課題 血紅蛋白的提取和分離

1、會(huì)計(jì)學(xué)1課題課題 血紅蛋白的提取和分離血紅蛋白的提取和分離提問研究“TRIM5”蛋白質(zhì)的第一步是什么？分離和提純TRIM5蛋白質(zhì)。回答 根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附的性質(zhì)、對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來分離不同蛋白質(zhì)。專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 1.了解色譜法、電泳法等分離生物大分子的基本原理。 2.掌握蛋白質(zhì)提取的基本概念。 1.學(xué)習(xí)對(duì)血液中蛋白質(zhì)提取和分離的方法。 2.掌握從復(fù)雜提取中提取生物大分子的基本過程和方法。 本實(shí)驗(yàn)采取實(shí)驗(yàn)與課本相結(jié)合的方法，在實(shí)驗(yàn)中掌握分離大分子物質(zhì)的基本方法。 1.發(fā)揮學(xué)生主觀能動(dòng)性。 2.激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)興趣

2、，培養(yǎng)學(xué)會(huì)僧創(chuàng)新能力。凝膠色譜法的原理和方法。1.樣品的預(yù)處理。2.色譜柱填料的處理。3.色譜柱的裝填。在一定的范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液PH發(fā)生明顯變化的作用叫做，具有緩沖作用的溶液叫做?；A(chǔ)知識(shí)思考：說出說出幾種常見的緩沖對(duì)NaH2PO4 /Na2HPO4H2CO3/NaHCO3緩沖溶液由共軛酸堿對(duì)組成。這一共軛酸堿通常稱為緩沖對(duì)、緩沖劑或緩沖系。常見的緩沖對(duì)主要有三種類型。H2CO3NaHCO3 ；CH3COOHCH3COONaNH3H2ONH4CL ; NH4OHNH4CLNaHCO3Na2CO3 ；NaH2PO4Na2HPO4 緩沖溶液通常由種溶解于水中配制

3、而成。 就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液。 利用模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察和科學(xué)研究。 是一些多糖類構(gòu)成的內(nèi)含許多貫穿的通道的微小多孔的球體。 帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過程。瓊脂糖凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳視頻：電泳的原理試驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物血液緩沖溶液凝膠色譜柱電泳裝置離心機(jī)化學(xué)試劑實(shí)驗(yàn)操作 離心將血液分層 用膠頭吸管吸出黃色血漿 用生理鹽水洗滌。 離心分層；濾紙過濾去除脂溶性沉淀層；分液漏斗分出紅色透明液體。 在蒸餾水和甲苯作用下，紅細(xì)胞破裂釋放。 裝入透析袋并置于磷酸緩沖液中（PH為7.0）透析。取膠皮蓋打孔安裝玻璃管安裝尼龍網(wǎng)安裝100目尼龍紗組裝

4、交聯(lián)葡聚糖凝膠（G-75）A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上B、裝填：將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)C、洗滌平衡：裝填完畢后，用磷酸緩沖液緩沖液充分洗滌平衡12小時(shí)B、待紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端時(shí)，用試管收集流出液，每5ml收集一試管，連續(xù)收集。1.樣品的處理血液離心后分層實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析1.洗滌次數(shù)過少，未能除去血漿蛋白。 2.離心速度過高和時(shí)間過長(zhǎng)，白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞一同沉淀。2.凝膠色譜柱裝填相關(guān)鏈接 。 在一定的范圍內(nèi)，能夠抵制外加少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿，使原來溶液PH值基本保持不變的混合溶液。根據(jù)被分離的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來進(jìn)行分離的方法。帶電粒

5、子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過程。紅細(xì)胞的洗滌血紅蛋白的釋放分離血紅蛋白溶液透析凝膠色譜柱的制作凝膠色譜柱的裝填樣品的加入和洗脫1.2009.山東 細(xì)胞分化是奢侈基因選擇性表達(dá)的結(jié)果。下列屬于奢侈基因的是（ ）A.血紅蛋白基因 B.ATP合成酶基因 C.DNA解旋酶基因 D.核糖體蛋白基因A解析： 題干中給予“細(xì)胞分化是奢侈基因選擇性表達(dá)的結(jié)果”，根據(jù)題干可知，找出分化的細(xì)胞中特殊成分的基因即可，四個(gè)選項(xiàng)中BCD是所有活細(xì)胞中都具體的基因，而A.血紅蛋白基因是分化后的紅細(xì)胞才表達(dá)的基因 2.2003全國(guó)卷理綜 能與人體血液中血紅蛋白結(jié)合的一種有毒氣體是( )A.氯氣 B.氮?dú)?C.一氧化碳 D.甲

6、烷C解析： CO與血紅蛋白結(jié)合，造成CO中毒，即煤氣中毒。填空題1.樣品處理中的血紅蛋白溶液離心后分層順序自上而下是（ ）-（ ）-（ ）-（ )。有機(jī)溶劑脂類物質(zhì)紅細(xì)胞破碎物沉淀血紅蛋白溶液2.一分子血紅蛋白最多可攜帶( ) O2分子數(shù)和（）CO2分子數(shù)。個(gè)個(gè)選擇題1. 隨著人類跨入蛋白質(zhì)組時(shí)代，對(duì)蛋白質(zhì)的研究和應(yīng)用越來越深入，首先要做的一步是（）A. 弄清各種蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)B. 弄清各種蛋白質(zhì)的功能C. 弄清各種蛋白質(zhì)的合成過程D. 獲得高純度的蛋白質(zhì)2. 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是（ ）A. 相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)B.

