獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類課件

1、獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類第六章 獸藥殘留檢測(cè)(jin c)技術(shù)第八節(jié)第八節(jié) 激素類藥物激素類藥物(yow)(yow)殘留的危殘留的危害分析與檢測(cè)方法害分析與檢測(cè)方法 第一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類一、概述一、概述(i sh)l獸用激素獸用激素(j s)包括包括皮質(zhì)激素皮質(zhì)激素、同化激素同化激素。l天然皮質(zhì)激素主要有可的松及氫化可的松。這類皮質(zhì)激素有較強(qiáng)天然皮質(zhì)激素主要有可的松及氫化可的松。這類皮質(zhì)激素有較強(qiáng)的糖代謝及抗炎等作用的糖代謝及抗炎等作用,而對(duì)水、鹽代謝的作用較弱而對(duì)水、鹽代謝的作用較弱,所以稱其所以稱其為為糖皮質(zhì)激素糖皮質(zhì)激素。臨床上應(yīng)用廣泛。通常所說(shuō)的皮質(zhì)激素即指這。臨床

2、上應(yīng)用廣泛。通常所說(shuō)的皮質(zhì)激素即指這類激素。類激素。l近年來(lái)近年來(lái),為了提高療效為了提高療效,降低副作用降低副作用,而而合成合成了一系列的了一系列的糖皮質(zhì)激糖皮質(zhì)激素衍生物素衍生物。如。如潑尼松潑尼松(強(qiáng)的松強(qiáng)的松)與氫化潑尼松與氫化潑尼松(強(qiáng)的松龍強(qiáng)的松龍),糖原異生糖原異生作用更強(qiáng)作用更強(qiáng),對(duì)水鹽平衡的影響更弱。較小劑量常用于補(bǔ)充腎上腺皮質(zhì)對(duì)水鹽平衡的影響更弱。較小劑量常用于補(bǔ)充腎上腺皮質(zhì)功能缺乏功能缺乏,較大劑量則能抑制免疫過(guò)程中的多個(gè)環(huán)節(jié)，緩解炎較大劑量則能抑制免疫過(guò)程中的多個(gè)環(huán)節(jié)，緩解炎癥。癥。第二頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類1、糖皮質(zhì)激素、糖皮質(zhì)激素l糖皮質(zhì)激素的主要作用

3、是能降低機(jī)體對(duì)內(nèi)外環(huán)境各種刺激的反應(yīng)糖皮質(zhì)激素的主要作用是能降低機(jī)體對(duì)內(nèi)外環(huán)境各種刺激的反應(yīng)(fnyng)性性,具體表現(xiàn)在具體表現(xiàn)在抗炎抗炎、免疫抑制免疫抑制、抗毒素抗毒素和和抗休克抗休克等方面。還等方面。還可使血糖升高可使血糖升高,蛋白質(zhì)分解加強(qiáng)蛋白質(zhì)分解加強(qiáng),使血淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞減少使血淋巴細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞減少,紅紅細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、血小板增高等。細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、血小板增高等。l糖皮質(zhì)激素主要用于以下疾病糖皮質(zhì)激素主要用于以下疾病:各種炎癥、嚴(yán)重感染及傳染病、過(guò)各種炎癥、嚴(yán)重感染及傳染病、過(guò)敏性疾病、風(fēng)濕病、休克、代謝疾病以及引產(chǎn)。敏性疾病、風(fēng)濕病、休克、代謝疾病以及引產(chǎn)。l皮質(zhì)

4、激素會(huì)引起水皮質(zhì)激素會(huì)引起水分在體內(nèi)滯留分在體內(nèi)滯留,增加肉的重量增加肉的重量,因而因而在畜牧業(yè)中有在畜牧業(yè)中有可能當(dāng)作可能當(dāng)作增重劑增重劑而被濫用而被濫用。l濫用這類藥物后濫用這類藥物后,肉品感官上多汁、肉瘦肉品感官上多汁、肉瘦。因此飼養(yǎng)場(chǎng)中用皮質(zhì)激。因此飼養(yǎng)場(chǎng)中用皮質(zhì)激素作素作催長(zhǎng)劑催長(zhǎng)劑，屬于，屬于違禁使用違禁使用。第三頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類潑尼松潑尼松l別名強(qiáng)的松別名強(qiáng)的松,不溶于水不溶于水,微溶于乙醇微溶于乙醇。應(yīng)避光、密封保存。應(yīng)避光、密封保存。l具有具有抗炎抗炎及及抗過(guò)敏抗過(guò)敏作用作用,還能還能促進(jìn)蛋白質(zhì)分解轉(zhuǎn)變促進(jìn)蛋白質(zhì)分解轉(zhuǎn)變(zhunbin)為糖為糖,減少葡

5、萄糖的利用減少葡萄糖的利用,因而使血糖及肝糖原增加因而使血糖及肝糖原增加,尿中可出尿中可出現(xiàn)糖尿現(xiàn)糖尿,同時(shí)同時(shí)增加胃液分泌增加胃液分泌,促進(jìn)食欲促進(jìn)食欲。l其水、鈉潴留及促進(jìn)鉀排泄作用比可的松小其水、鈉潴留及促進(jìn)鉀排泄作用比可的松小,抗炎及抗過(guò)敏作抗炎及抗過(guò)敏作用較強(qiáng)用較強(qiáng),副作用較小副作用較小,故故比較常用比較常用。l主要用于各種急性嚴(yán)重細(xì)菌感染、嚴(yán)重的過(guò)敏性疾病、風(fēng)濕、主要用于各種急性嚴(yán)重細(xì)菌感染、嚴(yán)重的過(guò)敏性疾病、風(fēng)濕、類風(fēng)濕、腎病綜合征、支氣管哮喘、各種腎上腺皮質(zhì)功能不足類風(fēng)濕、腎病綜合征、支氣管哮喘、各種腎上腺皮質(zhì)功能不足癥、濕疹等。癥、濕疹等。第四頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)

6、激素類地塞米松地塞米松(d si m sn)l別名氟美松別名氟美松,不溶于水不溶于水,溶于無(wú)水乙醇溶于無(wú)水乙醇。應(yīng)遮光保存。應(yīng)遮光保存。l抗炎抗炎及及控制控制(kngzh)皮膚過(guò)敏皮膚過(guò)敏的作用比潑尼松龍更顯著的作用比潑尼松龍更顯著,而對(duì)水、鈉而對(duì)水、鈉潴留和促進(jìn)鉀排泄作用較弱。潴留和促進(jìn)鉀排泄作用較弱。l目前地塞米松的應(yīng)用愈來(lái)愈廣泛目前地塞米松的應(yīng)用愈來(lái)愈廣泛,有取代潑尼松等其他合成皮質(zhì)激素有取代潑尼松等其他合成皮質(zhì)激素的趨勢(shì)。的趨勢(shì)。l肌注后吸收快肌注后吸收快,狗和鼠分別于狗和鼠分別于0.5h和和6h達(dá)血藥峰濃度。達(dá)血藥峰濃度。大部分在肝大部分在肝內(nèi)被代謝成羥基地塞米松及其葡萄糖苷結(jié)合物而

7、滅活。內(nèi)被代謝成羥基地塞米松及其葡萄糖苷結(jié)合物而滅活。第五頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類氟輕松氟輕松(qn sn)l氟輕松為白色結(jié)晶性粉末氟輕松為白色結(jié)晶性粉末,無(wú)臭無(wú)臭,不溶于水不溶于水,溶于乙醇溶于乙醇。應(yīng)遮光、密。應(yīng)遮光、密封保存。封保存。l氟輕松為外用皮質(zhì)激素中療效最顯著而副作用較小的一種氟輕松為外用皮質(zhì)激素中療效最顯著而副作用較小的一種,涂涂敷于局部對(duì)皮膚、黏膜的炎癥敷于局部對(duì)皮膚、黏膜的炎癥(搔癢及皮膚過(guò)敏反應(yīng)等有效。搔癢及皮膚過(guò)敏反應(yīng)等有效。不但不但(bdn)療效高療效高,而且顯效快而且顯效快,使用很低濃度即有明顯作用使用很低濃度即有明顯作用,止癢止癢作用尤其突出。作用尤

