天然藥物化學(xué)第六章黃酮類化合物ppt課件

1、第六章第六章 黃酮類化合物黃酮類化合物知識識要求： 掌握黃酮類黃酮類化合物的根本構(gòu)構(gòu)造、構(gòu)構(gòu)造類類型、理化性質(zhì)質(zhì)、提取分別別的方法 熟習(xí)黃酮類習(xí)黃酮類化合物的性狀狀和鑒鑒定的根本知識識 了解紫外光譜譜、核磁共振譜譜在黃酮類黃酮類化合物構(gòu)構(gòu)造鑒鑒定中的運(yùn)運(yùn)用。才干要求; 熟練練掌握槐米中黃酮類黃酮類化合物的提取技術(shù)術(shù) 學(xué)會運(yùn)學(xué)會運(yùn)用化學(xué)學(xué)方法、色譜鑒譜鑒定黃酮類黃酮類化合物的操作技術(shù)術(shù) 黃酮類化合物廣泛存在于自然界，其數(shù)量之黃酮類化合物廣泛存在于自然界，其數(shù)量之多位于天然酚性化合物之首。多位于天然酚性化合物之首。 主要分布在雙子葉植物及裸子植物中。主要分布在雙子葉植物及裸子植物中。 多與糖結(jié)合成

2、苷，少部分以游離方式存在。多與糖結(jié)合成苷，少部分以游離方式存在。 因大部分呈黃色并具有酮基，故稱為黃酮因大部分呈黃色并具有酮基，故稱為黃酮 第一節(jié)第一節(jié) 構(gòu)造類型構(gòu)造類型 兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)A與與B環(huán)經(jīng)過中央三碳鏈環(huán)經(jīng)過中央三碳鏈相互銜接相互銜接 6O5432187654321分類根據(jù)：分類根據(jù)： 三碳鏈氧化程度三碳鏈氧化程度 B B環(huán)苯基銜接位置環(huán)苯基銜接位置2-2-或或3-3-位位 三碳鏈能否構(gòu)成環(huán)狀三碳鏈能否構(gòu)成環(huán)狀6C-3C-6CA AB BC C黃酮類flavonesOOHOOHOHOHluteolin木犀草素，存在于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌木犀草素，存在

3、于忍冬藤、菊花、浮萍中，具有抗菌作用。作用。 黃酮醇類黃酮醇類 槲皮素(quercetin)具有抗炎、止咳祛痰等作用。降低血壓、加強(qiáng)毛細(xì)血管抵抗力、擴(kuò)張冠狀動脈； 蘆丁(rutin)是槲皮素的O蕓香糖苷。用于治療毛細(xì)管脆弱引起的出血病，并用作高血壓及動脈硬化的輔助治療劑。RUTINOOOHHOOHOHOrutinoseOOOHHOOHOHOHQUERCETIN蘆丁蘆丁槲皮素槲皮素 豆科植物 槐中藥槐米中含有蘆丁和槲皮素。二氫黃酮類二氫黃酮類OOOHOCH3rutinose O橙皮苷(hesperidin),具有Vp樣作用4二氫黃酮醇類二氫黃酮醇類 水飛薊素是二氫黃酮醇與苯丙素衍生物縮合成的黃酮

4、木脂素類成分。具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎及肝硬化，代謝中毒性肝損傷。 OOHOOHOHOOCH2OHOHOCH3水飛薊素(SILYBIN)5查爾酮類查爾酮類 查爾酮為苯甲醛縮苯乙酮類化合物，其鄰羥基衍生物可視為二氫黃酮的異構(gòu)體，二者可相互轉(zhuǎn)化。查耳酮654321654321OOHHOOOHO鄰 羥 基 查 耳 酮二 氫 黃 酮 二氫黃酮的吡喃酮環(huán)芳香二氫黃酮的吡喃酮環(huán)芳香性低，在堿的作用下易開環(huán)生性低，在堿的作用下易開環(huán)生成成6-羥基查耳酮，由無色轉(zhuǎn)為羥基查耳酮，由無色轉(zhuǎn)為深黃色，后者經(jīng)酸化又能轉(zhuǎn)化深黃色，后者經(jīng)酸化又能轉(zhuǎn)化為原來的二氫黃酮。為原來的二氫黃酮。 紅花在開花初期，花冠呈淡

