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人類淋巴細胞染色體制備、G顯帶及核型分析淋巴細胞染色體制備一、常用設備一、常用設備 無菌工作臺無菌工作臺 隔水式電熱恒溫培養(yǎng)隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱箱 電熱式水浴箱電熱式水浴箱 電熱枯燥箱電熱枯燥箱 光學顯微鏡光學顯微鏡 離心機離心機二、常用試劑二、常用試劑 培養(yǎng)基1640 新生小牛血清 植物血球凝集素PHA 雙抗青、鏈霉素 抗凝劑肝素，EDTA 秋水仙堿胺 甲醇、冰乙酸 胰蛋白酶 Giemsa染液 三、常用易耗品三、常用易耗品 玻璃培養(yǎng)瓶 刻度玻璃離心管 翻口膠塞 玻璃滴管 載玻片四、細胞培養(yǎng)和四、細胞培養(yǎng)和G顯帶染色體制備顯帶染色體制備1 細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)1640+10%牛血清+PHA 種全血0.5ml 37 培養(yǎng)70h 加秋水仙堿 2h2 染色體制備染色體制備 培養(yǎng)物 離心2000轉/分鐘 去上清 加 0.075M KCL 低滲處理 加1ml3:1甲醇、冰乙酸 離心 甲醇、冰乙酸固定二次 滴片 60 烤片2h3 G顯帶顯帶 0.025%胰蛋白酶染色體玻片 處理30-90秒 2-5%Giemsa染色5-10分鐘 自來水蒸餾水沖洗 枯燥 顯微鏡觀察4 染色體計數(shù)和核型分析染色體計數(shù)和核型分析染色體計數(shù)：一般情況下計數(shù)30個分裂相，遇嵌合體或性畸型時計數(shù)100個分裂相核型分析：一般分析3個分裂相 G顯帶染色體識別1 2 34 5 6 78 9 10 1112
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