8、其突出。l本品主要用于各種本品主要用于各種皮膚病皮膚病,如濕疹、過(guò)敏性皮炎、皮膚瘙癢等。如濕疹、過(guò)敏性皮炎、皮膚瘙癢等。對(duì)局部化膿創(chuàng)面對(duì)局部化膿創(chuàng)面,需同時(shí)配合新霉素等抗生素。需同時(shí)配合新霉素等抗生素。第六頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類倍他米松倍他米松l倍他米松為白色結(jié)晶性粉末倍他米松為白色結(jié)晶性粉末,無(wú)臭無(wú)臭,味苦味苦,幾乎不溶于水幾乎不溶于水,溶于乙醇溶于乙醇。l本品含有多種鹽類本品含有多種鹽類,如磷酸鈉鹽、二丙酸鹽、醋酸鹽等。均應(yīng)遮光如磷酸鈉鹽、二丙酸鹽、醋酸鹽等。均應(yīng)遮光保存。保存。l內(nèi)服吸收良好內(nèi)服吸收良好,生物利用度約為生物利用度約為72%,血漿蛋白血漿蛋白(dnbi)結(jié)合

9、率結(jié)合率64%,半半衰期衰期5.6h,4.8%的藥量自尿液排出。的藥量自尿液排出。l牛肌注牛肌注80g/kg,停藥二日停藥二日,肝臟中母藥殘留量為肝臟中母藥殘留量為5.47.8g/kg; 停藥八停藥八日日,肝臟中母藥殘留量為肝臟中母藥殘留量為10.9g/kg,腎臟、肌肉和脂肪中母藥殘留量分腎臟、肌肉和脂肪中母藥殘留量分別為別為2.3g/kg、3.9g/kg和和4.4g/kg。第七頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類2、同化、同化(tnghu)激素激素l例如：例如：雄激素雄激素能明顯地促進(jìn)蛋白質(zhì)合成能明顯地促進(jìn)蛋白質(zhì)合成(同化作用同化作用),能使肌肉發(fā)能使肌肉發(fā)達(dá)達(dá),體重增加體重增加;同時(shí)氨基

10、酸分解減少同時(shí)氨基酸分解減少(異化作用異化作用),使尿素生成減少降使尿素生成減少降低氮質(zhì)血癥。但使用雄激素?？沙霈F(xiàn)低氮質(zhì)血癥。但使用雄激素常可出現(xiàn)男性化現(xiàn)象男性化現(xiàn)象,因而限制了因而限制了它的應(yīng)用。它的應(yīng)用。l近年來(lái)人工合成的一些衍生物近年來(lái)人工合成的一些衍生物,其雄激素作用大為減弱其雄激素作用大為減弱,而同化作用而同化作用則保留或增強(qiáng)則保留或增強(qiáng),這些衍生物稱這些衍生物稱同化激素同化激素。l同化激素同化激素主要用于蛋白質(zhì)同化或吸收不足、降低亢進(jìn)和損失過(guò)多等主要用于蛋白質(zhì)同化或吸收不足、降低亢進(jìn)和損失過(guò)多等情況。情況。l畜牧業(yè)中使用同化激素畜牧業(yè)中使用同化激素(非治療用途非治療用途(yngt)

11、，提高胴體品質(zhì)、增，提高胴體品質(zhì)、增重和提高飼料轉(zhuǎn)化率重和提高飼料轉(zhuǎn)化率),可以很快產(chǎn)生顯著和直接的經(jīng)濟(jì)效益可以很快產(chǎn)生顯著和直接的經(jīng)濟(jì)效益,因此對(duì)生產(chǎn)者有很大的吸引力。因此對(duì)生產(chǎn)者有很大的吸引力。第八頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類同化同化(tnghu)激素類藥物激素類藥物l去氫睪酮、去氫甲睪酮、醋酸氯地孕酮去氫睪酮、去氫甲睪酮、醋酸氯地孕酮(yn tn)、氯睪酮、乙烯雌醇、醋酸甲羥孕酮、氯睪酮、乙烯雌醇、醋酸甲羥孕酮(yn tn)、醋酸美侖孕酮、醋酸美侖孕酮(yn tn)、醋酸甲地孕酮、醋酸甲地孕酮(yn tn)、諾甲醋孕酮、諾甲醋孕酮(yn tn)、去甲睪酮、司坦唑、去甲睪酮、司坦

12、唑醇、醋酸群勃龍等醇、醋酸群勃龍等第九頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類醋酸醋酸(c sun)甲羥孕酮甲羥孕酮l作用與黃體酮相似作用與黃體酮相似,孕激素活性強(qiáng)孕激素活性強(qiáng),無(wú)雌激素和雄激素活性無(wú)雌激素和雄激素活性,有抗雌有抗雌激素作用。激素作用。l內(nèi)服、注射均有效內(nèi)服、注射均有效。內(nèi)服在胃腸道吸收。內(nèi)服在胃腸道吸收,在肝內(nèi)降解。肌內(nèi)注射后在肝內(nèi)降解。肌內(nèi)注射后23天血藥濃度達(dá)到峰值。血藥峰值越高天血藥濃度達(dá)到峰值。血藥峰值越高,藥物清除越快。藥物清除越快。肌肌注注150mg后后69個(gè)月血中才檢不出藥物。個(gè)月血中才檢不出藥物。l小牛肌注復(fù)方制劑小牛肌注復(fù)方制劑(24mg醋酸甲羥孕酮、醋酸甲羥

13、孕酮、100mg苯甲酸雌二醇、苯甲酸雌二醇、200mg癸酸去甲睪酮癸酸去甲睪酮)后停藥后停藥2天天,血漿中醋酸甲羥孕酮濃度為血漿中醋酸甲羥孕酮濃度為1g/kg,14天時(shí)降至天時(shí)降至30pg/kg。尿液在數(shù)天內(nèi)都能檢出尿液在數(shù)天內(nèi)都能檢出,14天時(shí)醋酸天時(shí)醋酸甲羥孕酮濃度為甲羥孕酮濃度為37pg/kg。腎腎組織組織(zzh)殘留相對(duì)較高殘留相對(duì)較高,故作為殘故作為殘留檢測(cè)的靶組織。留檢測(cè)的靶組織。第十頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類醋酸醋酸(c sun)美侖孕酮美侖孕酮l別名醋酸甲烯雌醇別名醋酸甲烯雌醇,為合成為合成(hchng)的避孕藥。的避孕藥。l內(nèi)服時(shí)孕激素作用約為黃體酮的內(nèi)服時(shí)孕激

14、素作用約為黃體酮的75倍倍,無(wú)雌激素和雄激素活性無(wú)雌激素和雄激素活性,具具有顯著排卵抑制作用。有顯著排卵抑制作用。l小母牛小母牛用藥后用藥后,母藥和代謝物主要由糞便排出母藥和代謝物主要由糞便排出。停藥。停藥6h,肝、脂肪、肝、脂肪、腎和肌肉組織中的殘留量分別為腎和肌肉組織中的殘留量分別為915g/kg、78g/kg、1.21.8g/kg和和0.51g/kg。脂肪脂肪、肝、腎和肌肉中母藥殘留量分、肝、腎和肌肉中母藥殘留量分別占總殘留的別占總殘留的80%、37%、30%和和45%。l美國(guó)美國(guó)FDA規(guī)定規(guī)定休藥期休藥期48h,但歐盟禁止使用。但歐盟禁止使用。第十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素

