DNSAA雙向聚酰胺薄膜層析PPT學習教案

1、會計學1DNSAA雙向聚酰胺薄膜層析雙向聚酰胺薄膜層析第1頁/共19頁葉綠素通過碳酸鈣管柱所形成的色譜圖葉綠素通過碳酸鈣管柱所形成的色譜圖第2頁/共19頁第3頁/共19頁層析法分類層析法分類第4頁/共19頁層析法分類層析法分類按兩相所處的狀態(tài)分類：按兩相所處的狀態(tài)分類：流動相有兩種狀態(tài)：液體作為流動相流動相有兩種狀態(tài)：液體作為流動相 氣體作為流動相氣體作為流動相固定相也有兩種狀態(tài)：固體吸附劑作為固定相固定相也有兩種狀態(tài)：固體吸附劑作為固定相 以吸附在固體上的液體作為固定以吸附在固體上的液體作為固定相相按兩相所處的狀態(tài)分為：按兩相所處的狀態(tài)分為：液相層析和氣相層析液相層析和氣相層析 流動相流動相

2、固定相固定相 液體液體 （液相層析（液相層析) ) 氣體氣體 （固相層析）（固相層析） 液液 體體 液液- -液層析液層析氣氣- -液層析液層析 固固 體體 液液- -固層析固層析氣氣- -固層析固層析第5頁/共19頁層析法分類層析法分類名稱名稱操作形式操作形式適用范圍適用范圍柱層析柱層析將固定相裝于柱內，使將固定相裝于柱內，使樣品沿一個方向移動而樣品沿一個方向移動而達到分離的目的。達到分離的目的。柱層析是常用的層析形式，適用于大量樣柱層析是常用的層析形式，適用于大量樣品分析、分離。生物化學中常用的凝膠層品分析、分離。生物化學中常用的凝膠層析、離子交換層析、親和層析、高效液相析、離子交換層析、

3、親和層析、高效液相色譜等都通常采用柱層析形式。色譜等都通常采用柱層析形式。薄層層析薄層層析將適當粘度的固定相均將適當粘度的固定相均勻涂鋪在薄板上，點樣勻涂鋪在薄板上，點樣后用流動相展開，使各后用流動相展開，使各組份分離組份分離薄層層析主要適用于小分子物質的快速檢薄層層析主要適用于小分子物質的快速檢測分析和少量分離制備，通常為一次性使測分析和少量分離制備，通常為一次性使用。用。按操作形式不同分類：按操作形式不同分類：第6頁/共19頁吸附層析吸附層析原理：任何兩個相都可以形成表面，其中一個相的物質或溶解在其中的溶質原理：任何兩個相都可以形成表面，其中一個相的物質或溶解在其中的溶質在此表面密集現(xiàn)象稱

4、為吸附，利用吸附劑對不同物質具有不同吸附力使混合在此表面密集現(xiàn)象稱為吸附，利用吸附劑對不同物質具有不同吸附力使混合物得到分的現(xiàn)象就叫吸附層析。物得到分的現(xiàn)象就叫吸附層析。凡能將其他物質聚集到自己表面的物質稱吸附劑，包括硅皮、氧化鋁、活性凡能將其他物質聚集到自己表面的物質稱吸附劑，包括硅皮、氧化鋁、活性炭、淀粉、纖維素及陶土，而聚集于聚集于吸附劑表面的物質稱被吸附劑。炭、淀粉、纖維素及陶土，而聚集于聚集于吸附劑表面的物質稱被吸附劑。吸附劑與被吸附劑之間的作用除了物理作用外，還有化學作用，如吸附劑與被吸附劑之間的作用除了物理作用外，還有化學作用，如DNS-DNS-氨基氨基酸雙向聚酰胺薄膜層析時中被

5、分離的物質之所以能吸附在聚酰胺薄膜上就是酸雙向聚酰胺薄膜層析時中被分離的物質之所以能吸附在聚酰胺薄膜上就是由于二者之間形成氫鍵。由于二者之間形成氫鍵。第7頁/共19頁分配層析技術分配層析技術 （液（液- -液層析法）液層析法）原理：利用混合物在兩種不相混溶的液相（固定相和流動相）之間的分配系數(shù)原理：利用混合物在兩種不相混溶的液相（固定相和流動相）之間的分配系數(shù)的不同而達到分離各組分的目的。紙層析是最廣泛的一種分配層析。的不同而達到分離各組分的目的。紙層析是最廣泛的一種分配層析。特點：液特點：液- -液層析法適合于分離同系物或同分異構體液層析法適合于分離同系物或同分異構體第8頁/共19頁分配層析

