常用溶液的配制

1、一、常用溶液的配制（一）溶液配制注意事項(xiàng)1 .藥品要有較好的質(zhì)量試劑分為優(yōu)級(jí)純（保證試劑，Guaranteedreagent,G.R.）、分析試劑（Antalyticalreagent,A.R.）化學(xué)純（Chemicalpure,C.P.）和實(shí)驗(yàn)試劑（Laboratoryreagent,L.R.）等等。工業(yè)用的化學(xué)試劑，雜質(zhì)較多，只在個(gè)別情況下應(yīng)用，如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。2 .藥品稱量要精確。3 .配制試劑用水應(yīng)用新鮮的去離子水或雙蒸儲(chǔ)水，比電阻值在50萬(wàn)歐姆以上，pH在5.57.0之間才可應(yīng)用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時(shí)應(yīng)注意此項(xiàng)要求，配制一般化驗(yàn)用溶液只要求用雙蒸儲(chǔ)水或去離子水

2、。4 .配好后的溶液，應(yīng)立即除菌處理（如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物質(zhì)），以防雜菌生長(zhǎng)。（二）0.067（1/15）Mol/L磷酸緩沖液1 .1/15Mol/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（KH2P。4,A.R.）9.08g,用蒸儲(chǔ)水溶解后，傾入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再稀釋至刻度（1000ml）。2 .l/15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無(wú)水磷酸氫二鈉（Na2HPO4,A.R.）9.47g（或者Na2HPO4-2H2O11.87g）用蒸儲(chǔ)水溶解后，放入1000ml容量瓶?jī)?nèi)，再加蒸儲(chǔ)水稀釋至刻度（1000ml）。3.按附表的比例，配制成不同pH值的緩沖溶液。附表1磷酸鹽緩沖液配制法（

3、單位：毫升）1/15Mol/L1/15Mol/LKH2PO4pH1/15Mol/LNa2HPO41/15Mol/LKH2PO4pHNa2HPO45.88.092.07.166.623.45.99.990.17.272.028.06.012.287.87.376.823.26.115.384.77.380.819.26.218.681.47.584.115.96.322.477.67.687.013.06.426.773.37.789.410.66.531.868.27.891.58.56.637.562.57.993.26.86.743.556.58.894.75.36.849.650.48.

4、195.84.26.955.444.68.297.03.07.061.138.98.498.02.00.15Mol/LPB液附表20.15Mol/LPB液配制法PH0.15Mol/LNa2HPO4ml)0.15Mol/LNaH2Po4ml6.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.0Na2HPO42H2O分子量=175.050.15Mol/L26.7g/L。Na2HPO412H2O分子量=358.220.15Mol/L溶液含53.7g/L0NaH2PO4-出。分子量=138.000.15

5、Mol/L溶液含20.7g/L。NaH2PO4-2H2O分子量=156.030.15Mol/L溶液含23.4g/L。(四)0.2Mol/LPB緩沖液附表30.2mol/LPB緩沖液配制法PH0.2Mol/LNa2HPO4ml)0.2Mol/LNaH2Po4ml5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.07.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.75.30.2Mol/LNa2HPO4.2H2O溶液35.61g/LNa2HPO412H2

6、O溶液含71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4-H2O溶液含27.60g/LNaH2PO4-2H2O溶液含31.21g/L欲配0.1Mol/LPB緩沖液則在0.2Mol/LPB緩沖液的基礎(chǔ)上加H?O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時(shí)，則在溶液中加0.85%的NaCl溶液即可。（五）無(wú)鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（PBS）（0.15Mol/LPH7.2）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如為Na2HPO4-12H2O,則為2.89g）KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1000ml去離子水中，完全溶解后，115c高壓滅菌10min15min,存在4c冰箱中備用。此液可用于配制

7、和稀釋細(xì)胞分散劑以及洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物。（六）硼酸鹽緩沖液（Boratesalinebuffer）1.硼酸（H3BO3）0.2Mol/L硼酸：硼酸12.37g力口水至1000ml。2,硼砂（Na2B4O7）0.05Mol/L硼砂：硼砂19.07g加水至1000ml。附表4不同pH的0.2Mol/L硼酸緩沖液配制法PH0.05Mol/L硼砂(ml)0.2Mol/L硼酸(ml)PH0.05Mol/L硼砂0.2Mol/L硼酸(ml)(ml)7.41.09.08.23.56.57.61.58.58.44.55.57.82.08.08.76.04.08.03.07.09.08.02.0（七）巴比妥緩沖液1.