15、類去甲去甲(q ji)睪酮睪酮l牛牛注射注射去甲睪酮后去甲睪酮后,脂肪中殘留脂肪中殘留(cnli)能被檢出能被檢出,并持續(xù)并持續(xù)73天天;尿中殘留低于尿中殘留低于1g/kg。l內(nèi)服內(nèi)服后脂肪中殘留未被檢出后脂肪中殘留未被檢出,但尿中殘留可檢出。但尿中殘留可檢出。第十二頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類醋酸醋酸(c sun)甲地孕酮甲地孕酮l本品為孕激素對(duì)垂體促性腺激素的釋放有一定的抑制本品為孕激素對(duì)垂體促性腺激素的釋放有一定的抑制作用作用,但比左炔諾孕酮和炔諾酮為弱。不具有雌激素和雄但比左炔諾孕酮和炔諾酮為弱。不具有雌激素和雄激素樣活性激素樣活性,但有明顯抗雌激素作用。與雌激素合用但有明顯

16、抗雌激素作用。與雌激素合用,抑抑制排卵。制排卵。l動(dòng)物致畸試驗(yàn)動(dòng)物致畸試驗(yàn)(shyn)表明對(duì)家兔具有表明對(duì)家兔具有死胎率增加死胎率增加和和致畸致畸作用。作用。l口服口服后生物半衰期明顯比左炔諾孕酮為短后生物半衰期明顯比左炔諾孕酮為短,大部分代謝產(chǎn)大部分代謝產(chǎn)物以物以葡萄糖醛酸酯葡萄糖醛酸酯形式排出。形式排出。第十三頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類3、危害、危害(wihi)l對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的主要有甾類同化激素對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的主要有甾類同化激素(包括雌酮、雌二包括雌酮、雌二醇、睪酮、皮質(zhì)酮等物質(zhì)醇、睪酮、皮質(zhì)酮等物質(zhì))及及2-受體激動(dòng)劑受體激動(dòng)劑(苯乙胺類苯乙胺類)。這些存在。這些存

17、在于環(huán)境介質(zhì)中的激素量雖然很小于環(huán)境介質(zhì)中的激素量雖然很小,但大多但大多具有具有生物富集生物富集作用作用,容容易通過(guò)食物鏈在人體中富集易通過(guò)食物鏈在人體中富集,對(duì)人類及其他生物產(chǎn)生極其嚴(yán)重對(duì)人類及其他生物產(chǎn)生極其嚴(yán)重的危害。的危害。l主要產(chǎn)生各種主要產(chǎn)生各種慢性慢性、蓄積性毒性蓄積性毒性,如致癌、致畸、致突變等三致性如致癌、致畸、致突變等三致性毒性以及免疫毒性、發(fā)育毒性和生態(tài)毒性等。毒性以及免疫毒性、發(fā)育毒性和生態(tài)毒性等。2-受體激動(dòng)劑類藥受體激動(dòng)劑類藥物可產(chǎn)生急性毒性作用。物可產(chǎn)生急性毒性作用。l危害多具有危害多具有隱蔽性隱蔽性,易造成易造成(zo chn)實(shí)質(zhì)性危害而實(shí)質(zhì)性危害而難以逆轉(zhuǎn)難

18、以逆轉(zhuǎn)。第十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類糖皮質(zhì)激素的危害糖皮質(zhì)激素的危害(wihi)l對(duì)人體的危害主要表現(xiàn)為抑制腎上腺皮質(zhì)功能對(duì)人體的危害主要表現(xiàn)為抑制腎上腺皮質(zhì)功能,使使腎上腺皮腎上腺皮質(zhì)萎縮質(zhì)萎縮。l另外另外,過(guò)多攝入過(guò)多攝入,可使人產(chǎn)生可使人產(chǎn)生多毛癥多毛癥、滿月臉滿月臉以及以及免疫力下降免疫力下降等毒等毒副作用。副作用。l對(duì)敏感型的個(gè)體可造成血管擴(kuò)張對(duì)敏感型的個(gè)體可造成血管擴(kuò)張,血壓降低血壓降低(jingd)而引起而引起休克休克,甚至甚至死亡死亡。第十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類同化同化(tnghu)激素的危害激素的危害l目前目前,同化激素對(duì)環(huán)境的污染已引起了社

19、會(huì)各界的普遍關(guān)注。同化激素對(duì)環(huán)境的污染已引起了社會(huì)各界的普遍關(guān)注。l長(zhǎng)期攝入同化激素，即使含量甚微，也會(huì)長(zhǎng)期攝入同化激素，即使含量甚微，也會(huì)導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂、發(fā)育異導(dǎo)致機(jī)體代謝紊亂、發(fā)育異常常,且多數(shù)激素類物質(zhì)具有且多數(shù)激素類物質(zhì)具有潛在的致癌作用潛在的致癌作用。l歐盟歐盟(原歐洲經(jīng)濟(jì)共同體原歐洲經(jīng)濟(jì)共同體)從從1988年起年起,禁止所有同化激素用于動(dòng)物的促禁止所有同化激素用于動(dòng)物的促生長(zhǎng)目的生長(zhǎng)目的,并制定了嚴(yán)格的監(jiān)測(cè)措施。并制定了嚴(yán)格的監(jiān)測(cè)措施。l我國(guó)從我國(guó)從20世紀(jì)世紀(jì)90年代起年代起,也陸續(xù)開(kāi)始對(duì)用于促生長(zhǎng)目的的同化激素禁止也陸續(xù)開(kāi)始對(duì)用于促生長(zhǎng)目的的同化激素禁止使用使用,并已開(kāi)展并已

20、開(kāi)展(kizhn)了相關(guān)的監(jiān)測(cè)工作。了相關(guān)的監(jiān)測(cè)工作。l但是但是,在利益驅(qū)動(dòng)下在利益驅(qū)動(dòng)下,在世界范圍內(nèi)在世界范圍內(nèi),同化激素仍在被大量濫用同化激素仍在被大量濫用。就殘留的。就殘留的危害和引起的爭(zhēng)議而言危害和引起的爭(zhēng)議而言,同化激素同化激素與與抗生素抗生素并列為最重要的獸藥殘留。并列為最重要的獸藥殘留。第十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類雄性激素及其同化雄性激素及其同化(tnghu)激素的危害激素的危害l進(jìn)人人體和動(dòng)物體后進(jìn)人人體和動(dòng)物體后,對(duì)其生殖功能產(chǎn)生嚴(yán)重的影響對(duì)其生殖功能產(chǎn)生嚴(yán)重的影響,甚至可能造成某甚至可能造成某些物種的絕種。些物種的絕種。l通過(guò)食物鏈進(jìn)行富集通過(guò)食物鏈進(jìn)行富

21、集,在人體首先引起內(nèi)分泌失調(diào)在人體首先引起內(nèi)分泌失調(diào),危害生殖系統(tǒng)危害生殖系統(tǒng),易出現(xiàn)生殖器病變。易出現(xiàn)生殖器病變。l對(duì)男性的危害：對(duì)男性的危害：表現(xiàn)為睪丸萎縮、胸部擴(kuò)大、早禿、肝腎功表現(xiàn)為睪丸萎縮、胸部擴(kuò)大、早禿、肝腎功能障礙或肝臟能障礙或肝臟(gnzng)腫瘤。腫瘤。l對(duì)女性的危害：對(duì)女性的危害：可引起女性的不孕、早產(chǎn)、流產(chǎn)、月經(jīng)不調(diào)或女性可引起女性的不孕、早產(chǎn)、流產(chǎn)、月經(jīng)不調(diào)或女性男性化男性化(肌肉增生、毛發(fā)增多肌肉增生、毛發(fā)增多)等現(xiàn)象。等現(xiàn)象。l目前目前,在局部地區(qū)已開(kāi)始出現(xiàn)在局部地區(qū)已開(kāi)始出現(xiàn)人類生存危機(jī)人類生存危機(jī)現(xiàn)象現(xiàn)象,如發(fā)達(dá)國(guó)家約有如發(fā)達(dá)國(guó)家約有20%的家庭沒(méi)有子女的家庭沒(méi)

