常見病原微生物的檢測PPT

1、常見病原微生物的檢測PPT 第一頁，課件共81頁n 兔血漿制備兔血漿制備:無菌采取兔心臟血無菌采取兔心臟血,以以1份滅菌的份滅菌的3.8%枸櫞酸枸櫞酸鈉液抗凝劑鈉液抗凝劑加加4份兔血的比例充分混勻份兔血的比例充分混勻,離心離心,吸取上清液吸取上清液即為原兔血漿即為原兔血漿,分裝分裝成成1ml/支或支或0.5ml/支支;n另用另用滅菌生理鹽水滅菌生理鹽水稀釋兔血漿稀釋兔血漿,制成制成4倍稀釋血漿倍稀釋血漿(以下簡稱以下簡稱為稀釋兔血漿為稀釋兔血漿),分裝同上分裝同上,于于-18以下冰凍保存以下冰凍保存,供試驗供試驗 遺留問題遺留問題第二頁，課件共81頁第一節(jié)第一節(jié) 炭疽桿菌（一）炭疽桿菌（一）n

2、炭疽桿菌炭疽桿菌（Bacillus anthraci）屬于需氧芽胞桿菌屬，屬于需氧芽胞桿菌屬，能引起羊、牛、馬等動物及人類的炭疽病。炭疽桿菌曾被帝國主義能引起羊、牛、馬等動物及人類的炭疽病。炭疽桿菌曾被帝國主義作為致死戰(zhàn)劑之一。作為致死戰(zhàn)劑之一。n（一）生物學(xué)性狀（一）生物學(xué)性狀n1.菌體粗大，排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，無動力，菌體粗大，排列似竹節(jié)狀，無鞭毛，無動力，革蘭氏染色陽性革蘭氏染色陽性，本菌，本菌在氧氣充足，溫度適宜在氧氣充足，溫度適宜（2530）的條件下易形成芽胞的條件下易形成芽胞。第三頁，課件共81頁2.在在活體活體或未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，則不能形成芽胞。芽胞呈橢圓形，或未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)

3、，則不能形成芽胞。芽胞呈橢圓形，位于菌體中央，其寬度小于菌體的寬度。位于菌體中央，其寬度小于菌體的寬度。3.形成莢膜形成莢膜是毒性特征。是毒性特征。4.炭疽桿菌受低濃度青霉素作用，菌體可腫大形成園珠，稱為炭疽桿菌受低濃度青霉素作用，菌體可腫大形成園珠，稱為“串串珠反應(yīng)珠反應(yīng)”。這也是炭疽桿菌特有的反應(yīng)。這也是炭疽桿菌特有的反應(yīng)。第四頁，課件共81頁n1.本菌專性需氧或兼性厭氧，在普通培養(yǎng)基中易繁殖。本菌專性需氧或兼性厭氧，在普通培養(yǎng)基中易繁殖。n2.最適溫度為最適溫度為37，最適，最適pH為為7.27.4n3.在瓊脂平板培養(yǎng)在瓊脂平板培養(yǎng)24小時，粗糙菌落。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，小時，粗

4、糙菌落。菌落呈毛玻璃狀，邊緣不整齊，呈卷發(fā)狀，有一個或數(shù)個小尾突起，這是本菌向外伸延繁殖所致呈卷發(fā)狀，有一個或數(shù)個小尾突起，這是本菌向外伸延繁殖所致。（二）培養(yǎng)特性（二）培養(yǎng)特性第五頁，課件共81頁n4.在在510%綿羊血液瓊脂平板上，菌落周圍無明顯的溶血綿羊血液瓊脂平板上，菌落周圍無明顯的溶血環(huán)，但培養(yǎng)較久后可出現(xiàn)輕度溶血。菌落有粘性，用接種環(huán)，但培養(yǎng)較久后可出現(xiàn)輕度溶血。菌落有粘性，用接種針鉤取可拉成絲，針鉤取可拉成絲，稱為稱為“拉絲拉絲”現(xiàn)象現(xiàn)象。n5.在普通肉湯培養(yǎng)在普通肉湯培養(yǎng)1824小時，管底有絮狀沉淀生長，無菌膜，小時，管底有絮狀沉淀生長，無菌膜，菌液清亮。菌液清亮。有毒株在碳酸

5、氫鈉平板，有毒株在碳酸氫鈉平板，20%CO2培養(yǎng)下，形成培養(yǎng)下，形成粘液狀菌落（有莢膜），而無毒株則為粗糙狀。粘液狀菌落（有莢膜），而無毒株則為粗糙狀。第六頁，課件共81頁n（三）抵抗力（三）抵抗力n繁殖體抵抗力不強，易被一般消毒劑殺滅，而芽胞抵抗力強，繁殖體抵抗力不強，易被一般消毒劑殺滅，而芽胞抵抗力強，在干燥的室溫環(huán)境中可存活數(shù)十年，在皮毛中可存活數(shù)年。牧在干燥的室溫環(huán)境中可存活數(shù)十年，在皮毛中可存活數(shù)年。牧場一旦被污染，芽胞可存活數(shù)年至數(shù)十年。煮沸場一旦被污染，芽胞可存活數(shù)年至數(shù)十年。煮沸1010分鐘或干熱分鐘或干熱14031403小時可將芽胞殺死。炭疽芽胞對碘特別敏感，對青霉素、鏈小時