7、相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)C. 相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)D. 二者根本無法比較A簡(jiǎn)答題 1.人們用雞的紅細(xì)胞提取DNA，用人(豬、牛、羊）的紅細(xì)胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 答： 雞的紅細(xì)胞具有細(xì)胞核，含有DNA，便于進(jìn)行DNA的提取，人的紅細(xì)胞無細(xì)胞核，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，血紅蛋白含量豐富便于提取血紅蛋白。2. 蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？ 答： 根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度和吸附的性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來分離不同蛋白質(zhì)。 3. 高溫滅菌和酒精滅菌分別利用蛋白質(zhì)的何種作用，作用

8、結(jié)果是什么被破壞？ 答： 兩者都利用了蛋白質(zhì)的變性作用，破壞了其空間結(jié)構(gòu)。1.凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理是怎樣的？ 答：凝膠色譜法也稱為分配色譜法，它是根據(jù)分子量的大小分離蛋白質(zhì)的方法之一。 所用的凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體，這些小球體大多數(shù)是由多糖類化合物構(gòu)成，小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，當(dāng)一個(gè)含有各種分子的樣品溶液緩慢流經(jīng)時(shí)，各分子在色譜柱內(nèi)進(jìn)行兩種不同的運(yùn)動(dòng)，即垂直向下的運(yùn)動(dòng)和無規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)。 相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動(dòng)速度較快； 相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長(zhǎng)，移動(dòng)速度較慢。 因

9、此，樣品中相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出，相對(duì)分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對(duì)分子質(zhì)量最小的分子最后流出，這種現(xiàn)象又叫分子篩現(xiàn)象。 此外，凝膠本身具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，相對(duì)分子質(zhì)量大的分子通過這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，相對(duì)分子質(zhì)量大的分子通過這種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上的空隙時(shí)阻力大，而相對(duì)分子質(zhì)量小的分子通過時(shí)阻力小，因此不同分子量的蛋白質(zhì)分子可以獲得分離。2.什么是緩沖溶液？它的作用是什么？ 答： 在一定范圍內(nèi)，能對(duì)抗外來少量強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或稍加稀釋不引起溶液pH發(fā)生明顯變化的作用叫緩沖作用。緩沖溶液的作用是維持反應(yīng)體系的pH不變。在生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)過程都是在精確的pH 下進(jìn)行的受到氫離子濃度的嚴(yán)格調(diào)控。 為了在實(shí)

10、驗(yàn)室條件下精確的模擬生物體內(nèi)的天然環(huán)境，就必須保持體外生物化學(xué)反應(yīng)過程有與體內(nèi)過程完全相同的PH。 具有緩沖作用的溶液叫做緩沖溶液。緩沖溶液通常是由一或兩種化合物（緩沖劑）溶解于水中制得的，調(diào)節(jié)緩沖劑的配比就可制得不同pH范圍的緩沖液。3.電泳及其原理是什么？ 答：電泳是指帶電粒子在電場(chǎng)的作用下發(fā)生遷移的過程。 許多重要的生物大分子，如氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、核苷酸、核酸等都具有可解離基團(tuán)，它們?cè)谀硞€(gè)特定的pH下會(huì)帶上正電或負(fù)電； 在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極方向移動(dòng)。電泳技術(shù)就是在電場(chǎng)的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、形狀等性質(zhì)的差異，使帶

11、電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達(dá)到對(duì)樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。4.你能描述血紅蛋白分離的完整過程嗎？ 答：血紅蛋白提取和分離的程序可分為四大步，包括：樣品處理、粗分離、純化和純度鑒定。 首先通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、離心等操作收集到血紅蛋白溶液，即樣品的處理； 再經(jīng)過透析去除分子量較小的雜質(zhì)，即樣品的粗分離； 然后通過凝膠色譜法將相對(duì)分子質(zhì)量大的雜質(zhì)蛋白除去，即樣品的純化； 最后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行純度鑒定。 5. 與其它真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞有什么特點(diǎn)？這一特點(diǎn)對(duì)你進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離有什么意義？ 答：血紅蛋白是有色蛋白，因此在凝膠色譜分離時(shí)可以通過觀察顏色來判斷什么時(shí)候應(yīng)該收集洗

12、脫液。這使血紅蛋白的分離過程非常直觀，大大簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作。專題五 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)凝膠色譜法的原理和方法。1.樣品的預(yù)處理。2.色譜柱填料的處理。3.色譜柱的裝填。 緩沖溶液通常由種溶解于水中配制而成。 就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液。 利用模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察和科學(xué)研究。帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過程。瓊脂糖凝膠電泳聚丙稀酰胺凝膠電泳交聯(lián)葡聚糖凝膠（G-75）A、固定：將色譜柱裝置固定在支架上B、裝填：將凝膠懸浮液一次性的裝填入色譜柱內(nèi)C、洗滌平衡：裝填完畢后，用磷酸緩沖液緩沖液充分洗滌平衡12小時(shí)解析： 題干中給予“細(xì)胞分化是奢侈基因選擇性表達(dá)的結(jié)果”，根據(jù)題干可知，找出分化的細(xì)胞中特殊成分的基因即可，四個(gè)選項(xiàng)中BCD是所有活細(xì)胞中都具體的基因，而A.血紅蛋白基因是分化后的紅