22、有子女,而睪丸癌的患者明顯增加。而睪丸癌的患者明顯增加。第十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類對(duì)其他動(dòng)物對(duì)其他動(dòng)物(dngw)的危害的危害l激素污染對(duì)人類以外的其他動(dòng)物影響更為顯著激素污染對(duì)人類以外的其他動(dòng)物影響更為顯著,如魚(yú)、鳥(niǎo)和哺如魚(yú)、鳥(niǎo)和哺乳動(dòng)物的大量死亡乳動(dòng)物的大量死亡,雌雄異變雌雄異變,生育和發(fā)育紊亂生育和發(fā)育紊亂,免疫力下降免疫力下降等現(xiàn)象等現(xiàn)象,可能均與此有關(guān)。可能均與此有關(guān)。l1980年左右年左右,美國(guó)一造紙廠廢水排出口下游的雌性魚(yú)雄性化美國(guó)一造紙廠廢水排出口下游的雌性魚(yú)雄性化,且雄性化后的魚(yú)與原先正常雌性魚(yú)進(jìn)行交尾且雄性化后的魚(yú)與原先正常雌性魚(yú)進(jìn)行交尾,原來(lái)正常雄性魚(yú)原

23、來(lái)正常雄性魚(yú)出現(xiàn)超雄化出現(xiàn)超雄化,并表現(xiàn)為攻擊性交尾行動(dòng)。并表現(xiàn)為攻擊性交尾行動(dòng)。l在日本在日本,發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)(fxin)有雌海螺長(zhǎng)有雄海螺的生殖器。有雌海螺長(zhǎng)有雄海螺的生殖器。第十八頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類雌性激素的危害雌性激素的危害(wihi)l雌性激素造成的環(huán)境污染雌性激素造成的環(huán)境污染,同樣可能造成某些物種的絕種。同樣可能造成某些物種的絕種。l通過(guò)食物鏈產(chǎn)生的富集作用通過(guò)食物鏈產(chǎn)生的富集作用(zuyng),可引起人體的可引起人體的內(nèi)分泌失內(nèi)分泌失調(diào)調(diào),l對(duì)男性的危害：對(duì)男性的危害：使男性精子數(shù)量下降或出現(xiàn)女性化、性早使男性精子數(shù)量下降或出現(xiàn)女性化、性早熟、抑制骨骼發(fā)育等。熟、

24、抑制骨骼發(fā)育等。l對(duì)女性的危害：可引起女性對(duì)女性的危害：可引起女性 性早熟、生殖器官畸形和癌性早熟、生殖器官畸形和癌變變,這一效應(yīng)在其女性后代中表現(xiàn)更顯著。這一效應(yīng)在其女性后代中表現(xiàn)更顯著。l對(duì)人類后代的危害：對(duì)人類后代的危害：這些激素透過(guò)胎盤這些激素透過(guò)胎盤,可引起用藥者子宮可引起用藥者子宮內(nèi)膜及女性后代的陰道宮頸癌變和男性后代的精子發(fā)育不內(nèi)膜及女性后代的陰道宮頸癌變和男性后代的精子發(fā)育不良、生殖器畸形。良、生殖器畸形。第十九頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類對(duì)其他對(duì)其他(qt)動(dòng)物的危害動(dòng)物的危害l雌性激素的污染對(duì)人類之外的其他動(dòng)物雌性激素的污染對(duì)人類之外的其他動(dòng)物,同樣有著嚴(yán)重的影響

25、。同樣有著嚴(yán)重的影響。l美國(guó)出現(xiàn)的雄性美洲獅雌性化、加拿大的海豚在生殖周期出現(xiàn)美國(guó)出現(xiàn)的雄性美洲獅雌性化、加拿大的海豚在生殖周期出現(xiàn)卵巢卵巢異常異常、南極企鵝產(chǎn)下、南極企鵝產(chǎn)下無(wú)精卵無(wú)精卵以及其他一些連體、以及其他一些連體、畸形動(dòng)物畸形動(dòng)物的較高的較高比例出現(xiàn)比例出現(xiàn),可能均與環(huán)境可能均與環(huán)境(hunjng)激素污染有關(guān)。激素污染有關(guān)。第二十頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類二、樣品二、樣品(yngpn)處理處理（一）（一）皮質(zhì)激素皮質(zhì)激素的樣品處理的樣品處理(chl)（二）（二）同化激素同化激素的樣品處理的樣品處理第二十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類（一）皮質(zhì)激素（一）皮質(zhì)激素

26、1、皮質(zhì)激素樣品預(yù)處理、皮質(zhì)激素樣品預(yù)處理l液體樣品液體樣品(奶、血液、尿液奶、血液、尿液)提取前需要提取前需要脫脂肪脫脂肪,通常在通常在4 、7000g離心離心(lxn),除去浮在上層的脂肪。除去浮在上層的脂肪。l組織樣品組織樣品(肌肉、肝、腎肌肉、肝、腎)先要用切碎機(jī)或勻漿器進(jìn)行先要用切碎機(jī)或勻漿器進(jìn)行組織破碎組織破碎。水或醋酸鹽緩沖液常用于水或醋酸鹽緩沖液常用于樣品的稀釋樣品的稀釋。l肝臟或尿樣肝臟或尿樣中的皮質(zhì)激素結(jié)合物較多中的皮質(zhì)激素結(jié)合物較多,因此先用因此先用葡糖苷酸酶葡糖苷酸酶/硫酸硫酸酯酶水解酯酶水解。l由于酶解反應(yīng)較慢由于酶解反應(yīng)較慢,為保證水解完全為保證水解完全,可在較高的

27、溫度下來(lái)加速水可在較高的溫度下來(lái)加速水解或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。解或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。l用超臨界萃取法提取時(shí)用超臨界萃取法提取時(shí),先要將組織樣品勻漿先要將組織樣品勻漿,再進(jìn)行冷凍干燥。再進(jìn)行冷凍干燥。第二十二頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類2、提取、提取(tq)皮質(zhì)激素皮質(zhì)激素l在一定的在一定的pH值條件下值條件下,一般用一般用有機(jī)溶劑有機(jī)溶劑對(duì)樣品對(duì)樣品提取提取(tq)和除蛋白和除蛋白。l例如例如,氯仿氯仿提取牛奶中的氫化可的松提取牛奶中的氫化可的松;l二氯甲烷二氯甲烷-正己烷正己烷(4+1)提取牛奶中游離的氫化可的松和提取牛奶中游離的氫化可的松和21-醋醋酸酯酸酯;l乙酸乙酯乙酸乙酯提取動(dòng)物組織

28、中的氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)提取動(dòng)物組織中的氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)的松龍、倍他米松的松龍、倍他米松,牛奶中的甲基強(qiáng)的松龍，牛奶中的氫化波尼松牛奶中的甲基強(qiáng)的松龍，牛奶中的氫化波尼松和地塞米松和地塞米松;l含含0.1mol/L氫氧化鈉的乙酸乙酯氫氧化鈉的乙酸乙酯提取牛組織中的地塞米松提取牛組織中的地塞米松;第二十三頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類有機(jī)溶劑法提取有機(jī)溶劑法提取(tq)l甲醇甲醇提取牛肉組織中的提取牛肉組織中的5種皮質(zhì)激素種皮質(zhì)激素;l乙腈乙腈提取牛肝臟中的提取牛肝臟中的5種人工合成的皮質(zhì)激素和牛組織中的地塞種人工合成的皮質(zhì)激素和牛組織中的地塞米松米松;l乙醚乙醚

29、提取牛糞中提取牛糞中9種合成的皮質(zhì)激素種合成的皮質(zhì)激素;l二氯甲烷二氯甲烷提取動(dòng)物脂肪中的氟強(qiáng)的松龍?zhí)崛?dòng)物脂肪中的氟強(qiáng)的松龍;l丙酮丙酮提取動(dòng)物肝臟提取動(dòng)物肝臟(腎臟腎臟(shnzng)和肌肉中的氟強(qiáng)的松龍。和肌肉中的氟強(qiáng)的松龍。l此外此外,牛奶牛奶和和尿樣尿樣可以直接用水或醋酸鹽緩沖液稀釋并提取。可以直接用水或醋酸鹽緩沖液稀釋并提取。第二十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類3、凈化、凈化(jnghu)l粗提取液中含大量的粗提取液中含大量的內(nèi)源性干擾物質(zhì)內(nèi)源性干擾物質(zhì),為了消除或降低干擾并濃為了消除或降低干擾并濃縮分析物縮分析物,樣液需要凈化處理。樣液需要凈化處理。l凈化方法凈化方法(