8、 .pH8.2離子強(qiáng)度0.05MO1/L巴比妥緩沖液巴比妥鈉47.6g蒸儲(chǔ)水3000ml1.17NHC155.0ml（1.17NHC1=193m1濃HC1力口1807ml蒸儲(chǔ)水）將4.76g巴比妥鈉溶于3000ml蒸儲(chǔ)水。加1.17NHC155ml。用HC1調(diào)節(jié)pH到8.2,并加蒸儲(chǔ)水至4265ml。2. pH8.40.06MO1/L巴比妥緩沖液巴比妥1.84g巴比妥鈉10.30g加蒸儲(chǔ)水至1000.00ml3. pH8.60.06MO1/L巴比妥緩沖液巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸儲(chǔ)水1000.00ml（八）0.2MO1/L醋酸鹽緩沖液見表附表5附表50.2MO1/L醋酸鹽緩沖液配

9、制法pH0.2MO1/LTris(ml)0.1MO1/LHC1(ml)pH0.2MO1/LTris(ml)0.1MO1/LHC1(ml)23c37c23c37c9.108.952558.067.902527.58.928.76257.57.967.822530.08.758.602510.57.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.57.667.522537.58.408.272517.57.547.402540.08.328.182520.07.367.222542.5（九）三羥甲基甲烷一鹽酸緩沖液（Tris-HC1緩沖液）

10、不同pH,0.05MO1/L25ml0.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷加xml0.1NHCl,加水稀釋至100ml（見下表）附表6Tris-HCl緩沖液配制法PH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)PH0.2Mol/LTris(ml)0.1NHCl(ml)23c37c23c37c9.108.962558.057.902527.58.928.78257.57.967.822530.08.748.602510.07.877.732532.58.628.482512.57.777.632535.08.508.372515.07.667.522537.58.408.272517.57.

11、547.402540.08.328.182520.07.367.222542.58.238.102522.57.207.052545.08.148.002525.025三羥甲基氨基甲烷（Tris）分子量=121.140.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷：Tris24.23g,加水至1000ml。0.1NHCl：取HCl8.6ml,加水至1000ml。（十）0.5Mol/LpH9.5碳酸鹽緩沖液NaHCO33.70gW2CO30.60g溶于600.00ml蒸儲(chǔ)水中即得。不用時(shí)塞緊瓶塞，以免吸U空氣中二氧化碳使PH下降。最好小量配制。（十一）甘油磷酸緩沖液1 .配制pH8.0磷酸緩沖液0.1Mol/L

12、Na2HPO494.50ml0.1NNaH2PO45.50ml混合即可2 .9份甘油與1份pH8.0磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。用途：用于免疫熒光試驗(yàn)。（十二）Hank's液1.貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO4-12H2OKH2PO4葡萄糖0.4%酚紅液雙儲(chǔ)水加至1.52g0.60g4.00g50.00ml100.00ml115c高壓滅菌15min,冰凍保存。2.工作液貯存液1份雙儲(chǔ)水9份115c局壓火菌15min。臨用時(shí)用火菌的5.6%NaHCO3液倜pH值至7.2左右（溶液呈橙紅色）。（十三）蔡（鈉）氏試劑（Nessler'sreagent)

