藥物殘留快速測定方法

1、藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法 隨著人們環(huán)境意識的不斷加強，由藥隨著人們環(huán)境意識的不斷加強，由藥物殘留物殘留引起的食品安全問引起的食品安全問題也越來越受到人們的關(guān)注。為了保障消費者的安全和健康，提高題也越來越受到人們的關(guān)注。為了保障消費者的安全和健康，提高食食品的質(zhì)量安全水平，我國政府決定加強品的質(zhì)量安全水平，我國政府決定加強食食品中藥品中藥物物殘留的監(jiān)控，殘留的監(jiān)控，建立健全藥建立健全藥物物殘留的檢測體系，實施對蔬菜、瓜果、茶葉生產(chǎn)全過殘留的檢測體系，實施對蔬菜、瓜果、茶葉生產(chǎn)全過程的農(nóng)藥監(jiān)控，程的農(nóng)藥監(jiān)控，對對有防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動有防病治病、促進生長、提高生

2、產(chǎn)性能、改善動物性食品物性食品的的一些一些含有含有化學(xué)的、生物藥用成分功效的動物保健品或飼化學(xué)的、生物藥用成分功效的動物保健品或飼料添加劑料添加劑的監(jiān)控。的監(jiān)控。 食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，食用含有藥物殘留的食品，使人類的健康受到了極大的危害，引起了世界各國的關(guān)注。因此，對食品中藥物殘留情況，必須加以引起了世界各國的關(guān)注。因此，對食品中藥物殘留情況，必須加以監(jiān)測，以保證食用安全。監(jiān)測，以保證食用安全。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法砷砷 0.5mg/kg0.5mg/kg，氟氟 0

3、.5mg/kg0.5mg/kg，鎘鎘 0.03mg/kg0.03mg/kg，汞汞 0.01mg/kg0.01mg/kg，六六六六六六 0.2mg/L0.2mg/L，DDTDDT 0.1mg/kg0.1mg/kg，殺螟硫磷殺螟硫磷 0.4mg/kg0.4mg/kg，倍硫磷倍硫磷 0.05mg/kg0.05mg/kg，敵敵畏敵敵畏 0.2mg/kg0.2mg/kg，樂果樂果 1.0mg/kg1.0mg/kg，鋅鋅 5mg/kg5mg/kg，甲拌磷、馬拉硫磷、對硫磷等不得檢出甲拌磷、馬拉硫磷、對硫磷等不得檢出藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法（一）藥物殘留的概念（一）藥物殘留的概念農(nóng)藥殘留農(nóng)藥

4、殘留：是指農(nóng)藥使用后殘存于生物體、食品(農(nóng)副產(chǎn)品)和環(huán)境中的微量農(nóng)藥原體、有毒代謝物、降解物和雜質(zhì)的總稱。獸藥殘留：獸藥殘留：獸藥在動物源食品中的殘留”的簡稱，是指動物產(chǎn)品的任何可食部分所含獸藥的母體化合物及（或）其代謝物，以及與獸藥有關(guān)的雜質(zhì)。食品中農(nóng)藥殘留的快速檢測食品中農(nóng)藥殘留的快速檢測藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法1 1抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰抗生素類：包括青霉素、鏈霉素、金霉素、土霉素、四環(huán)素、泰樂菌素等。樂菌素等。 2 2呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。呋喃藥類：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。 3 3磺胺藥類；磺胺藥類；

5、 4. 4. 抗球蟲藥；抗球蟲藥； 5. 5. 激素藥類；激素藥類； 6. 6. 驅(qū)蟲藥類驅(qū)蟲藥類。（二）（二）主要殘留藥物有以下幾類：主要殘留藥物有以下幾類：藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法（三）（三）藥物對食品的污染及危害藥物對食品的污染及危害u藥物對食品的污染藥物對食品的污染 1 1預(yù)防和治療畜禽疾病預(yù)防和治療畜禽疾病 2 2作為飼料添加劑使用作為飼料添加劑使用 3 3保鮮保鮮：在食品的保鮮過程中，有時加入某種抗生素以抑制微生物的生長、繁殖，使用后也會對食品造成污染。 藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法u藥物的殘留對人體的危害藥物的殘留對人體的危害藥物雖然有預(yù)防和治療疾病的