30、fngf)包括液包括液-液萃取、固相萃取、免疫親和色譜及柱液萃取、固相萃取、免疫親和色譜及柱切換技術(shù)等。切換技術(shù)等。l液液-液萃取液萃取可以簡(jiǎn)單的一次溶劑萃取可以簡(jiǎn)單的一次溶劑萃取,也可以多次溶劑萃取。萃取也可以多次溶劑萃取。萃取次數(shù)的多少次數(shù)的多少,很大程度上取決于色譜的分離效率和選擇性。很大程度上取決于色譜的分離效率和選擇性。l色譜的分離度和選擇性愈高色譜的分離度和選擇性愈高,樣品的提取和凈化步驟可以簡(jiǎn)略一些樣品的提取和凈化步驟可以簡(jiǎn)略一些,還可以提高分析效率。還可以提高分析效率。第二十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類液液-液萃取液萃取(cuq)法法l液液-液萃取可以除去生物樣品中

31、大部分雜質(zhì)和蛋白質(zhì)。液萃取可以除去生物樣品中大部分雜質(zhì)和蛋白質(zhì)。l例如例如,氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)的松龍和倍他米松的氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)的松龍和倍他米松的乙酸乙酸乙酯提取液乙酯提取液,依次用依次用稀酸溶液稀酸溶液和和稀堿溶液洗滌稀堿溶液洗滌(xd),可以可以除去除去堿性和堿性和酸性的酸性的水溶性雜質(zhì)水溶性雜質(zhì)。l地塞米松的地塞米松的乙酸乙酯提取液乙酸乙酯提取液,可以可以用氫氧化鈉溶液洗滌用氫氧化鈉溶液洗滌,以除去酚以除去酚類雌激素。類雌激素。l甲基強(qiáng)的松龍的初提液蒸發(fā)至干后甲基強(qiáng)的松龍的初提液蒸發(fā)至干后,用用乙腈溶解乙腈溶解,加入加入正已烷正已烷提取提取,正已烷提取液再用正已

32、烷提取液再用飽和的硫酸鈉水溶液飽和的硫酸鈉水溶液提取提取,最后用最后用二氯甲烷二氯甲烷提提取。取。第二十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l氟強(qiáng)的松龍?zhí)崛∫赫舭l(fā)至干后氟強(qiáng)的松龍?zhí)崛∫赫舭l(fā)至干后,依次用依次用乙腈乙腈和和正己烷正己烷,正己烷正己烷和和水水進(jìn)進(jìn)行液行液-液萃取液萃取,最后用最后用二氯甲烷二氯甲烷提取。提取。l通過(guò)通過(guò)(tnggu)液液-液萃取對(duì)分析物的提純液萃取對(duì)分析物的提純,可以降低儀器檢測(cè)的背可以降低儀器檢測(cè)的背景干擾景干擾,大大提高分析方法的檢測(cè)靈敏度。大大提高分析方法的檢測(cè)靈敏度。l皮質(zhì)激素的初提液還可通過(guò)皮質(zhì)激素的初提液還可通過(guò)三相液三相液-液分配凈化：液分配凈化：

33、l當(dāng)組織樣用當(dāng)組織樣用乙腈乙腈水溶液初提后水溶液初提后,上清液加入上清液加入正己烷正己烷和和二氯甲烷二氯甲烷,進(jìn)進(jìn)行行乙腈乙腈、正己烷正己烷和和二氯甲烷二氯甲烷的三相液的三相液-液萃取液萃取,非極性組分被分配非極性組分被分配到正己烷相中到正己烷相中,極性和離子化組分被分配到底層水相中極性和離子化組分被分配到底層水相中,皮質(zhì)激素皮質(zhì)激素和其他中等極性組分則分配到中間乙腈相中。和其他中等極性組分則分配到中間乙腈相中。第二十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類固相萃取固相萃取(cuq)法法l采用有機(jī)溶劑萃取法容易出現(xiàn)采用有機(jī)溶劑萃取法容易出現(xiàn)(chxin)乳化乳化現(xiàn)象現(xiàn)象,因而常常導(dǎo)致提因而常常

34、導(dǎo)致提取回收率偏低或不穩(wěn)定。取回收率偏低或不穩(wěn)定。l固相萃取法固相萃取法克服了這一缺點(diǎn)克服了這一缺點(diǎn),且具有操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)。且具有操作簡(jiǎn)便、快速的優(yōu)點(diǎn)。l常用的固相萃取柱吸附劑有常用的固相萃取柱吸附劑有C18、C8和弗洛里硅藻土和弗洛里硅藻土(Florisil)等。等。l例如例如,C18固相萃取柱用于豬血漿中天然的和合成的皮質(zhì)激素凈化固相萃取柱用于豬血漿中天然的和合成的皮質(zhì)激素凈化,血血漿或血清樣品中氫化可的松凈化。漿或血清樣品中氫化可的松凈化。lFlorisil柱用于牛奶中氫化可的松凈化和牛組織中氟強(qiáng)的松龍柱用于牛奶中氫化可的松凈化和牛組織中氟強(qiáng)的松龍凈化。凈化。第二十八頁(yè)，共六十七頁(yè)

35、。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類免疫免疫(miny)親和柱色譜法親和柱色譜法l免疫親和柱具有高的專一性免疫親和柱具有高的專一性,近年來(lái)發(fā)展迅速近年來(lái)發(fā)展迅速,已應(yīng)用于皮質(zhì)激已應(yīng)用于皮質(zhì)激素的生物素的生物(shngw)樣品制備。樣品制備。l例如例如,用兩種抗體結(jié)合的免疫親和柱用兩種抗體結(jié)合的免疫親和柱,可以分離純化肝、牛奶、尿樣和可以分離純化肝、牛奶、尿樣和糞樣中糞樣中9種皮質(zhì)激素。種皮質(zhì)激素。l免疫親和色譜與免疫親和色譜與GC-負(fù)離子化學(xué)電離質(zhì)譜負(fù)離子化學(xué)電離質(zhì)譜聯(lián)用聯(lián)用,已用于馬組織中雙已用于馬組織中雙氟美松的確證分析。氟美松的確證分析。第二十九頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類柱切換柱切換(q

36、i hun)技術(shù)技術(shù)l柱切換技術(shù)自動(dòng)化程度高柱切換技術(shù)自動(dòng)化程度高,在線濃縮在線濃縮(nn su)和和純化純化,大大大大簡(jiǎn)化了樣品的前處理步驟。簡(jiǎn)化了樣品的前處理步驟。l例如例如,牛組織中地塞米松測(cè)定時(shí)牛組織中地塞米松測(cè)定時(shí),樣液經(jīng)苯基柱初級(jí)分離樣液經(jīng)苯基柱初級(jí)分離后流至硅膠預(yù)富集柱中后流至硅膠預(yù)富集柱中,通過(guò)柱切換通過(guò)柱切換,改變流動(dòng)相將富改變流動(dòng)相將富集柱中的待測(cè)物洗脫至氰丙基分析柱中分離。集柱中的待測(cè)物洗脫至氰丙基分析柱中分離。第三十頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類超臨界超臨界CO2流體流體(lit)萃取法萃取法l超臨界超臨界CO2流體萃取法具有低溫、快速、無(wú)溶劑萃取的流體萃取法具