5、黃色；開花中期，花紅花在開花初期，花冠呈淡黃色；開花中期，花冠呈深黃色；開花后期或采收枯燥過程中由于酶的作冠呈深黃色；開花后期或采收枯燥過程中由于酶的作用，氧化成紅色。用，氧化成紅色。SO2氧化酶異構(gòu)化醌式紅花苷(紅色)紅花苷(carthamone)(黃色)新紅花苷(neo-carthamin)(無色)OHOOOOglcOHOHOHOHOOglcOHOOHOHOOglcOH第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的查耳酮類植物成分第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的查耳酮類植物成分6異黃酮類異黃酮類 (isoflavones) 取代基7,4-二OH4-OH, 7-glc7,4-二OH,8-C-glc化合物名稱大豆素大豆苷葛根素OOHOOH 主要存

6、在于豆科、鳶尾科等植物中。主要存在于豆科、鳶尾科等植物中。 如葛根主要含有以下幾種異黃酮類成分。如葛根主要含有以下幾種異黃酮類成分。葛根總黃酮具有擴(kuò)冠、添加冠脈流量及降低心葛根總黃酮具有擴(kuò)冠、添加冠脈流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素具有類似罌粟堿的解肌耗氧量等作用。大豆素具有類似罌粟堿的解痙作用。痙作用。 大豆苷、葛根素及大豆素均能緩解高血壓大豆苷、葛根素及大豆素均能緩解高血壓患者的頭痛等病癥?；颊叩念^痛等病癥。7 7二氫異黃酮類二氫異黃酮類/ /紫檀素類紫檀素類紫檀素OOOOCH3O8 8雙黃酮類雙黃酮類 由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚物，多分布于裸子植物中。銀杏中含有多種雙黃酮，如銀杏

7、素。GINKGETINOOOHCH3OOCH3OHHOOHOO銀杏葉片舒血寧片銀杏葉片舒血寧片 作用與用途 活血化瘀，通脈舒絡(luò)。用于動脈硬化及高血壓病所致的冠狀動脈供血不全、心絞痛，心肌堵塞、腦血管痙攣等以及動脈血管供血不良所引起的疾患. 銀杏葉片提取物被法國、德國列為降血壓特效藥、天然藥品；被日本列為抗衰老、治老年癡呆癥特效藥品。 9花樣素類花樣素類 使花、葉、果、莖等呈現(xiàn)藍(lán)、紫、紅等顏色的色素。以苷的方式存在于細(xì)胞液中，經(jīng)水解可生成苷元花樣素及糖。矢車菊苷元(蘭色)花青素母核OHOOHOHOHO10黃烷黃烷-3-醇醇(flavan-3-ols)及黃烷及黃烷-3，4-二醇二醇(flavan-

8、3,4-diols)類類(+)兒茶素(-)表兒茶素OHOOHOHHOHHOHHOHOOHOHOHOHH11雙苯吡酮類雙苯吡酮類87654321異芒果素(isomengiferin)OOHOHOOHOHglc水龍骨科植物石韋中的異芒果素具有止咳祛痰的效果。水龍骨科植物石韋中的異芒果素具有止咳祛痰的效果。 12橙酮類橙酮類OCHHOOHOHO硫磺菊素硫磺菊素(sulphuretin)(sulphuretin)黃酮類化合物的生物活性黃酮類化合物的生物活性 1. 對心血管系統(tǒng)的作用 Vp樣作用：蘆丁、橙皮苷等有Vp樣作用，能降低血管脆性及異常通透性，可用作防治高血壓及動脈硬化的輔助治療劑。 擴(kuò)冠作用：