6、可將芽胞殺死。炭疽芽胞對碘特別敏感，對青霉素、鏈霉素、卡那霉素等高度敏感。霉素、卡那霉素等高度敏感。第七頁，課件共81頁一）致病性一）致病性n人類主要通過工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)而感染。機體抵抗力降低時，接觸污染人類主要通過工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)而感染。機體抵抗力降低時，接觸污染物品可發(fā)生下列疾?。何锲房砂l(fā)生下列疾?。簄1皮膚炭疽，最常見，多發(fā)生于屠宰或毛刷工人及飼養(yǎng)員。皮膚炭疽，最常見，多發(fā)生于屠宰或毛刷工人及飼養(yǎng)員。n2縱隔障炭疽，縱隔障炭疽， 少見。由吸入病菌芽胞所致，多發(fā)生于皮毛少見。由吸入病菌芽胞所致，多發(fā)生于皮毛工人，病死率高。病初似感冒，進而出現(xiàn)嚴(yán)重的支氣管肺炎，工人，病死率高。病初似感冒，進而出現(xiàn)嚴(yán)重的

7、支氣管肺炎，可在可在23天內(nèi)死于中毒性休克。天內(nèi)死于中毒性休克。二、致病性與免疫性二、致病性與免疫性第八頁，課件共81頁n3腸炭疽，腸炭疽， 由食入病獸肉制品所致，以全身中毒癥狀為由食入病獸肉制品所致，以全身中毒癥狀為主，并有胃腸道潰瘍、出血及毒血癥，發(fā)病后主，并有胃腸道潰瘍、出血及毒血癥，發(fā)病后23日內(nèi)死日內(nèi)死亡。亡。n上述疾病若引起上述疾病若引起敗血癥時敗血癥時，可繼發(fā)，可繼發(fā)“炭疽性腦膜炎炭疽性腦膜炎”。炭疽桿。炭疽桿菌的致病性取決于莢膜和毒素的協(xié)同作用。菌的致病性取決于莢膜和毒素的協(xié)同作用。第九頁，課件共81頁n（二）免疫性n注射炭疽外毒素中保護性抗原于機體，能形成抗毒素免疫，對受染注

8、射炭疽外毒素中保護性抗原于機體，能形成抗毒素免疫，對受染炭疽有保護作用。但單純的莢膜抗體對機體沒有保護作用。病后可炭疽有保護作用。但單純的莢膜抗體對機體沒有保護作用。病后可獲較強的免疫力。獲較強的免疫力。第十頁，課件共81頁三、微生物學(xué)檢查三、微生物學(xué)檢查n1.采集皮膚炭疽的膿液、滲出物，腸炭疽的糞便以及病人的的血采集皮膚炭疽的膿液、滲出物，腸炭疽的糞便以及病人的的血液等送檢，液等送檢，獸尸禁止解剖，獸尸禁止解剖，可割取耳朵或舌尖一片送檢?？筛钊《浠蛏嗉庖黄蜋z。n2.將標(biāo)本直接涂片，沙黃莢膜染色鏡檢，觀察形態(tài)及莢膜特征，將標(biāo)本直接涂片，沙黃莢膜染色鏡檢，觀察形態(tài)及莢膜特征，可以初步幫助診斷

9、?？梢猿醪綆椭\斷。第十一頁，課件共81頁n3.確診應(yīng)進行確診應(yīng)進行血平板分離培養(yǎng)血平板分離培養(yǎng)，37孵育孵育1215小時，鉤取小時，鉤取可疑菌落，可疑菌落，進行進行青霉素串珠試驗青霉素串珠試驗，噬菌體裂解試驗，碳酸氫，噬菌體裂解試驗，碳酸氫鈉平板二氧化碳培養(yǎng)。莢膜腫脹試驗和小白鼠致病力試驗等鈉平板二氧化碳培養(yǎng)。莢膜腫脹試驗和小白鼠致病力試驗等與其他需氧芽胞桿菌進行鑒別確定。與其他需氧芽胞桿菌進行鑒別確定。第十二頁，課件共81頁四、特異防治四、特異防治n1.預(yù)防人類炭疽首先應(yīng)防止家畜炭疽的發(fā)生。家畜炭疽感染消滅預(yù)防人類炭疽首先應(yīng)防止家畜炭疽的發(fā)生。家畜炭疽感染消滅后，人類的傳染源也隨之消滅。后

10、，人類的傳染源也隨之消滅。n2.目前我國使用的炭疽活疫菌，作目前我國使用的炭疽活疫菌，作皮上劃痕皮上劃痕接種，免疫力接種，免疫力可維護半年至一年。青霉素是治療炭疽的首選藥物，對可維護半年至一年。青霉素是治療炭疽的首選藥物，對腸道及吸入性炭疽治療困難，有條件的可用抗血清腸道及吸入性炭疽治療困難，有條件的可用抗血清。第十三頁，課件共81頁五、檢測方法五、檢測方法n1.環(huán)狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng)n2.噬菌體裂解實驗噬菌體裂解實驗n3.莢膜熒光抗體檢測莢膜熒光抗體檢測n4.質(zhì)譜分析法質(zhì)譜分析法第十四頁，課件共81頁第一節(jié)第一節(jié) 布魯氏桿菌布魯氏桿菌（二）n本菌屬初次分離培養(yǎng)時多呈小球桿狀，本菌屬初次分離