6、作用，但同時對機體也產(chǎn)生有害的作用。藥物與毒物之間并無明顯的界限，有些毒物在適當(dāng)?shù)膭┝繒r具有治療作用，而所有藥物過量或應(yīng)用時間過長，均有毒性。殘留的藥物對人體的不良影響主要有： 1 1毒性作用毒性作用 2 2使某些細菌產(chǎn)生抗藥性使某些細菌產(chǎn)生抗藥性 3 3過敏反應(yīng)過敏反應(yīng) 4 4造成菌群失調(diào)造成菌群失調(diào) 5 5致癌作用致癌作用：現(xiàn)已證明殘留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法 國際上用于農(nóng)藥殘留快速檢測方法種類繁多，究其原理來說主要分為兩大國際上用于農(nóng)藥殘留快速檢測方法種類繁多，究其原理來說主要分為兩大類：類：生化測定法生化測定法和和色譜快速檢測法色譜

7、快速檢測法。生化檢測法生化檢測法是利用生物體內(nèi)提取出的某種生化物質(zhì)進行的生化反應(yīng)來判斷農(nóng)藥是利用生物體內(nèi)提取出的某種生化物質(zhì)進行的生化反應(yīng)來判斷農(nóng)藥殘留是否存在以及農(nóng)藥污染情況，在測定時樣本無需經(jīng)過凈化，或凈化比較簡殘留是否存在以及農(nóng)藥污染情況，在測定時樣本無需經(jīng)過凈化，或凈化比較簡單，檢測速度快。生化檢測法中又以酶抑制法和酶聯(lián)免疫法應(yīng)用最為廣泛。單，檢測速度快。生化檢測法中又以酶抑制法和酶聯(lián)免疫法應(yīng)用最為廣泛。色譜快速檢測法色譜快速檢測法通過盡可能的簡化樣品凈化步驟，直接提取進樣分析蔬菜和水通過盡可能的簡化樣品凈化步驟，直接提取進樣分析蔬菜和水果中的有機磷類農(nóng)藥殘留。上述快速檢測方法在具體應(yīng)

8、用中可以根據(jù)實際情況果中的有機磷類農(nóng)藥殘留。上述快速檢測方法在具體應(yīng)用中可以根據(jù)實際情況和方法各自適用范圍及優(yōu)缺點來選擇使用。和方法各自適用范圍及優(yōu)缺點來選擇使用。（五）農(nóng)藥殘留主要檢測方法（五）農(nóng)藥殘留主要檢測方法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法傳統(tǒng)的農(nóng)殘化學(xué)分析傳統(tǒng)的農(nóng)殘化學(xué)分析主要是主要是氣相氣相或或液相色譜液相色譜等儀器等儀器 優(yōu)點：優(yōu)點：敏感敏感(10l2 106 molL) 、準確、準確 缺點：缺點：操作復(fù)雜、費時及成本高。操作復(fù)雜、費時及成本高。 發(fā)展適合我國的快速檢測技術(shù)發(fā)展適合我國的快速檢測技術(shù)藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法u適合我國的農(nóng)藥殘留快速檢測方法適

9、合我國的農(nóng)藥殘留快速檢測方法生化檢測生化檢測生物檢測生物檢測化學(xué)比色法化學(xué)比色法酶抑制法免疫分析法發(fā)光菌檢測法敏感家蠅檢測法速測儀速測卡主要為酶免疫法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法酶抑制技術(shù)酶抑制技術(shù)是研究比較成熟、應(yīng)用最廣 泛快速的農(nóng)藥殘留檢測技術(shù)，是根據(jù)有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對乙酰膽堿酯酶（AChE)的特異性生化反應(yīng)建立起來的農(nóng)藥殘留的微量和痕量快速檢測技術(shù)。1、速測卡法、速測卡法藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法“-”陰性（藍色）陰性（藍色） “+”弱陽性（淡藍）弱陽性（淡藍） “+”強陽性（白色）強陽性（白色）速測卡檢測結(jié)果速測卡檢測結(jié)果藥物殘留快速測定方法藥物殘留快