6、技術分配層析技術分配系數(shù)小的溶質在流動相中分配的數(shù)量多，移動快；分配系數(shù)大的溶質在固定相分配系數(shù)小的溶質在流動相中分配的數(shù)量多，移動快；分配系數(shù)大的溶質在固定相中分配的數(shù)量多，移動慢。因此可彼此分開。中分配的數(shù)量多，移動慢。因此可彼此分開。分配系數(shù)主要與下列因素有關：分配系數(shù)主要與下列因素有關： 被分離物質本身的性質；被分離物質本身的性質； 固定相和流動相的性質；固定相和流動相的性質； 層析柱的溫度。層析柱的溫度。 相關的概念（一）：相關的概念（一）： 分配系數(shù)：當一種溶質分布在兩個互不相溶的溶劑中時，它在固定相和流動相兩相內分配系數(shù)：當一種溶質分布在兩個互不相溶的溶劑中時，它在固定相和流動相

7、兩相內的濃度之比是個常數(shù)，稱為分配系數(shù)的濃度之比是個常數(shù)，稱為分配系數(shù)(Kd)。分配系數(shù)是層析中分離純化物質的主要依據(jù)。分配系數(shù)是層析中分離純化物質的主要依據(jù) Kd=Cs/Cm 其中其中Cs: 固定相中的濃度，固定相中的濃度，Cm: 流動相中的濃度流動相中的濃度第9頁/共19頁分配層析技術分配層析技術相關的概念（二）：相關的概念（二）：遷移率：在一定條件下，在相同的時間內某一組分在固定相移動的距離與流動遷移率：在一定條件下，在相同的時間內某一組分在固定相移動的距離與流動相本身移動的距離之比值。常用相本身移動的距離之比值。常用RfRf來表示。來表示。物質在一定溶劑中的分配系數(shù)是一定的，物質在一定

8、溶劑中的分配系數(shù)是一定的， Rf值也是恒定的，因此可以根據(jù)值也是恒定的，因此可以根據(jù)RfRf值值來鑒定被分離的物質。來鑒定被分離的物質。Rf =色斑中心至原點中心的距離色斑中心至原點中心的距離溶劑前緣至原點中心的距離溶劑前緣至原點中心的距離第10頁/共19頁第11頁/共19頁第12頁/共19頁第13頁/共19頁原理原理聚酰胺薄膜層析是一類特殊的分配層析?；旌衔镫S流動相通過聚酰胺薄膜時，聚酰胺薄膜層析是一類特殊的分配層析?；旌衔镫S流動相通過聚酰胺薄膜時，由于被分離物質與薄膜形成氫鍵，而各物質形成氫鍵的能力不同，決定吸附力由于被分離物質與薄膜形成氫鍵，而各物質形成氫鍵的能力不同，決定吸附力的差異，

9、吸附力強的差異，吸附力強, ,展層速度慢，吸附力弱，展層速度快。展層速度慢，吸附力弱，展層速度快。展層溶劑與被分離物質在聚酰胺離子表面競爭形成氫鍵，選擇適當?shù)恼箤尤軇┱箤尤軇┡c被分離物質在聚酰胺離子表面競爭形成氫鍵，選擇適當?shù)恼箤尤軇贡环蛛x物質在溶劑與聚酰胺薄膜表面之間的分配系數(shù)有最大差異。易溶于，使被分離物質在溶劑與聚酰胺薄膜表面之間的分配系數(shù)有最大差異。易溶于展層劑的所受的動力作用大，展層速度快，反之，速度慢。展層劑的所受的動力作用大，展層速度快，反之，速度慢。 DNS-氨基酸氨基酸的雙向聚酰胺薄膜層的雙向聚酰胺薄膜層析析第14頁/共19頁DNS-Cl + AADNS-AA + HCl

10、第15頁/共19頁實驗操作實驗操作DNS- -氨基酸的制備（已完成）氨基酸的制備（已完成）混合混合DNS氨基酸的雙向層析氨基酸的雙向層析點樣：在薄膜右下角距兩邊各，直徑控制在點樣：在薄膜右下角距兩邊各，直徑控制在23mm之間，點在無光澤面，可重之間，點在無光澤面，可重復點樣復點樣2-3次；次；苯冰醋酸層析：將點好樣品的薄膜用回形針固定放入展層劑中，展層劑前緣在苯冰醋酸層析：將點好樣品的薄膜用回形針固定放入展層劑中，展層劑前緣在距薄膜頂端距薄膜頂端2mm處即可停止處即可停止,冷風吹干，紫外燈下觀察；冷風吹干，紫外燈下觀察；甲酸水層析：調轉甲酸水層析：調轉90度與第一相垂直，放入展層劑中，熱風吹干，紫外燈下觀度與第一相垂直，放入展層劑中，熱風吹干，紫外燈下觀察，用鉛筆輕輕標記（以免損壞薄膜表面）；察，用鉛筆輕輕標記（以免損壞薄膜表面）；分析實驗結果；分析實驗結果；將層析后標記好的薄膜以點樣點為左下角貼于實驗報告中。將層析后標記好的薄膜以點樣點為左下角貼于實驗報告中。第16頁/共19頁3 3、操作注意事項：、操作注意事項：嚴格控制點樣位置以及點樣直徑。嚴格控制點樣位置以及點樣直