11、培養(yǎng)時多呈小球桿狀，毒力菌株有莢膜毒力菌株有莢膜，經(jīng)傳代培，經(jīng)傳代培養(yǎng)漸呈桿狀，養(yǎng)漸呈桿狀，革蘭氏染色陰性革蘭氏染色陰性。n我國流行的是我國流行的是羊、羊、牛、豬布氏桿菌牛、豬布氏桿菌一、生物學(xué)性狀一、生物學(xué)性狀1.形態(tài)染色形態(tài)染色第十五頁，課件共81頁n本菌為本菌為嚴(yán)格需氧菌嚴(yán)格需氧菌；n牛布氏桿菌在初次分離時，需在牛布氏桿菌在初次分離時，需在510%CO2環(huán)境中才能生長，環(huán)境中才能生長，最最適溫度適溫度37，最適的，最適的pH6.67.1，營養(yǎng)要求高，生長時需，營養(yǎng)要求高，生長時需硫硫胺素，煙草酸和生物素，泛酸鈣胺素，煙草酸和生物素，泛酸鈣等，實驗室常用等，實驗室常用肝浸液培養(yǎng)基肝浸液培養(yǎng)

12、基或改良厚氏培養(yǎng)基或改良厚氏培養(yǎng)基。n此菌生緩慢，培養(yǎng)此菌生緩慢，培養(yǎng)48小時后才出現(xiàn)透明的小菌落，雞胚培養(yǎng)小時后才出現(xiàn)透明的小菌落，雞胚培養(yǎng)也能生長。也能生長。2.培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性第十六頁，課件共81頁n在自然界中抵抗力較強，在在自然界中抵抗力較強，在病畜的臟器和分泌物中病畜的臟器和分泌物中，一般，一般能存活能存活4個月左右，在個月左右，在食品中食品中約能生存約能生存2個月。對低溫的抵抗個月。對低溫的抵抗力也強，對熱和消毒劑抵抗力弱。對力也強，對熱和消毒劑抵抗力弱。對鏈霉素、氯霉素和四環(huán)鏈霉素、氯霉素和四環(huán)素素等均敏感。等均敏感。 3.抵抗力抵抗力第十七頁，課件共81頁n本菌侵入人體后，被吞

13、噬細胞吞噬，由于本菌侵入人體后，被吞噬細胞吞噬，由于本菌具有莢膜本菌具有莢膜，能抵抗吞，能抵抗吞噬細胞的吞噬消毀，并能在該細胞內(nèi)增殖。反復(fù)出現(xiàn)噬細胞的吞噬消毀，并能在該細胞內(nèi)增殖。反復(fù)出現(xiàn)菌血癥菌血癥。由于內(nèi)。由于內(nèi)毒素的作用，病人出現(xiàn)毒素的作用，病人出現(xiàn)發(fā)熱、無力等中毒癥狀發(fā)熱、無力等中毒癥狀，血流中細菌逐步消失，血流中細菌逐步消失，體溫也逐漸消退。細菌在細胞內(nèi)繁殖至一定程度時，再次進入血流又出現(xiàn)體溫也逐漸消退。細菌在細胞內(nèi)繁殖至一定程度時，再次進入血流又出現(xiàn)菌血癥，體溫再次上升，反復(fù)呈波浪熱型。菌血癥，體溫再次上升，反復(fù)呈波浪熱型。二、致病性和免疫性二、致病性和免疫性第十八頁，課件共81頁

14、 人感染布氏桿菌表現(xiàn)乏力，全身軟弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色人感染布氏桿菌表現(xiàn)乏力，全身軟弱，食欲不振，失眠，咳嗽，有白色痰，可聽到肺部干鳴，多呈波浪熱，也有稽留熱、不規(guī)則熱或不發(fā)熱。痰，可聽到肺部干鳴，多呈波浪熱，也有稽留熱、不規(guī)則熱或不發(fā)熱。 盜汗或大汗，一個或多個關(guān)節(jié)發(fā)生無紅腫熱的疼痛，肌肉酸痛，盜汗或大汗，一個或多個關(guān)節(jié)發(fā)生無紅腫熱的疼痛，肌肉酸痛，由于由于關(guān)節(jié)和肌肉疼痛難忍，即使不發(fā)燒也不能勞動，成為能吃不能活懶漢，故關(guān)節(jié)和肌肉疼痛難忍，即使不發(fā)燒也不能勞動，成為能吃不能活懶漢，故該病又被稱作該病又被稱作懶漢病懶漢病。 病灶發(fā)生在生殖器官，影響生育，嚴(yán)重者可引起死亡。病灶發(fā)生在生

15、殖器官，影響生育，嚴(yán)重者可引起死亡。三三、主要癥狀主要癥狀第十九頁，課件共81頁本菌傳染性大，要注意防止實驗室污染。本菌傳染性大，要注意防止實驗室污染。（一）分離培養(yǎng)（一）分離培養(yǎng) 急性期急性期采集血液，采集血液，慢性期慢性期采取骨髓，接種于采取骨髓，接種于雙相肝浸液培養(yǎng)基雙相肝浸液培養(yǎng)基（一（一半斜面，一半液體）置半斜面，一半液體）置3710%CO2環(huán)境中培養(yǎng)，每隔環(huán)境中培養(yǎng)，每隔2天檢查一天檢查一次，如無細菌生長則搖蕩培養(yǎng)基，使液體浸過斜面上，有細菌次，如無細菌生長則搖蕩培養(yǎng)基，使液體浸過斜面上，有細菌生長，可依鑒定項目確定是否為布氏桿菌。經(jīng)一月培養(yǎng)無細菌生長，可依鑒定項目確定是否為布氏桿