13、配方1:氯化汞6.0g碘化鉀12.4g20%NaOH30ml加蒸儲(chǔ)水至100ml配方2:碘化汞11.5g碘化鉀8g蒸儲(chǔ)水50ml（完全溶解后）過濾，力口20%NaOH50ml。用途：檢測(cè)溶液中氨離子。（十四）阿氏（Alsever's)液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸儲(chǔ)水100ml溶解后，以10%檸檬酸調(diào)節(jié)pH至6.1,過濾，分裝，10磅10min滅菌，4C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡(jiǎn)稱S.P.液或雙抗液）青霉素（40萬(wàn)U）5支鏈霉素（200萬(wàn)Wg）1支分別溶于100ml滅菌無(wú)離子水中或共同溶于200ml滅菌無(wú)離子水中，混合后分裝小瓶，置-10C-20C冰箱保

14、存?zhèn)溆茫?萬(wàn)單位g/ml）。臨用時(shí)，按1%的量加入營(yíng)養(yǎng)液或其他溶液中，最后濃度是青霉素100U/ml,鏈霉素100ug/ml。（十六）洗液（清潔液）配方1:重銘酸鉀蒸儲(chǔ)水濃硫酸將重銘酸鉀加入蒸儲(chǔ)水中,150g300ml3000ml使之自然溶解或水浴溶解，亦可在大增期中加熱溶解，然后慢慢加入濃硫酸，邊加邊攪拌，見發(fā)熱過劇則稍停，冷卻后再繼續(xù)加。此為強(qiáng)洗液。盛清潔液的容器要堅(jiān)固，上加厚玻璃蓋，操作時(shí)要穿橡皮圍裙、長(zhǎng)統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。洗液一旦變綠，表示銘酸已經(jīng)還原，失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱，再加適量重銘酸鉀，又可重新使用。配方2:濃硫酸50%蒸儲(chǔ)水50%重銘酸

15、鉀5%此為中等強(qiáng)度洗液。配方3:重銘酸鉀100g蒸儲(chǔ)水1000ml加熱溶解，冷卻后緩慢加入工業(yè)硫酸100ml此液為弱洗液，為棕紅色。使用此液時(shí)，必須預(yù)先用熱肥皂水將玻璃器皿洗凈,經(jīng)自來(lái)水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效。二、犢牛血清的制備選擇健康犢牛，一般為初生至六個(gè)月齡，最好是剛出生尚未吸乳的公犢牛，采血前12h不予喂飼，僅予水喝。采血時(shí)采用頸動(dòng)脈，動(dòng)脈插管，乳膠管、盛血容器均應(yīng)洗凈滅菌。將采血筒中放入少量Hank's液，將膠管連接至玻璃管（彎）放入瓶口，然后瓶口包以硫酸紙、白布和普通紙，系緊。插管也用硫酸紙包扎系好。采血前將犢牛固定，最好放在手術(shù)臺(tái)或固定架上固定好頭部和四

16、肢，局部剪毛消毒，切開，剝離頸動(dòng)脈，止血鉗夾好，消毒，切開動(dòng)脈管壁，插入插管，另一助手輕搖采血筒中的Hank's液以濕潤(rùn)瓶壁，這樣有利于凝血，也有利于血凝塊與瓶壁的分離。這時(shí)術(shù)者即可放血。每個(gè)采血筒內(nèi)采適量不宜超過總?cè)萘康?/3,裝的過多則出血清少。采血時(shí)還須注意動(dòng)脈插管口不宜太細(xì)，放血速度也不宜過快，過快過慢均可引起溶血。盛血的采血筒應(yīng)置室溫（天熱時(shí)）或溫箱中，溫室（天冷時(shí)）中，靜置4h以上，待血液凝固后放入4c冰箱或冷庫(kù)中過夜。然后在無(wú)菌間，小心（不要搖晃）倒出或用虹吸法吸出上清液，如混有紅血球，則將這部分血清以2000r/min離心10min15min注意無(wú)菌操作，收集上清（略有