10、速測定方法原理原理:在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶在一定條件下，有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)。酶。酶催化催化乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物乙酰膽堿水解，其水解產(chǎn)物與顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)質(zhì)。 用分光光度計在用分光光度計在412nm處測定吸光度隨時間的變化，計處測定吸光度隨時間的變化，計算出抑制率，通過算出抑制率，通過抑制率抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機磷可以判斷出樣品中是否含有有機磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。2、速測儀、速測儀

11、藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法農(nóng)藥殘留快速測試儀農(nóng)藥殘留快速測試儀藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法抑制率與農(nóng)藥殘留量成正相關(guān)，抑制率越高說明殘留量抑制率與農(nóng)藥殘留量成正相關(guān)，抑制率越高說明殘留量越高越高速測儀檢測結(jié)果藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法免疫分析技術(shù) 免疫分析技術(shù)免疫分析技術(shù)是將免疫反應(yīng)與現(xiàn)代測試手段相結(jié)合而建立的超微量分析技術(shù)，是基于抗原抗體特異性結(jié)合和反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法。 目前應(yīng)用于農(nóng)殘檢測的是酶免疫分析(EIA)和放射性免疫分析(RIA)。其中酶聯(lián)免疫分析技術(shù)應(yīng)用最為普遍。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法3、酶聯(lián)免疫技術(shù) ELISA是一種以酶

12、作為標(biāo)記物的免疫分析方法，也是目前應(yīng)用最廣泛的免疫分析方法之一，它將酶標(biāo)記在抗體抗原分子上形成酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗原，酶作用于能呈現(xiàn)出顏色的底物，通過儀器或肉眼進行辨別。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法ELISA法基本原理是預(yù)先結(jié)合在固相載體上的抗體或抗原分子與樣品中的抗原或抗體分子在一定條件下進行免疫學(xué)反應(yīng)。該法因不需昂貴儀器設(shè)備，對人體無害等優(yōu)點而被廣泛采用，具有靈敏、特異、快速、穩(wěn)定以及易于自動化操作等特點。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法酶標(biāo)板酶標(biāo)板 u型型 96孔孔目前，ELISA方法常用的固相載體是96孔聚苯乙烯酶標(biāo)板，常用的酶是辣根過氧化物酶，常用的底物是鄰苯二胺和四甲

13、基聯(lián)苯胺等。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法4、發(fā)光菌檢測法農(nóng)藥與細菌作用后可影響細菌的發(fā)光程度，通過細菌發(fā)光情況，可測出農(nóng)藥殘留量。 此方法簡便但是特異性差藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法5、敏感家蠅檢測法敏感家蠅對殺蟲劑具有敏感性，記錄家蠅存活情況，根據(jù)家蠅的死亡率可知農(nóng)藥殘留情況。該技術(shù)方法直接、過程簡單、容易掌握，但定性粗糙，只對少數(shù)農(nóng)藥有效，而且由于其他生物對不同農(nóng)藥的毒性反應(yīng)與人畜可能不同，因此影響對農(nóng)藥殘留量的判斷。如家蠅對毒性較低的除蟲菊酯類敏感，遠超過有機磷和氨基甲酸酯類中毒或高毒的農(nóng)藥。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法6、化學(xué)比色法 目前常用的化學(xué)比