16、菌。經(jīng)一月培養(yǎng)無細菌生長，可報告陰性。生長，可報告陰性。四、微生物學(xué)檢驗四、微生物學(xué)檢驗第二十頁，課件共81頁（二）血清學(xué)檢查二）血清學(xué)檢查通常作凝集試驗，判定通常作凝集試驗，判定凝集效價凝集效價1：50可疑，可疑，1：100以上為以上為陽性。效價增高陽性。效價增高4倍以上時，更有診斷價值。倍以上時，更有診斷價值。（三）酶聯(lián)免疫吸附檢測（三）酶聯(lián)免疫吸附檢測第二十一頁，課件共81頁（四）（四）PCR檢測檢測 此法敏感、特異、快速，實時熒光定量此法敏感、特異、快速，實時熒光定量PCR已用于布氏桿菌特異已用于布氏桿菌特異性基因的檢測，即在性基因的檢測，即在PCR反應(yīng)體系中加熒光基團，利用熒光信反應(yīng)

17、體系中加熒光基團，利用熒光信號積累，實時監(jiān)測整個過程。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可進行定量。號積累，實時監(jiān)測整個過程。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可進行定量。 第二十二頁，課件共81頁第一節(jié)第一節(jié) 結(jié)核分枝桿菌（三）結(jié)核分枝桿菌（三） 簡介簡介第二十三頁，課件共81頁（1 1）形態(tài)與染色）形態(tài)與染色一、生物學(xué)性狀一、生物學(xué)性狀第二十四頁，課件共81頁（2 2）培養(yǎng)特性）培養(yǎng)特性第二十五頁，課件共81頁第二十六頁，課件共81頁（3 3）生化反應(yīng)）生化反應(yīng)第二十七頁，課件共81頁（4 4）抵抗力）抵抗力第二十八頁，課件共81頁（5 5）變異性）變異性第二十九頁，課件共81頁二、致病性二、致病性第三十頁，課件共81頁（一）致病物

18、質(zhì)（一）致病物質(zhì)第三十一頁，課件共81頁 1. 1.莢膜莢膜第三十二頁，課件共81頁梭狀因子蠟質(zhì)D硫酸腦苷脂磷脂 2. 2.脂質(zhì)脂質(zhì)第三十三頁，課件共81頁第三十四頁，課件共81頁 3. 3.蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)第三十五頁，課件共81頁 4. 4.多糖質(zhì)多糖質(zhì)第三十六頁，課件共81頁 5. 5.核酸核酸第三十七頁，課件共81頁（二）所致疾?。ǘ┧录膊〉谌隧?，課件共81頁n三、檢測方法三、檢測方法n檢測方法：免疫學(xué)和細菌學(xué)檢測n根據(jù)感染部位選擇樣品制作標(biāo)本根據(jù)感染部位選擇樣品制作標(biāo)本n分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)n動物試驗動物試驗n快速診斷快速診斷第三十九頁，課件共81頁n是是人類霍亂人類霍亂的病原體。的病

19、原體。 引起腸道傳染病。引起腸道傳染病。n霍亂是一種古老且流行廣泛的霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳烈性傳染病。染病。 n曾在世界上曾在世界上引起多次大流行引起多次大流行，主要表現(xiàn)，主要表現(xiàn)為劇烈的嘔吐，腹瀉，失水，死亡率甚高。為劇烈的嘔吐，腹瀉，失水，死亡率甚高。 n屬于屬于國際檢疫甲類傳染病國際檢疫甲類傳染病。第一節(jié)第一節(jié) 霍亂弧菌（霍亂弧菌（V. cholerae）（四）（四）第四十頁，課件共81頁n兩個生物型兩個生物型：古典生物型古典生物型（霍亂的病原體）和埃爾托生物型（霍亂的病原體）和埃爾托生物型（副霍亂的病原體）（副霍亂的病原體）第四十一頁，課件共81頁流行情況流行情況第四十二頁，

20、課件共81頁一、生物學(xué)性狀一、生物學(xué)性狀形態(tài)與染色形態(tài)與染色 1. 呈呈弧形或逗點狀弧形或逗點狀；排；排列成魚群狀列成魚群狀 2.革蘭陰性；無芽孢，無革蘭陰性；無芽孢，無莢膜莢膜 3.有單鞭毛，運動活潑，呈有單鞭毛，運動活潑，呈穿梭樣或流星樣穿梭樣或流星樣 4.有菌毛有菌毛第四十三頁，課件共81頁培養(yǎng)特性培養(yǎng)特性1.營養(yǎng)要求不高；營養(yǎng)要求不高； 2. 兼性厭氧菌；兼性厭氧菌； 3. 生長繁殖溫度范圍廣（生長繁殖溫度范圍廣（18-37）；）； 4. 嗜堿嗜堿-堿性蛋白胨堿性蛋白胨(pH 8.8-9.0): 初次分離培養(yǎng)初次分離培養(yǎng) TCBS平板：黃色菌落平板：黃色菌落 5. 可在無鹽環(huán)境中生長可