37、有低溫、快速、無(wú)溶劑萃取的優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)(yudin)。l例如例如,超臨界流體萃取法與超臨界流體萃取法與HPLC聯(lián)用聯(lián)用,用于牛組織中地塞用于牛組織中地塞米松殘留的測(cè)定。米松殘留的測(cè)定。第三十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類（二）同化（二）同化(tnghu)激素的樣品處理激素的樣品處理1、樣品、樣品(yngpn)預(yù)處理：預(yù)處理：l液體樣品液體樣品(尿、血漿、膽汁、牛奶尿、血漿、膽汁、牛奶)在提取前在提取前,可用水或可用水或磷酸鹽緩沖液磷酸鹽緩沖液稀釋稀釋。l半固體樣品半固體樣品(肌肉、肝、腎肌肉、肝、腎)在提取前需要在提取前需要均質(zhì)均質(zhì)。l脂肪樣脂肪樣可在可在4060 下下加熱加熱,使脂肪融

38、化成液體。使脂肪融化成液體。第三十二頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類2、提取、提取(tq)l生物樣品中生物樣品中游離游離的類固醇激素可以用丙酮、乙醚、乙腈、的類固醇激素可以用丙酮、乙醚、乙腈、堿性乙腈、四氫呋喃、叔丁基甲醚和氯仿堿性乙腈、四氫呋喃、叔丁基甲醚和氯仿(l fn)-甲醇等甲醇等有有機(jī)溶劑提取機(jī)溶劑提取。l激素結(jié)合物激素結(jié)合物的的水溶性較大水溶性較大,不易被有機(jī)溶劑提取不易被有機(jī)溶劑提取,可先將樣品可先將樣品水解水解后再提取游離激素。后再提取游離激素。l常用的水解方法有常用的水解方法有酶水解酶水解和和堿水解堿水解兩種。兩種。l酶水解通常使用酶水解通常使用葡糖苷酸酶葡糖苷酸酶/芳

39、基硫酸酯酶芳基硫酸酯酶,前者可專一地水解葡前者可專一地水解葡糖苷酸結(jié)合物糖苷酸結(jié)合物,后者可水解硫酸酯結(jié)合物。后者可水解硫酸酯結(jié)合物。第三十三頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l由于尿樣和組織中通常同時(shí)存在上述兩種結(jié)合物由于尿樣和組織中通常同時(shí)存在上述兩種結(jié)合物,常使用葡萄糖苷酸常使用葡萄糖苷酸/芳基硫酸酯混合酶芳基硫酸酯混合酶,控制控制pH4.57.0,于于37 溫育過(guò)夜。溫育過(guò)夜。l堿水解堿水解通常使用氫氧化鈉通常使用氫氧化鈉(qn yn hu n)溶液溶液,由于合成類固醇由于合成類固醇常以酯制劑注入動(dòng)物常以酯制劑注入動(dòng)物,水解后使酯類釋放出游離的類固醇。水解后使酯類釋放出游離的類固醇

40、。第三十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類3、凈化、凈化(jnghu)l粗提取液的粗提取液的凈化方法凈化方法包括液包括液-液萃取、固相萃取法、液液萃取、固相萃取法、液相色譜、免疫親和色譜和超臨界流體色譜等。相色譜、免疫親和色譜和超臨界流體色譜等。l為了為了(wi le)達(dá)到更好的純化效果達(dá)到更好的純化效果,可將幾種方法結(jié)合應(yīng)用?？蓪追N方法結(jié)合應(yīng)用。第三十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類液液-液萃取液萃取(cuq)法法l液液-液萃取大多是液萃取大多是去除去除水溶性提取液中的水溶性提取液中的脂肪脂肪,l例如例如,乙腈或甲醇提取液中加入正己烷或異辛烷乙腈或甲醇提取液中加入正己烷或異辛

41、烷,可脫去脂類物可脫去脂類物質(zhì)。質(zhì)。l脂肪樣中的激素脂肪樣中的激素(30種雄激素種雄激素)可用可用正己烷提取正己烷提取,再用甲醇再用甲醇-醋酸鹽醋酸鹽緩沖液緩沖液(pH5.2)提取正己烷中的激素提取正己烷中的激素,同時(shí)去除脂類物質(zhì)同時(shí)去除脂類物質(zhì),水性提水性提取液再用二氯甲烷抽提。取液再用二氯甲烷抽提。l當(dāng)當(dāng)乙腈乙腈粗提取液調(diào)節(jié)粗提取液調(diào)節(jié)pH至至13時(shí)時(shí),加入加入正己烷正己烷和和二氯甲烷二氯甲烷進(jìn)行進(jìn)行三相三相液液-液萃取液萃取,極性和離子型酸性物質(zhì)進(jìn)入水相極性和離子型酸性物質(zhì)進(jìn)入水相,脂類等低極性物質(zhì)則脂類等低極性物質(zhì)則進(jìn)入上層進(jìn)入上層(shngcng)正己烷相中正己烷相中,而中等極性物質(zhì)

42、而中等極性物質(zhì)(如待測(cè)物：群勃如待測(cè)物：群勃龍和表群勃龍、去甲睪酮和美侖孕酮龍和表群勃龍、去甲睪酮和美侖孕酮)進(jìn)入中間乙腈相中。進(jìn)入中間乙腈相中。第三十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類固相萃取固相萃取(cuq)法法l柱層析采用柱層析采用氧化鋁氧化鋁、硅膠硅膠和和Celite吸附劑吸附劑,可有效分離分析物和內(nèi)可有效分離分析物和內(nèi)源性雜質(zhì)源性雜質(zhì),已應(yīng)用于肉樣中七種類固醇的純化。已應(yīng)用于肉樣中七種類固醇的純化。l固相萃取法具有簡(jiǎn)便、快速固相萃取法具有簡(jiǎn)便、快速(kui s)、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于已廣泛應(yīng)用于激素類藥物的凈化。激素類藥物的凈化。l正相柱正相柱常用硅膠、氧化鋁、

43、氰基型和氨基型吸附劑常用硅膠、氧化鋁、氰基型和氨基型吸附劑,反相柱反相柱常常用用C18和和C8吸附劑。吸附劑。lC18固相萃取柱和固相萃取柱和Amberlite XAD-2離子交換柱適合純化離子交換柱適合純化親脂性親脂性或或中性中性的同化激素。的同化激素。第三十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l司坦唑醇在司坦唑醇在C18固相萃取柱上的回收率偏低固相萃取柱上的回收率偏低,是由于它的結(jié)構(gòu)為吡是由于它的結(jié)構(gòu)為吡唑環(huán)和雄唑環(huán)和雄(甾甾)烷環(huán)縮合而成烷環(huán)縮合而成,兩個(gè)活潑氫可解離兩個(gè)活潑氫可解離,具有離子化的具有離子化的性質(zhì)性質(zhì),可與固定相或玻璃的活性點(diǎn)發(fā)生吸附可與固定相或玻璃的活性點(diǎn)發(fā)生吸附,

44、但其在但其在C8和苯磺酸型的和苯磺酸型的混合混合(hnh)固定相小柱中固定相小柱中,凈化效果和回收率均佳。凈化效果和回收率均佳。lC18和硅膠的和硅膠的混合柱混合柱同樣被用來(lái)對(duì)粗提取液的純化。同樣被用來(lái)對(duì)粗提取液的純化。lC8、硅膠和氨基型的、硅膠和氨基型的混合固定相小柱混合固定相小柱被成功地應(yīng)用于肉中同化激素被成功地應(yīng)用于肉中同化激素和異化激素的分離和異化激素的分離,激素按照極性、非極性和酚類性質(zhì)分段流出激素按照極性、非極性和酚類性質(zhì)分段流出,然后再分別純化。然后再分別純化。第三十八頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l固相萃取柱的凈化效果有時(shí)并不能滿足質(zhì)譜檢測(cè)的要求固相萃取柱的凈化效果有

45、時(shí)并不能滿足質(zhì)譜檢測(cè)的要求,因因此有人將固相萃取法與色譜法相結(jié)合此有人將固相萃取法與色譜法相結(jié)合,對(duì)樣品提取液作更高的對(duì)樣品提取液作更高的純化。純化。l另外另外,還有采用還有采用(ciyng)C18柱對(duì)樣液色譜分離柱對(duì)樣液色譜分離,用自動(dòng)餾分收集器收用自動(dòng)餾分收集器收集分析物的餾分集分析物的餾分,餾分收集后吹干餾分收集后吹干,然后衍生化然后衍生化GC分析。分析。第三十九頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類柱切換柱切換(qi hun)技術(shù)技術(shù)l柱切換技術(shù)也被應(yīng)用于激素的生物樣品制備。柱切換技術(shù)也被應(yīng)用于激素的生物樣品制備。l例如例如,將牛肝提取液注入凝膠柱中將牛肝提取液注入凝膠柱中,含同化激素