9、蘆丁、槲皮素、葛根素、人工合成的力可定。 降血脂及膽固醇：木犀草素 治療冠心病或活血化淤類中藥含有黃酮類治療冠心病或活血化淤類中藥含有黃酮類蘆丁片蘆丁片 蘆丁是從中國所獨(dú)有的國槐的花蕾中提取的植物藥，也稱維生素P，具有降低毛細(xì)血管的異常通透性和脆性的作用，是心腦血管維護(hù)藥，國內(nèi)用于心腦血管藥品制劑的主要成分，國外還大量用于食品添加劑和化裝品。 2. 抗肝臟毒作用 從水飛薊種子中得到的水飛薊素具有保肝作用，用于治療急、慢性肝炎、肝硬化及多種中毒性肝損傷。 +-兒茶素(catergen)也可抗肝臟毒作用，治療脂肪肝及因半乳糖胺或四氯化碳等引起的中毒性肝損傷。水水飛飛薊薊 3. 抗炎 蘆丁及其衍生物

10、羥乙基蘆丁、二氫槲皮素等具抗炎作用。 4. 抗菌及抗病毒作用 如木樨草素、黃芩苷、黃芩素 5. 解痙作用 異甘草素、大豆素：解除平滑肌痙攣； 大豆苷、葛根素及葛根總黃酮可緩解高血壓患者的頭痛等病癥； 杜鵑素、川陳皮素、槲皮素、山奈酚、芫花素、羥基芫花素：止咳祛痰。 6. 雌性激素樣作用 大豆素(daidzein)等異黃酮具有雌性激素樣作用，能夠與它們的構(gòu)造與己烯雌酚構(gòu)造類似。己 烯 雌 酚HOOH大 豆 素 (dadzein)OOHOOH7. 去除人體自在基作用去除人體自在基作用 黃酮類化合物多具有酚羥基，易氧化成醌類而提供氫離子，故有顯著的抗氧化特點(diǎn)。 另外還有降血脂、血糖，抗動脈粥樣硬化及

11、抗癌抗突變等作用。第二節(jié)第二節(jié) 理化性質(zhì)及顏色反響理化性質(zhì)及顏色反響 一、性狀 1. 多為結(jié)晶性固體，少為如黃酮苷類無定形粉末。 2. 旋光性：游離苷元中，除二氫黃酮、二氫黃酮醇、黃烷、黃烷醇有旋光外，其他無旋光性。 苷類由于構(gòu)造中引入糖的分子，均有旋光性，且多為左旋。 3. 顏色： 與 分子中能否存在交叉共軛體系 助色團(tuán)的數(shù)目 取代基的位置有關(guān)。 色原酮部分本來無色，但在2位引入苯環(huán)后，即構(gòu)成交叉共軛體系，且經(jīng)過電子的轉(zhuǎn)移，重排，使共軛鏈延伸，而表現(xiàn)出顏色。OOOOOO 黃酮、黃酮醇及苷類 灰黃-黃色 查耳酮 黃-橙黃色 二氫黃酮、二氫黃酮醇 無色 異黃酮 微黃色 其中，黃酮、黃酮醇及苷類、

12、查耳酮等因分子中存在交叉共軛體系，在7,4位引入-OH, -OCH3等供電子基團(tuán)那么促進(jìn)電子移位、重排，使化合物顏色加深。 花樣苷及其苷元的顏色隨pH的不同而改動：呈現(xiàn)紅pH8.5 二、溶解度二、溶解度 1. 游離苷元難溶或不溶于水，易溶于MeOH, EtOH, EtOAc, Et2O 黃酮、黃酮醇及查耳酮是平面型分子，分子堆砌嚴(yán)密，分子間引力較大，更難溶于水。 R=H，二氫黃酮，二氫黃酮R=OH，二氫黃酮醇，二氫黃酮醇O OO OH HR R23二氫黃酮、二氫黃酮醇是非平面型分子，二氫黃酮、二氫黃酮醇是非平面型分子，分子陳列不嚴(yán)密，分子間引力降低，有利分子陳列不嚴(yán)密，分子間引力降低，有利于水