21、在無鹽環(huán)境中生長 第四十四頁，課件共81頁 抵抗力抵抗力1. 對熱、干燥、日光，化學(xué)消毒劑和酸均很敏感對熱、干燥、日光，化學(xué)消毒劑和酸均很敏感 2. 耐低溫，耐堿。耐低溫，耐堿。 四怕四怕：怕醋、怕煮、怕曬、怕藥。：怕醋、怕煮、怕曬、怕藥。 怕熱不怕冷怕熱不怕冷 怕干不怕濕怕干不怕濕 怕酸不怕堿怕酸不怕堿怕咸不怕淡怕咸不怕淡第四十五頁，課件共81頁毒毒 素素 霍亂腸毒素霍亂腸毒素(CT) ：前噬菌體基因編碼前噬菌體基因編碼 小帶聯(lián)結(jié)毒素小帶聯(lián)結(jié)毒素 Zot 增加腸黏膜通透性增加腸黏膜通透性 副霍亂腸毒素副霍亂腸毒素Ace 腸段積液腸段積液侵襲力侵襲力 鞭鞭 毛毛 菌毛菌毛致病物質(zhì)致病物質(zhì)第四十

22、六頁，課件共81頁CTCT的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)B亞單位：亞單位：與小腸粘膜上皮細胞與小腸粘膜上皮細胞GM1神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合；神經(jīng)節(jié)苷脂受體結(jié)合；由由1個個A亞單位和亞單位和5個個B亞單位構(gòu)亞單位構(gòu)成的多聚體，不耐熱。成的多聚體，不耐熱。（前噬菌體基因編碼）（前噬菌體基因編碼）1A+5B第四十七頁，課件共81頁 霍亂典型臨床特征霍亂典型臨床特征患者出現(xiàn)上吐下瀉，瀉出物呈患者出現(xiàn)上吐下瀉，瀉出物呈“米泔米泔水樣水樣”。 并發(fā)癥有血容量減少，并發(fā)癥有血容量減少， 循環(huán)衰竭及循環(huán)衰竭及腎功能衰竭，導(dǎo)致尿閉、電解質(zhì)、腎功能衰竭，導(dǎo)致尿閉、電解質(zhì)、酸堿平衡失調(diào)導(dǎo)致肌肉痙攣。酸堿平衡失調(diào)導(dǎo)致肌肉痙攣。 第四十八頁

23、，課件共81頁免疫性感染后可獲感染后可獲牢固免疫力牢固免疫力；再感染少見；再感染少見 局部黏膜免疫；抗菌抗體（局部黏膜免疫；抗菌抗體（O）；抗毒素抗體（）；抗毒素抗體（B） O1群與群與O139群不存在交叉免疫保護作用群不存在交叉免疫保護作用。第四十九頁，課件共81頁 微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查a.采集樣品采集樣品b.鏡檢鏡檢c.分離培養(yǎng)并生化反應(yīng)和凝集反應(yīng)分離培養(yǎng)并生化反應(yīng)和凝集反應(yīng) PCRPCR檢查檢查 Southern blotSouthern blot檢測檢測 檢驗方法檢驗方法第五十頁，課件共81頁第二節(jié)第二節(jié) 食物傳播的病毒及其檢驗食物傳播的病毒及其檢驗1.1.朊病毒朊病毒2.2.禽流

24、感病毒禽流感病毒3.3.甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒第五十一頁，課件共81頁一、朊病毒及其檢驗一、朊病毒及其檢驗n 朊病毒朊病毒(prion) -傳染性蛋白粒子傳染性蛋白粒子/朊粒朊粒/朊毒體，是一種不同于朊毒體，是一種不同于細菌、病毒或類病毒的在分類上細菌、病毒或類病毒的在分類上尚未尚未定論的病原因子定論的病原因子，其本質(zhì)為由，其本質(zhì)為由正常宿主細胞基因編碼的、構(gòu)象異常的蛋白質(zhì)，稱為正常宿主細胞基因編碼的、構(gòu)象異常的蛋白質(zhì)，稱為朊蛋白朊蛋白(prion protein, PrP)，目前尚未檢出任何核酸成分，是人和動物的傳染性目前尚未檢出任何核酸成分，是人和動物的傳染性海海綿狀腦?。ňd狀腦?。═S

25、Es)的病原體的病原體。 第五十二頁，課件共81頁n （一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)（一）形態(tài)與結(jié)構(gòu)n prion 是一種不含核酸和脂類的疏水性糖蛋白，分子量為是一種不含核酸和脂類的疏水性糖蛋白，分子量為2730103，因此又稱為，因此又稱為 PrP2730。大小。大小30-50nm，電鏡下看，電鏡下看不到病毒粒子，負(fù)染后看到聚集而成的棒狀體，大小不到病毒粒子，負(fù)染后看到聚集而成的棒狀體，大小10-250nm 100-200nm。 n其能在宿主細胞內(nèi)復(fù)制，無免疫性，不誘發(fā)抗體。其能在宿主細胞內(nèi)復(fù)制，無免疫性，不誘發(fā)抗體。 一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性第五十三頁，課件共81頁n1.細胞朊病毒蛋白細胞朊病毒蛋白