46、的兩段含同化激素的兩段餾分被切入到硅膠柱餾分被切入到硅膠柱(富集柱富集柱)中中,群勃龍和去甲睪酮激群勃龍和去甲睪酮激素在富集柱中被濃縮純化素在富集柱中被濃縮純化(chn hu),洗脫后流入氰基柱中洗脫后流入氰基柱中,再通過(guò)柱切換再通過(guò)柱切換,流入硅膠分析柱中分離測(cè)定。流入硅膠分析柱中分離測(cè)定。第四十頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l醋酸醋酸(c sun)美侖孕酮為中性、脂溶性的類固醇美侖孕酮為中性、脂溶性的類固醇,固相萃取固相萃取法對(duì)牛組織提取液中醋酸美侖孕酮的提取純化效果欠法對(duì)牛組織提取液中醋酸美侖孕酮的提取純化效果欠佳佳,故采用故采用柱切換柱切換。l其過(guò)程為粗提取液注入其過(guò)程為粗提取

47、液注入苯基柱苯基柱中作初級(jí)分離中作初級(jí)分離,含分析含分析物的餾分被切換到物的餾分被切換到硅膠預(yù)富集柱硅膠預(yù)富集柱中中,濃縮提純后再通濃縮提純后再通過(guò)柱切換洗脫至過(guò)柱切換洗脫至硅膠分析柱硅膠分析柱中分離測(cè)定中分離測(cè)定;若收集餾分若收集餾分,可可用于用于GC-MS分析。分析。第四十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類免疫免疫(miny)親和柱色譜法親和柱色譜法l免疫親和柱具有專一性高的優(yōu)點(diǎn)免疫親和柱具有專一性高的優(yōu)點(diǎn),但適合但適合同化激素同化激素(j s)純化純化的免疫的免疫親和柱目前還不多。親和柱目前還不多。l對(duì)于多殘留分析對(duì)于多殘留分析,可將幾種免疫親和固定相配伍使用。可將幾種免疫親和固定

48、相配伍使用。l免疫親和柱已應(yīng)用于生物樣品中己烯雄酚、雙烯雌酚和己烷雌酚免疫親和柱已應(yīng)用于生物樣品中己烯雄酚、雙烯雌酚和己烷雌酚的純化的純化,以及肉和尿中去甲睪酮、睪酮和群勃龍的純化。以及肉和尿中去甲睪酮、睪酮和群勃龍的純化。l此外此外,亦有報(bào)道采用亦有報(bào)道采用在線免疫親和色譜法在線免疫親和色譜法,對(duì)生物樣品中的去甲對(duì)生物樣品中的去甲睪酮及其表代謝物進(jìn)行純化。睪酮及其表代謝物進(jìn)行純化。第四十二頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類超臨界流體超臨界流體(lit)色譜法色譜法l超臨界流體萃取可以在低溫條件下獲得無(wú)溶劑的提取超臨界流體萃取可以在低溫條件下獲得無(wú)溶劑的提取物物,且快速且快速,但從生物樣品

49、中分離激素的研究目前還很少。但從生物樣品中分離激素的研究目前還很少。l有報(bào)道采用超臨界流體萃取和超臨界流體色譜相結(jié)合有報(bào)道采用超臨界流體萃取和超臨界流體色譜相結(jié)合,用用來(lái)檢測(cè)豬腎中己烯雌酚、己二烯雌酚和己烷雌酚殘留。來(lái)檢測(cè)豬腎中己烯雌酚、己二烯雌酚和己烷雌酚殘留。l超臨界超臨界CO2提取時(shí)提取時(shí),同化激素被柱子同化激素被柱子(zh zi)保留保留,而非極性而非極性的內(nèi)源性物質(zhì)不被保留的內(nèi)源性物質(zhì)不被保留,然后換流動(dòng)相來(lái)洗脫激素然后換流動(dòng)相來(lái)洗脫激素,串聯(lián)串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)。質(zhì)譜檢測(cè)。第四十三頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l用超臨界用超臨界CO2提取牛組織中提取牛組織中7種促生長(zhǎng)激素種促生長(zhǎng)激

50、素,發(fā)現(xiàn)極性藥物發(fā)現(xiàn)極性藥物(地塞地塞米松、曲安奈德、玉米赤霉醇米松、曲安奈德、玉米赤霉醇)的回收率偏低的回收率偏低,約約44%58%,非極性非極性藥物藥物(醋酸美侖孕酮、甲羥孕酮、己烯雌酚醋酸美侖孕酮、甲羥孕酮、己烯雌酚)的回收率相當(dāng)高的回收率相當(dāng)高,約約83%91%。l由于共萃取物的干擾由于共萃取物的干擾,群勃龍不能被檢測(cè)到群勃龍不能被檢測(cè)到,尤其是脂肪和肝臟樣尤其是脂肪和肝臟樣品中的共萃取物品中的共萃取物,對(duì)群勃龍的色譜峰有嚴(yán)重干擾。因此對(duì)群勃龍的色譜峰有嚴(yán)重干擾。因此,超臨界流超臨界流體萃取法并不能取代所有的樣品處理體萃取法并不能取代所有的樣品處理(chl)方法。方法。l在超臨界流體萃

51、取前后在超臨界流體萃取前后,還需要其他凈化方法加以處理。還需要其他凈化方法加以處理。第四十四頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類三、分析方法三、分析方法 （一）（一）皮質(zhì)激素分析方法皮質(zhì)激素分析方法l有關(guān)有關(guān)(yugun)動(dòng)物性食品中皮質(zhì)激素類的殘留分析動(dòng)物性食品中皮質(zhì)激素類的殘留分析,文獻(xiàn)報(bào)道很少。文獻(xiàn)報(bào)道很少。l皮質(zhì)激素類的殘留分析主要采用皮質(zhì)激素類的殘留分析主要采用色譜法色譜法,包括薄層色譜法、液包括薄層色譜法、液相色譜法和氣相色譜法。相色譜法和氣相色譜法。第四十五頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類1、薄層、薄層(bo cn)色譜法色譜法l薄層色譜法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)薄層色譜

52、法具有設(shè)備簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn),適合生物樣品的篩選分析。適合生物樣品的篩選分析。l早期早期(zoq)采用苯肼硫酸溶液作顯色劑采用苯肼硫酸溶液作顯色劑,后來(lái)采用其他一些后來(lái)采用其他一些顯色劑顯色劑,如如磷酸甲醇溶液、四唑藍(lán)、對(duì)甲苯磺酸和磷酸甲醇溶液、四唑藍(lán)、對(duì)甲苯磺酸和2,3,5-三苯基三苯基-2H-四唑四唑氯。氯。lVanoosthyze等建立了一種等建立了一種高效薄層色譜法高效薄層色譜法,能夠檢測(cè)注射部位能夠檢測(cè)注射部位中的中的29種皮質(zhì)激素。種皮質(zhì)激素。l樣液滴注于樣液滴注于Kieselgel 60板上板上,以以氯仿氯仿-甲醇甲醇作展開(kāi)劑作展開(kāi)劑,展開(kāi)后組分得展開(kāi)后組分得到很好地分離到很好地分