13、分子進(jìn)入，對水的溶解度較大。于水分子進(jìn)入，對水的溶解度較大。 花樣苷元花青素類雖系平面型分子，但因以離子方式存在，具有鹽的通性，故親水性較強(qiáng)，水溶度較大?；ㄇ嗨囟潼S酮X -或OH -OORHOH 黃酮苷元引入羥基越多，水溶性越強(qiáng)，羥基甲基化后，那么添加在有機(jī)溶劑中的溶解度。 如普通黃酮類化合物(多羥基化合物)不溶于石油醚中，可與脂溶性雜質(zhì)分開，但川陳皮素5,6,7,8,3,4-六甲氧基黃酮卻可溶于石油醚。 2. 黃酮類化合物的羥基苷化后，水溶性相應(yīng)增大，而在有機(jī)溶劑中的溶解度相應(yīng)減小。黃酮苷普通易溶于H2O, MeOH, EtOH等，難溶或不溶于苯，氯仿等。 同一苷元，同一苷元，3-O-葡萄

14、糖苷的水溶度葡萄糖苷的水溶度7-O-葡萄糖苷葡萄糖苷立體妨礙使分子的平面性降低立體妨礙使分子的平面性降低三、酸堿性三、酸堿性 1. 酸性 黃酮類化合物多具有酚羥基而呈酸性，可溶于堿性水液，吡啶，甲酰胺及二甲基甲酰胺。 酸性強(qiáng)弱順序：7, 4-二羥基 7, 或4羥基 普通酚羥基5-羥基 此性質(zhì)可用于提取、分別及鑒定任務(wù)。374664736473OHOOOOHHOHO+OHOHO-O+OHO-HO5,7,4-三羥基黃酮 2. 堿性 -吡喃酮上的1-位氧原子上有未共用電子對，表現(xiàn)微弱的堿性，可與強(qiáng)無機(jī)酸如濃硫酸，鹽酸生成yang鹽，但極不穩(wěn)定，加水即可分解。 黃酮類化合物溶于濃硫酸中生成的yang鹽

15、常表現(xiàn)特殊的顏色，可用于鑒別。H2OHClClOOHOO四、顯色反響四、顯色反響 ( (一一) )復(fù)原反響復(fù)原反響 1. 鹽酸-鎂粉鹽酸-鋅粉反響 黃酮、黃酮醇及二氫黃酮、二氫黃酮醇類在鹽酸-鎂粉作用下，易被氫化復(fù)原，迅速生成紅-紫紅個(gè)別有綠-蘭色:將樣品溶于甲醇或乙醇，加少量鎂粉振搖，滴加幾滴濃鹽酸，1-2分鐘內(nèi)必要時(shí)微熱即可出現(xiàn)顏色。多顯橙紅-紫紅色，少數(shù)蘭-紫色，B環(huán)有-OH或OCH3取代時(shí)，顏色隨之加深，查耳酮、橙酮、兒茶素類那么不反響。 花樣素及部分查耳酮、橙酮等在濃鹽酸酸性條件下也會發(fā)生色變，故須先做一空白對照。 2. 四氫硼鈉反響四氫硼鈉反響 與二氫黃酮醇類化合物產(chǎn)生紅-紫色。

16、取樣品10mg溶于甲醇，加NaBH4 10mg，再滴加1%濃鹽酸或濃硫酸，呈紅-紫色。 其他黃酮類化合物均不顯色。二金屬鹽類試劑的絡(luò)合反響二金屬鹽類試劑的絡(luò)合反響 黃酮類化合物分子構(gòu)造中多有3-OH, 4=O; 5-OH, 4=O; 鄰二酚羥基，?？膳c鋁鹽、鉛鹽、鋯鹽、鎂鹽等試劑生成有色絡(luò)合物。OHOH結(jié)果：顏色，沉淀結(jié)果：顏色，沉淀用途：鑒定，構(gòu)造測定，提取分別用途：鑒定，構(gòu)造測定，提取分別OOH45OOHO341. 鋁鹽鋁鹽 1%AlCl3或或Al(NO3)3： 生成絡(luò)合物為黃色生成絡(luò)合物為黃色(max=415nm)，并，并有熒光。有熒光。2. 鋯鹽鋯鹽: 2%二氯氧化鋯甲醇液二氯氧化鋯甲