26、(cellular PrP, PrPC)：具有：具有42%的的-螺旋，螺旋，3%的的折疊。存在于正常組織及感染動物的組織中，是正?；虻恼郫B。存在于正常組織及感染動物的組織中，是正?；虻漠a(chǎn)物，通產(chǎn)物，通常情況下是無害的常情況下是無害的，對蛋白酶，對蛋白酶K敏感。敏感。 n2. 騷擾型朊病毒蛋白騷擾型朊病毒蛋白(scrapie prion protein , PrPsc)：-螺旋占螺旋占30%，折疊高達折疊高達43%，僅存在于感染動物的組織中，僅存在于感染動物的組織中，與致病和傳染有與致病和傳染有關(guān)，對蛋白酶關(guān)，對蛋白酶K有抗性有抗性。兩種不同的分子構(gòu)型兩種不同的分子構(gòu)型第五十四頁，課件共81

27、頁n 朊病毒顆粒對一些理化因子朊病毒顆粒對一些理化因子 的抵抗力之強，大大高于已知各的抵抗力之強，大大高于已知各類微生物和寄生蟲。類微生物和寄生蟲。 n1.傳染源：感染朊毒體的人和動物。傳染源：感染朊毒體的人和動物。 n2.傳染途徑：消化道傳播。傳染途徑：消化道傳播。n醫(yī)源性傳播：腦外科手術(shù)、器官移植等遺傳醫(yī)源性傳播：腦外科手術(shù)、器官移植等遺傳。 （二（二）抵抗力抵抗力 （三）致病性（三）致病性第五十五頁，課件共81頁n 瘋牛病瘋牛?。号：＞d狀腦病。病牛臨床表現(xiàn)為步態(tài)不穩(wěn)、共濟失調(diào)、：牛海綿狀腦病。病牛臨床表現(xiàn)為步態(tài)不穩(wěn)、共濟失調(diào)、搔癢、煩躁不安等神經(jīng)癥狀。搔癢、煩躁不安等神經(jīng)癥狀。 n綿羊癢

28、?。壕d羊癢?。核茄虻囊环N它是羊的一種慢性致死性疾病慢性致死性疾病，病羊具有中樞神經(jīng)，病羊具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性、劇癢、共濟失調(diào)、高死亡率等特點。系統(tǒng)變性、劇癢、共濟失調(diào)、高死亡率等特點。 n克克- -雅氏?。貉攀喜。喝说囊环N人的一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。其臨床癥狀和病理。其臨床癥狀和病理組織學(xué)變化與瘋牛病、綿羊癢病十分相似。組織學(xué)變化與瘋牛病、綿羊癢病十分相似。 3.3.導(dǎo)致疾病導(dǎo)致疾病第五十六頁，課件共81頁n共同特征：潛伏期長（可達數(shù)年至數(shù)十年），一旦發(fā)病即呈共同特征：潛伏期長（可達數(shù)年至數(shù)十年），一旦發(fā)病即呈慢性進行性發(fā)展，最終死亡。慢性進行性發(fā)展，最終死亡。n 第五

29、十七頁，課件共81頁nPrPC轉(zhuǎn)變?yōu)檗D(zhuǎn)變?yōu)镻rPSC是是疾病發(fā)生的基本條件疾病發(fā)生的基本條件，PrPSC在中樞神經(jīng)系在中樞神經(jīng)系統(tǒng)細胞內(nèi)聚集，導(dǎo)致統(tǒng)細胞內(nèi)聚集，導(dǎo)致神經(jīng)元的破壞神經(jīng)元的破壞。 腦組織病理學(xué)特點：腦組織病理學(xué)特點：中樞神經(jīng)細胞空泡化、彌漫性神經(jīng)細胞缺失、中樞神經(jīng)細胞空泡化、彌漫性神經(jīng)細胞缺失、膠質(zhì)細胞增生、淀粉樣斑塊形成、腦組織海綿狀改變；膠質(zhì)細胞增生、淀粉樣斑塊形成、腦組織海綿狀改變；PrPSc聚集。聚集。 4.發(fā)病機理發(fā)病機理 第五十八頁，課件共81頁n 1.1.免疫組化技術(shù)免疫組化技術(shù) n 取取可疑患者的腦組織或非神經(jīng)組織切片可疑患者的腦組織或非神經(jīng)組織切片，經(jīng)脫水性或水解

30、性高壓消，經(jīng)脫水性或水解性高壓消毒、甲酸和硫氰酸胍處理，使其毒、甲酸和硫氰酸胍處理，使其感染性消失并破壞感染性消失并破壞PrPCPrPC后后，再用單克，再用單克隆抗體檢測對上述處理有隆抗體檢測對上述處理有抗性的抗性的PrPSCPrPSC。 朊病毒的檢驗朊病毒的檢驗 第五十九頁，課件共81頁n 組織印跡法檢測組織印跡法檢測PrPSCPrPSC是一種簡單而敏感的診斷方法。是一種簡單而敏感的診斷方法。n方法：方法： 首先將待測的樣品印跡在首先將待測的樣品印跡在固相載體固相載體硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜上，上，用病毒的用病毒的家兔特異性抗體（家兔特異性抗體（IgGIgG）與吸附在固相載體上的病毒進行與吸

