滯留在分選柱上，被去除分選柱上，被去除15生物素標(biāo)記生物素標(biāo)記CD2, CD14, CD16, CD36, CD43, CD235a; 再加入鏈酶親和素標(biāo)記的磁珠再加入鏈酶親和素標(biāo)記的磁珠應(yīng)用去除法分選人應(yīng)用去除法分選人外周血中的外周血中的B B細(xì)胞細(xì)胞16先去除非目的細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞，再進(jìn)行陽性分選。再進(jìn)行陽性分選。非目的細(xì)

7、胞也表達(dá)用非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性選擇目的細(xì)胞的來陽性選擇目的細(xì)胞的抗原；要分選非常稀有抗原；要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，可獲胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細(xì)胞。得高純度的目的細(xì)胞。標(biāo)記去除非標(biāo)記去除非目的細(xì)胞目的細(xì)胞標(biāo)記目的細(xì)胞標(biāo)記目的細(xì)胞洗脫目洗脫目的細(xì)胞的細(xì)胞17應(yīng)用：分選人外周血中應(yīng)用：分選人外周血中的的CD4+CD25+ T細(xì)胞細(xì)胞分選前分選前去除分選后去除分選后陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陽性組分陽性分選后的陽性組分18洗脫目標(biāo)細(xì)胞洗脫目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)記用標(biāo)記1標(biāo)記標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)記用標(biāo)記2標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞標(biāo)記目

8、標(biāo)細(xì)胞去除磁珠標(biāo)記去除磁珠標(biāo)記洗脫目標(biāo)細(xì)胞洗脫目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行多次連續(xù)陽性分進(jìn)行多次連續(xù)陽性分選，進(jìn)行新標(biāo)記前先去選，進(jìn)行新標(biāo)記前先去除原來的磁珠標(biāo)記。除原來的磁珠標(biāo)記?？蛇M(jìn)行多參數(shù)分選?？蛇M(jìn)行多參數(shù)分選。19應(yīng)用：分選人外周血中應(yīng)用：分選人外周血中的的CD3+CD56+ T細(xì)胞細(xì)胞分選前分選前第一次陽選第一次陽選第二次陽選第二次陽選20v優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，高效快捷，無操作簡單，高效快捷，無菌和細(xì)胞狀態(tài)更有保證，回收率、菌和細(xì)胞狀態(tài)更有保證，回收率、純度高。純度高。v缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：不能在分選的同時(shí)進(jìn)行分不能在分選的同時(shí)進(jìn)行分析，分選過程中很難去除死細(xì)胞析，分選過程中很難去除死細(xì)胞團(tuán)塊的干擾，難于同時(shí)進(jìn)行多種團(tuán)塊的干擾，難于同時(shí)進(jìn)行多種標(biāo)記物的分選。標(biāo)記物的分選。21分選前標(biāo)本處理分選前標(biāo)本處理密度梯度離心密度梯度離心(Ficoll, Percoll)(Ficoll, Percoll)（根據(jù)情況）溶血（根據(jù)情況）溶血( (溶解紅細(xì)胞溶解紅細(xì)胞) )過濾過濾( (單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞) )分選標(biāo)本：不含有死細(xì)胞或者碎片