17、醇液 觀察顏色2%枸櫞酸甲醇液黃色1ml2% ZrOCl210ml甲醇溶樣品0.5-1mg黃色不褪黃色褪去2%枸櫞酸黃色鋯絡(luò)合物 鋯鹽3-OH, 4=O5-OH, 4=O3-OH3-OH，4-4-酮基絡(luò)合物穩(wěn)定性酮基絡(luò)合物穩(wěn)定性5 5OHOH，4-4-酮基絡(luò)合物酮基絡(luò)合物緣由：緣由：ClH2OOHOOHOHOHOOZrO543OHOOOHOHOORutinoseZr OClH2O543 3. 鎂鹽 醋酸鎂甲醇液作顯色劑，可在紙上進(jìn)展。 二氫黃酮醇類顯天藍(lán)色熒光，假設(shè)具有C5-OH，色澤更明顯。而黃酮、黃酮醇及異黃酮類那么顯黃-橙黃-褐色。 4. 氯化鍶氯化鍶(SrCl2) 使具有鄰二酚羥基的黃

18、酮顯綠使具有鄰二酚羥基的黃酮顯綠-棕色棕色-黑黑色沉淀。色沉淀。 5. 氯化鐵氯化鐵(FeCl3) 檢查酚羥基。檢查酚羥基。 多數(shù)黃酮類化合物具有酚羥基，可產(chǎn)生多數(shù)黃酮類化合物具有酚羥基，可產(chǎn)生正反響，生成綠、藍(lán)、黑、紫等顏色。正反響，生成綠、藍(lán)、黑、紫等顏色。6. 6. 鉛鹽鉛鹽 1%PbAc2或堿式醋酸鉛水液。生成黃-紅色沉淀。色澤因羥基數(shù)目及位置不同而異。 醋酸鉛可沉淀具有鄰二酚羥基或兼有3-OH, 4=O或5-OH, 4=O者。 堿式醋酸鉛沉淀才干要大得多，可沉淀普通酚類化合物。 據(jù)此不僅可用于鑒定，也可用于提取及分別任務(wù).三硼酸顯色反響三硼酸顯色反響 1 具有以下構(gòu)造5-羥基黃酮，2

19、-羥基查耳酮 2 有無機(jī)酸或有機(jī)酸存在在草酸存在下，顯黃色并帶綠色熒光。在枸櫞酸丙酮存在條件下，只顯黃色而無熒光。 CCCOOH四堿性試劑顯色反響 日光及紫外光下，經(jīng)過紙斑反響，察看樣品用堿性試劑處置后的色變情況。 1. 二氫黃酮類易在堿液中開環(huán)，轉(zhuǎn)變成相應(yīng)異構(gòu)體查耳酮類化合物，顯橙-紅色。HOHOHOOO 2. 黃酮醇類在堿液中先呈黃色，通入空氣后變?yōu)樽厣瑩?jù)此可與黃酮類區(qū)別。 3. 黃酮類化合物當(dāng)分子中有鄰二酚羥基取代或3,4-二羥基取代時(shí)，在堿液中不穩(wěn)定，很快氧化，由黃色深紅色綠棕色沉淀。第三節(jié)第三節(jié) 提取分別提取分別一、提取一、提取 黃酮類化合物在花、葉、果等組織中，多以苷的方式存在；

20、在木部鞏固組織中，多以游離苷元方式存在； 根據(jù)化合物極性不同，溶解性不同，采用不同溶劑提取。 1. 苷元 多用CHCl3、Et2O、EtOAc等極性較小溶劑提??；對于多OCH3的成分，用苯、石油醚提取； 對于極性大的成分，如查耳酮、橙酮、雙黃酮、羥基黃酮等，用EtOAc、EtOH、Me2CO、MeOH:H2O(1:1)等溶劑提取。 2. 苷類 水或熱水提取，多糖苷在熱水中溶解度較大，在冷水中溶解度較??； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。 3. 含羥基的苷或苷元，可用堿水提取。 4. 提取花青素類可參與少量酸.常見的提取方法常見的提取方法一一 堿溶酸沉法堿溶酸沉法 適用于含酚羥基的化合