14、色法包括各種檢測試劑和試紙，兩者都是利用迅速產(chǎn)生明顯顏色的化學(xué)反應(yīng)檢測待測物質(zhì)，可通過與標(biāo)準比色卡比較進行目視定性或半定量分析。 藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法化學(xué)比色分析法與一般的儀器分析方法相比，具有價格低，化學(xué)比色分析法與一般的儀器分析方法相比，具有價格低，操作相對簡便，結(jié)果顯示直觀，一次性使用，不需檢修維操作相對簡便，結(jié)果顯示直觀，一次性使用，不需檢修維護，有一定的靈敏度和專一性等優(yōu)點。隨著檢測儀器的不護，有一定的靈敏度和專一性等優(yōu)點。隨著檢測儀器的不斷發(fā)展，與其相配套的微型檢測儀器也相應(yīng)出現(xiàn)。如與試斷發(fā)展，與其相配套的微型檢測儀器也相應(yīng)出現(xiàn)。如與試劑檢測方法相配套的劑檢測方

15、法相配套的微型光電比色計微型光電比色計目前已發(fā)展得比較成目前已發(fā)展得比較成熟。熟。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法u 抗生素類：氯霉素、四環(huán)素、土霉素、青霉素等；抗生素類：氯霉素、四環(huán)素、土霉素、青霉素等；u 磺胺類：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；磺胺類：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；u 呋喃類：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等；呋喃類：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等；u 激素和激素和- -興奮劑：鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、孕酮等；興奮劑：鹽酸克倫特羅、己烯雌酚、孕酮等；u 抗寄生蟲類：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等抗寄生蟲類：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。1.獸

16、藥殘留的類型獸藥殘留檢測獸藥殘留檢測藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法2、獸藥殘留的分析方法獸藥殘留分析技術(shù)的特點獸藥殘留分析技術(shù)的特點u待測物質(zhì)濃度低u樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多u獸藥殘留代謝產(chǎn)物多樣或不明u動物種類多樣，對藥物代謝存在差異藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法對檢測方法的要求對檢測方法的要求快速高通量定量準確度和精確度確證理想的儀器裝備理想的儀器裝備樣品經(jīng)簡單處理即可上機測定不需萃取和凈化快速、準確的定量分析自動的資料處理藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法分析方法的總體思路分析方法的總體思路v高水平(Level )方法確證和定量被分析物質(zhì) v中等水平(Level

17、 )方法定量但不需要確證被分析物質(zhì)v低水平(Level )方法篩選藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法u 篩選方法篩選方法u 檢檢測和確認方法：理化檢驗技術(shù)（測和確認方法：理化檢驗技術(shù)（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。等）。微生物檢驗（微生物抑制試驗）微生物檢驗（微生物抑制試驗）免疫法（免疫檢測試劑盒）免疫法（免疫檢測試劑盒）陽性陽性u獸藥殘留的檢驗分析方法包括獸藥殘留的檢驗分析方法包括篩選、檢測和確認篩選、檢測和確認。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法uELISAELISA：簡單、快速、靈敏度，但容易產(chǎn)生假陽性，一般只適用進行樣品簡單、快速、靈敏度，但容易產(chǎn)

18、生假陽性，一般只適用進行樣品粗篩粗篩，陽性結(jié)果需進行確證。，陽性結(jié)果需進行確證。u GCGC：靈敏度較高，但大多數(shù)獸藥極性或沸點偏高，需繁瑣的衍生化步驟靈敏度較高，但大多數(shù)獸藥極性或沸點偏高，需繁瑣的衍生化步驟，限制了應(yīng)用。，限制了應(yīng)用。uHPLCHPLC：操作簡單，但靈敏度不高；某些殘留，檢出限達不到要求。操作簡單，但靈敏度不高；某些殘留，檢出限達不到要求。u儀器聯(lián)用：儀器聯(lián)用：分離、定性、定量一體，靈敏、準確、選擇性都高，是國際分離、定性、定量一體，靈敏、準確、選擇性都高，是國際公認的確認方法公認的確認方法。 GC/MSGC/MS、LC/MSLC/MS等等獸藥殘留的分析方法藥物殘留快速測定