31、附在固相載體上的病毒進行特異性反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的羊抗兔第二抗體進行反應(yīng)，最后用酶特異性反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的羊抗兔第二抗體進行反應(yīng)，最后用酶的反應(yīng)底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顏色的變化，確定病毒的感染程的反應(yīng)底物進行顯色反應(yīng)，根據(jù)顏色的變化，確定病毒的感染程度。度。 2.2.免疫印跡技術(shù)免疫印跡技術(shù)第六十頁，課件共81頁n 從病人從病人外周血白細胞中提取外周血白細胞中提取DNA，對，對20號染色體號染色體prion基基因進行分子遺傳學(xué)分析因進行分子遺傳學(xué)分析。 3. 3.基因分析基因分析第六十一頁，課件共81頁 第一節(jié)第一節(jié) 禽流感病毒禽流感病毒（二）（二）n禽流感是禽流行性感冒（禽流感是禽流行性感冒（

32、AvianInfluenza，AI）的簡稱，）的簡稱，這是一種由這是一種由甲型流感病毒甲型流感病毒的一種亞型引起的傳染性疾病綜合征，的一種亞型引起的傳染性疾病綜合征，被國際獸疫局定為被國際獸疫局定為類傳染病類傳染病，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。，又稱真性雞瘟或歐洲雞瘟。 第六十二頁，課件共81頁 1.形態(tài)學(xué)特點形態(tài)學(xué)特點n禽流感病毒是禽流感病毒是正粘病毒，正粘病毒，流感病毒屬的一流感病毒屬的一個成員。個成員。n禽流感病毒禽流感病毒具有具有A型抗原型抗原，屬于，屬于A型流感病型流感病毒，列為禽流感病毒類。毒，列為禽流感病毒類。一、生物學(xué)特性一、生物學(xué)特性 第六十三頁，課件共81頁n流感病毒流感病毒分

33、為三個不同的抗原型分為三個不同的抗原型，即，即A A、B B、C C三型。其中三型。其中B B、C C兩型僅兩型僅能對人致病能對人致病，A A型可對人、豬、馬和禽致病。型可對人、豬、馬和禽致病。n依據(jù)病毒表面的依據(jù)病毒表面的兩種糖蛋白血凝素兩種糖蛋白血凝素HA和神經(jīng)氨酸酶和神經(jīng)氨酸酶NA可將可將A型流感病毒分成若干亞型。目前已有型流感病毒分成若干亞型。目前已有15種種HA（H1-H15)和和9種種NA(N1-N9)。 2.禽流感病毒的分型禽流感病毒的分型第六十四頁，課件共81頁n對熱的抵抗力較低，對熱的抵抗力較低，6530分鐘，分鐘，1002分鐘即滅活，普分鐘即滅活，普通消毒劑能很快將它殺死。

34、通消毒劑能很快將它殺死。n低溫凍干或甘油保存可使病毒存活多年。低溫凍干或甘油保存可使病毒存活多年。 3.抵抗力抵抗力第六十五頁，課件共81頁n禽流感在家禽中以禽流感在家禽中以雞和火雞雞和火雞及某些野禽的易感性最高，并呈急及某些野禽的易感性最高，并呈急性致死性傳染病。性致死性傳染病。n鴨、鵝及其它水禽類的易感性較差，多為隱性感染或帶鴨、鵝及其它水禽類的易感性較差，多為隱性感染或帶毒，有時也能大批死亡。鴿子可帶毒，但很少自然發(fā)病。毒，有時也能大批死亡。鴿子可帶毒，但很少自然發(fā)病。 4.4.流行病學(xué)流行病學(xué)第六十六頁，課件共81頁n禽流感的癥狀極為復(fù)雜，有禽流感的癥狀極為復(fù)雜，有最急性、急性、亞急性

35、及隱性感染等。最急性、急性、亞急性及隱性感染等。n潛伏期一般較短，通常為潛伏期一般較短，通常為4-5天，體溫急劇上升至天，體溫急劇上升至43.3-44.4，精，精神沉郁、拒食、病雞很快陷于昏睡狀態(tài)，有些頸部出現(xiàn)向后扭轉(zhuǎn)神沉郁、拒食、病雞很快陷于昏睡狀態(tài)，有些頸部出現(xiàn)向后扭轉(zhuǎn)的神經(jīng)癥狀。病雞多呈急性死亡，有的也可能的神經(jīng)癥狀。病雞多呈急性死亡，有的也可能出現(xiàn)呼吸道癥狀，出現(xiàn)呼吸道癥狀，咳嗽、打噴嚏，氣管出現(xiàn)咯音，流淚咳嗽、打噴嚏，氣管出現(xiàn)咯音，流淚等癥狀，羽毛蓬松，產(chǎn)蛋率下等癥狀，羽毛蓬松，產(chǎn)蛋率下降，死亡率高低不等。降，死亡率高低不等。 5.5.臨床癥狀和病理變化臨床癥狀和病理變化第六十七頁，