21、物，如槐米中蘆丁的提取。 常用堿液： 飽和石灰水溶液、5%Na2CO3溶液及稀氫氧化鈉溶液等本卷須知： 石灰乳的參與可除去果膠、粘液等水溶性酸性雜質(zhì) 鄰二酚羥基的維護(hù)：堿性條件下，鄰二酚羥基易被氧化，加硼砂維護(hù) 酸堿度不宜過大 強(qiáng)堿：加熱時(shí)易破壞黃酮母核 強(qiáng)酸：生成yang鹽而溶解二、溶劑提取法二、溶劑提取法 1 醇提取法 乙醇和甲醇是最常用的提取溶劑。 60%左右的稀醇提取黃銅苷類 90-95%提取黃酮苷元 石油醚可除去醇提取液中的雜質(zhì)如葉綠素、胡蘿卜素等脂溶性色素2. 水提取法 用熱熱水提取黃銅苷類黃銅苷類 其中蛋白質(zhì)質(zhì)、多糖等大分子水溶性物質(zhì)質(zhì)可以用多倍量的濃濃醇沉淀除去3. 系統(tǒng)統(tǒng)溶劑

22、劑提取法 實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室常用極極性由小到大的溶劑劑依次將將黃酮類黃酮類化合物按相應(yīng)應(yīng)的極極性順順序提取出來來二、分別二、分別一一pHpH梯度萃取法梯度萃取法酸性不同的黃酮苷元的分別酸性不同的黃酮苷元的分別酸性：酸性：7,4- OH7-或或 4-OH 普通普通Ar-OH 5-OH5%NaHCO3 5%Na2CO2 0.2%NaOH 4%NaOH二柱色譜法二柱色譜法1、聚酰胺層析： 其原理是酰胺羰基與黃酮酚羥基構(gòu)成氫鍵締合而吸附，吸附才干與酚羥基多少、位置及氫鍵締合力大小有關(guān)。 吸 附 洗 脫 劑 解 吸 附 HO+HOCH3OOOCNHOH2CCH2H2CCH2H2CCONHHCH3HOCH3OCN

23、HH2CCH2H2CCH2H2CCONHHOOO 各種溶劑在聚酰胺柱上洗脫才干由弱至強(qiáng)依次為： 水，甲醇，丙酮，氫氧化鈉水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰胺，脲素水溶液。聚酰胺是分別黃酮聚酰胺是分別黃酮的理想吸附劑的理想吸附劑黃酮類化合物從聚酰胺柱洗脫時(shí)有以下規(guī)律：黃酮類化合物從聚酰胺柱洗脫時(shí)有以下規(guī)律：苷元一樣，洗脫先后順序普通為：苷元一樣，洗脫先后順序普通為： 三糖苷三糖苷雙糖苷雙糖苷單糖苷單糖苷苷元苷元母核上添加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢母核上添加羥基，洗脫速度相應(yīng)減慢 羥基位置的影響：具有羰基鄰位羥基黃羥基位置的影響：具有羰基鄰位羥基黃酮比具有對位或間位羥基黃酮先洗酮比具有對位或間位羥基黃酮先洗脫

24、下來脫下來不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序普不同類型的黃酮類化合物，先后流出順序普通是：通是： 異黃酮異黃酮二氫黃酮醇二氫黃酮醇黃酮黃酮黃酮醇黃酮醇OOOHOHHOOHOHOOOHOHHOOHOOOHOHHOOHOOHOOHOHOH分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，分子中芳香核、共軛雙鍵多者吸附力強(qiáng)，故查耳酮往往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。故查耳酮往往較相應(yīng)的二氫黃酮難于洗脫。OOH OO HO HO C H3O HO C H3O HOH OO H 極性挪動相含水極性挪動相含水 溶劑系統(tǒng)洗脫時(shí)溶劑系統(tǒng)洗脫時(shí)有機(jī)溶劑如氯仿有機(jī)溶劑如氯仿一甲醇洗脫時(shí)一甲醇洗脫時(shí) 聚酰胺聚酰胺 非極性固定相非極