19、方法藥物殘留快速測定方法u GCGC靈敏度較高，但易出現(xiàn)假陽性、陽性結(jié)果需進一步確證；靈敏度較高，但易出現(xiàn)假陽性、陽性結(jié)果需進一步確證；HPLCHPLC操作簡單，但靈敏度不高；操作簡單，但靈敏度不高；ELISAELISA簡單、快速、靈敏度，但容易產(chǎn)生簡單、快速、靈敏度，但容易產(chǎn)生假陽性，一般只適用進行樣品粗篩，陽性結(jié)果需進行確證；目前靈假陽性，一般只適用進行樣品粗篩，陽性結(jié)果需進行確證；目前靈敏度較高、確證率較好的是敏度較高、確證率較好的是GC/MSGC/MS、GS-MS/MSGS-MS/MS 。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法GCGC和和GC-MSGC-MS的區(qū)別的區(qū)別GCGC是指氣

20、相色譜儀是指氣相色譜儀 一般來說一般來說 氣象色譜儀使用的檢測器氣象色譜儀使用的檢測器 有有npd fid npd fid fpd ecdfpd ecd等等等等. .如果氣象色譜器沒加上述常用檢測器如果氣象色譜器沒加上述常用檢測器 而是用質(zhì)譜當(dāng)做檢測器而是用質(zhì)譜當(dāng)做檢測器 那么就那么就是是GC-MSGC-MS了，了，GC-MSGC-MS一般指的是單級質(zhì)譜一般指的是單級質(zhì)譜 如果是二級質(zhì)譜就是如果是二級質(zhì)譜就是 GC-MS-MS GC-MS-MS了。了。GCGC就是一個分離裝置就是一個分離裝置 嚴格說嚴格說 GC GC是沒法單獨用的是沒法單獨用的 必須加檢測器必須加檢測器 只不只不過人們習(xí)慣吧過

21、人們習(xí)慣吧 GC-FID GC-FID 、GC-ECDGC-ECD、GC-FPDGC-FPD等等等等 簡稱為簡稱為GCGC而而已。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法質(zhì)譜分析質(zhì)譜分析Mass Spectrometry，MS 質(zhì)譜分析法是通過對被測樣品離子的質(zhì)荷比的測定來進行分析的一種分析方法?；衔锓肿邮艿诫娮恿鳑_擊后，形成的帶正電荷分子離子及碎片離子，按照其質(zhì)量m和電荷z的比值m/z（質(zhì)荷比）大小依次排列而被記錄下來的圖譜，稱為質(zhì)譜。藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法質(zhì)譜分析的過程與原理質(zhì)譜分析的過程與原理藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法1、進樣、進樣化合物通過汽化引入離子

22、化室；化合物通過汽化引入離子化室；2、離子化、離子化在離子化室，組分分子被一束加速電子碰在離子化室，組分分子被一束加速電子碰撞（能量約撞（能量約70eV），撞擊使分子電離形），撞擊使分子電離形成正離子；成正離子；M M+ + e或與電子結(jié)合，形成負離子或與電子結(jié)合，形成負離子M + e M藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法3、離子也可因撞擊強烈而形成碎片離子：、離子也可因撞擊強烈而形成碎片離子：4、荷電離子被加速電壓加速，產(chǎn)生一定、荷電離子被加速電壓加速，產(chǎn)生一定的速度的速度v，與質(zhì)量、電荷及加速電壓有關(guān)：，與質(zhì)量、電荷及加速電壓有關(guān)：) 1 (212mvzH 藥物殘留快速測定方法藥物殘留快速測定方法5、加速離子進入一個強度為、加速離子進入一個強度為H的磁場，發(fā)的磁場，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，半徑為：生偏轉(zhuǎn)，半徑為：)2(zHmvr 將（將（1）（）（2）合并：）合并：) 3(222VrHZm當(dāng)當(dāng) r 為儀器設(shè)置不變時，改變加速電壓或為儀器設(shè)置不變時，改變加速電壓或磁場強度，則不同磁場強度，則不同m/z的離子依次通過狹縫的離子依次通過狹縫到達檢測器，形成質(zhì)量譜，簡稱質(zhì)譜。到達檢測器，形成質(zhì)量譜，