36、課件共81頁n 1.病原的分離病原的分離n病原的分離和鑒定可以從病原的分離和鑒定可以從活體或尸體分離病毒?；铙w或尸體分離病毒。n用棉拭子法?？蓮幕铙w的氣管和泄殖腔中分離到病毒，可用用棉拭子法?？蓮幕铙w的氣管和泄殖腔中分離到病毒，可用不同大小的棉拭子擦取氣管或泄殖腔，然后將拭子不同大小的棉拭子擦取氣管或泄殖腔，然后將拭子放入滅菌的放入滅菌的保存液保存液2550%甘油鹽水、肉湯或甘油鹽水、肉湯或1000u/ml青霉素和青霉素和10mg/mL鏈霉鏈霉素的細胞維持液中。素的細胞維持液中。n病料的采取時間病料的采取時間：一般在一般在感染初期或發(fā)病急性期采取感染初期或發(fā)病急性期采取。如轉(zhuǎn)為后期。如轉(zhuǎn)為后期

37、則因機體已形成足夠的抗體而不易分離到病毒則因機體已形成足夠的抗體而不易分離到病毒. 二、診斷二、診斷第六十八頁，課件共81頁n通常用通常用雞胚雞胚來進行。來進行。n接種接種9-10日齡雞胚尿囊腔，繼續(xù)孵育日齡雞胚尿囊腔，繼續(xù)孵育48-72h。n如材料中含有病毒時，則接種如材料中含有病毒時，則接種48h雞胚死亡，但在多數(shù)情況下雞胚死亡，但在多數(shù)情況下初代分離時雞胚多不死，為此需將經(jīng)初代分離時雞胚多不死，為此需將經(jīng)72h未死的雞胚置冰箱內(nèi)凍死未死的雞胚置冰箱內(nèi)凍死后，收集尿囊液作第二代接種。如第二代接種的雞胚仍不死亡，即可后，收集尿囊液作第二代接種。如第二代接種的雞胚仍不死亡，即可判判定分離病毒為

38、陰性定分離病毒為陰性。 2.病毒分離病毒分離第六十九頁，課件共81頁三、介紹高致病性禽流感的其他知識三、介紹高致病性禽流感的其他知識n鑒定鑒定高致病性禽流感的標(biāo)準(zhǔn)高致病性禽流感的標(biāo)準(zhǔn): 按照國際標(biāo)準(zhǔn)，按照國際標(biāo)準(zhǔn)，能引起接種雞死亡能引起接種雞死亡75以上的分離株，是高致病性毒株。以上的分離株，是高致病性毒株。盡管接種雞是確定致病的盡管接種雞是確定致病的“黃金標(biāo)準(zhǔn)黃金標(biāo)準(zhǔn)”，但它不能反應(yīng)致死率小于，但它不能反應(yīng)致死率小于75%的的H5或或H7亞型病毒的潛在致病力。因此亞型病毒的潛在致病力。因此0IE(國際獸疫局國際獸疫局根據(jù)科根據(jù)科學(xué)家的建議，推出新鑒定標(biāo)準(zhǔn)。學(xué)家的建議，推出新鑒定標(biāo)準(zhǔn)。 第七十

39、頁，課件共81頁n 1 .任何任何分離到分離到A型流感病毒型流感病毒，用，用0.2mL1:10稀釋的無菌尿囊稀釋的無菌尿囊液靜脈或肌肉注射液靜脈或肌肉注射8只只48周齡易感雞，周齡易感雞，10天內(nèi)的死亡率天內(nèi)的死亡率不低于不低于75%。第七十一頁，課件共81頁2.對所對所有低致病的有低致病的H5、H7毒株毒株，血凝素切割位點的氨基酸，血凝素切割位點的氨基酸序列與高致病性禽流感病毒一致。序列與高致病性禽流感病毒一致。 3.H5、H7以外的以外的A型流感病毒，可以致死型流感病毒，可以致死15只雞，在缺乏胰只雞，在缺乏胰蛋白酶的情況下蛋白酶的情況下,能在細胞上生長形成蝕斑。能在細胞上生長形成蝕斑。第

40、七十二頁，課件共81頁禽流感的傳播途徑是什么？禽流感的傳播途徑是什么？n禽流感的傳播禽流感的傳播：有病禽和健康禽直接接觸；病毒污染物間接接觸。：有病禽和健康禽直接接觸；病毒污染物間接接觸。n禽流感病毒存在于病禽和感染禽的禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽體消化道、呼吸道和禽體臟器組臟器組織中。健康禽通過呼吸道和消化道感染，引起發(fā)病?？椫小＝】登萃ㄟ^呼吸道和消化道感染，引起發(fā)病。第七十三頁，課件共81頁如何防范禽流感如何防范禽流感 n禽流感被國際獸疫局定禽流感被國際獸疫局定為類傳染病為類傳染病，且變異后的病毒能威脅人類健，且變異后的病毒能威脅人類健康?？?。n 1.避免直接接觸病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。避免直接接觸病禽及其排泄物、分泌物等能有效防止感染病毒。 n 2.飼養(yǎng)員、屠宰工人等經(jīng)常與活禽密切接觸的人，必須做好保護。飼養(yǎng)員、屠宰工人等經(jīng)常與活禽密切接觸的人，必須做好保護。 n3.注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感病毒的有效措注重自身健康、保持良好的免疫力也是避免感染禽流感病毒的有效措施。施。n4.不要去疫區(qū)旅游。不要去疫區(qū)旅游。n5.食用烹熟的家禽肉、蛋不會傳染禽流感。食用烹熟的家禽肉、蛋不會傳染禽流感。 第七十四頁，課件共8