25、性固定相 極性固定相極性固定相色譜行為色譜行為 類似反相分配色類似反相分配色譜譜 正相分配色譜正相分配色譜 苷極性苷元苷極性苷元 苷元極性苷苷元極性苷 苷先洗脫 苷元易洗脫苷元易洗脫、硅膠層析、硅膠層析 適于分別異黃酮、二氫黃酮醇及適于分別異黃酮、二氫黃酮醇及高度甲基化或乙醚化的黃酮醇類高度甲基化或乙醚化的黃酮醇類對酚羥基多的黃酮類，如多羥基黃酮及對酚羥基多的黃酮類，如多羥基黃酮及 其苷類，硅膠減活性運(yùn)用其苷類，硅膠減活性運(yùn)用對酚羥基少的黃酮類，如甲基化、乙酰對酚羥基少的黃酮類，如甲基化、乙?；S酮及二氫黃酮、異黃酮，那么無須化黃酮及二氫黃酮、異黃酮，那么無須減活性。減活性。3 3炭粉吸附法炭

26、粉吸附法 適用于苷類的精制任務(wù)。 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，過濾得吸附苷的活性炭粉末。 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/醇洗脫，分步搜集、檢查、合并。 大部分苷類可用7%酚/水洗下，經(jīng)減壓濃縮至小體積，乙醚除酚，余下水層經(jīng)減壓濃縮得較純黃酮苷。4. 4. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝膠分子篩分別利用分子大小不同，用葡聚糖凝膠分子篩分別 分別游離黃酮主要是吸附作用，極性小大洗脫。 分別黃酮苷類，主要是分子篩作用，分子大小洗脫。 總的洗脫順序：糖多的苷糖少的苷游離苷元極性小大 常用洗脫劑：堿性水溶液，含鹽水溶液 醇及含水醇 含水丙酮，甲醇氯仿 第四節(jié)第四節(jié) 鑒定鑒定目前主要采用

27、的方法有：目前主要采用的方法有：與規(guī)范品或與文獻(xiàn)對照與規(guī)范品或與文獻(xiàn)對照PPC或或TLC得到得到的的Rf值值分析對比樣品在甲醇溶液中及參與酸、分析對比樣品在甲醇溶液中及參與酸、堿或金屬鹽類試劑后得到的堿或金屬鹽類試劑后得到的UV光譜光譜1. 1. 硅膠薄層色譜硅膠薄層色譜(TLC)(TLC) 用于弱極性黃酮較好。 展開劑：常用甲苯：甲酸甲酯：甲酸5：4：1； 苯：甲醇95：5或苯：甲醇：冰醋酸35：5：5等。 . . 聚酰胺薄層色譜聚酰胺薄層色譜 適用范圍廣，可分別含游離酚羥基的黃酮或其苷類。 常用展開系統(tǒng)：乙醇:水3:2；丙酮:水1:1等。 顯色劑：紫外光；2%三氯化鋁甲醇液；1%FeCl3

28、 / 1%K3Fe(CN)6(1:1)混合液。 二、紙色譜二、紙色譜 適宜分別鑒定包括苷和苷元的各種黃酮類化合物 苷類成分可采用雙向紙色譜法，第一相展開采用醇性溶劑，如BAW系統(tǒng)正丁醇：醋酸：水4：1：5上層；第二相展開用水性溶劑，如氯仿：醋酸：水3：6：1 苷元那么多采用醇性溶劑。 花樣苷及其苷元，可用含鹽酸或醋酸的溶劑。Rf值與構(gòu)造之間的關(guān)系：值與構(gòu)造之間的關(guān)系：1、醇性展開劑開劑1苷苷元單單糖苷苷雙雙糖苷苷2分子中 羥羥基數(shù)數(shù)目增多，極極性加強(qiáng)， Rf值值相應(yīng)減應(yīng)減小，羥羥基甲基化后，極極性降低， Rf值值增大2、水性展開劑開劑1雙雙糖苷苷單單糖苷苷苷苷元。苷苷元幾乎留于原點(diǎn)， 苷類苷類