53、離,用用2,4-二羥苯甲醛二羥苯甲醛噴霧顯色噴霧顯色,色澤差異明顯色澤差異明顯,366nm處熒光檢測(cè)分析物。處熒光檢測(cè)分析物。第四十六頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類2、氣相色譜法、氣相色譜法lGC法分析動(dòng)物源性食品中皮質(zhì)激素法分析動(dòng)物源性食品中皮質(zhì)激素,早期采用早期采用TMS衍生化衍生化,OV-17 275cm柱分離柱分離,電子電子(dinz)捕獲檢測(cè)器檢測(cè)捕獲檢測(cè)器檢測(cè)。l例如例如,氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)的松龍和倍他米松氫化波尼松、氟強(qiáng)的松龍、氟羥強(qiáng)的松龍和倍他米松TMS衍生化衍生化,采用采用N,O-雙雙(三甲基甲硅烷基三甲基甲硅烷基)乙酰胺、三甲基甲硅乙酰胺、三甲基甲硅烷咪

54、唑和三甲基氯硅烷混合衍生劑進(jìn)行硅烷化。烷咪唑和三甲基氯硅烷混合衍生劑進(jìn)行硅烷化。l目前目前,GC-MS得到了廣泛應(yīng)用。測(cè)定地塞米松時(shí)得到了廣泛應(yīng)用。測(cè)定地塞米松時(shí),用用TMS-enol-TMS衍生化較好。衍生化較好。第四十七頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類例子例子(l zi)：lDelahat等報(bào)道了一種等報(bào)道了一種GC-MS法法分析分析(fnx)肝臟、牛奶、尿樣和肝臟、牛奶、尿樣和糞樣中的糞樣中的5種皮質(zhì)激素種皮質(zhì)激素(氫化波尼松、甲基強(qiáng)的松龍、地塞米氫化波尼松、甲基強(qiáng)的松龍、地塞米松松,雙氟美松和異氟烷雙氟美松和異氟烷)。不同樣品的提取不同樣品的提取l肝臟樣品：肝臟樣品：取取5g肝樣

55、加肝樣加10mL醋酸鹽緩沖液均質(zhì)醋酸鹽緩沖液均質(zhì),加入加入Helix pomatia混合酶混合酶,于于60 孵育孵育2h,水解結(jié)束后水解結(jié)束后,用用20mL乙腈提取乙腈提取,離離心心,取出上清液并加入取出上清液并加入8mL正己烷和正己烷和2mL二氯甲烷混合二氯甲烷混合,離心離心,取出取出中間乙腈相層并蒸發(fā)至干中間乙腈相層并蒸發(fā)至干,殘余物用殘余物用1mL乙醇溶解乙醇溶解,過(guò)過(guò)C18固相萃固相萃取柱。取柱。第四十八頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類不同不同(b tn)樣品的樣品的提取提取l牛奶樣品：牛奶樣品：取取10mL牛奶牛奶,于于4 離心離心,除去浮在上面的脂肪并除去浮在上面的脂肪并將剩

56、下的脫脂奶用等量的水稀釋將剩下的脫脂奶用等量的水稀釋,過(guò)過(guò)C18固相萃取柱。固相萃取柱。l尿樣：尿樣：取取5mL尿樣尿樣,加入加入2mL pH4.8醋酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液和Helix pomatia混混合酶合酶,于于37孵育過(guò)夜孵育過(guò)夜(guy),水解結(jié)束后水解結(jié)束后,加入加入5mL磷酸緩沖鹽磷酸緩沖鹽,過(guò)過(guò)C18固相萃取柱。固相萃取柱。l糞樣：糞樣：取取5g糞樣糞樣,加入加入10mL醋酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液和35mL乙醚乙醚,振搖振搖,離心離心后取出乙醚相并蒸發(fā)至干后取出乙醚相并蒸發(fā)至干,殘余物用殘余物用3mL乙醇溶解乙醇溶解,加入加入12mL水水和和5mL正己烷正己烷,振搖振搖,靜止

57、分層后取出水相靜止分層后取出水相,過(guò)過(guò)C18固相萃取柱。固相萃取柱。第四十九頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類不同提取不同提取(tq)樣品的樣品的凈化凈化l牛奶、尿和糞便樣液過(guò)牛奶、尿和糞便樣液過(guò)C18固相萃取柱固相萃取柱后后,依次用依次用5mL水、水、5mL丙酮丙酮-水水(20+80)、5mL甲醇甲醇-水水(20+80)、5mL二氯甲烷二氯甲烷-正己烷正己烷(20+80)和和5mL乙酸乙酯乙酸乙酯-正己烷正己烷(10+90)淋洗淋洗,用用3mL乙酸乙酯洗乙酸乙酯洗脫皮質(zhì)激素脫皮質(zhì)激素,洗脫液蒸發(fā)至干后洗脫液蒸發(fā)至干后,用用0.5mL乙醇和乙醇和5ml磷酸緩沖鹽磷酸緩沖鹽溶液溶解溶液溶解(

58、rngji)殘余物殘余物,過(guò)免疫親和柱凈化。過(guò)免疫親和柱凈化。第五十頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類l肝臟樣液過(guò)肝臟樣液過(guò)C18固相萃取柱后固相萃取柱后,依次依次(yc)用用5mL水、水、5mL丙酮丙酮-水水(20+80)、5mL甲醇甲醇-水水(20 +80)和和5mL正已烷淋洗正已烷淋洗,用用1mL乙酸乙酯乙酸乙酯洗脫。經(jīng)過(guò)洗脫。經(jīng)過(guò)固相萃取柱固相萃取柱凈化后凈化后,將洗脫液的將洗脫液的pH值調(diào)至值調(diào)至77.5,再過(guò)再過(guò)免免疫親和柱疫親和柱(含地塞米松和氫化波尼松抗體的凝膠含地塞米松和氫化波尼松抗體的凝膠)純化純化,用水淋用水淋洗柱子洗柱子,3mL甲醇甲醇-水水(80+20)洗脫。取部

59、分洗脫液洗脫。取部分洗脫液,加入加入氯鉻酸吡啶氯鉻酸吡啶氧化氧化,氧化的皮質(zhì)激素衍生物進(jìn)行氧化的皮質(zhì)激素衍生物進(jìn)行GC-MS分析分析。lCourtheyn等對(duì)氯鉻酸吡啶氧化法作了改進(jìn)等對(duì)氯鉻酸吡啶氧化法作了改進(jìn),簡(jiǎn)化了樣品前處理步簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟驟,采用采用負(fù)離子化學(xué)電離負(fù)離子化學(xué)電離GC-MS法法測(cè)定尿液和糞便中地塞米松含測(cè)定尿液和糞便中地塞米松含量量,以二氟美松作內(nèi)標(biāo)以二氟美松作內(nèi)標(biāo),測(cè)定結(jié)果與酶聯(lián)免疫法一致測(cè)定結(jié)果與酶聯(lián)免疫法一致,該方法檢測(cè)限該方法檢測(cè)限0.1g/L。第五十一頁(yè)，共六十七頁(yè)。獸藥殘留檢測(cè)技術(shù)激素類3、液相色譜法、液相色譜法l反相液相色譜（反相液相色譜（RP-HPLC

60、 ）和和正相液相色譜（正相液相色譜（ NP-HPLC ）均可用于皮質(zhì)激素的分析。均可用于皮質(zhì)激素的分析。l由于皮質(zhì)激素有較由于皮質(zhì)激素有較強(qiáng)強(qiáng)的的紫外吸收紫外吸收,因此紫外檢測(cè)法常被廣泛采用因此紫外檢測(cè)法常被廣泛采用,檢檢測(cè)波長(zhǎng)一般設(shè)在測(cè)波長(zhǎng)一般設(shè)在254nm。l但對(duì)于動(dòng)物源食品中殘留的某些皮質(zhì)激素及其代謝物但對(duì)于動(dòng)物源食品中殘留的某些皮質(zhì)激素及其代謝物,則必須制備則必須制備成成衍生物衍生物后后,進(jìn)行進(jìn)行熒光檢測(cè)熒光檢測(cè)。lHPLC-MS技術(shù)在皮質(zhì)激素分析中也有應(yīng)用技術(shù)在皮質(zhì)激素分析中也有應(yīng)用(yngyng),例如例如,LC-APCI-MS對(duì)牛組織中地塞米松的鑒別測(cè)定。對(duì)牛組織中地塞米松的鑒別