17、溶血的血清也可應(yīng)用）。一頭犢牛可采血1500ml3500m1,約能分離出一半血清。血清分離后，置56c水浴中滅活30min以破壞補(bǔ)體和某些傳染的病毒（也可以不滅活）。滅活后可進(jìn)行分裝，分裝后需作菌檢。菌檢結(jié)果如有污染，可用賽世濾器過濾。有的材料報(bào)道，有的血清不滅活要比滅活的血清效果好。除近期要用的血清可置4c保存外，其余放低溫冰箱中保存。最好采用35頭犢牛血清先分別滅活，菌檢后再混合、分裝、保存?；旌涎蹇梢员苊鈧€(gè)別犢牛具有抑制細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)或缺少某些生長(zhǎng)因子的缺陷。三、常用化合物的分子量及當(dāng)量附表7常用化合物的分子量及當(dāng)量業(yè)有當(dāng)甲.鹽酸HC136.4636.46氫氧化鈉NaOH40.0040

18、.00氫氧化鉀KOH56.1156.11草酸H2c2O490.0445.02氯化鈉NaCl58.4458.44氯化鉀KCl74.5674.56硫酸H2SO498.0849.04醋酸CH3COOH60.0560.05磷酸H3PO498.0032.67磷酸二氫鈉NaH2PO4119.98磷酸氫二鈉Na2HPO4141.96磷酸二氫鉀KH2PO4136.09磷酸氫二鉀K2HPO4174.18二乙胺四乙酸二鈉C10H14N2O8Na2372.24186.12(EDTANa2)硝酸HNO363.0163.01碘I2253.81126.90碘化鉀KI166.01166.01硼酸H3BO361.8320.6

19、1碳酸氫鈉NaHCO384.0184.01碳酸鈉Na2CO3105.9953.00硼砂Na2B4O7381.43四、克分子濃度用1L(1000ml)溶液中所含溶質(zhì)的克分子數(shù)表示溶液的濃度叫做克分子濃度。通常用字母M表示。物質(zhì)的量用做單位來(lái)表示，在數(shù)值上與物質(zhì)的分子量相同，這個(gè)量叫做克分子。例如氯化鈉的分子量為58.44,則1個(gè)克分子氯化鈉的重量是58.44go將58.44g氯化鈉溶解于水，配制成1L溶液，就是1Mol/L氯化鈉溶液。NaH2PO4H2O的分子量為138.0，則其1個(gè)克分子的重量是138.0克。將69.0gNaH2PO4H2O溶解于水，配制成1L溶液，就是0.5Mol/L磷酸二氫

20、鈉溶液。五、離心機(jī)與離心力習(xí)慣上把每分鐘4,000轉(zhuǎn)的離心機(jī)稱為低速離心機(jī)，每分鐘20,000轉(zhuǎn)的離心機(jī)稱為高速離心機(jī)，這類離心機(jī)有冷凍裝置。每分鐘20,000以上的離心機(jī)稱為超速離心機(jī)，為了減少空氣的摩擦阻力，它的轉(zhuǎn)頭是在真空中運(yùn)轉(zhuǎn)的。由于許多樣品(如病毒等)都是極小的顆?；蛉苜|(zhì)，它們?cè)谥亓?chǎng)中沉降速度極慢，同時(shí)還存在擴(kuò)散作用，只有超速離心所產(chǎn)生的強(qiáng)大的離心力場(chǎng)，才有可能它們彼此分離開。過去的資料中，所用離心條件多用轉(zhuǎn)數(shù)表達(dá)，現(xiàn)在國(guó)際資料中已經(jīng)改用相對(duì)離心力(RelativeCentrifugalForce,RCF)表示，因?yàn)殡x心力不僅為轉(zhuǎn)速的函數(shù)，也是離心半徑的函數(shù)。轉(zhuǎn)速相同時(shí)，離心半徑越長(zhǎng)，離心力越大，故僅以轉(zhuǎn)速表達(dá)離心力是不科學(xué)的。相對(duì)離心力的單位用重力加速度Gravity,簡(jiǎn)寫為“g”表示。G=9.8米/秒210離心