29、Rf值值可在0.5以上，且糖鏈鏈越長長，那么么Rf值值越大2平面型黃酮苷黃酮苷元幾乎原點(diǎn)不同，非平面型黃酮苷黃酮苷元因親親水性較較強(qiáng)， Rf值較值較大顯顯色：1日光下察看2紫外燈下察看熒熒光3顯顯色劑顯劑顯色 常用顯顯色劑劑：1%三氯氯化鋁鋁甲醇溶液，氨氨熏、10%碳碳酸鈉鈉水溶液等一、紫外一、紫外- -可見光譜可見光譜 可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置能否含可用于確定黃酮母核類型及確定某些位置能否含有羥基。有羥基。 普通程序：普通程序： 測定樣品在甲醇中的測定樣品在甲醇中的UV譜以了解母核類型；譜以了解母核類型； 在甲醇溶液中分別參與各種診斷試劑后測在甲醇溶液中分別參與各種診斷試劑后測U

30、V譜和可見光譜以了解譜和可見光譜以了解3,5,7,3,4有無羥基及鄰二酚有無羥基及鄰二酚羥基；羥基； 苷類可水解后或先甲基化再水解，再用苷類可水解后或先甲基化再水解，再用上法測苷元的上法測苷元的UV譜以了解糖的銜接位置。譜以了解糖的銜接位置。第五節(jié)第五節(jié) 構(gòu)造測定構(gòu)造測定一黃酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜一黃酮類化合物在甲醇溶液中的紫外光譜 多數(shù)黃酮類化合物由兩個(gè)主要吸收帶組成： 帶I在300-400nm區(qū)間，由B環(huán)桂皮?；到y(tǒng)的電子躍遷所引起；OOOO 帶II在220-280nm區(qū)間，由A環(huán)苯甲酰系統(tǒng)的電子躍遷所引起。OOOO 根據(jù)帶根據(jù)帶I I、帶、帶IIII的峰位及外形或強(qiáng)度，的峰位及

31、外形或強(qiáng)度，推測黃酮類化合物構(gòu)造類型。推測黃酮類化合物構(gòu)造類型。 帶帶II(240-285nm)苯甲苯甲酰系統(tǒng)酰系統(tǒng)帶帶I(300-400nm)桂皮酰系統(tǒng)桂皮酰系統(tǒng)類類 型型說說 明明 240-280304-350黃酮類黃酮類 -OH -OH越多，越多，帶帶I I帶帶IIII越紅移越紅移 帶帶IIII峰位主峰位主要受要受A A環(huán)氧取代環(huán)氧取代程度的影響，程度的影響， B B環(huán)環(huán)3 3,4,4有有-OH-OH基，帶基，帶IIII為雙為雙峰主峰伴肩峰主峰伴肩峰峰328-357黃酮醇類黃酮醇類(3-OR) 352-385黃酮醇類黃酮醇類(3-OH) 245-270270-295300-400異黃酮類異黃酮類二氫黃酮二氫黃酮醇醇B環(huán)上有環(huán)上有-OH, OCH3對帶對帶I影影響不大響不大 220-270340-390或或340-390(Ia) 300-320(Ib)查耳酮查耳酮類類查耳酮查耳酮2-OH使帶使帶I向紅移影向紅移影響大響大370-430(3-4個(gè)小峰個(gè)小峰)橙酮類橙酮類 不不同同類類型型黃黃酮酮類類化化合合物物的的紫紫外外光光譜譜2 2參與診斷試劑后引起的位移及構(gòu)參與診斷試